树鼩血栓性脑缺血时单胺氧化酶活性的变化及银杏内酯B作用机制探讨

目的 :揭示血栓性脑缺血时缺血区和血清单胺氧化酶 (MAO)活性变化及对血小板活化因子 (PAF)受体拮抗剂银杏内酯B(GB)作用机理的探讨。方法 :建立光化学诱导树鼠句血栓性脑缺血模型 ,用酶比色法测量缺血后4、2 4及 72h中心区、半暗区、对侧区及血清的MAO活性 ,并用双缩脲法测定上述各区的蛋白含量。结果 :脑缺血后不同时间缺血中心区MAO活性显著低于假手术组 [(15 4 1± 1 6 3)× 10 3 U/g蛋白 ]或对侧区 [(15 4 7± 1 6 8)× 10 3 U/g蛋白 ],以 72h最为明显 [(2 19± 1 96 )× 10 3 U/g蛋白 ,P <0 0 1];此时缺血半暗区和血清MAO活性 [分别为 (2 5 30± 2 0 1)× 10 3 U/g蛋白和 (2 10 0 4± 2 6 6 7)× 10 3 U/L]明显高于假手术组 (P <0 0 1)。光化学反应后 6h舌下静脉一次注射PAF受体拮抗剂GB(5mg·kg-1)后 2 4h时 ,半暗区MAO活性明显低于缺血组 ,而中心区则高于缺血组 (P <0 0 1)。MAO活性变化与相应区域蛋白含量改变一致 (r=0 81,P <0 0 5 )。结论 :脑缺血后中心区、半暗区MAO活性改变是相应区域单胺类递质消长变化的主要原因 ,MAO活性变化与神经元蛋白质合成能力的改变有关 ;GB的脑保护作用与其拮抗PAF受体和调节MAO活性而促进递质平衡有关。     

银杏内酯B对树鼩血栓性脑缺血后GFAP表达的影响及机制探讨

目的:观察树鼠句血栓性脑缺血形成后不同部位星形胶质细胞表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的时间消长改变,以及血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂银杏内酯B(GB)对GFAP表达的影响,并探讨其可能机制。方法:建立光化学诱导树鼠句血栓性脑缺血模型,用免疫组化法检测缺血后4、2 4、72hGFAP表达,最后用图像分析系统测定其平均灰度。结果:脑缺血后半暗区GFAP表达增多,以2 4h最为显著,其平均灰度值为6 0 .33±3 .0 9(P <0 . 0 1) ,72h表达仍高,其平均灰度值为6 0. 88±2 . 6 2 (P <0 . 0 1) ,此时对侧及远隔区GFAP表达增强。光化学反应后6h于舌下静脉注射GB(5mg/kg) ,发现缺血后2. 4h半暗区星形胶质细胞GFAP表达明显下调,与对照组相比有显著差异(P <0 . 0 5 )。结论:缺血性脑损伤后星形胶质细胞表达GFAP增多与神经元受损有关;GB通过拮抗血小板活化因子(PAF)对神经元的损伤作用使星形胶质细胞表达GFAP减少。     

单胺类递质在光化学诱导树Qu血栓性脑缺血中心区及半暗区形成 …

目的和方法：光化学诱导树Ｑｕ血栓性脑缺血,用荧光分光光度法检测实验后４,２４及７２ｈ中心及半暗区单胺类递质的变化,并用密度新颖度法测定以上各区脑水份含量,以探讨单胺类递质代谢紊千百万居缺血性脑损伤中的作用。结果;光化学反应后中心与半暗区的的多巴胺,去甲肾上纱和５－羟色胺含量分别在４,２４及７２ｈ降至最低点,然而５－ＨＴ的代谢产物－５－羟吲哚乙酸逐渐升高。     

单胺类递质在光化学诱导树鼩血栓性脑缺血中心区及半暗区形成中的作用

目的和方法：光化学诱导树鼠句血栓性脑缺血,用荧光分光光度法检测实验后４ 、２４ 及７２ ｈ 中心区及半暗区单胺类递质的变化,并用密度梯度法测定以上各区脑水份含量,以探讨单胺类递质代谢紊乱在缺血性脑损伤中的作用。结果：光化学反应后中心区与半暗区的多巴胺（ＤＡ） 、去甲肾上腺素（ＮＥ） 和５ － 羟色胺（５ － ＨＴ） 含量分别在４ 、２４ 及７２ ｈ 降至最低点（ 与假手术组相比Ｐ 均＜ ０－０１） ,然而５ － ＨＴ 的代谢产物—５ － 羟吲哚乙酸（５ － ＨＩＡＡ） 逐渐升高。中心区及半暗区脑水含量于实验后２４ ｈ 均达峰值（ Ｐ 均＜ ０－０１） 。结论：单胺类递质在光化学诱导树鼠句血栓性脑缺血,尤其是半暗区形成中具重要作用;其病理生理改变,既是血栓性脑缺血的结果,又是继发性脑损伤、脑水肿以及迟发性神经元坏死（ ＤＮＤ） 的原因     

树鼩脑局部血栓性缺血的扩布性抑制机制探讨

目的:观察树鼩血栓性脑缺血时,对侧神经元血小板活化因子(PAF)受体活化和神经元线粒体呼吸功能改变,探讨皮层扩布性抑制的可能机制。方法:采用光化学法诱导脑血栓形成,分别观察脑缺血对侧神经元超微结构、脑细胞膜PAF受体、单胺氧化酶(MAO)活性、单胺类递质含量以及神经元线粒体呼吸功能。结果:树鼩脑缺血时对侧皮层淤血,神经元线粒体肿胀;脑缺血4h对侧神经元PAF受体亲和量降低,其变化以24 h最为显著(P<0.01);缺血区线粒体Ⅲ态呼吸速率、呼吸控制率(RCR)及氧化磷酸化效率(P/O)均明显降低;缺血对侧皮层的P/O降低(P<0.05),Ⅲ态呼吸速率明显抑制(P<0.01);伴随着对侧脑组织MAO活性的升高(P<0.01),对侧皮层的去甲肾上腺素(NA)和5-羟色胺(5-HT)含量降低而5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量明显升高(P<0.01)。结论:树鼩脑缺血时对侧皮层神经元PAF受体的活化以及MAO活性的增强可能在扩布性抑制的发生中具有重要作用。     

脑缺血时皮层扩布性抑制与心功能障碍

目的 :研究树 鼠句脑缺血时单胺氧化酶 (MAO)活化在脑缺血时心功能障碍以及扩布性抑制中的可能作用。方法 :采用光化学法诱导树 鼠句血栓性脑缺血 ,测定缺血区及血清MAO活性、多巴胺及去甲肾上腺素 (NA)水平 ,经电镜观察脑及肾上腺的超微结构。记录仪检测心率(HR)、左室收缩压峰值 (LVSP) ,左室瞬间收缩与舒张最大速率 (±dp/dtmax) ,左室舒张末期压力 (LVEDP) ,平均动脉压 (MAP)。结果 :树鼠句脑缺血过程中血清NA先升高 (由 11.60± 0 .73ng/ml升高至18.46± 0 .3 9ng/ml,P <0 .0 1) ,72h后降至 8.3 2± 1.86ng/ml;血清MAO活性逐渐升高 ,达 2 10 .1± 2 6.67U/ml(P <0 .0 1) ,72h降低至对照水平 ;心功能指标 (±dp/dtmax,LVSP ) ,尤其是HR明显降低 ,由3 17.0± 98.0 1beat/min降至 2 3 7.4± 3 1.90beat/min(P <0 .0 1) ,于2 4h恢复至对照水平。结论 :血栓性脑缺血时血清NA水平明显取决于MAO活性的变化 ,后者对脑缺血时心脏舒缩功能可能具有调节作用。     

光化学诱导树鼠句血栓性局部脑缺血及其对脑-心卒中的影响

近年来,虽然心脑血管疾病的防治已取得长足的进步,但其仍是全球死亡率最高的疾病之一。脑血栓形成时继发性脑缺血的机制以及脑缺血时心脏功能抑制等诸多复杂的病理生理过程给实验性脑缺血研究时动物种类、模型建立以及观察指标的选择提出了新的要求。本文采用了低等灵长类动物—树鼠句,建立与临床脑缺血发病条件相近的光化学诱导脑缺血模型,在观察不同种类单胺类递质消长变化的同时,通过密度梯度法动态而快速地监测皮层脑水含量的改变,类似的研究迄今未见报道。同时通过此研究为前期工作所观察到“心肌挫抑”（ｓｔｕｎｎｉｎｇ）及线…     

树鼩血栓性脑缺血中心区及半暗区神经元PAF受体结合特性的研究

目的：观察血栓性局部脑缺血过程中缺血中心区及半暗区血小板活化因子（PAF）受体的消长变化,探讨PAF在脑缺血中心区及半暗区神经元继发性脑损伤中的分子机制。方法：建立光化学诱导树鼩血栓性局部脑缺血模型并提取树鼩脑细胞膜蛋白,用[³H]-PAF放射配体结合试验检测中枢神经细胞膜不同特性的PAF结合位点（受体）。结果：树鼩脑细胞膜上存在两种亲和性不同的PAF受体,即高亲和性和低亲和性受体,其亲和力（kD）分别为(3.61±0.72) nmol/L（kD₁）和17.04±2.41) nmol/L（kD₂）相应的最大结合容量（B_max）分别为(1 457.94±168.01) pmol/g蛋白和(5 017.40±742.16) pmol/g蛋白。脑缺血4、24及72 h中心区、半暗区及对侧区高、低亲和性受体的kD值、B_max值均显著低于假手术组（P<0.01）,中心区及半暗区尤为明显,其中以缺血后24 h的变化最为显著。结论：PAF受体在介导缺血性脑损伤过程中起着重要作用,缺血中心区及半暗区机能代谢的不同与PAF受体亲和特性及最大结合容量改变不同有关,亦是PAF介导继发性脑损伤的重要分子基础。     

树血栓性脑缺血中心区及半暗区神经元PAF受体结合特性的研究

目的 :观察血栓性局部脑缺血过程中缺血中心区及半暗区血小板活化因子 (PAF)受体的消长变化 ,探讨PAF在脑缺血中心区及半暗区神经元继发性脑损伤中的分子机制。方法 :建立光化学诱导树鼠句血栓性局部脑缺血模型并提取树鼠句脑细胞膜蛋白 ,用 [3H]-PAF放射配体结合试验检测中枢神经细胞膜不同特性的PAF结合位点 (受体 )。结果 :树鼠句脑细胞膜上存在两种亲和性不同的PAF受体 ,即高亲和性和低亲和性受体 ,其亲和力 (kD)分别为 ( 3 61± 0 72 )nmol/L(kD1)和 ( 17 0 4± 2 4 1)nmol/L(kD2 ) ,相应的最大结合容量 (Bmax)分别为 ( 14 5 7 94± 168 0 1)pmol/g蛋白和 ( 5 0 17 4 0± 74 2 16)pmol/g蛋白。脑缺血 4、2 4h及 72h中心区、半暗区及对侧区高、低亲和性受体的kD值、Bmax值均显著低于假手术组 (P <0 0 1) ,中心区及半暗区尤为明显 ,其中以缺血后 2 4h的变化最为显著。结论 :PAF受体在介导缺血性脑损伤过程中起着重要作用 ,缺血中心区及半暗区机能代谢的不同与PAF受体亲和特性及最大结合容量改变不同有关 ,亦是PAF介导继发性脑损伤的重要分子基础     

树鼩皮层局部脑缺血时海马细胞微环境及氨基酸含量动态变化的研究

目的：揭示血栓性脑缺血后，海马神经细胞微环境及其细胞外液兴奋性与抑制性氨基酸含量的动态变化，并探讨其相互关系及可能的机制。方法: 建立光化学反应诱导树鼩局部脑缺血模型，进行微灌流并收集海马细胞外液，用高效液相色谱-PITC衍生法和IL-1306型血气分析仪分别测量天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）和γ-氨基丁酸（GABA）含量和微环境相关指标pH值、PCO2、PO2和HCO3－的变化。结果: 局部脑缺血后，海马细胞外液中上述各种氨基酸的含量与对照组比均升高（P<0.01）；pH值、PO2、HCO3－均下降（P<0.01）；PCO2在6 h升高（P<0.05）。结论: 局部脑缺血后海马细胞外液氨基酸平衡紊乱参与了脑损伤的发生，氨基酸的代谢改变与缺血后细胞微环境的变化有关。     

缺血后适应促进树鼩血栓性脑缺血时紧密连接occludin/ZO-1蛋白表达及抑制脑水肿的机制

 目的: 研究脑缺血及缺血后适应(postconditioning,PC)条件下,树鼩脑缺血时局部脑血流(regional cerebral blood flow,rCBF)、脑水肿及紧密连接(tight junction,TJ)的occludin和zonula occludins(ZO)-1蛋白表达的改变;探讨TJ表达对脑水肿及脑梗死的影响及其可能机制。方法: 将72只健康成年树鼩随机分为对照组、脑缺血组和脑缺血+PC组,其余3只动物用于磁共振成像(MRI)观察。通过光化学反应诱导树鼩局部血栓形成;缺血PC组于缺血后4 h夹闭患侧颈总动脉3次(每次5 min)实施PC处理。用电镜观察神经超微结构,用TUNEL法检测海马神经元的凋亡数量,用激光多普勒血流监测仪检测缺血区的rCBF,用免疫组化及Western blot法观察缺血海马occludin/ZO-1蛋白的表达,MRI技术监测脑梗死体积,组织干湿法检测脑含水量的改变。结果: 树鼩脑缺血后海马CA1区的正常神经元明显减少以及神经元超微结构明显异常。脑缺血组TUNEL阳性细胞数明显增加(P<0.01),rCBF明显降低,occludin/ZO-1表达减弱(P<0.01),脑含水量和脑梗死体积明显增加(P<0.01)。经PC处理的动物,缺血区rCBF增加,TJ表达增强,脑含水量降低,且TUNEL阳性细胞数和脑梗死体积明显减小(P<0.01)。结论: 缺血PC可增加树鼩缺血区rCBF但不增加局部含水量;提示缺血PC缩小脑梗死体积可能与occludin/ZO-1表达增强而抑制脑水肿有关。     

树鼩脑缺血时神经元线粒体渗透性转导孔开放对线粒体呼吸的影响

目的：揭示光化学诱导树鼩脑缺血后不同时间内，缺血神经元线粒体呼吸功能的变化，观察血小板活化因子（PAF）受体拮抗剂银杏内酯B（GB）和免疫抑制剂环孢菌素A （CsA）对线粒体呼吸及神经元线粒体渗透性转导孔（MPT）开放的影响，探讨二者可能的神经保护机制及缺血时MPT开放与线粒体呼吸的相互关系。方法：建立光化学诱导树鼩脑缺血模型，分离缺血后4、24、72 h大脑皮层线粒体，用氧电极极谱法测定线粒体呼吸。于缺血6 h分别注射GB和CsA，24 h时观察相关指标。另取分离的线粒体，用CaCl₂诱导MPT开放，再分别加入CsA或GB，观察其对线粒体肿胀的影响。结果：缺血脑皮层神经元线粒体Ⅲ态呼吸速度、呼吸控制率（RCR）及磷氧比（P/O）逐渐下降，以缺血24 h的变化为著，与假手术组相比均有显著差异（P<0.01）。给予GB或CsA，Ⅲ态呼吸速度显著大于对照组（P<0.01），P/O比上升（P<0.05）。CaCl₂可诱导MPT开放，线粒体肿胀而透光率迅速下降，CsA有效阻滞了MPT开放，GB则不然。结论：光化学诱导树鼩局灶脑缺血后，缺血皮层线粒体呼吸明显障碍，GB或CsA可不同程度地改善缺血神经元线粒体代谢，可能与GB拮抗神经细胞膜上PAF受体活化，间接调节线粒体呼吸有关；而CsA主要通过抑制MPT开放而改善线粒体呼吸而具有神经保护作用。     

缺血后适应减轻树鼩缺血性脑水肿及脑梗死的机制

目的 观察缺血后适应对树鼩血栓性脑缺血时大脑皮层脑水含量、局部脑血流、梗塞面积及神经元超微结构的影响,探讨其对树鼩脑缺血时神经保护的可能机制。 方法 将88只健康成年树鼩随机分为对照组、脑缺血4 h组、脑缺血24 h组、后适应4 h组及后适应24 h组（每组n=8）,另取8只动物做HE染色（n=3）及电子显微镜观察（n=5）。本实验采用光化学反应诱导树鼩血栓性脑缺血而建立脑缺血动物模型,在脑缺血模型建成后4 h夹闭缺血侧颈总动脉5 min,再灌注5 min,如此交替进行3个循环以建立缺血后适应模型。测定大脑皮层局部脑血流,脑组织含水量,脑梗死范围,并观察皮层及海马CA1区神经元超微结构改变。 结果 脑缺血时神经元固缩,线粒体肿胀,嵴溶解或形成空泡,内质网肿胀,内质网池形成。缺血后适应能使海马CA1区神经元固缩减少,线粒体和内质网的病理改变减轻,细胞水肿改善。随着缺血时间的延长,缺血24h组脑水含量明显增加86.81%±1.08%,此时脑梗塞面积明显扩大33.00%±3.03%,局部脑血流明显降低（134.27±28.75）ml/min。缺血后适应24h组脑组织含水量明显减少（81.04%±1.04%,P＜0.01）;脑梗塞面积缩小（16.79%±1.29%,P＜0.01）;而局部脑血流明显增加［（195.25±21.18）ml/min,P＜0.01］。 结论 缺血后适应可缓解树鼩缺血性脑水肿并缩小梗死范围,其机制可能与改善局部脑血流有关。     

PAF拮抗剂对光化学反应后脑缺血中心区及半暗区单胺类递质的影响

目的：探讨血小板活化因子（PAF）与单胺类神经递质缺血性脑损伤中的可能机制，并观察PAF拮抗剂银杏内酯B对抗PAF所致脑缺血中心区及半暗区病理生理改变及其逆转单胺类递质代谢紊乱的作用。方法：采用光化学诱导树血栓性脑缺血模型，舌下静脉一次性注射银杏内酯B5mg·kg-1（光化学反应后6h），观察给药后缺血中心区及半暗区单胺类递质及脑水含量的变化。结果：给药组半暗区NE、DA及5－HT依次为（403．64±50.94）ng／gwt、（474．96±44．12）ng／gwt和（495．79±33．19）ng／gwt，均分别高于缺血组（254．95±42.26）ng／gwt（P＜0．01）、（403．28±34．86）ngwt（P＜0．01）和（410.58±33．24）ng／wt（P＜0．01）；而给药组半暗区脑水份含量为（81．75±0．80）％低于缺血组（83．85±0．96）％（P＜0．01）。结论：PAF与单胺类神经递质共同参与缺血性脑损伤，并且银杏内酯B能特异性拮抗PAF受体及减少单胺递质的释放而具有抗脑缺血效应。     

酒精对树鼩感染乙型肝炎病毒的影响

目的：验证酒精对树鼠句感染ＨＢＶ（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ）是否具有更高的易感性。方法：应用酒精性免疫抑制的树鼠句模型,观察酒精性免疫抑制树鼠句对ＨＢＶ的易感性。结果：酒精组树鼠句的肺泡巨噬细胞和外周血中性粒细胞的吞噬率明显低于对照组,白细胞移动指数明显高于对照组,ＨＢＶ感染率比对照组增高２５倍。结论：提示酒精组树鼠句在发生免疫功能明显受损的同时对ＨＢＶ易感性也显著增高。