特发性血小板减少性紫癜患者糖皮质激素及其受体改变的临床意义——附43例分析

目的：探讨特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患者糖皮质激素（ＧＣ）及其受体（ＧＣＲ）受体的临床意义。方法：采用放射免疫分析法和放射性配基多点饱和结合法检测了４３例ＩＴＰ患者和１５名正常人ＡＣＴＨ,ＧＣ及淋巴细胞表面ＧＣＲ位点水平,对比了单用甲泼尼龙冲击治疗和泼尼松联合环孢素治疗难治性ＩＴＰ的治疗效果。结果：敏感组,中,度敏感组ＩＴＰ在ＡＣＴＨ,ＧＣ,ＧＣＲ位点水平与正常人组比较均无显著差异。     

星状神经节阻滞对严重烧伤小鼠巨噬细胞糖皮质激素受体表达及细胞因子分泌的影响

目的:探讨星状神经节阻滞(stellate ganglion block,SGB)在严重烧伤小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达及炎性细胞因子分泌中的作用,明确SGB可否成为改善严重创伤后的GR功能、抑制炎性反应过度的手段。方法:20%TBSAⅢ度烧伤小鼠分为单纯严重烧伤组(烧伤组)、严重烧伤后单侧颈部SGB治疗组(单侧SGB组)、严重烧伤后双侧颈部SGB治疗组(双侧SGB组),另设正常对照组,比较各组巨噬细胞GR水平及巨噬细胞分泌炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1"(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的差异。结果:单侧及双侧SGB组腹腔巨噬细胞GR蛋白水平均显著高于烧伤组,单侧及双侧SGB组腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的作用均显著低于烧伤组。严重烧伤后单侧SGB组及双侧SGB组间巨噬细胞GR蛋白水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达释放无明显差异。结论:单侧或双侧颈部SGB均可成为改善严重烧伤巨噬细胞GR功能、抑制其过度分泌炎性细胞因子的手段。     

Application of denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) to screen for mutations of the human glucocorticoid receptor alpha gene (hGRalpha)

OBJECTIVES: In a previous publication, we had presented a sensitive method to detect mutations of the segment of the human glucocorticoid receptor alpha (hGRalpha) gene encoding the ligand binding domain (LBD) and part of the DNA binding domain (DBD) of hGRalpha, as several types of glucocorticoid resistance syndromes have been correlated with mutations in the respective nucleotide sequences. However, mutations affecting various regions covering the whole length of hGRalpha are increasingly reported in a variety of disease states. We now present an expanded screening methodology to detect mutations covering the whole length of hGRalpha. DESIGN AND METHODS: We developed a sensitive, simple screening PCR-DGGE method to detect mutations in the aminoterminal domain and DNA-binding domain of the hGRalpha. Wild type hGRalpha cDNA and mutant samples were included in the analysis to ensure the accuracy and sensitivity of the method. RESULTS: The PCR-DGGE method identified the mutant samples and discriminated them from wild type hGRalpha. CONCLUSIONS: The method described is accurate, sensitive, simple, cheap and fulfills the critera for a screening method which will be useful in delineating possible involvement of hGRalpha mutations in the aetiopathology of diseases correlated to derangements of glucocorticoid action.     

Polymorphisms in the glucocorticoid receptor co-chaperone FKBP5 predict persistent musculoskeletal pain after traumatic stress exposure

Individual vulnerability factors influencing the function of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis may contribute to the risk of the development of persistent musculoskeletal pain after traumatic stress exposure. The objective of the study was to evaluate the association between polymorphisms in the gene encoding FK506 binding protein 51, FKBP5, a glucocorticoid receptor co-chaperone, and musculoskeletal pain severity 6 weeks after 2 common trauma exposures. The study included data from 2 prospective emergency department-based cohorts: a discovery cohort (n = 949) of European Americans experiencing motor vehicle collision and a replication cohort of adult European American women experiencing sexual assault (n = 53). DNA was collected from trauma survivors at the time of initial assessment. Overall pain and neck pain 6 weeks after trauma exposure were assessed using a 0–10 numeric rating scale. After adjustment for multiple comparisons, 6 FKBP5 polymorphisms showed significant association (minimum P < 0.0001) with both overall and neck pain in the discovery cohort. The association of rs3800373, rs9380526, rs9394314, rs2817032, and rs2817040 with neck pain and/or overall pain 6 weeks after trauma was replicated in the sexual assault cohort, showing the same direction of the effect in each case. The results of this study indicate that genetic variants in FKBP5 influence the severity of musculoskeletal pain symptoms experienced during the weeks after motor vehicle collision and sexual assault. These results suggest that glucocorticoid pathways influence the development of persistent posttraumatic pain, and that such pathways may be a target of pharmacologic interventions aimed at improving recovery after trauma.     

地塞米松对人单核细胞糖皮质激素受体蛋白表达的影响

目的研究不同浓度的地塞米松,在不同的刺激时间下对人单核细胞糖皮质激素受体蛋白(GRα,GRβ)表达的影响。方法对培养的人单核细胞株THP1给予不同浓度的地塞米松,在不同的刺激时间下,采用Westernblotting检测细胞中GRα、CRβ蛋白表达。结果人的单核细胞中存在GRQ、GRB受体。GRQ表达量在相同浓度地塞米松刺激下,随刺激时间的延长表现出下调;GRB表达量随地塞米松刺激浓度的增加以及刺激时间的延长而上调。结论GRα表达量随地塞米松刺激时间的延长表现出下调。GRβ表达量随地塞米松浓度的增加、刺激时间的延长而上调,具有一定的剂量和时间依赖性。GRα、GRβ的表达受糖皮质激素的调节。     

烧伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的变化

目的 观察烧伤小鼠24h内肝糖皮质激素受体在蛋白及mRNA水平的时相变化特点。方法 将60只BALB／C小鼠随机分为正常对照组和实验组，实验组给予背部Ⅲ度15％－20％烧伤。分别于伤后2、4、6、12、24h测定血清皮质酮浓度，用Westernblotting、RF－PCR蛋白质和mRNA水平测定肝组织糖皮质激素受体。结果 烧伤小鼠血清皮质酮浓度2－4h达到高峰，24h仍未恢复正常；肝组织糖皮质激素受体在蛋白质水平4－6h降至最低；而mRNA水平仅仅在伤后2h有短暂降低。结论 烧伤应激引起小鼠血清皮质酮水平明显升高，其受体在蛋白质及mRNA水平均可降低，但蛋白的降低不仅仅发生在mRNA水平。     

失血大鼠肝、脑组织糖皮质激素受体的变化及其意义

探讨动物失血后肝、脑组织糖皮质激素受体（ＧＲ）的变化及其意义。成年雄性ＳＤ大鼠，麻醉后经颈动脉插管放血０～４０％，或肌注不同剂量的Ｒｕ４８６以阻断组织的ＧＲ０，５０％和８０％。结果：大鼠失血０～４０％后３小时，肝、脑组织胞液ＧＲ量随失血量增加而进行性下降；大鼠失血３０％后０～３小时，肝、脑组织ＧＲ含量随失血持续时间延长而进行性减少；组织ＧＲ与失血量、失血持续时间呈显著的负相关。预先阻断大鼠ＧＲ０、５０％和８０％后再放血１０％，结果ＧＲ阻断率越大，则大鼠颈动脉压越低，时间存活率越小。提示：失血可引起组织ＧＲ减少，失血量越大、失血持续时间越长，ＧＲ减少越明显；ＧＲ可作为反映动物失血严重程度及判断其预后的重要指标     

糖皮质激素受体及核因子-κB在创伤休克大鼠肝脏中的作用

目的 探讨糖皮质激素受体(GR)、核因子-κB(NF-κB)在创伤失血性休克后肝组织中的变化、相互关系,及其对肝损伤的作用机制.方法 雄性健康Wistar大鼠96只,采用双侧股骨骨折伴失血性休克创伤模型,随机分成正常对照组6只,创伤休克组30只,GR阻断伴创伤休克组30只,NF-κB抑制伴创伤休克组30只.动态观察伤后0.5、2、4、6、8 h大鼠肝组织GR、NF-κB,肝脏病理,肝功能,血清TNF -α、IL-6等变化.GR采用免疫印迹法测定蛋白含量,NF-κB采用EMSA法测定结合活性,并进行计算机图像分析.结果 肝组织GR的蛋白含量在创伤失血性休克后2 h即开始下降,4 h明显低于正常对照(P<0.01),6 h降至最低,8 h仍显著低于正常(P<0.01);NF-κB的活性伤后迅速升高,伤后6 h达到高峰(P<0.01).光镜下伤后4～8 h肝窦内少许淤血,有散在炎性细胞浸润;血清TNF-α、IL-6、ALT、TB伤后4 h 开始增高.GR阻断后再致伤,NF-κB在伤后各个时相点的表达均较未阻断有明显增高,光镜下伤后2 h肝窦内即可见较多炎性细胞浸润,血清TNF-α、IL-6、ALT、TB在伤后2 h即有明显升高(P<0.01).抑制NF-κB再致伤后,GR在伤后肝组织中的表达增强,TNF-α、IL-6伤后各个时相点均迅速回落,光镜下伤后4～8 h肝细胞变性明显好转,肝窦内见淤血减轻,仅见少许淋巴细胞及中性粒细胞浸润;伤后4 h,血清ALT、TB即明显下降.结论 GR、NF-κB参与了严重创伤失血性休克后肝损伤的发生,阻断GR使NF-κB的表达增强,肝损害程度加重;抑制NF-κB使GR表达增加,肝损害程度减轻.提示GR及NF-κB在严重创伤休克后肝组织细胞损伤过程中关系密切并起着重要作用.     

糖皮质激素、糖皮质激素受体和热休克蛋白对大鼠严重创伤后早期肝损伤的作用机制

目的 探讨严重创伤后糖皮质激素(GC)、糖皮质激素受体(GR)、热休克蛋白(HSP70)在肝脏继发性损伤中的作用机制。方法 成年雄性Wistar大鼠88只，随机分成正常对照组、严重创伤组、阻断50％GR伴严重创伤组。采用严重胸部撞击伤伴单侧股骨骨折模型、动态观察创伤后大鼠血清皮质醇浓度、肝组织GR及HSP70、肝脏病理、血清肝功能生化指标等变化。结果 创伤后血浆皮质醇浓度迅速增加，伤后4h达到峰值，24h仍维持在高水平；肝组织GR的结合容量伤后即开始下降，12h降至最低，24h有所回升，HSP70在伤后增加，8h达到高峰，24h仍持续在较高水平；但肝脏病理、血清ALT、TB的改变差异无显著性。使用GR阻断剂后，血浆皮质醇浓度较严重刨伤组明显增加，肝淤血明显，肝窦内有较多炎性细胞浸润；血清ALT、TB在伤后早期即有明显升高；肝组织HSP70较单纯创伤组明显增多。结论 GR不足可导致创伤后继发性肝功能不全的发生；HSP70参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动；GC、GR及HSP70在严重创伤后肝组织细胞的损伤与抗损伤机制方面起着重要作用。     

7周递增运动负荷训练过程中糖皮质激素受体的变化

目的为探讨不同运动负荷量作用后的机体靶细胞糖皮质激素受体(GR)变化特征。方法复制相应的动物运动模型,观察7周递增运动负荷训练过程中不同运动负荷量作用后大鼠肝胞液GR结合量的变化。采用竞争性蛋白结合分析法检测血浆皮质酮浓度;放射配体结合分析法测定靶细胞胞液糖皮质激素受体结合量。结果运动后GR减少呈运动负荷量依赖性。结论7周递增负荷运动过程中,GR呈渐进性减少,在运动至第7周时达最低点。     

Glucocorticoid receptor expression on acute lung injury induced by endotoxin in rats

BACKGROUND:

In cases of severe sepsis and septic shock, a series of pathophysiological changes lead to multiple organ dysfunction syndrome. This study aimed to investigate the expression of glucocorticoid receptor mRNA in the rat lung following endotoxin (LPS) induced shock.

METHODS:

Totally 56 SD rats were randomly divided into 4 groups: LPS shock group (n=16), LPS+vasoactive intestinal peptide group(VIP) group, (n=16), LPS+VIP+ glucocorticoid (GC) group, (n=16),and control group (n=8). LPS shock was induced by intravenous injection of LPS (10 mg/kg) in rats. Within 15 minutes after LPS injection, rats in the treatment groups received VIP (5 nmol/kg) or VIP and methylprednisolone (3 mg/kg). The control group was given normal saline instead of LPS. The rats of the four groups were sacrificed at 6 hours,24 hours after injection respectively, and the lung tissues were collected. Pathological changes of the lungs were examined by light microscopy and electron microscopy. GRmRNA expression in the lung tissues was evaluated by RT-PCR.

RESULTS:

In the LPS shock group, lung histopathology demonstrated destruction of the alveolar space,widening of the inter-alveolar space, inflammatory cell infiltration and interstitial edema. However,pathological changes in the LPS+ VIP group and LPS+ VIP+GC group were milder than those in the LPS shock group. Six hours after LPS injection, GR mRNA expression was down-regulated in the LPS group (0.72± 0.24) and LPS+ VIP group (0.88±0.27) (P<0.05) as compared with the control group (1.17±0.22). The LPS shock group showed a more significant down-regualtion than the LPS+VIP group, but the difference was not statistically significant (P>0.05). In contrast, GRmRNA expression in the LPS+ VIP+GC group was significantly up-regulated at 6 hours and further at 24 hours (1.45±0.32 and 1.91±0.46 respectively) (P<0.05).

CONCLUSION:

GrmRNA expression decreased in LPS induced lung injury in rats. Combined treatment with VIP and GC mitigated lung injury ang inflammation. The mechanism may be related to up-regulation of GR mRNA expression.KEY WORDS: Glucocorticoid, GRmRNA, Vasoactive intestinal peptide, LPS, Shock, Inflammation, Lung injury, Rat     

激素对肺损伤大鼠肺内水通道蛋白-1及钠钾-ATP酶的影响

目的 观察不同剂量氢化可的松（hydrocortisone,HC）对急性肺损伤（ALI）大鼠肺内水通道蛋白-1（AQP-1）和钠钾-ATP酶的影响及机制.方法 间隔5 h分2次注射灭活大肠杆菌建立早期休克Wistar大鼠ALI模型.40只鼠随机分为5组：正常对照组、肺损伤组、大剂量HC组（150 mg/kg）、中剂量HC组（20 mg/kg）、小剂量HC组（6 mg/kg）.给药2 h后收集肺组织标本,观察肺组织病理形态和计算肺损伤病理评分,并采用免疫组化法观察肺内水通道蛋白-1、钠钾-ATP酶、糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）的表达.结果 肺损伤组肺损伤病理评分显著高于正常对照组（P＜0.05）.使用HC干预后,各剂量组较肺损伤组明显降低（P＜0.05）,以小剂量组下降最明显（P＜0.05）.中剂量组肺损伤病理评分虽较大剂量组降低,但两组间差异无显著性;肺内AQP-1和钠钾-ATP酶表达,肺损伤组显著低于正常对照组（P＜0.05）,使用HC干预后,各剂量组肺内AQP-1和钠钾-ATP酶表达均较肺损伤组升高,以小剂量组最明显（P＜0.05）,中剂量组较大剂量组表达增强,但差异无显著性;肺内GR表达,肺损伤组显著低于正常对照组（P＜0.05）,使用HC干预后,各剂量组肺内GR表达均较肺损伤组升高,但仅小剂量组差异达显著性（P＜0.05）.大、中剂量组间差异无显著性.指标间相关性分析提示,GR与AQP-1和钠钾-ATP酶表达均存在明显直线正相关关系（r=0.43,P=0.007;r=0.31,P=0.015）.结论 不同剂量HC干预早期休克大鼠ALI显示,在改善肺泡液体转运、肺组织病理改变等方面,均以小剂量HC最佳,未发现剂量依赖效应.不同剂量HC干预效果差异的原因可能与GR表达水平有关.     

新生大鼠反复惊厥对海马区肾上腺皮质激素受体表达的影响

目的 研究新生期大鼠反复惊厥对海马区肾上腺皮质激素受体MR和GR表达的影响,以及对成年期大鼠记忆功能的影响,探讨发育期脑损伤和脑内相关受体之间的相互关系.方法 生后7 d的SD大鼠随机分成两组,每组40只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次,每次持续30 min,连续6 d;于反复惊厥后1、3、7、30、60 d处死大鼠取脑,分别采用免疫组织化学方法观察大鼠海马肾上腺皮质激素受体MR和GR表达的变化.最后一组大鼠处死前于第61～65天行Morris水迷宫实验,检测大鼠的学习记忆功能.对照组同样操作但不吸入三氟乙醚.结果 61～64 d,两组大鼠寻找平台时间均逐渐缩短,惊厥组大鼠在第64天的平均寻找平台时间[(82 424.3±35 622.0)ms]与对照组[(40 712.4±29 467.6)ms]比较明显延长(P=0.001).在第65天,惊厥组大鼠120 s内穿越原平台位置次数[(1.2±0.9)次]较对照组[(3.1±1.3)次]明显减少(P<0.001).免疫组化结果显示新生大鼠反复惊厥后的1、3、7、30、60 d海马CA1～4区GR、MR的表达较埘照组明显降低(P<0.05).结论 海马区GR及MR随脑发育成熟表达不断增高,呈现一定规律及分布特点,参与了脑发育过程.新生大鼠反复惊厥造成海马GR、MR表达的持续异常,参与发育期脑损伤.     

类固醇受体辅活化子-3基因敲除对炎症反应中糖皮质激素受体的影响

目的 观察类固醇受体辅活化子(SRC)-3基因敲除对脂多糖(LPS)诱导的糖皮质激素受体(GR)蛋白表达水平及核转位的影响.方法 健康清洁SRC-3 / 小鼠、SRC-3-/-小鼠各20只,雌性,体质量约20 g,分为SRC-3 / 组和SRC-3-/-组,每组设正常(N)、1 h、4 h、12 h四个时相点,每个时相点各5只小鼠.采用Western blot测定肝、脾组织GR及SRC-1、SRC-2的蛋白表达.结果 无论是SRC-3 / 组还是SRC-3-/-组,LPS刺激引起肝组织GR蛋白表达及核转位显著降低,但SRC-3-/-组降低程度明显小于SRC-3 / 组;SRC-3 / 组和SRC-3-/-组小鼠脾组织GR表达水平4 h后开始下降.但SRC-3-/-组下降幅度显著低于SRC-3 / 组,GR核转位在SRC-3 / 组显著降低,而SRC-3-/-组则无显著变化.LPS刺激后SRC-3 / 组、SRC-3-/-组肝组织SRC-1均显著降低,但SRC-3-/-组变化程度均显著小于SRC-3 / 组;两组脾组织中未能明确检测到SRC-1蛋白表达.LPS刺激后两组小鼠肝组织SRC-2蛋白表达均显著增加,但在相应时相点SRC-3-/-组小鼠显著高于SRC-3 / 组;SRC-3 / 组小鼠脾组织SRC-2蛋白表达明显降低,而SRC-3-/-组却显著增加.结论 炎症反应中GR蛋白表达及核转位显著降低,产生明显的糖皮质激素抵抗(GCR),SRC-3基凶敲除后可缓解其程度.SRC-3基因敲除对炎症反应中肝、脾组织GCR程度的不同影响,可能与SRC家族成员的不同补偿效应有关.     

脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及糖皮质激素的作用

目的 观察脓毒症状态下大鼠心肌细胞凋亡的变化并探讨糖皮质激素对心肌细胞凋亡的影响及其机制,为临床治疗脓毒症心脏损害提供依据.方法 采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症模型.60只体质量为230 ～ 280 g的Wistar大鼠被随机(随机数字法)分为糖皮质激素实验组(n=30)和对照组(n=30).每组大鼠均行盲肠结扎穿孔术,每组术后4h开始给予舒普深200 mg/kg,2次/d.实验组在以上基础上给予地塞米松0.5 mg/kg.每组随机分为3个亚组(6、24、72 h组),于相应时间点取出各组大鼠心脏,分离左心室,制备单细胞悬液,进行流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.使用SPSS 11.5统计软件系统,所有数据以均数±标准差表示((x-)±s),两组间采取独立样本t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析.同时左心室行免疫组化检测抗细胞凋亡蛋白B淋巴细胞瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)的表达.结果 激素组大鼠各时间点心肌细胞凋亡率分别较对照组大鼠心肌细胞凋亡率明显减少(F=9.11,t=5.681,P＜0.01)(6 ht =11.416,P＜0.01;24 h=6.217,P＜0.01;72 h t=3.76,P＜0.01);6h对照组大鼠的心肌细胞凋亡率显著低于24 h及72 h对照组大鼠(F=13.254,sig =0.000,P＜0.01;sig=0.004,P＜0.01);24 h对照组大鼠的心肌细胞凋亡率显著高于72 h对照组大鼠(sig=0.039,P＜0.05);激素各组大鼠心肌细胞凋亡率差异无统计学意义(F=2.488,6/24 h sig=0.132,P＞0.05; 24/72 h sig=0.549,P＞0.05;6/72 h sig=0.053,P＞0.05).结论 脓毒症时存在心肌细胞凋亡,以24 h最明显,脓毒症时应用糖皮质激素能够减少各个阶段心肌细胞凋亡.     

糖皮质激素受体和热休克蛋白70在大鼠创伤失血性休克肝组织中的变化及其意义

目的从组织细胞受体水平探讨糖皮质激素受体（GR）和热休克蛋白70（HSP70）在创伤失血性休克后肝脏中的变化及其作用。方法采用双侧股骨骨折伴失血性休克致严重创伤模型，动态观察伤后8h大鼠肝组织GR、HSP70、血清肝功能生化指标、肝脏病理等变化。采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）测定肝组织GR、HSP70含量，并进行计算机图像分析。结果单纯股骨骨折伤后，肝组织GR含量于伤后1h即开始下降，6h降至最低，8h仍显著低于正常对照组；创伤合并休克后，GR下降更加明显。HSP70在单纯股骨骨折伤后迅速增加，6h达到峰值，8h仍持续在较高水平；创伤合并休克后，HSP70升高更加显著。单纯股骨骨折伤后，血清丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TB）和白蛋白与正常对照组比较，差异均无显著性。但创伤合并休克后4h和2h血清ALT和TB分别开始明显增高（P均d〈0．01），白蛋白则均下降（P均〈0．01）。创伤合并休克后6h肝脏镜下肝窦内即出现较多炎性细胞浸润。结论GR不足在严重创伤失血性休克后肝脏继发性损害过程中起重要作用，HSP70可能参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动。