肾母细胞瘤中RB基因突变的研究

目的：调查肾母细胞瘤中ＲＢ基因突变，探讨ＲＢ基因突变与肾母细胞瘤发生的关系。方法：采用多重ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法结合ＤＮＡ测序对肾母细胞瘤的手术标本进行ＲＢ基因全部外显子的突变筛查。结果：２５例肾母细胞瘤中５例显示有缺失，４例检出ＳＳＣＰ电泳迁移率的改变，２例经测序证实为单碱基置换。其中１例（Ｗ２８）为第７５６个密码子的第２个碱基发生Ａ→Ｃ的颠换，另１例（Ｗ３１）为第２６内含子距５′端２８个碱基处发生Ｔ→Ｃ的转换。结论：ＲＢ基因突变涉及肾母细胞瘤的发生，提示肾母细胞瘤的发生为多次遗传改变积累的结果。     

肾母细胞瘤中BRCA1基因突变的筛查

目的：探讨ＢＲＣＡ１基因突变与肾母细胞瘤发生的关系。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对２４例肾母细胞瘤标本选用ＢＲＣＡ１基因发生突变较多的第２、５、２１和部分１１外显子区域进行筛查，以瘤旁正常组织作对照。结果：发现有６例标本分别在第５、２１、１１Ｇ、１１Ｈ２外显子区域出现ＳＳＣＰ异常泳动带。结论：提示ＢＲＣＡ１基因的突变可能与部分肾母细胞瘤的发生有一定关系。     

小儿肾母细胞瘤,肝母细胞瘤及胚胎性癌P53基因突变的研究

小儿肾母细胞瘤、肝母细胞瘤及胚胎性癌Ｐ５３基因突变的研究冯雪莲蔡玲玲刘荻宋万波朱琪肾母细胞瘤、肝母细胞瘤及胚胎性癌是发生在青少年的恶性肿瘤。我们采用多聚酶链反应－ＤＮＡ单链构象多态性分析法（简称ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法）对上述三种肿瘤中Ｐ５３抑癌基因突变进...     

小儿恶性肿瘤突变型P53蛋白的检测及临床意义

采用免疫组织化学方法检测小儿常见恶性肿瘤突变型Ｐ５３蛋白的表达情况并探讨其临床意义，用ＤＯ－１Ｐ５３单克隆抗体，ＬＳＡＢ法测定４５例小儿恶性肿瘤石蜡切片的Ｐ５３表达，１９例神经母细胞瘤３例阳性，均为ＩＶ期患儿，其中１例阳性为睾丸转移瘤的发瘤阴性，１６例肾母细胞瘤４例阳性，其中３例预后不良型均为阳性，１０例恶性淋巴瘤５例阳性，均为Ⅲ，Ⅳ期患儿，结果表明突变型Ｐ５３蛋白的表达与三种肿瘤的临床分期，组织     

用PCT—SSCP方法检测中国人Alport综合征COL4A5基因突变

目的 检测中国人Ａｌｐｏｒｔ综合征（ＡＳ）患者编码Ⅳ型胶原α链的ＣＯＬ４Ａ５基因突变。方法 提取１８例中国Ｘ连锁显性遗传型ＡＳ患者基因组ＤＮＡ，据ＣＯＬ４Ａ５基因中与外显子相邻的内含子序列设计引物，分别作ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ），扩增了该基因第２０～５１外显子。以琼脂糖凝胶电泳鉴定产物，作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析检测ＰＣＲ产物，对迁多率异常者进行ＤＮＡ测序。结果 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析发     

肾母细胞瘤BWR1A突变的筛查

目的：探讨新发现的印迹基因BWR1A突变与胚胎性肿瘤发生的关系。方法：采用聚合酶链式反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）技术及DNA测序，对55例肾母细胞瘤进行印迹基因BWR1A突变检测，以瘤旁组织为对照。结果：发现6例肾母细胞瘤标本第9外显子有异常泳动带。DNA测序其中1例1093位G缺失，产生终止密码TGA。结论：BWR1A基因突变涉及胚胎性肿瘤发生。     

P53蛋白及PCNA表达与肝母细胞瘤临床病理关系

用免疫组织化学法检测１７例肝母细胞瘤中Ｐ５３蛋白及ＰＣＮＡ的表达、分布，探讨这两种指标与肝母细胞瘤的临床病理关系和价值。材料和方法：取自我院外科手术标本１７例，男１２例，女５例。年龄最小５天，最大１１岁。病理分型按《外科病理学》标准。根据肿瘤组织分化程度分为组织结构分化好类型（ＦＨ），及组织结构分化差类型（ＵＨ），方法：常规ＳＰ法，一抗Ｐ５３１∶５０稀释，ＰＣＮＡ１∶１００稀释，对照组１１例取自非肝脏疾病尸检肝组织。结果判断：每张切片观察１０个光镜高倍视野下肿瘤细胞核有棕黄色颗粒为阳性，计数１０…     

先天性巨结肠症原癌基因RET结构的PCR-SSCP分析

目的：明确中国散发先天性巨结肠症是否有原癌基因ＲＥＴ突变。方法：３０例中国散发先天性巨结肠症。提取基因组ＤＮＡ；聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＲＥＴ基因第６、１３、１５、１７外显子；单链构象多态（ＳＳＣＰ）分析上述外显子是否有突变。结果：６例长段型先天性巨结肠症，２例有ＲＥＴ基因突变；普通型及短段型未见ＲＥＴ基因突变。２例突变位点均是ＲＥＴ基因的第１３外显子。结论：中国散发先天性巨结肠症长段型有ＲＥＴ基因突变，提示原癌基因ＲＥＴ与先天性巨结肠症的发生有关     

中国儿童白血病中P^53基因失活突变的研究

目的通过对中国儿童白血病患儿外周静脉血及骨髓标本的Ｐ５３基因失活突变的分析，探讨Ｐ５３基因突变在儿童白血病中的作用机制，及其突变类型在中国人群中的分布频率。方法用聚合酶链反应分别扩增Ｐ５３基因的外显子４，５，６，７，８；用单链构象多态性对扩增片段进行点突变检测。结果２２例儿童白血病人中９例在不同的外显子内发现了点突变，其中外显子７内的点突变发生频率最高。１例在血液系统外的体细胞中亦存在点突变，被证明是遗传性的突变，其他８例则是获得性突变。结论儿童白血病与其他实体肿瘤一样，普遍存在Ｐ５３基因的失活，因此对疾病的发生有重要意义。突变发生的频率与国外报道相同，因此是人类不同类型肿瘤的一个基本致变因素。     

小儿肾母细胞瘤p16基因启动子区甲基化观察

目的：观察小儿肾母细胞瘤ｐ１６基因启动子区有无甲基化及有甲基化者与组织类型和预后之间关系。方法：２０例肾母细胞瘤（５例肾组织作对照）进行甲基化观察，使用三种内切酶分别为ＦｎｕＤⅡ、ＳａｃⅡ、ＨｐａⅡ。结果：肿瘤组有６例出现甲基化（对照组无甲基化），除１例属于预后良好型（ＦＨ）之外，余５例均属预后不良型（ＵＨ）。甲基化与组织类型有关。随访结果有甲基化病例（ＵＨ组），１例术后１．５年死亡，１例术后半年复发，证明甲基化影响着预后。结论：肾母细胞瘤ｐ１６基因启动子区存在甲基化，甲基化者属于组织预后不良类型者多。     

儿童期脊肌萎缩症的基因诊断及产前基因诊断

为建立脊肌萎缩症（ＳＭＡ）产前诊断方法，应用３个与ＳＭＡ基因紧密连锁的ＣＡ重复序列位点ＪＫ５３ＣＡ１／２、５ＤＳ６３７、ＣＡＴＴ１，对１８个ＳＭＡ家系进行了连锁分析；应用聚合酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析，对３７例ＳＭＡ患儿作了ＳＭＡ基因缺失的检测；并作２例ＳＭＡ产前诊断。结果：１８个家系通过ＪＫ５３ＣＡ１／２位点诊断１２个（可诊断率６６．７％），通过５ＤＳ６３７位点诊断１４个（７．８％），１０个ＳＭＡ家系通过ＣＡＴＴ１位点诊断９．５个（９５．０％）；３７例患儿中３２例（８６．５％）有端粒侧ｅｘｏｎ７的纯合性缺失；２例接受产前诊断者，１例胎儿患病，１例胎儿为正常。结论：应用ＳＭＡ基因旁侧ＣＡ重复序列联合ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测进行ＳＭＡ基因诊断和产前诊断简便、准确、可应用于临床。     

小儿急性淋巴细胞性白血病与p53基因突变的相关性研究

ｐ５３基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的一个重要的抑癌基因 ,但 ｐ５３基因一旦突变则成为白血病发生的重要分子生物学机制之一。本研究应用聚合酶链反应结合单链构象多态性分析(ＰＣＲ＿ＳＳＣＰ)技术检测了１６例小儿急性淋巴细胞性白血病 (ＡＬＬ)的ｐ５３基因５、６、７、８外显子的突变 ,以探讨 ｐ５３基因突变与小儿ＡＬＬ发生、治疗效果及预后的关系。对象和方法一、对象ＡＬＬ患儿 (按ＦＡＢ标准诊断 )共１６例 ,年龄１岁～１３岁。其中初诊７例 ,复发期３例 ,缓解期６例。二、方法提取患儿外周血ＤＮＡ后 ,应用上海复旦大学…     

增殖细胞核抗原在肾母细胞瘤中的表达及其临床意义

为明确增殖细胞核抗原在肾母细胞瘤中的表达及其临床意义。对３５例肾母细胞瘤采用免疫组化染色进行回顾性研究。结果；３５例肾母细胞瘤采用免疫组化染色进行回顾性研究。结果；３５例肾母细胞瘤中ＰＣＮＡ表达阳性者１２例，其中Ⅱ级５例，Ⅲ级４例，Ⅳ级３例，阳性率为３４．２９％，其阳性率随临床分期升高而增加，ＰＣＮＡ阳性者其Ｓ期细胞指数及增殖指数均显著高天ＰＣＮＡ阴性者，而其五年生存率，１６．６７％，则显著低于Ｐ     

肝母细胞瘤各组织类型的免疫表达和预后的关系

目的 探讨肝母细胞瘤各组织类型的免疫表达和预后的关系。方法 对２４例肝母细胞瘤进行临床病理分析和组织学分型,其中１８例作７种标记的免疫组化研究。结果 胎儿型１２例,胚胎型７例,间变型３例和上皮间叶混合型２例;细胞角蛋白,甲胎蛋白,Ｓ－１００蛋白和波形蛋白在肿瘤上皮细胞浆的表达分别为１４例,１０例,９例和６例,癌胚抗原,Ｐ５３和Ｐ１６蛋白在细胞核中表达分别是１１例,９例和７例;     

儿童急性白血病p16基因的缺失和突变及其意义

目的 探讨Ｐ１６基因缺失、突变在儿童急性白血病发病中的意义。方法 选择白血病初治儿５１例，取其骨髓或外周血标本抽提ＤＮＡ，进行差异聚合酶链反应（Ｄ－ＰＣＲ）和单链构象多态性聚合酶链反应（ＳＳＣＰ－ＰＣＲ）的检测。结果 （１）儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）Ｐ１６基因外显子１、外显了２和外显子３的缺失率分别为３２％（１２／３８）、４４％（１２／４２）。（２）无一例发生基因突变。（３）急性非细胞性白血     

肾母细胞瘤血小板,凝血系统功能状态及其相关活化指标变化？…

目的 分析肾母细胞瘤时血小板数量，体积，活化，功能状态和凝血功能指标和凝血因子活化指标的改变。方法 肾母细胞瘤患儿组和对照组均为２１例，用＾１２５Ｉ标记单克隆抗体ＳＺ５１测定ＧＭＰ－１４０，ＥＬＩＳＱＡ测定ＴＸＢ２，用放免法测定５－ＨＴ，用Ｃｏｕｌｔｅｒ ＪＴ－ＩＲ细胞分析仪测定血小板数量，体积有较多的要用ＴＹＸＮ血液凝固仪测定血小板聚集率，采用ＣＯＮＴＲＯＮⅣ型凝血仪测定凝血功能，采用ＥＬＩＳＡ     

细胞性纤维连接蛋白在肾母细胞瘤中表达的研究

用过氧化物酶－抗过氧化物酶技术光镜下观察细胞性纤维连接蛋白（ＣＦＮ）在６３例肾母细胞瘤组织中表达强度与分布，探讨其与组织类型、预后之间的关系。结果，ＣＦＮ表达与瘤组织类型有关：上皮型，ＣＦＮ分布以肾小管样结构周围为主，而且表达强度高；间质型，ＣＦＮ多分布在细胞内，两者差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）。ＣＦＮ表达情况与肿瘤的临床分期无关。当ＣＦＮ分布在细胞周围，表达强度高者，预后好，生存５年以上者多。ＣＦＮ表达可作为判定肾母细胞瘤预后的指标之一     

软骨发育不全和FGFR3基因突变的临床研究

目的 探讨软骨发育不全的临床特点和ＦＧＦＲ３基因突变特点。方法 对２２例软骨发育不全患儿进行临床分析,并应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）及限制性内切酶酶解技术对其中７例软骨发育不全家系进行ＦＧＦＲ３基因第１０外显子突变分析。结果 ８６％为散发病例,全部患儿均在出生时即表现为头大,７例软骨发育不全患儿均显示出ＦＧＦＲ３基因第１０外显子Ｇ３８０Ｒ突变（ＦＧＦＲ３基因第１０外显     

肾母细胞瘤CD44V6表达及其意义

目的 探讨ＣＤ４４Ｖ６在不同病理类型肾母细胞瘤中表达的差异及其意义。方法 用免疫组化方法,研究１７例不同病理类型肾母细胞瘤和１３例正常肾组织中ＣＤ４４Ｖ６的表达。结果 肾母细胞瘤ＣＤ４４Ｖ６阳性率为４７．１％,明显高于正常肾组织（７．７％,１／１３）。其中,间变型肾母细胞瘤ＣＤ４４Ｖ６阳性率１００％（５／５）,非间变型阳性率２５．０％（３／１２）,两者差异有显著性意义（Ｐ＝０．００９〈０．０２５）     

肾母细胞瘤微卫星DNA变化分析

目的 研究分析１３例肾母细胞瘤（Ｗｉｌｍｓ肿瘤）患儿５个染色体点微卫星标记的变化。方法 ５个微卫星标记分别为：Ｄ７Ｓ１８０８、Ｄ９Ｓ１６１、Ｄ１２Ｓ１０５６、Ｄ１７Ｓ７９１和Ｓ２２Ｓ２７４,应用ＰＣＲ方法扩增Ｗｉｌｍｓ肿瘤组织ＤＮＡ,以该患儿正常组织作对照,扩增产物用含脲素的聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术进行分析。结果 １３例Ｗｉｌｍｓ肿瘤患儿检测５条染色体５个位点的微卫星多态标记,只１例患儿７号染