SAT技术与荧光定量PCR在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究

目的通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(SAT-TB)与荧光定量PCR(FQ-PCR)两种不同类型的方法检测痰涂片阴性肺结核患者的肺泡灌洗液(BALF)标本,探讨两种检测方法的临床价值。方法采集2015年3月-2017年3月本院收治的疑似肺结核,且至少3次痰涂片结果为阴性的患者共1050例,其中531例肺结核为观察组,519例其他肺部疾病患者为对照组。以临床诊断为金标准,计算SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养、抗酸杆菌染色等检测方式的各类评价指标,并进行比较。结果菌阴肺结核肺泡灌洗液抗酸杆菌染色、结核分枝杆菌快速培养、SAT-TB、FQ-PCR单独检测与SAT-TB联合FQ-PCR检测单阳、双阳的准确性分别为12. 99%、21. 28%、56. 69%、54. 24%、62. 52%、42. 37%,SAT-TB、FQ-PCR与SAT-TB联合FQ-PCR检测的诊断价值均具有统计学意义(P 0. 05);对痰涂片阴性的肺结核患者的肺泡灌洗液(BALF)诊断有价值,单阳 SAT-TB FQ-PCR双阳结核分枝杆菌快速培养抗酸杆菌染色。结论与细菌学检测方法比较,SAT-TB、FQ-PCR检测具有快速、敏感等优势,能显著缩短确诊时间,提高诊断的准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供了有效的诊断手段和依据,值得临床推广应用。     

四种方法诊断涂阴肺结核的临床应用价值探讨

痰涂片查到抗酸杆菌是确诊肺结核病的重要依据。但是我国有50%～70%的活动性肺结核病例痰涂片检查抗酸杆菌阴性,而这些患者可能也是传染源或发展为新的传染源^[1]。由于痰涂片阴性肺结核大多仅以临床症状及X线胸片作诊断,其特异性不高,存在过诊、漏诊等现象。本实验应用噬菌体扩增法（PhaB）及痰培养法检测痰涂片阴性（涂阴）肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并结合血清结核抗体（LAM-IgG）检测和PPD皮肤试验,探讨其应用于临床诊断的可行性和适用性,报告如下。     

抗酸染色对肺结核的诊断价值

目的 了解结核分枝杆菌抗酸染色对肺结核的诊断价值。方法对98例确诊为继发型肺结核和血行播散型肺结核患者，统计分析痰液及纤支镜刷检液涂片抗酸染色情况。结果98例中抗酸染色阳性38例，阴性60例。10例经纤支镜刷检液涂片抗酸染色中，阳性6例。结论抗酸染色是诊断肺结核的常规方法，纤支镜刷检液涂片明显高于痰涂片法。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在肺结核诊断中的价值分析

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT-TB)在肺结核诊断中的价值。方法纳入1121例非相同患者痰标本,其中26例为非结核分枝杆菌。570例肺结核为观察组,525例其他肺部疾病患者为对照组。对治疗前的痰标本分别进行抗酸杆菌涂片、培养及鉴定和SAT法检测。阳性检出率的比较使用卡方检验。结果临床诊断肺结核570例,痰培养结核菌阳性率46.5%(265/570),SAT法检测阳性率46.7%(266/570),痰涂片阳性率34.4%(196/570),SAT与涂片法阳性率的差异有统计学意义(χ2=17.83,P0.01)。在涂阴肺结核中,SAT阳性率达19.5%。以培养阳性作为金标准,SAT法诊断结核病的灵敏度为89.4%,特异度96.3%,阳性似然比为24.2,阴性似然比为0.11,一致率是94.6%,阳性预测值是88.4%,阴性预测值为96.6%。在非结核分枝杆菌肺病中SAT检测阳性率为零。结论 SAT-TB法在肺结核的早期诊断中是一种快速、准确、敏感的方法,值得推广。     

苏州地区64例非结核分枝杆菌肺病临床分析

目的对苏州地区非结核分枝杆菌肺病((nontuberculous mycobacteria,NTM))临床特点、耐药特点进行分析总结,以提高NTM肺病诊疗水平。方法选取苏州市第五人民医院2014年9月至2016年9月64例非结核分枝杆菌肺病患者为研究对象,对患者临床资料(包括年龄、性别、既往病史、症状、影像学)、实验室检查(包括γ-干扰素释放实验、痰抗酸杆菌涂片、结核分枝杆菌TB-DNA痰液检测、痰结核分枝杆菌培养)、治疗方案选择、治疗期间药物不良反应及治疗效果进行回顾性分析。结果非结核分枝杆菌肺病以老年男性多见,通常合并基础肺病如支气管扩张、矽肺、慢性阻塞性肺病患者容易好发,临床症状及影像学表现与肺结核相似但病情进展较慢,γ-干扰素释放实验多为阴性(83.0%),痰抗酸杆菌涂片阳性率高(66.0%)及结核分枝杆菌TB-DNA痰液检测有助于早期诊断,耐药严重,耐药率由高到低分别为INH(98.4%)PAS(95.3%)SM(73.4%)Lfx(82.8%)=RFP(82.8%)Am(73.4%)EMB(56.3%)Pto(40.6%)。患者治疗期间药物副反应大,治疗效果差。结论对于老年患者,特别是合并基础肺疾病如支气管扩张、慢阻肺等查痰涂片找抗酸杆菌阳性及常规抗结核后治疗效果差的肺结核患者,均需警惕NTM肺病可能。因NTM与肺结核有很多相似点,早期易被误诊为肺结核,因此需及时关注早期疑似非结核分枝杆菌肺病患者的NTM培养报告及药敏试验结果,并根据药敏结果调整治疗方案。     

四种方法诊断涂阴肺结核的临床应用价值探讨

痰涂片查到抗酸杆菌是确诊肺结核病的重要依据。但是我国有50％～70％的活动性肺结核病例痰涂片检查抗酸杆菌阴性，而这些患者可能也是传染源或发展为新的传染源。由于痰涂片阴性肺结核大多仅以临床症状及X线胸片作诊断，其特异性不高，存在过诊、漏诊等现象。本实验应用噬菌体扩增法（PhaB）及痰培养法检测痰涂片阴性（涂阴）肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌，并结合血清结核抗体（LAM—IgG）检测和PPD皮肤试验，探讨其应用于临床诊断的可行性和适用性，报告如下。     

应用磁纳米捕获-PCR技术检测痰液结核分枝杆菌的研究

目的采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,以提高PCR检测的灵敏度,快速诊断结核病。方法以普通PCR为对照,采用磁纳米捕获技术富集187份结核和非结核呼吸系统疾病患者痰标本中的结核分枝杆菌,进行PCR检测。结果 152份肺结核患者痰标本41份(27.0%)涂片抗酸染色阳性,72份(47.4%)普通PCR检测阳性,126份(82.9%)磁纳米捕获-PCR检测阳性。35份非结核呼吸系统疾病患者,痰标本中抗酸染色均为阴性,1份普通PCR和磁纳米捕获-PCR检测均阳性,该患者临床诊断肺部感染合并陈旧性肺结核。结论采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,可显著提高PCR检测的灵敏度。     

纤维支气管镜检查对无痰或痰菌阴性不典型肺结核的诊断价值

目的 探讨纤维支气管镜（简称“纤支镜”）检查对无痰或痰菌阴性不典型肺结核的诊断价值。 方法 选无痰或痰菌阴性的不典型肺结核患者201例,用纤支镜在病变部位进行活检、刷检、支气管肺泡灌洗液（BALF）进行BBLMGIT(Mycobacteria Growth Indicate Tube)分枝杆菌快速培养查结核杆菌。术后进行痰涂片查抗酸杆菌、痰结核分枝杆菌快速培养。 结果201例刷检、BALF快速培养结核分枝杆菌阳性率分别是67.2%、83.6%,61例活检阳性率63.9%,201例术后痰涂片、术后痰快速培养结核分枝杆菌阳性率分别是28.9%、57.2%。 结论 纤支镜检查是确诊无痰或痰菌阴性不典型肺结核的有效方法 ,其中BALF行结核分枝杆菌快速培养具有较高的诊断价值、快速、阳性率较高。根据镜下所见采用不同的取材方法 可望提高诊断率。     

诱导痰对菌阴肺结核诊断价值的探讨

目的探讨诱导痰对痰涂片阴性肺结核的诊断价值。方法对三次痰涂片阴性肺结核病人采用10%高渗氯化钠吸入20～30分钟或取到20～30ml痰后,立即离心沉渣涂片抗酸染色和结核菌培养。结果83例取痰均成功,涂片抗酸染色阴性50例(60.24%)、(±)12例(14.46%)、( )13例(15.66%)、( )8例(9.63%),诱导痰培养阳性36例(43.37%)。结论诱导痰找抗酸杆菌痛苦小、费用低,提高了痰菌检出率,是菌阴肺结核诊断一个有效方法。     

荧光定量PCR检测24小时尿沉渣TB-DNA对临床诊断泌尿系结核价值分析

目的荧光定量PCR检测24小时尿沉渣中TB-DNA对临床诊断泌尿系统结核的价值分析。方法采集66例临床诊断泌尿系统结核病患者的24小时尿液沉渣标本,应用荧光定量PCR检测尿沉渣中的TB-DNA,同时对这些标本进行分枝杆菌培养及涂片找抗酸杆菌,各种检验方法检出率进行比对。结果 66例临床诊断为泌尿系统结核患者,24小时尿沉渣中查出TB-DNA阳性的检出率为28.78%(19/66),明显高于24小时尿沉渣涂片找抗酸杆菌的阳性检出率6.06%(4/66)(P0.05),同时高于24小时尿沉渣结核菌培养法阳性检出率12.12%(8/66)(P0.05)。结论荧光PCR定量检测24小时尿沉渣中TB-DNA的方法能明显提高泌尿系统结核病的检出率,而且敏感性和特异性均高于其他两项检验方法,优于24小时尿沉渣涂片找抗酸杆菌以及分枝杆菌培养法,对早期诊断泌尿系统结核提供了非常大的帮助。     

支气管肺泡灌洗液GeneXpert-MTB/RIF检测在活动性肺结核诊断中的效能

目的探讨支气管肺泡灌洗液Xpert-MTB/RIF检测对肺结核早期诊断的价值。方法选择2017年9月～2018年9月在苏州大学附属传染病医院肺科住院,临床诊断肺结核患者共158例,分别对其支气管肺泡灌洗液及痰标本行GeneXpert-MTB/RIF法(简称"Xpert法")检测,同时对其支气管肺泡灌洗液行涂片抗酸染色镜检、MGIT 960培养、荧光定量PCR,并对Xpert法检测法结果进行分析。结果 Xpert法检测支气管肺泡灌洗液阳性率明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液培养阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05)。Xpert法检测阳性率明显高于PCR检测结核分枝杆菌DNA,差异有统计学意义(P0.05);上述四项联合检测阳性率明显高于Xpert法、结核培养等,差异有统计学意义(P0.05)。而Xpert法检测阳性率与痰培养阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。以支气管肺泡灌洗液结核培养为金标准,Xpert法检测敏感度78.75%,特异度为65.38%。支气管镜BALF Xpert法检测阳性率57.0%,痰Xpert法检测阳性率32.3%,支气管肺泡灌洗液Xpert法检测阳性率明显高于痰标本,差异有统计学意义(P0.05)。结论支气管肺泡灌洗液Xpert法检测相比痰检及其他传统检测方法快捷、安全、高敏感性,能很大程度提高结核病及耐药结核的早期诊断率,有极大的临床应用前景。     

纤支镜在菌阴肺结核中的应用评估

目的 观察纤支镜在菌阴肺结核诊断中的价值.方法 分析190例入院时痰涂片和PCR分析均为阴性疑诊为肺结核患者的病例资料,从经纤支镜抗酸杆菌涂片的阳性率、PCR检测结核分枝杆菌阳性率、上皮性肉芽肿支气管活检、结核分枝杆菌的培养阳性率等四个方面进行分析.结果 190例病例中,经纤支镜取样的阳性率:42.6％(痰涂片),63.6％(PCR分析),31.2％(肉芽肿支气管活检),54.2％(痰培养),将各种检查手段联合起来,诊断率可以达到85.2％.结论 经纤支镜取样有较高阳性率,可以提供快速明确的结核诊断.     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22.5%、32.2%、54.8%、64.5%和87.1%;检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13.6%、18.6%、28.8%、37.3%和52.5%。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异(P<0.05)。检测34例非结核病人痰标本,涂片、培养均为阴性,而PCR和增菌PCR均有1例假阳性,假阳性率2.9%。比较PCR与增菌PCR对菌阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率,有显著性差异(P<0.05),而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性,可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

防污染支气管肺泡灌洗对痰菌阴性肺结核的诊断价值

目的研究防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)技术对痰菌阴性肺结核患者的诊断价值。方法对96例痰菌阴性肺结核患者进行经支气管镜防污染支气管肺泡灌洗,防污染支气管肺泡灌洗液经过前处理,离心沉渣行涂片荧光染色镜检抗酸杆菌、改良罗氏法分离培养及BACTEC MGIT960快速结核菌培养。结果防污染支气管肺泡灌洗液离心沉渣镜检抗酸杆菌阳性20例(20.8%),改良罗氏培养基分离培养阳性30例(31.3%),BACTEC MGIT960快速培养技术培养阳性59例(61.5%),最终获病原学确诊62例,确诊率为64.6%。结论防污染支气管肺泡灌洗对痰菌阴性肺结核患者具有重要的诊断价值,对灌洗液进行多种检查可提高检出的阳性率。     

二代测序技术检测临床痰标本中结核分枝杆菌的初步评价CSCD

目的:评价二代测序(NGS)技术对临床痰标本中结核分枝杆菌的检测效能。方法:采用前瞻性研究方法,选取北京市疾病预防控制中心(北京结核病控制研究与防治所)2021年8—10月接诊的49例疑似肺结核患者痰标本,同时进行抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片”)、分枝杆菌培养(包含罗氏培养和MGIT 960液体培养;简称“培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)和NGS技术检测结核分枝杆菌,比较4种方法检测不同分类患者阳性率差异,并以最终临床诊断为参照标准,评价4种检测方法的检测效能。结果:49例疑似肺结核患者中,最终肺结核诊断者40例(包括病原学确诊患者25例、病原学阴性临床诊断患者15例),非肺结核患者9例(包括肺炎6例,非结核分枝杆菌感染、慢性阻塞性肺疾病和哮喘各1例)。NGS技术检测49例疑似肺结核患者的阳性率[69.4%(34/49)]明显高于涂片[44.9%(22/49)]、培养[51.0%(25/49)]和Xpert[49.0%(24/49)],差异均有统计学意义(χ^(2)=17.614、17.018、20.753,P值均=0.000);检测病原学阴性肺结核患者的阳性检出率为46.7%(7/15)。以临床诊断结果为参照标准,涂片、培养、Xpert、NGS技术对49例疑似患者痰标本的检测敏感度分别为55.0%(22/40)、60.0%(24/40)、60.0%(24/40)、80.0%(32/40),特异度分别为9/9、8/9、9/9、7/9,一致率分别为63.3%(31/49)、65.3%(32/49)、67.3%(33/49)、79.6%(39/49),Kappa值分别为0.310、0.297、0.355、0.459。结论:以临床诊断为参考标准,NGS技术检测的敏感度最高,与临床诊断的一致性也最高,能够快速、高效检测痰标本中的结核分枝杆菌,可早期辅助诊断疑似肺结核患者。     

二代测序技术检测临床痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的 评价二代测序(NGS)技术对临床痰标本中结核分枝杆菌的检测效能。方法采用前瞻性研究方法,选取北京市疾病预防控制中心(北京结核病控制研究与防治所)2021年8—10月接诊的49例疑似肺结核患者痰标本,同时进行抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片”)、分枝杆菌培养(包含罗氏培养和MGIT 960液体培养;简称“培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)和NGS技术检测结核分枝杆菌,比较4种方法检测不同分类患者阳性率差异,并以最终临床诊断为参照标准,评价4种检测方法的检测效能。结果49例疑似肺结核患者中,最终肺结核诊断者40例(包括病原学确诊患者25例、病原学阴性临床诊断患者15例),非肺结核患者9例(包括肺炎6例,非结核分枝杆菌感染、慢性阻塞性肺疾病和哮喘各1例)。NGS技术检测49例疑似肺结核患者的阳性率[69.4%(34/49)]明显高于涂片[44.9%(22/49)]、培养[51.0%(25/49)]和Xpert[49.0%(24/49)],差异均有统计学意义(χ²=17.614、17.018、20.753,P值均=0.000);检测病原学阴性肺结核患者的阳性检出率为46.7%(7/15)。 以临床诊断结果为参照标准,涂片、培养、Xpert、NGS技术对49例疑似患者痰标本的检测敏感度分别为55.0%(22/40)、60.0%(24/40)、60.0%(24/40)、80.0%(32/40),特异度分别为9/9、8/9、9/9、7/9,一致率分别为63.3%(31/49)、65.3%(32/49)、67.3%(33/49)、79.6%(39/49),Kappa值分别为0.310、0.297、0.355、0.459。结论以临床诊断为参考标准,NGS技术检测的敏感度最高,与临床诊断的一致性也最高,能够快速、高效检测痰标本中的结核分枝杆菌,可早期辅助诊断疑似肺结核患者。     

聚合酶链反应技术检测咽拭子标本中结核菌DNA的评价

为探讨聚合酶链反应（PCR）检测咽拭子标本中结核菌在诊断肺部疾病的价值。应用PCR法检测肺结核患者50例，非肺结核患者55例及100例正常健康人咽拭子标本中结核菌和咽拭子涂片找抗酸杆菌，并与痰涂片检查作比较。肺结核组、非肺结核组及正常健康人咽拭子PCR阳性率分别为60％、3O．9％及10％，涂片为6％、0％和0％。结核组及非结核组痰PCR阳，牲率为54％和10．9％，涂片为26％和0％。结果表明PCR检测咽拭子标本结核菌DNA是肺结核病早期诊断和鉴别诊断的一种有价值的检测手段。但应注意假阳性或假阴性出现的可能。     

实时多聚酶链反应检测支气管分泌物在涂阴结核病快速诊断中的应用

背景:实时定量PCR技术在微生物包括分枝杆菌检测领域应用越来越广泛。目的:评价在痰标本涂片抗酸染色无法获得诊断信息时(如没有痰或痰涂片阴性),RT-PCR在结核病诊断中的作用。设计:我们分析了从2006年1月至2008年4月之间连续纳入的为诊断结核病而进行的支气管分泌物RT-PCR检测的病人。所有病人均接收了计算机断层扫描(CT)、支气管镜和组织活检确诊结核病,对收集的支气管分泌物进行了微生物学和RT-PCR检测。最终的确诊基于微生物学或临床病理学的标准。结果:有136例患者最终得到了诊断结果,其中77例(包括65例培养阳性病例)诊断为结核。RT-PCR在确诊病人中的阳性率是51.9%(40/77)。与支气管分泌物抗酸染色相比,更多的病人(20.8%)通过RT-PCR被检测出来(40比20,P<0.001)。结合支气管分泌物抗酸染色和RT-PCR,77例结核确诊病例中的44例(57.1%)在几天之内被确诊。结论:支气管分泌物的RT-PCR检测在涂阴或无痰结核病人的快速诊断中是一种有用的方法。     

荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中TbDNA诊断肺结核的临床价值

目的探讨纤支镜肺泡灌洗液中结核分枝杆菌DNA在肺结核诊断中的价值。方法对187例初治肺结核患者及41例肺炎患者分别应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测结核分枝杆菌DNA、肺泡灌洗液结核菌培养、纤维支气管镜刷片抗酸染色。结果肺结核患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA阳性率为:78.6%、肺泡灌洗液结核菌培养阳性率为28.8%、刷片抗酸染色阳性率为21.9%。肺炎患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA、肺泡灌洗液结核菌培养、刷片抗酸染色均阴性。结论荧光定量聚合酶链反应检测肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA,特异性高,用于肺结核诊断可提高肺结核诊断的敏感性和准确性,明显优于纤维支气管镜刷片抗酸染色,亦较肺泡灌洗液结核菌培养诊断灵敏、快速,可作为肺结核诊断较可靠指标。     

荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中TbDNA对涂阴肺结核的诊断价值

目的探讨纤支镜肺泡灌洗液中结核分枝杆菌DNA在涂阴肺结核诊断中的价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对300例涂阴肺结核,178例菌阳肺结核及119例肺炎或肺癌患者的纤支镜肺泡灌洗液标本进行结核分枝杆菌DNA检测。结果3种病因肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA阳性检出率分别为：74.3%（223/300）、94.9%（169/178）、17.6%（21/119）。结论荧光定量聚合酶链反应检测肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA,用于肺结核诊断可提高肺结核诊断的敏感性和准确性,明显优于痰抗酸染色,亦较痰结核菌培养诊断灵敏、快速,可作为肺结核诊断较可靠指标。