体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的: 探讨人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程.方法:采用体外细胞三维立体培养的方法在转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用.结果:人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好.培养4 d在TGFβ1+DNCP组中细胞出现核极化有很长的突起细胞平行排列.诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构.抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应.碱性磷酸酶活性增强.细胞在矿化液中能形成矿化结节.RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP).结论:三维立体培养下人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFβ1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞.本结果将外胚间充质干细胞作为前体诱导分化出成牙本质样细胞为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据.     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚问充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨人胚胎面突外胚间允质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。方法：采用体外细胞三维立体培养的方法，在转化生长因子B1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下，通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法，探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用。结果：人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好。培养4d，在TGFβ1 DNCP组中细胞出现核极化，有很长的突起，细胞平行排列。诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构。抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应。碱性磷酸酶活性增强。细胞在矿化液中能形成矿化结节。RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSFP)。结论：三维立体培养下，人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFB1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞。本结果将外胚间充质干细胞作为前体，诱导分化出成牙本质样细胞，为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据。     

胰岛素样生长因子1诱导外胚间充质细胞向成牙本质细胞样细胞分化

目的：探讨SD大鼠颌突外胚间充质细胞向成牙本质细胞的分化机制。方法：在建立SD大鼠颌突外胚间充质细胞体外培养模型的基础上，用胰岛素样生长因子1(IGF-1)刺激外胚间充质细胞，采用倒置微镜和免疫组化等方法从形态学和功能方面检测细胞的变化。结果：在不含LIF的培养液中加入100ng/mL IGF-1培养的外胚间充质细胞，10d后在倒置显微镜下可见一些细胞出现单一细胞浆突起，似成牙本质细胞。消化后爬片经免疫组化抗DSP染色，部分细胞胞浆呈强阳性着色。结论：IGF-1可部分地诱导外胚间充质细胞向功能性成牙本质细胞分化，可能是牙齿发育过程中的重要细胞因子之一。     

诱导成牙本质样细胞在体内外的矿化研究

目的：人早期胚胎颌突外胚间充质细胞在体外能被诱导分化为成牙本质样细胞，表达牙本质特异的涎磷蛋白。本研究探讨该诱导分化细胞在体内外矿化的可能。方法：转化生长因子-βl(TGF-β1)和牙本质非胶原蛋白(DNCP)作用于三维培养的外胚间充质细胞，诱导10d，然后将诱导的成牙本质样细胞接种于裸鼠皮下，X线照相，组织切片，HE染色，观察细胞在体内的矿化情况。同时消化细胞，培养于矿化液中，观察细胞在体外的矿化能力。结果：8周后，裸鼠皮下接种的胶原细胞密度明显高于对照组。5周，胶原内的细胞为单极长突起；8周时，细胞周围可见牙本质样基质结构沉积。矿化液中的细胞3d出现复层生长，2ld，VonKossa染色阳性。结论：诱导的成牙本质样细胞在体内可以形成类似牙本质样基质，在体外能形成矿化结节，为有功能的终末分化的成牙本质细胞。     

牙胚细胞条件培养液诱导大鼠胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨牙胚细胞条件培养液（TGC—CM）在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用。方法：取妊娠12．5d SD大鼠胎鼠第4代下颌突外胚间充质细胞,在牙胚细胞条件培养液（TGC—CM）的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT—PCR等方法,探索牙胚细胞条件培养液诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的可能。结果：面突外胚间充质细胞在诱导培养基中生长良好。培养7d,在诱导组中细胞出现核极化,有很长的突起,细胞平行排列。抗牙本质涎蛋白（DSP）呈阳性反应。RT—PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白（DSPP）和牙本质基质蛋白-1（DMP-1）。结论：面突外胚间充质细胞在含有多种细胞因子的TGC—CM的作用下能分化为成牙本质样细胞,能为研究牙齿的分化和发育提供良好的模型和实验依据。     

大鼠外胚间充质细胞向成牙本质细胞样细胞定向诱导分化--三维诱导模型的建立

目的：探讨大鼠面突外胚间充质细胞向成牙本质细胞分化的机制。方法：以胶原作为支架，建立外胚间充质细胞三维培养模型，并在培养液中加入10ng／mlbFGF和(或)100ng／mlIGF-1等生长因子，观察和检测细胞表型的变化。结果：经bFGF和IGF-1诱导4d后，在胶原的周边细胞出现平行排列的具有细长单极突起的成牙本质细胞样细胞，通过免疫组化抗DSP抗体染色阳性。而其余组细胞排列较紊乱，抗DSP染色阴性。结论：含有bFGF和IGF-1的三维诱导模型可诱导大鼠外胚间充质细胞向成牙本质细胞样细胞分化，为研究牙齿发育的分子机制奠定了基础。     

颌突外胚间充质细胞向成牙本质细胞的定向诱导分化

外胚间充质细胞具有多向分化潜能．它可以进一步分化为成牙本质细胞等多种细胞。并将形成上下颌骨、最下颌关节盘软骨、牙本质、牙髓、牙骨质、牙周韧带、听神经等组织器官。该细胞在牙齿发育和牙体牙髓损伤修复过程中起重要作甩。本文从外胚间充质细胞的起源和特性、颌突外胚间充质细胞的分离和体外培养、外胚间充质细胞的定向诱导分化、外胚间充质细胞向成牙本质细胞的定向诱导分化、诱导分化的成牙本质细胞的鉴定等方面进行了综述。     

经典Wnt通路调节骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞的分化

目的:探讨经典Wnt通路在骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化中的作用,以期为临床治疗牙髓损伤提供新策略。方法:用牙胚细胞条件培养液诱导骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞的分化,培养液内分别加入外源性Wnt激活剂Wnt3a/抑制剂DKK-1,检测经典Wnt通路中β-catenin、LEF1、TCF4及成牙本质样细胞特异表达物DSPP、DMP-1变化。结果:骨髓间充质干细胞经Wnt激活剂/抑制剂处理后,胞浆内β-catenin水平明显上升/下降,其下游核内转录因子LEF1、TCF4基因水平明显上升/下降,而细胞内DSPP、DMP-1的表达明显降低/升高。结论:Wnt信号通路抑制骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化。     

颌突外胚间充质细胞向成牙本质细胞的定向诱导分化

外胚间充质细胞具有多向分化潜能。它可以进一步分化为成牙本质细胞等多种细胞,并将形成上下颌骨、颞下颌关节盘软骨、牙本质、牙髓、牙骨质、牙周韧带、听神经等组织器官。该细胞在牙齿发育和牙体牙髓损伤修复过程中起重要作用。本文从外胚间充质细胞的起源和特性、颌突外胚间充质细胞的分离和体外培养、外胚间充质细胞的定向诱导分化、外胚间充质细胞向成牙本质细胞的定向误导分化、诱导分化的成牙本质细胞的鉴定等方面进行了综述。     

组蛋白去甲基化酶Jmjd3对牙髓干细胞成牙本质向分化的影响研究

目的研究组蛋白去甲基化酶Jmjd3对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙本质向分化的影响。方法原代分离培养DPSCs,用流式细胞术和茜素红染色鉴定DPSCs。体外诱导DPSCs成牙本质向分化不同时间(0、3、5、7、14 d),qRT-PCR检测Jmjd3及成牙本质细胞标志物牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)的表达情况。用不同浓度(0、1、10μmol/L)的Jmjd3抑制剂GSK-J4处理DPSCs 14 d,q RT-PCR检测DSPP、DMP1的表达情况。结果原代培养的DPSCs表达间充质干细胞表面标记物CD44、CD29、CD146,体外诱导培养具有成骨分化潜能。DPSCs成牙本质向分化过程中,Jmjd3、DSPP、DMP1表达水平均上调(P<0.05),且可能具有时间依赖性。10μmol/L GSK-J4处理DPSCs可明显抑制DSPP、DMP1的表达(P<0.05)。结论Jmjd3在DPSCs成牙本质向分化过程中发挥正调节作用,且与其去甲基化酶活性相关。     

口腔组织病理学

口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞与PGA的生物相容性研究，槟榔碱诱导体外培养的血管内皮细胞凋亡研究，表皮生长因子对MDPC-23细胞增殖和ALP活性的影响，bFGF、TGF-β对人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响，体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化，牙本质涎磷蛋白反义核酸对体外培养牙胚发育、矿化的影响．     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子对大鼠外胚间充质干细胞增殖活性的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠外胚间充质干细胞增殖活性的影响,为研究颅面与牙齿的发育机制及外胚间充质干细胞的诱导分化提供理论依据。方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检测经 10 ng/ml bFGF、100 ng/ml IGF-1刺激4 d后大鼠外胚间充质干细胞的吸光度值。结果 培养4 d后,bFGF处理组吸光度值高于对照组(P<0.05),而IGF-1组及bFGF+IGF-1组与对照组差异均无显著性(P>0.05)。结论 bFGF可促进大鼠外胚间充质于细胞的增殖,bFGF和IGF-1可能协同促进其分化。     

TGF-β、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化

目的：探讨TGFβ、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化的能力。方法：取妊娠12．5d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞，分别在含60、100mmol/L的TGF－β和1．6、3.2mmol/L的rhBMP-2的DMEM／F12中培养，相差显微镜下观察细胞的形态变化，免疫组化鉴定细胞性质。结果：培养2d,60pmol/L的TGF－β组细胞形态发生明显变化，细胞变得大而扁平，培养4d，免疫组化鉴定约70％的细胞分化为平滑肌细胞，rhBMP-2组细胞形态未见明显改变，1.6nmol/L组免疫组化鉴定约5％的细胞分化为平滑肌细胞，未能诱导分化出神经元细胞。未加LIF的对照组细胞出现向平滑肌细胞的自然分化。结论：TGFβ、rhBMP-2可诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化。     

转化生长因子β促进面突外胚间充质干细胞向平滑肌细胞分化

目的　探讨转化生长因子β(TGF-β)对面突外胚间充质干细胞向平滑肌细胞分化的影响。方法　 60 pmol/LTGF-β作用于面突外胚间充质干细胞,分别于1 d、2 d后进行抗α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体免 疫组化图象分析检测,2 d后定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达。结果　免疫组化显示,TGF-β诱导组表达α- SMA的细胞数约为95%,而未加分化抑制剂的自然分化组表达α-SMA的细胞数约为65%。图象分析显示,1 d、2 d TGF-β诱导组抗α-SMA着色平均灰度值小于未加分化抑制剂的自然分化组。定量RT-PCR显示TGF-β诱导组α-SMA mRNA量大于自然分化组。有分化抑制剂的对照组细胞不表达α-SMA。结论　TGF-β诱导组细胞表达α-SMA强于 自然分化组。TGF-β可以促进外胚间充质干细胞向平滑肌细胞分化。     

小鼠胚胎干细胞向成牙本质样细胞的诱导分化

目的探讨胚胎干细胞(ES细胞)向成牙本质样细胞诱导分化的方法。方法首先通过悬浮培养的方式,将ES细胞诱导分化形成拟胚体,然后将拟胚体细胞与牙髓成纤维细胞通过Transwell培养系统共培养,研究拟胚体细胞向成牙本质样细胞的分化情况。结果RT-PCR结果显示,拟胚体细胞与牙髓成纤维细胞共培养10d后,可检测到成牙本质细胞的特征性分子——牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达;共培养15d后,表达有所增强。而单独培养的拟胚体细胞,则始终未检测到DSPP的表达。结论通过与牙髓成纤维细胞共培养,可以促进胚胎干细胞向成牙本质样细胞分化。     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子（EGF）对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的剂量效应和时间效应。方法：用体外细胞培养技术和噻唑蓝（MTT）比色法，观察不同浓度和不同时间bFGF和EGF对外胚间充质细胞增殖的影响。结果：0.1-100ng/mL bFGF,0.1-10ng/mL EGF对细胞有促增殖作用，并呈浓度依赖性,两种生长因子均在10ng/mL浓度时作用最强，并于培养第5d达到促增殖高峰。结论：bFGF和EGF能促进外胚间充质细胞的增殖。     

aFGF和TGFβ1联合诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化

目的建立猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化的体外诱导方案。方法联合应用aFGF和TGFβ1对体外培养的猪牙乳头细胞进行平面诱导,观察诱导后细胞的形态学变化,通过Von Kossa染色检测诱导后细胞的矿化能力,并采用免疫荧光染色和RT-PCR检测成牙本质细胞特异性标志物——DSP蛋白和DSPP mRNA在诱导后细胞中的表达。结果诱导后部分细胞出现细长的单侧细胞突起,在矿化液培养2周后形成典型的矿化结节,并且表达DSP蛋白和DSPP mRNA。结论联合应用aFGF和TGFβ1可以诱导体外培养的猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化。     

转化生长因子β1对体外成牙本质细胞分化的影响

目的：观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGF－β1）对体外培养鼠牙乳头成本本质细胞分化的影响。方法：取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚，胰腺蛋白消化分离牙乳头，置半固态培养基培养6d，半固态培养基中加入重组转化生长因子β1和肝素，组织学观察。结果：TGF－β1加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化，并分泌胸外基质，单独加入TGF－β1未见细胞极化，但基质分泌增加，结论：TGF－β1能诱导前成牙本质细胞的细胞学和功能上分化。     

胎盘间充质干细胞牙向分化的体外研究

目的探讨胎盘间充质干细胞牙向分化的可能性。方法双酶(胶原酶和胰蛋白酶)消化法获得SD大鼠胎盘间充质干细胞,免疫细胞化学鉴定其表型、成脂成骨诱导鉴定其多向分化能力。SD大鼠胎鼠牙胚细胞条件培养基诱导胎盘间充质干细胞14 d,免疫细胞化学检测DSP和DMP-1,RT-PCR及凝胶电泳检测DSPP和DMP-1基因。结果胎盘间充质干细胞表达CD29、CD44和CD105,而不表达CD31、C34和CD45。成骨和成脂诱导后形成钙结节以及脂滴。牙向诱导后的胎盘间充质干细胞形态无明显改变,表达成牙本质细胞特异性相关蛋白-DMP-1、DSP和特异性基因-DMP-1和DSPP。结论胎盘间充质干细胞具有牙向分化的潜能。     

永生化成牙本质细胞表达牙本质基质蛋白的实验研究

目的　探讨永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT-hOd-l表达牙本质基质蛋白的情况。方法　矿化液培养hTERT-hOd-l细胞5周,检测骨钙素(OC)分泌量和碱性磷酸酶(ALP)活性。采用免疫组织化学、RT-PCR和原位杂交方法检测Ⅰ型胶原、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白1 (DMP1)以及成牙本质细胞标志物牙本质涎磷蛋白(DSPP) 和牙本质涎蛋白(DSP)在细胞中的表达。结果　在矿化液诱导下,hTERT-hOd-l细胞ALP活性和OC分泌量升高。 hTERT-hOd-l细胞在mRNA水平上表达BSP、DMP1和DSPP,在蛋白质水平上表达DSP和Ⅰ型胶原。结论　hTERT- hOd-l细胞在体外表达牙本质基质蛋白,具有矿化的潜能。