去铁胺诱导K562细胞凋亡研究

目的：探讨铁螯合剂去铁胺（DFO）诱导白血病细胞凋亡的分子机制。方法：实验分为DFO组(终浓度分别为10、50、100 μM)、DFO+FeCl3（各10 μmol/L）组及空白对照组。用钙黄绿素检测K562细胞可变铁池。锥虫蓝活细胞拒染实验进行活细胞计数及细胞存活率测定;光镜形态学观察及流式细胞仪方法检测K562细胞凋亡;比色法检测caspase-3活性。结果：（1）DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,凋亡率增加,显示一定的时间剂量依赖性;而DFO+FeCl3组细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义。（2）50 μmo/L、100 μmol/L DFO作用于K562细胞24 h时,caspase-3酶活性升高明显,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);相关分析结果显示,K562细胞铁池的荧光改变与caspase-3活性变化呈负相关(r=-0.894, P<0.05)。结论：DFO诱导白血病细胞凋亡的作用可能与螯合细胞内铁,降低细胞可变铁池,激活caspase-3有关。     

铁剥夺对K562细胞动态铁池的改变及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨去铁胺(DFO)对白血病细胞K562动态铁池(LIP)、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法实验分为DFO组、DFO 三氯化铁组及空白对照组,分别采用钙黄绿素检测K562细胞LIP改变、流式细胞术观察K562细胞凋亡和RT-PCR测定K562细胞c-myc、Rbb、ax mRNA表达。结果1.不同浓度的DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度增加,LIP降低,细胞生存率逐渐下降,显示一定的时间剂量依赖性。2.不同浓度的DFO作用于K562不同时间后,细胞凋亡增加,高于对照组(P<0.05);3.RT-PCR结果显示,DFO能明显上调c-myc、Rb和bax mRNA表达(P<0.05)。结论DFO可诱导K562细胞凋亡;其诱导K562细胞凋亡作用可能与其螯合细胞内铁,降低细胞LIP,上调细胞凋亡相关基因c-myc、Rb、bax mRNA表达密切相关。     

铁剥夺抗K562细胞的增殖作用及机制

目的观察铁剥夺对白血病细胞增殖的影响。方法以K562细胞作为人类白血病细胞株,台盼蓝染色,光镜下计数活细胞率;用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测A值（570nm）,绘制生长曲线;流式细胞术分析细胞周期变化。结果小剂量去铁胺（DFO）（12.5μmol/L）处理K562细胞时,生长曲线轻微变化,随时间延长和DFO剂量增加（25、50、100μmol/L）,细胞存活率明显下降,生长曲线高峰显著低于对照组。DFO的抗增殖活性为时间-剂量依赖型。用DFO（50、100μmol/L）处理K562细胞48和72h后,G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,与对照组比较均有显著性差异（Pa〈0.001）。上述作用可被等浓度的三氯化铁抵消。结论铁剥夺具有抗白血病细胞增殖作用,剥夺细胞内铁,阻止细胞由G0/G1期进入S期可能是其机制之一。     

铁剥夺诱导K562细胞凋亡与Caspase-3激活的实验研究

目的观察铁剥夺诱导K562细胞凋亡与Caspase-3激活间的关系。方法以不同水平的去铁胺(DFO)处理K562细胞。1.用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)对K562细胞进行双标记后,在流式细胞仪下检测细胞凋亡率。2.采用肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测Caspase-3活性。3.用Western blot分析Caspase-3活性蛋白的激活。结果K562细胞经不同浓度DFO处理后,细胞发生明显凋亡,Caspase-3活性渐升高。50、100μmol/L DFO作用于K562细胞24 h后,Caspase-3酶活性升高明显;与对照组比较,有显著性差异(P<0.001);在100μmol/L浓度下14 h可见活性Caspase-3,Caspase-3活性和量为时间-剂量依赖性;10、12 h各浓度组间Caspase-3活性水平比较,差异均无显著性(P均>0.05)。上述作用可被等摩尔浓度的氯化铁(FeCl3)抵消。结论铁剥夺可能通过螯合细胞内铁,激活Caspase-3,诱导K562细胞凋亡。     

去铁胺对HL-60细胞Nix蛋白表达的影响

目的探讨去铁胺(DFO)对HL-60细胞Mix蛋白表达的影响。方法应用不同浓度的DFO刺激HL-60细胞系12 h后采用western blot方法检测处理后细胞中Nix蛋白的表达水平。结果与对照组(0μmol/L)相比,20μmol/L DFO组Nix蛋白表达水平无明显改变(P0.05),100μmol/L DFO组Nix蛋白表达量明显增加(P0.01)。结论 DFO可能通过诱导Nix蛋白的表达来实现HL-60细胞的凋亡。     

铁对白血病细胞HL-60线粒体膜电位及凋亡的影响

目的研究铁对人白血病细胞HL-60线粒体膜电位(ΔΨm)及凋亡影响,探讨其可能机制。方法HL-60细胞分别与10、50、100μmol/L去铁胺(DFO)和10、100μmol/L三氯化铁(FeCl3)共培养,分别造成细胞内铁剥夺和富铁状态,噻唑蓝(MTT)法检测不同铁状态下细胞活力变化;相差显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率及ΔΨm变化;原位杂交法检测凋亡基因Bax转录水平。结果DFO组细胞生长率呈下降趋势,而FeCl3组细胞生长率呈上升趋势;HL-60细胞经DFO处理后,细胞凋亡率增加、ΔΨm下降(P<0.01);100μmol/L DFO作用细胞244、8 h后,凋亡基因Bax的转录水平均较对照组增高(P<0.01)。FeCl3组细胞ΔΨm及Bax转录无明显变化,但凋亡率较对照组略下降。结论铁剥夺可降低ΔΨm,诱导HL-60细胞凋亡;而富铁对细胞ΔΨm无明显影响,但可增强细胞活力,使细胞凋亡率下降。     

2-甲氧基雌二醇诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对K562细胞的凋亡诱导效应及其作用机制。方法使用不同浓度2-ME(0,5,10,20,40μmol/L)作用于K562细胞,48 h后用流式细胞术检测2-ME作用后K562细胞的凋亡率的变化;用western blot方法检测2-ME作用48 h后K562细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。结果 (1)2-ME在5~40μmol/L浓度范围内作用48 h对K562细胞有凋亡诱导作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),这种作用呈剂量依赖关系;(2)2-ME作用48 h后,K562细胞Bcl-2蛋白的表达较对照组减少,差异有显著性(P<0.05),而Bax和Caspase-3表达较对照组增高,差异有显著性(P<0.05)。结论 2-ME可能通过线粒体途径诱导K562白血病细胞凋亡。     

二烯丙基二硫诱导人白血病K562细胞凋亡及其对Fas、FasL及caspase-8表达的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）诱导白血病 K562 细胞凋亡的作用及其机制。方法：采用 Hoechst 33258 染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度及不同作用时间 DADS 对 K562 细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测DADS作用48 h后 Fas、FasL、caspase-8 mRNA的表达。结果：DADS可诱导K562 细胞凋亡。DADS(作用细胞24 h)浓度从10 mg/L增至40 mg/L时,其对K562细胞的凋亡率由（11.60±0.83）%增至（37.94±0.87）%;DADS(40 mg/L浓度组)作用时间从24 h增至72 h,其对K562细胞的凋亡率由（37.94±0.87）% 增至（47.02±0.66）%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增加 (P<0.05)。DADS作用48 h后,Fas、caspase-8 mRNA 表达水平较对照组上调;FasL mRNA 较对照组下调（P＜0.05）。结论：DADS 呈时间和浓度依赖性诱导白血病K562 细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调 Fas、caspase-8,下调 FasL有关。     

去铁胺对K562细胞多药耐药基因MDR1及核因子κB表达的影响

目的 探讨去铁胺对柔红霉素（DNR）诱导多药耐药基因MDR1及核因子KB（NFκB）表达的影响,初步了解NFKB与MDR1表达、细胞内铁代谢的关系。方法 以DNR单用或联合应用25μmol／L去铁胺（DFO）为处理因素作用于人红白血病细胞株K562,应用RT-PCR法、流式细胞分析技术分别检测对照组、DNR组和DNR＋DFO组K562细胞MDRlmRNA和P糖蛋白（PgP）的表达情况,同时采用免疫组织化学染色法检测NFKBκB表达及活性情况。结果 与对照组相比,DNR可同时诱导MDRlmRNA、Pgp表达和NFgB活化（P〈0．05）;25μmol／LDFO联合DNR可显著抑制DNR诱导的MDRlmRNA、Pgp的表达及NFKB的活化（P〈0．05）。结论 去铁胺可减少柔红霉素诱导的MDRl、PgP表达,其机制可能与铁剥夺后降低了柔红霉索诱导的K562细胞的氧化应激反应,进而影响NFκB的活化有关。     

柔红霉素对K562细胞核因子-κBp65活性的影响

目的 探讨柔红霉素(DNR)对白血病K562细胞核因子-κBp65(NF-κBp65)活性的影响.方法 对数生长期K562细胞随机分为A、B二组,A组(对照组)加RPMI-1640培养液;B组(DNR组)分别加DNR 0.2、2.0、20.0 μmol/L作用1、2、 6、24 h后,用免疫组织化学法检测K562细胞NF-κBp65活性阳性率.结果 DNR 0.2 μmol/L作用1、2、 6 h,NF-κBp65阳性率与对照组比较无显著性差异(Pa＞0.05);作用24 h,其阳性率与对照组比较有显著性差异(P＜0.001).DNR 2.0 μmol/L作用于K562细胞1 h,其阳性率与对照组比较无显著性差异(P＞0.05);作用2、6、24 h,与对照组比较均有显著性差异(Pa＜0.05).DNR 20.0 μmol/L作用1、2、6、24 h,其阳性率与对照组相比均有显著性差异(Pa＜0.001).结论 DNR能促进K562细胞NF-κBp65蛋白活化,且存在剂量时间依赖性.     

术中判断肠活力三种方法的比较

术中准确地评价肠活力是外科医师面临的一个普遍问题。应用兔肠缺血模型，比较静脉荧光素、表面血氧测定和激光多普勒三种技术判断肠活力的精确性。结果：诊断效率静脉荧光素法为７８％，表面血氧测定为６８％，激光多普勒为９５％。后者精确度显著优于前二者，且操作简便、迅速，具有临床应用前景。     

早产儿视网膜病的危险因素分析及随访调查

研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的发生率、高危因素、治疗与随访情况。方法对2005年7月-2007年12月温州医学院附属第一医院NICU收治的符合ROP筛查标准的早产儿,于生后2周开始由资深眼科医师开始行间接眼底镜检查眼底,并进行随访。结果434例早产儿中ROP的发生率为5.5%(24/434例),24例ROP中Ⅰ期19例,Ⅱ期3例,Ⅲ期2例。Ⅲ期阈值病变者行激光光凝治疗,全部患儿均恢复正常。对434例早产儿行单因素分析得出,胎龄、出生体重、住院时间、吸氧、吸氧浓度、吸氧时间、呼吸暂停、新生儿肺透明膜病(RDS)、肺表面活性剂(PS)的应用、机械通气、输血、光疗时间、感染与ROP的发生有相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示胎龄、出生体重、胎数、吸氧时间、光疗时间、代谢性酸中毒、母亲妊高症、颅内出血是影响ROP发生的主要因素。结论早产是ROP的根本原因,防治各种并发症、合理的氧疗是预防ROP的关键。建立完善有效的ROP筛查制度,早期发现、早期治疗ROP,可改善ROP的预后。     

主动脉缩窄的治疗研究进展

主动脉缩窄(coarctation of aorta,CoA)是主动脉的局限性狭窄,狭窄最常见于峡部,是一种常见的先天性心血管畸形,占所有先天性心脏病的5％ ～8％.缩窄导致上肢血压升高,下肢血压降低,并可引起心功能下降,未经治疗的CoA预后不佳.治疗方式包括外科治疗及经皮介入治疗,不同治疗方式的并发症发生率不同,术后长期监测其并发症、心功能是评估预后的重要指标.该文对主动脉缩窄的治疗方式及术后并发症、心功能情况的研究进展作一综述.     

小儿法洛四联症根治术106例临床分析

目的探讨小儿法洛四联症根治术的特点,以提高手术疗效。方法对1998-02—2005-07在河南省郑州市第七人民医院接受法洛四联症根治术的106例患儿的临床资料进行回顾性分析。结果治愈103例,死亡3例,病死率为2.9%。术后随访率100%,随访3～93个月,无晚期死亡。全部病例心功能皆恢复至Ⅰ或Ⅱ级(NYHA)。结论绝大部分法洛四联症患儿可施行一期根治术,提高手术成功率的关键在于合理的体外循环灌注、严密修补室间隔缺损和恰当疏通右室流出道。     

Outcome of the Treatment of Inborn Errors of Metabolism

The use of specific dietary restrictions, cofactor administration, mobilisation of insoluble substances, environmental modifications, product replacement and selective enzyme inhibition are now established for the treatment of some inborn errors of metabolism. There is no generally accepted application for enzyme administration, cytopharmacology (manipulation of the cytoskeleton) or for cell transplantation except for bone marrow transplantation in disorders where the bone marrow is primarily at fault. The other uses of bone marrow transplantation which have been proposed require further evaluation. Results of recent research suggest that the scope of this approach is gradually being widened. There is also scope for development in the field of organ transplantation taking advantage of recent technical¹ and immunological progress. The treatment of inborn errors of metabolism by genetic modification is not yet on a practical clinical level; more laboratory and animal studies are needed before this can be attempted in man. Adenosine deaminase deficiency appears to be the disease in which this will be first attempted using a retroviral vector to insert the gene into the genome of pluripotential bone marrow cells.     

Reliability of subjective estimates of exercise capacity after total repair of tetralogy of Fallot

Sixty-nine patients (age 10 × 3.5 years, median 9.7 years) operated on for tetralogy of Fallot, underwent excercise testing 5.1 × 2.5 years after total correction. Aerobic capacity was assessed by the ventilatory threshold method. After the exercise test, parents completed a validated standardized questionnaire to evaluate the habitual level of physical activity of their child. They were then asked to place their child into one of three groups, describing their child's activity level, compared to normals (below average, average and above average). In the average and above-average groups, 73% and 65% of the patients were misclassified when compared to objective exercise testing. However, in the below-average group, no misclassifications were found. Subjective estimates of activity level, and consequently exercise tolerance, were poorly associated with objective measurements of exercise performance in these patient groups. Our results question the reliability of self-reported estimates of physical activity level and consequently exercise capacity in children after surgical correction of tetralogy of Fallot.     

Spectrum of clinical presentations of vein of Galen aneurysm

Aneurysm of the vein of Galen is a rare intracranial vascular malformation. It is known to have diverse manifestations and varying severity. Four cases with different modes of presentation and outcome are reported. A mortality of 50 per cent was encountered. Among the survivors, one had neurologic sequelae whereas the other had attained age-appropriate developmental milestones. The former was a rare case of spontaneous thrombosis of the aneurysm while the latter was a boy who underwent therapeutic embolization.     

早产儿脑病研究进展

早产儿脑病是复杂的原发性脑损伤和继发性脑发育异常疾病.过去几年对该病有了较为深刻的认识,该文就最新的有关早产儿脑病概念演变,脑损伤后的细胞分子机制和损伤后发育障碍,尤其是活化小胶质细胞介导的少突胶质细胞损伤机制、神经/髓鞘受损和丘脑、板层下神经元及大脑皮层的受损机制或发育成熟障碍进行综述,以便对该病有更深刻的认识.     

婴幼儿法乐四联症手术治疗近期疗效的影响因素

目的 探讨影响婴幼儿法乐四联症手术治疗近期疗效的各相关因素.方法 将2003年8月至2011年2月经作者一期手术纠治的117例年龄≤3岁的法乐四联症患儿分为疗效良好、疗效较差两组.分析手术时患儿年龄、体重、术前HCT值、McGoon指数、EDVI、主动脉阻断时间、转流时间、室间隔缺损大小、升主动脉与肺动脉干直径比、...