小鼠胚胎成纤维细胞与人胚共培养对胚胎体外发育影响

[目的]评价小鼠胚胎成纤维细胞共培养是否促进d3质量差的人胚胎的囊胚发育。[方法]使用小鼠胚胎成纤维细胞与受精后第3天(d 3)质量差的胚胎共培养,对照组使用Quins囊胚培养液进行序贯培养,观察各阶段囊胚形成率,检测囊胚总细胞数。[结果]d5共培养组12.3％胚胎开始出现早期囊腔化,d 6 7.4％胚胎出现囊腔扩张,4.2％的胚胎d 7孵出。而序贯培养组d 5仅4.2％胚胎开始早期囊腔化,d 6仅1.5％胚胎出现囊腔扩张,d 7仅0.6％的胚胎孵出,表明共培养组囊胚形成率更高,囊胚发育速度快于对照组。此外,共培养组囊胚总细胞数更多,d 6扩张囊胚总细胞数为62.6±13.4,而未扩张囊胚总细胞数26.1±8.9,分别高于序贯培养组。[结论]小鼠胚胎成纤维细胞共培养与 Quins囊胚培养液序贯培养比较,前者更能促进d 3质量差的人胚胎体外发育。     

小鼠体外受精及其胚胎体外培养的比较研究

目的 通过比较不同品系小鼠体外受精情况以及不同培养液对C57BL/6J小鼠胚胎体外培养效果的实验,进一步完善小鼠体外受精和早期胚胎体外培养体系.方法 对C57BL/6J、DBA/2、FVB/NJ、BALB/c、KM、ICR及BARR Ⅱ小鼠进行超排和体外受精,并对C57BL/6J小鼠体外受精后的2-细胞胚胎用HTF、CZB、KSOM、M16、HECM五种培养液在相同条件下进行体外培养到囊胚,计算4-细胞～囊胚的发育率.结果 各品系小鼠平均排卵数为13.0～38.7个(P＜0.01),体外受精率为70.2%～92.8%(P＜0.05).不同培养液至4-细胞的发育率为60.3%～95.8%,其中KSOM的4-细胞发育率为95.8%,最适合2-细胞向4-细胞的发育.8-细胞发育率为52.8%～91.1%,桑椹胚发育率为40.6%～87.5%,囊胚发育率为5.1%～75.4%,各阶段胚胎发育率均差异显著.其中适合于金黄仓鼠桑椹胚、囊胚发育的HECM-2并不支持C57BL/6J囊胚的发育,其囊胚发育率只有5.1%,CZB最适合其囊胚的发育.结论 遗传背景是影响小鼠超排及体外受精效果的主要因素之一.葡萄糖的存在不利于克服2-细胞发育阻断,胚胎在8-细胞期以前,主要能源物质不是葡萄糖,直到桑椹胚后期,葡萄糖才是主要的能量物质.磷酸盐可引起胚胎发育阻断.氨基酸和EDTA有利于克服胚胎发育阻滞.     

小鼠胚胎原始生殖细胞的体外培养

采用细胞生物学方法和组织培养技术研究小鼠胚胎原始生殖细胞(PGCs)的一般形态学特征及生物学特点.在体外培养条件下,PGCs 按体积大小可分大、中、小3类。本研究发现,中、小型原始生殖细胞在培养的第2、3 d 增多,形态似大型原始生殖细胞。培养中的 PGCs 不贴壁而悬浮生长于培养液中,培养到第6～7 d时开始死亡。体细胞(间充质细胞或间皮细胞)贴壁生长,生长旺盛,与PGCs 同时死亡。     

冻融胚胎体外培养至囊胚移植后出生婴儿1例报道

常规体外受精于第3天将胚胎冷冻保存,但冻胚经融解后受多种因素的影响着床能力较低,经体外培养2～3d可观察其发育潜能,将形成囊胚者进行移植,以提高着床的机率,是目前冻胚移植的又一新点[1]。我中心冻融胚胎体外培养至囊胚移植后出生婴儿1例,现报告如下。1病例介绍患者,女,29岁,主因:"人流术后8年,婚后未避孕不     

小鼠早期胚胎的体外培养研究

目的 寻求一种体外稳定培养早期胚胎的方法。方法 比较了不同培养基(M16、G1、CZB)从受精卵到囊胚的培养效果，并对CZB做了加糖与不加糖、加BSA与15％FBS的比较研究。对体外形成的囊胚做细胞记数以评估胚胎的质量。结果 CZB无论加糖还是不加糖，均能有效克服2-细胞阻滞(70．0％～84．6％)，加糖CZB囊胚形成率(46．1％～50．0％)更高。受精卵一直在无糖CZB中培养与第3d后转入加糖CZB培养的桑椹胚和囊胚形成率无显著性差异。CZB中加BSA和15％FBS的培养效果相当。体外培养形成的囊胚较体内发育有迟滞现象，但是细胞记数无显著性差异。结论 对于昆明小鼠早期胚胎的体外培养，CZB是较M16、G1更适合的培养基，且CZB中从一开始就应该加糖。CZB中加BSA足可取代FBS，其培养的胚胎无明显异常。     

乙二醇为主体的玻璃化溶液对小鼠桑椹胚的超低温保存

本试验系统地研究了以低毒性的乙二醇为主体,添加葡聚糖和海藻配制成的玻璃化溶液（EDT20,EDT30及EDT40）,在室温（20 ℃或25 ℃）下对小鼠体内受精的桑椹胚进行玻璃化冷冻保存。毒性试验表明,30%葡聚糖溶液（D）,0.5mol/L海藻糖溶液（T）,以及两种物质的混合液即DT溶液,对胚胎均无化学毒性作用,乙二醇是化学毒性的主要来源。且随着乙二醇浓度的增加和平衡时间的延长,对胚胎的化学毒性也增大。小鼠桑椹胚的玻璃化冷冻试验中,20 ℃室温下胚胎冷冻效果好于25 ℃,但差异无显著意义（P>0.05）。在20℃室温下,胚胎于EDT30中平衡1 min,后直接投入液氮中一步法冷冻后胚胎体外发育率、移植妊娠率和产仔率分别为94.00%、45.00%、38.00%,与对照组差异均无显著意义（P>0.05）。若将胚胎在10%EG中平衡5 min,再移入EDT30中平衡30 s二步法冷冻效果最佳,解冻后囊胚发育率、移植妊娠率和产仔率分别为96.00%、57.00%、52.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05)。     

人胚胎囊胚期培养及相关因素研究

目的 分析受精后第3天 (D3)胚胎的细胞数、质量分级与囊胚形成之间的关系 ,比较不同囊胚培养液的囊胚形成率。方法 将体外授精 (IVF)患者胚胎移植后的剩余胚胎54个 ,移入含10 %合成血清代用品(SSS)的囊胚培养液 (IVC -Three、Blastocyst)或人输卵管液 (HTF)中 ,每天观察胚胎卵裂情况 ,直至退化或受精后第7天。 结果 总囊胚形成率29.6% ,囊胚形成率与D3胚胎细胞数呈显著正相关 (r=0.99,P<0.01) ,胚胎质量级别1～2.5级的卵裂球较3～4级者具有更高的囊胚形成率 (34.9%比9.1% )。IVC -Three培养液中囊胚形成率达56.1 % ,与其他两种培养液比较有显著差异 ( χ21=5.77,χ22=3.95,P<0.05)。 结论 序贯培养的囊胚期胚胎培养技术是简便可行的。D3胚胎细胞数及质量分级与囊胚形成有密切关系。IVC -Three培养液是良好的囊胚培养液 ,可应用于临床     

输卵管积液影响体外培养胚胎质量的实验研究

目的：分析输卵管积液的形成及其化学成分，探讨输卵管积液对体外培养胚胎生长发育的影响及其机制。方法：建立输卵管积液动物模型，测定其成分；用不同浓度输卵管积液培养小鼠2-细胞胚胎，观察胚胎形态。结果：输卵管积认中K^ 、HCO3^-和表皮生长因子（EGF）含量明显低于输卵管液；pH值明显增高。输卵管积液组囊胚形成率和胚胎孵化率均明显低于输卵管液。结论：结扎兔输管两端能诱导输卵管积液形成；机械诱导的输卵管积液成分改变能影响早期胚胎的质量。     

分割小鼠胚胎的简易方法和分割后二分胚的发育能力

本研究改进和简化了小鼠胚胎分割方法,在普通立体显微镜下用玻璃针手工切割,每切割一枚胚胎只需1min。共切割4日龄鼠胚701枚,得1346枚可用半胚,分割成功率为96.01%。半胚培养发育率达73.70%。冷冻裸半胚,装透明带半胚和装透明带后再用琼脂包埋半胚的解冻后培养发育率分别为26.67%、56.67%和64.29%。     

体外培养神经干细胞PDGF、EGF和GDNF的表达

目的为研究体外培养小鼠神经干细胞（NSC）血小板源性生长因子（PDGF）、表皮生长因子（EGF）和胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的基因表达.方法取小鼠胚胎海马NSC培养并鉴定,提取其总RNA,用RT-PCR技术检测培养NSC内PDGF、EGF、GDNFmRNA的表达.结果培养NSC中PDGF mR-NA表达最强,EGF mRNA明显表达,但几乎未检测到GDNF mRNA.结论为了解NSC分泌神经营养因子发挥生物学作用提供了理论基础.     

小鼠胚胎冷冻保存技术研究进展

随着生物工程小鼠的大量出现，建立一种完善的胚胎冷冻保存技术体系保存这些资源至关重要。自20世纪70年代对小鼠胚胎冻存成功以来，胚胎冷冻技术已得到飞速发展。目前研究焦点在于寻找更好的冷冻保护剂和简化操作方法等方面。本文对小鼠胚胎冷冻保存技术的冷冻保护剂、冷冻方法及所涉及的主要原理和目前的研究进展进行了评述。     

洗胚对小鼠胚胎质量影响初探

本实验探讨了胚胎移植过程中洗胚对胚胎质量的影响。实验对象是KM鼠,对实验（不洗胚）组和对照（洗胚）组进行比较,结果显示实验组受体鼠产仔率为30.3%,对照组受体鼠产仔率为23.0%,实验组明显高于对照组,卡方检验P〈0.05,有统计学意义。从而得出移植过程中的洗胚对胚胎质量有一定影响的结论。     

不同日龄和品系小鼠超排卵、体外受精及受孕率的比较研究

用PMSG和HCG分别对不同日龄(28日龄、56日龄和112日龄)的ICR,B6C3F1和C57BL/6J三个品系小鼠进行超排处理,并分别进行IVF(体外受精)及体外培养后将2-细胞期的胚胎移植至假孕受体的输卵管中,以此比较不同日龄和品系小鼠的超排、体外受精率和受孕率.结果显示,三个品系的28日龄小鼠的排卵数均高于56日龄和112日龄的排卵数(P<0.01),但品系和年龄并不影响卵母细胞在体外受精后形成2-细胞胚胎的受精率(平均约为91%的受精率),以及这些正常的胚胎在移植至受体后的受孕率(约51%左右).     

鼠胚心肌细胞体外培养模型的建立

目的建立经济适用的小鼠胚胎心肌细胞的分离、培养和鉴定方法。方法取不同胚龄小鼠心脏,采用不同方法进行消化、接种、体外增生、鉴定。结果用0.125%胰蛋白酶和0.02%EDTA混合消化液,短时间、分步消化孕12 d鼠胚的心脏。将获得的细胞悬液接种于胎牛血清包被的培养皿中,采用pH值为7.2~7.4的HAM’S F12加20%胎牛血清培养液进行培养,所获得的细胞经PAS反应及免疫组化鉴定显示约80%的细胞为心肌细胞。结论建立的鼠胚心肌细胞培养模型可进行胚胎心脏发育毒性的体外研究。     

小鼠2细胞期胚胎移植方法的探讨

目的以近交系C57BL/6J小鼠作为供体胚小鼠，封闭群ICR小鼠及昆明鼠作为假孕体，对2细胞期的胚胎移植方法和假孕鼠品系进行对比探讨。方法经超数排卵的C57BL/6J雌鼠于正常雄鼠交配，取受精卵，培养到2细胞期，进行输卵管伞移植和输卵管壁移植，妊娠产仔。结果从KM为假孕鼠，对2细胞期胚胎进行的输卵管壁移植的妊娠数量最多18只，90%的妊娠率，产仔数最多188只，产仔率达34.8%。结论输卵管壁移植的技术简单易行具有较高的妊娠率及产仔率。     

小鼠窦前卵泡体外培养的研究

目的探讨不同直径的窦前卵泡的培养对获得成熟卵母细胞的影响。方法出生10天的小鼠窦前卵泡体外培养12 天。直径小于80μm的卵泡258个为A组;直径80-110μm的卵泡306个为B组。观察卵泡形态的变化,测量卵泡直径的变化。结果 A组卵泡成活率56．2％,窦腔形成率13．1％,卵母细胞成熟率11．7%;B组卵泡成活率89．5％,窦腔形成率51．8％,卵母细胞成熟率56．6％。B组卵泡成活率、窦腔形成率和卵母细胞成熟率显著高于A组(P<0．05,P<0．01,P<0．01)。A组卵泡直径(72．5±15．7)μm,培养后卵泡直径(246．3±22．2)μm(P<0．01);B组卵泡直径(101．7±20．1)μm,培养后卵泡直径(370．3 ±33．9)μm(P<0．05)。A组卵母细胞直径(52．3±4．4)μm,培养后卵母细胞直径(68．5±9．3)μm(P<0．01);B组卵母细胞直径(55．6±5．8)μm,培养后卵母细胞直径(71．9±5．7)μm(P<0．01)。结论出生10天小鼠窦前卵泡培养后可以得到第二次减数分裂中期(MⅡ期)卵母细胞;直径80μm以上的卵泡成活率,窦腔形成率,卵母细胞成熟率较高,培养效果较好。     

体外低氧培养系统下的高质量早期人胚形态学特征

目的：探讨低氧（7.5%O2）和高氧（20%O2）培养体系对人早期胚胎（D1-D3）体外发育及胚胎移植临床结局的影响．方法选取2012年2月至2013年8月在云南省第二人民医院生殖医学中心接受常规IVF-ET治疗,行D3新鲜胚胎移植的周期资料,共280个周期,比较7.5%O2低氧组（120个周期）和20%O2高氧组（160个周期）早期胚胎体外发育的结果和胚胎移植的临床结局．结果低氧组D3优级胚胎形态外观上明显有别于次优级胚胎（即传统优级胚胎）,呈卵裂球紧贴,裂球边界渐模糊的形态学特征,且优级胚胎率显著高于高氧组（66.22%与47.54%）,但2组受精率、卵裂率和可用胚胎率比较差异无统计学意义．低氧组胚胎的着床率显著高于高氧组（42.94%与31.01%）,生化妊娠率（62.22%与47.06%）和临床妊娠率（53.33%与39.22%）也均比高氧组高．结论体外低氧培养系统能产生质量更高的人早期胚胎,对提高IVF临床结局有益．     

2,3,7,8-四氯苯二噁英对NIH小鼠胚胎发育的影响

目的探讨2,3,7,8四氯苯二英(TCDD)对NIH小鼠胚胎发育过程的影响。方法在NIH小鼠妊娠早期的1～8d,胚泡着床前期的1～3d和着床后期的4～8d,经口腔灌服0、2、50和100ng(kg·d)剂量的TCDD,在小鼠妊娠第9天和第18天时观察子宫内的胚胎发育形态。结果50、100ng(kg·d)剂量在妊娠早期1～8d染毒,使多数妊娠小鼠在第9天观察时子宫内胚胎全部丢失;在妊娠1～3d和4～8d染毒,使部分妊娠小鼠胚胎丢失,另外有部分胚胎吸收或发育阻滞。同时发现早期成活胚胎在发育过程中继续死亡,妊娠第18天时,胎鼠出生前成活率下降。结论小鼠妊娠早期染毒,引起小鼠妊娠早期胚胎丢失,着床后胚胎发育异常,出现阻滞和死亡。