多对引物PCR方法鉴别尖锐温疣和假性湿疣

应用多对引物ＰＣＲ方法对尖锐湿疣９５例和假性湿疣３３例进行鉴别。结果９５例尖锐湿疣中８６例ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ阳性，３３例假性湿疣ＨＰＶＤＮＡ阴性，两组有非常显著差异。本研究结果显示假性湿疣与ＨＰＶ无关。ＰＣＲ方法准确，省时，方便，是鉴别尖锐湿疣与假性湿疣的理想方法。     

幽门螺杆菌细胞空泡毒素的PCR检测

目的：建立幽门螺杆菌（ＨＰ）细胞空泡毒素（ＶＣ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。方法：根据ＨＰＶＣ基因图谱，设计了两对顺序特异性引物，分别扩增包括信号肽顺序（４０６－１５１６）和不含此顺序（８１１－１５１６）的基因片段。对１４株经形态学和生化鉴定证实为ＨＰ的菌株提取其基因组ＤＮＡ，以上述引物进行ＰＣＲ。结果：已知ＶＣ阳性的ＨＰ标准株（ＮＣＴＣ１１６３８）、临床分离株ＮＺ７、ＮＺ８、ＨＰ２３、ＨＰ３５、ＨＰ５７、ＨＰ６５、ＨＰ６６、ＨＰ６７和ＨＰ７０共１０株为ＶＣ阳性。扩增产物中均检出ＶＣ特异的１１００ｂｐ、７０５ｂｐ、５４３ｂｐ片段，敏感性约为０．６ｎｇ基因组ＤＮＡ。结论：所设计的引物和ＰＣＲ检测方法正确，可应用于临床检测。     

多对引物PCR方法鉴别尖锐湿疣和假性湿疣

应用多对引物ＰＣＲ方法对尖锐湿疣９５例和假性湿疣３３例进行了鉴别。结果９５例尖锐湿疣中８６例（９０．５％）ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ阳性，３３例假性湿疣ＨＰＶＤＮＡ阴性，两组有非常显著差别（Ｐ＜０．００１）。本研究结果显示假性湿疣与ＨＰＶ无关。ＰＣＲ方法准确、省时、方便，是鉴别尖锐湿疣与假性湿疣的理想方法。     

76例宫颈癌组织中人类乳头瘤病毒的检测

本文应用ＨＰＶ－ＰＣＲ技术和ＤＮＡ杂交技术对７６例宫颈鳞癌标本进行了ＨＰＶ－ＤＮＡ的研究，发现ＨＰＶ－ＤＮＡ存在率为９０．７９％，主要类型为ＨＰＶ１６和１８。多酶切Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ杂交证实在宫颈癌中９２．５６％的ＨＰＶ－ＤＮＡ发生变异，说明ＨＰＶ－ＤＮＡ的基因变异与其致癌作用密切相关。ＰＣＲ结果证实ＨＰＶ－Ｅ６段在宫颈癌组织中常可出现，推测可能是致癌的关键片段之一。     

维吾尔族妇女子宫颈癌中 p53 基因的表达和 HPV DNA 检测研究

应用Ｅ６特异性引物ＰＣＲ检测新疆维吾尔族妇女子宫颈癌活检组织标本中的ＨＰＶ６，１６和１８ＤＮＡ。并应用免疫组化研究ｐ５３基因的表达。结果显示，６５例标本中７例不适应用于ＰＣＲ，其余５８例中ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性４５例（７７．６％），而ＨＰＶ６ＤＮＡ和１８ＤＮＡ为阴性。免疫组化显示，６５例中ｐ５３表达阳性４９例（７５．４％）。在４５例ＨＰＶＤＮＡ阳性标本中，ｐ５３表达阳性３４例（７５．６％）；１３例ＨＰＶＤＮＡ阴性标本中，ｐ５３表达阳性１１例（８４．６％）。提示，ＨＰＶ阳性或阴性与ｐ５３表达之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16E6E7基因 …

目的 分析中国山东地区宫颈癌患者ＨＰＶ１６型Ｅ６Ｅ７基因结构特点。方法 从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取ＤＮＡ,经ＨＰＶ多重引物ＰＣＲ法鉴定标准中感染ＨＰＶ型别,选感染ＨＰＶ１６型的标本ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,获得ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７基因,将其重组入ｐＡＬＴＥＲ－１载体,进行双向测序、分析。结果 构建了含中国山东地区宫颈癌患者组织中ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７的重组质粒,命名为ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７－ＳＤ。     

用PCR技术检测皮肤表皮肿瘤组织HPV DNA

应用多对引物ＰＣＲ方法检测５８例皮肤人表皮肿瘤（Ｂｏｗｅｎ‘ｓ病１７例，Ｑｕｅｙｒａｔ增殖性红斑５例，鲍温样丘疹病１６例，皮肤鳞状细胞癌２０例）石蜡包埋组织中ＨＰＶ６，１１，１６及１８ＤＮＡ。Ｂｏｗｎｅ’ｓ病ＨＰＶ１ＤＮＡ２例（２／１７）阳性Ｑｕｅｙｒａｔ增殖性红斑ＨＰＶ１６ＤＮＡ１例（１／５）阳性，鲍温样丘疹病ＨＰＶ１６ＤＮＡ９例（９／１６）阳性，皮阳鳞状细胞癌ＨＰＶＤＮＡ２０例均阴性，提示鲍温     

PCR结合核酸分子杂交放射自显影检测HPV16,18实验条件的研究

为建立一种快速、简便、高敏感性和特异性的检测消化道肿瘤组织中ＨＰＶ１６，１８ＤＮＡ序列的方法，用ＰＣＲ扩增ＨＰＶ１６早期区Ｅ６的１２０ｂｐ片段和扩增ＨＰＶ１８Ｅ６、Ｅ７区２６７ｂｐ片段，扩增产物与相应的５′－末端Ｐ３２标记的特异性寡核苷酸探针进行斑点杂交放射性自显影。探讨了影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选出较佳的反应条件：即ＰＣＲ退火温度及杂交温度均为５５℃，反应缓冲液镁离子浓度为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，引物浓度各为５０ｐｍｏｌ／１００μｌ，探针浓度各为１．０ｐｍｏｌ／ｍｌ，杂交时间３ｈ，放射性自显影时间２４ｈ。在上述条件下，该方法可检出低至０．０１ｆｇ的ＨＰＶ１６或ＨＰＶ１８质粒ＤＮＡ，ＨＰＶ１６与ＨＰＶ１８之间无交叉反应，为进一步探讨ＨＰＶ与消化道肿瘤的关系奠定了基础。     

76例宫颈癌组织中人类乳头瘤病毒的检测

本文应用ＨＰＶ－ＰＣＲ技术和ＤＮＡ杂交技术对７６例宫颈鳞癌标本进行了ＨＰＶ－ＤＮＡ的研究，发现ＨＰＶ－ＤＮＡ存在率为９０．７９％（６９／７６），主要类型为ＨＰＶ１６和１８。多酶切ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ杂交证实在宫颈癌中９２．５６％的ＨＰＶ－ＤＮＡ发生变异，说明ＨＰＶ－ＤＮＡ的基因变异与其致癌作用密切相关。ＰＣＲ结果证实ＨＰＶ－Ｅ６片段在宫颈癌组织中常可出现，推测可能是致癌的关键片段之一。因此，检测宫颈癌组织中ＨＰＶ－ＤＮＡ的完整性、关键基因片段的存在与否，可能对于病变恶变的预测有一定的意义     

采用通用引物进行PCR检测宫颈中人乳头瘤病毒的基因

采用可检测九个型别人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的通用引物进行多聚酶链反应，在４７份宫颈糜烂患者的宫颈细胞标本中检出了ＨＰＶ阳性的标本２３份。在这２３份阳性标本中ＨＰＶ１６型特异性引物进一步用ＰＣＲ进行扩增，检出ＨＰＶ１６型阳性者１０份，在２４份ＨＰＶ阴性的标本中用ＨＰＶ１６型特异性引物未检出ＨＰＶ１６阳性的标本。结果表明：用通用引物进行ＰＣＲ检测人乳头瘤病毒的感染，方法简便、灵敏、经济，特别适合于ＰＣＲ     

噬菌体抗体库技术构建HPV16 E7人源化单克隆抗体

目的：构建抗ＨＰＶ１６Ｅ７的噬菌体抗体库。方法：由感染者抗凝血中分离外周淋巴细胞，提取细胞总ＲＮＡ，以逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ），用人ＩｇＧ　Ｆａｂ基因特异引物，从合成的ｃＤＮＡ中分别扩增出抗体轻链和重链可变区基因，回收纯化ＰＣＲ产物。用ＳｐｅＩ＋ＸｈｏＩ酶切重链可变区基因，ＸｂａＩ＋ＳａｃＩ酶切轻链可变区基因，先后克隆入噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３。结果：ＰＣＲ产物经电泳证实分子量大小正确，酶切电泳证实质粒构建正确。结论：成功构建抗体轻链和重链基因克隆，建立抗ＨＰＶ１６Ｅ７噬菌体抗体库。     

宫颈癌及癌旁组织中人乳头瘤病毒DNA检测

目的：探讨人乳头瘤病毒与宫颈癌及癌旁组织的关系。方法：应用原信ＰＣＲ技术对４４例宫颈癌、１８例癌旁组织及３０例慢性宫颈炎和１５例正常宫颈组织中的ＨＰＶ１６ＤＮＡ和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：４４例宫颈癌组织中在６ＤＮＳ阳性３５例，ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性５例。其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性４例；ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性而ＨＰＶ１６ＤＮＡ阴性１例；ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性而ＨＰＶ１８ＤＮＡ阴性     

涎腺肿瘤组织中人乳头瘤病毒DN的检测

为探讨腺上皮起源的涎腺良,恶性肿瘤与人乳头瘤病毒（Ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ,ＨＰＶ）感染的关系,应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）,采用共有引物检测４４例涎腺肿瘤组织中的ＨＰＶＤＮＡ的存在状况,１０例正常涎腺组织作为对照。结果显示：肿瘤组织中ＨＰＶＤＮＡ阳性检出率达７０．４５％（３１／４４）,其中恶性肿瘤ＨＰＶＤＮＡ阳性率为７７．２７％（３１／４４（;良性肿瘤ＨＰＶＤＮＡ阳性率为６３．６     

食管癌组织中人乳头瘤病毒的检测

用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）保守基因的通用引物和１６、１８型特异性引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ），检测２０例正常新鲜活检食管粘膜，４０例新鲜食管癌组织和５１例石蜡包埋的食管癌组织标本的ＨＰＶＤＮＡ，在２０例正常人食管粘膜组织中ＨＰＶＤＮＡ检出率９．１％，癌组织中为３６．２％，鳞癌和腺癌分别为３４．７％、４７．１％，鳞癌以１６型感染为主，腺癌以１８型为主。但肿瘤分化程度与ＨＰＶ感染无关。结果提示：ＨＰＶ感染与食管癌的发生有一定关系，不同型别的ＨＰＶ与不同组织的亲和性有差别。     

PCR结合核酸分子杂交放射自显影检测HPV16,18实验条件的研究

为建立一种快速，简便，高敏感性和特异性的检测消化道肿瘤组织中ＨＰＶ１６，１８ＤＮＡ序列的方法，用ＰＣＲ扩增ＨＰＶ１６早期区Ｅ６的１２０ｂｐ片段和扩增ＨＰＶ１１８Ｅ６，Ｅ７区２６７ｂｐ片段，扩增产物与相应的５′－末端Ｐ３２标记的特异性寡核苷酸探针进行斑点杂交放射性自显影，探讨了影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选出较佳的以应条件，即ＰＣＲ退火温度及杂交温度均为５５℃，影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选     

人喉癌组织中人乳头瘤病毒DNA的检测

目的：为探讨喉癌与人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系和ＨＰＶ在喉癌中基因组型的分布与表达。方法：应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）制备非放射性探针标记物－地高辛标记ＨＰＶ共有引物探针，对１４６例喉不同病变的新鲜组织标本（喉癌６８例，喉其他病变４８例，正常喉组织３０例），进行ＨＰＶ６，１１，１６，１８，３１，３３，３５，４２，５８共９型ＨＰＶＤＮＡ感染的检测；阳性者用多重引物ＰＣＲ方法分型。结果：喉癌ＨＰＶ感染阳性率４５．６％（３１／６８），喉癌颈转移淋巴结组织阳性率２０．０％（３／１５），喉癌前病变阳性率１１．８％（２／１７），声带息肉阳性率６．３％（１／１６），１５例癌旁及１５例癌周正常喉组织均为ＨＰＶＤＮＡ阴性。ＨＰＶＤＮＡ型别分布在喉癌中以ＨＰＶ１６，１８型为主，喉良性病变中以ＨＰＶ６，１１型为主。结论：喉癌发生与ＨＰＶ感染有关。     

食管癌患者中HPV16,18的检测

目的 检测食管癌组织中人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１６，１８的感染情况。方法 采用型特异性引物ＰＣＲ检测５６例食管癌组织中ＨＰＶ１６，１８的感染率，采用Ｓｏｕｔｈｅｎ ｂｌｏｔ杂交检测ＨＰＶ１６在食管中的存在状态。结果 食管癌组织中ＨＰＶ１６，１８的感染率分别为３９％和２％，并且在部分病例ＨＰＶ１６ＤＮＡ以整合形式存在。结论 食管癌组织中存在ＨＰＶ１６的高感染，可能在食管癌的发生、发展中发挥着重要任凭     

用HPVL1区共有引物及PCR技术检查人尖税湿疣和子宫颈癌中…

根据ＨＰＶ６、１１、１８、３１、３３型Ｌ１ＯＲＦ高度保守区的基因序列设计合成了一对ＨＰＶＬ１区共有引物。该引物除与上述六型有很高的同源性外还可覆盖其它已知的２０多型与女性肛生殖区感染有关的ＨＰＶ。有该引物及ＰＣＲ技术对一组计１４４例活检标本进行测，结果显示：病理确诊的尖税湿疣、子宫颈癌及外阴癌组织、正常颈标本中ＨＰＶ ＤＮＡ序列检出率分别１００％（５５／５５）、７０％（２８／４０）和１３．３％（２     

HIV—1侵染要体多种组织细胞的分子生物学研究

探讨ＨＩＶ－１是否能够侵染及整合在多种组织细胞的ＤＮＡ中。２．方法 采用套式ＰＣＲ对来自艾滋病病人的肺，脑，肾，肌肉及口腔脱落细胞标本进行ＨＩＶ－１前病毒ｐｏｌ基因的检测，并根据外侧引物ＰＣＲ和套式引物ＰＣＲ敏感性对原始模板数量进行半定量检测。３．结果 采用套式引物ＰＣＲ可以在艾滋病病人的肺，脑，肾，肌肉及口腔脱落细胞ＤＮＡ标本中检出ＨＩＶ－１前病毒ｐｏｌ基因，而采用外侧引物ＰＣＲ仅在肺，脑细胞Ｄ     

聚合酶链反应检测肺癌蜡块标本中HPVDNA

聚合酶链反应检测肺癌蜡块标本中ＨＰＶＤＮＡ第一临床学院胸外科，第一临床学院内科，第一临床学院儿科研究室，第一临床学院病理科佟倜，纪振东，潘国强，郑永晨，张俊格关键词肺癌蜡块ＰＣＲ，ＨＰＶＤＮＡ中图号Ｒ７３４．２Ｒ４４６人类乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）是人类...