梗阻性黄疸围手术期肾髓质水通道蛋白2表达变化的实验研究

目的探讨大鼠胆道梗阻解除后肾髓质集合管上皮细胞形态学改变及水通道蛋白2(AQP2)表达的变化。方法30只大鼠按随机表法随机分为假手术组(n=10)和梗阻性黄疸组(n=20)。梗阻性黄疸组大鼠全麻后建立梗阻性黄疸模型;假手术组大鼠行假手术。7d后再次全麻解除胆道梗阻,而假手术组再次行假手术。各组动物分别于解除梗阻后立即或24h处死取材。将静脉血离心后血清冻存备检肝、肾功能;部分肾脏标本分离后冻存,Western blot法半定量检测AQP2表达;部分肾脏固定后作光镜观察。结果各组动物均顺利完成实验,无实验动物死亡。梗阻性黄疸组大鼠取材时见腹腔较多金黄色腹水。解除梗阻后24h大鼠血清胆红素水平下降〔(45.95±8.39)μmol/L〕,P<0.01,血肌酐及尿素氮未见明显改变。梗阻性黄疸组肾髓质AQP2表达(15665.30±1181.85)较假手术组(21966.20±1544.70)明显下降(P<0.01),解除梗阻后梗阻性黄疸组肾髓质AQP2表达增强(19490.80±4239.32),P<0.01。结论胆道梗阻会造成肾髓质集合管上皮细胞结构损伤,同时下调AQP2表达。     

梗阻性黄疸围手术期肾水通道蛋白1表达变化的实验研究

目的 探讨大鼠胆道梗阻解除后肾脏近曲小管上皮细胞形态学检测及水通道蛋白1表达的变化.方法 30只大鼠随机分为二组,分别为假手术组10只、梗阻性黄疸组20只.梗阻性黄疸组20只大鼠全身麻醉后建立梗阻性黄疸动物模型;假手术组10只大鼠行假手术.7 d后再次全麻解除胆道梗阻,而假手术组再次行假手术.并将各组动物随机均分为立即取材组和24 h后取材组,分别立即处死取材或24 h后处死取材.将静脉血离心后血清冻存检测肝功能、肾功能;部分肾脏标本冻存,Western印迹法半定量检测水通道蛋白1(aquaporinl,aqp1)表达;部分肾脏固定后光镜检测.结果 解除梗阻早期鼠血清胆红素水平下降,同时血BUN及Cr未见明显改变.通过Western印迹对肾aqp1表达测定发现:梗阻性黄疸组aqp1表达较对照组明显下降,解除梗阻后梗黄组aqp1表达增强.结论 胆道梗阻会造成肾脏近曲小管上皮细胞结构损伤,同时下调aqp1表达.解除梗阻后aqp1表达增强.     

脓毒症大鼠肾脏AQPs动态变化与水代谢的关系

目的：探讨肾脏AQPs的表达与肾损伤水代谢紊乱的关系。方法：Wistar大鼠采用盲肠结扎穿孔法（CLP）建立脓毒症大鼠模型。观测尿量、尿渗透压和肾功能。免疫组化方法检测AQP1、AQP2蛋白水平,实时荧光定量PCR方法检测AQP1mRNA、AQP2mRNA水平。结果：手术组大鼠肾脏AQP1蛋白及AQP1mRNA表达随着CPL术后时间的延长呈下降趋势,6h开始下降,24h达最低;AQP2蛋白及AQP2-mRNA表达均在术后3h增高、12h、24h明显降低,较假手术组差异有统计学意义（P〈0.05）。大鼠肾脏AQP1、AQP2分别与尿量呈负相关（P〈0.05）,与尿渗透压呈正相关（P〈0.05）。结论：AQP1和AQP2基因通过调节AQP1、AQP2蛋白的表达,参与肾脏水代谢的调节;AQP1、AQP2蛋白及基因的表达异常是导致脓毒症肾损伤水代谢紊乱的重要原因。     

高原低氧环境下大鼠肾脏水通道蛋白2的表达及意义

目的 研究高原低氧环境下大鼠肾脏内髓水通道蛋白2（AQP2）mRNA及蛋白的表达。 方法 将40只雄性SD大鼠随机分为24 h、48 h、72 h及1周组，同时设立对照组（西宁地区）。将4个实验组由西宁地区（2260 m）带至青海大学可可西里高原医学研究基地(4600 m)，在不同时间点处死取材。用放射免疫法检测血浆抗利尿激素(AHD)浓度，Western印迹、实时定量PCR、免疫荧光等方法检测AQP2蛋白及mRNA的表达。 结果 暴露于高原低氧环境后，大鼠AHD水平首先呈下降趋势，24 h为（142.46±10.57）；48 h时达到最低水平，仅为对照组的28.5%[（86.94±6.49） μg/L比（302.53±10.48） μg/L]；后逐渐上升，72 h组为（169.65±11.15） μg/L，与对照组差异均有统计学意义（均P < 0.01）；1周时为（306.46±11.14） μg/L达到对照组水平。AQP2 mRNA的表达与AHD水平的变化相一致，初入高原后呈下降趋势，48 h时达到最低水平，后逐渐上升，24 h、48 h、72 h组与对照组差异均有统计学意义（分别为0.04±0.005，0.03±0.002，0.04±0.003比0.09±0.008，均P < 0.01），1周时为（0.09±0.01），达到对照组水平。AQP2蛋白表达与mRNA的表达变化一致。免疫荧光结果显示，对照组及1周组大鼠肾脏荧光强度表达一致，其余各组较低，48 h组荧光强度最低。 结论 在高原低氧环境下大鼠肾脏内髓AQP2 mRNA和蛋白的表达在缺氧早期呈下降趋势，后逐渐上升到正常水平，其改变可能和机体对缺氧的程度和高原低氧的习服过程有关。     

梗阻性黄疸大鼠肾细胞凋亡及bcl-2表达的作用

目的探讨梗阻性黄疸引起肾损伤过程中细胞凋亡的意义。方法32只雄性SD大鼠随机均分为2组，假手术组（SO组）只暴露腹腔但不结扎胆管，胆总管结扎组（BDL组）以双重结扎胆管中间离断方法制成梗阻性黄疸大鼠模型。于术后行光镜下肾脏病理学检查，琼脂糖凝胶电泳检测肾细胞DNA的断裂形式，测定血清中D-Bil、TBA、GOT、GPT、Cr和BUN的含量，检测尿β2-微球蛋白，流式细胞术检测肾脏细胞凋亡率，免疫组化法检测肾组织凋亡抑制基因bcl-2蛋白的表达。结果BDL组大鼠肾脏细胞凋亡率明显高于SO组（P〈0．05），出现细胞凋亡特征性DNA梯状带；其肾脏细胞bcl-2蛋白的表达阳性细胞率明显高于SO组（P〈0．01），并于术后7d达高峰，14d时bcl-2表达阳性细胞率开始下降。结论梗阻性黄疸大鼠肾功能损害过程中存在肾脏细胞凋亡，梗阻性黄疸可反馈性启动肾小管上皮细胞凋亡抑制基因bcl-2的表达。     

可复性单侧输尿管部分梗阻动物模型的建立

目的探索建立一种较为理想的、可复性强的输尿管部分梗阻的动物模型。方法选用雄性Wistar大鼠48只,应用输尿管对侧腰大肌悬吊术建立输尿管部分梗阻模型,分别于6个不同时相即造模后1、2、4、6、8周（解除梗阻后4周）、10周（解除梗阻后4周）各取8只动物,同位素肾动态扫描检测造模后不同时相梗阻肾功能受损情况、梗阻解除后肾功能恢复情况,光镜下观察不同梗阻时段肾脏病理改变。结果造模后2周成模,成模率为97.9%。肾动态显像：与梗阻前比较,梗阻肾肾小球滤过率明显降低（P〈0.05）。梗阻后4周解除梗阻,肾功能明显恢复;6周解除梗阻,肾功能不能恢复至正常。结论输尿管对侧腰大肌悬吊术是较为理想的输尿管部分梗阻模型,该方法成模率高,梗阻具有可逆性。     

内皮素在梗阻性黄疸肝、肾、心组织损伤中的作用及血塞通干预

目的 探讨内皮素（ET）在梗阻性黄疸肝、肾、心组织损伤中的作用机理及血塞通注射液的保护作用。方法 健康日本大耳白兔72只，雌雄各半，采用完全随机分组方法随机均分为3组：胆总管结扎（BDL）组、BDL＋血塞通注射液组及假手术组。建立实验动物模型，分别于术后3、6、9及21d取材。用全自动生化分析仪测定各组动物血清总胆红素、谷丙转氨酶、尿素氮及肌酐；用放免法测定各组动物肝、肾、心组织及血浆中的ET水平。结果 BDL组和BDL＋血塞通注射液组与假手术组比较，动物血浆及肝、肾、心组织中的ET含量明显升高（P〈0．01），肝、肾功能损害更严重（P〈0．01）；BDL＋血塞通注射液组比BDL组血浆及组织中ET含量明显降低（P〈0．05），肝、肾功能损害亦减轻（P〈0．05）。结论梗阻性黄疸可导致血浆及肝、肾、心组织ET含量升高，且随梗阻时间延长升高愈明显；血塞通注射液通过降低血浆及组织的ET水平，发挥对梗阻性黄疸肝、肾、心损害的保护作用。     

川芎嗪改善高渗枸橼酸盐嘌呤溶液保存犬肾的效果

目的探讨一定浓度的川芎嗪对低温保存的犬肾的影响。方法分别以2～4℃加入川芎嗪（终浓度为4mg／L）的新型高渗枸橼酸盐嘌呤溶液（HC-A Ⅱ液，实验组）、HC-A Ⅱ液（HC-AⅡ液组）及UW液（UW液组）灌注肾脏，然后进行组织病理学观察及细胞凋亡测定。将按上述方法保存48、72h的肾脏进行自体移植，术后观察血肌酐浓度、恢复正常的时间以及受者的存活情况。结果体外保存实验中，在保存时间不超过48h时，三个组的组织形态基本相似，但保存72h后，实验组和UW液组肾组织的病理改变明显轻于HC-A Ⅱ液组，细胞凋亡指数也明显低于HC-A Ⅱ液组（P〈0．05），实验组和UW液组的上述指标相比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。经保存的肾脏自体移植后，单纯HC-A Ⅱ液保存72h者有2只犬（2／5）因肾功能衰竭死亡；不论是保存48h还是72h，采用含川芎嗪的HC-AⅡ 液和UW液保存者移植后血肌酐水平明显低于单纯HC-A Ⅱ液保存者（P〈0．05），其肾功能恢复正常的时间也较单纯HC-AⅡ液保存者缩短（P〈0．05）。结论HCA-Ⅱ液中加入一定浓度的川芎嗪能改善肾脏低温灌注保存的效果。     

梗阻性黄疸患者血清中IGF—I的变化与免疫功能

目的 探讨和研究IGF－I对梗阻性黄疸免疫功能的影响。方法 收集20例梗阻性黄疸病人的临床资料，并对患血清的ALT，γ-GT,Endotoxin,IGF－I,SL-2R,T淋巴细胞亚群，免疫球蛋白等进行检验。结果 良性梗阻性黄疸与对照组相比，IGF－I水平显降低（P＜0．01），而SIL－2R则显升高（P＜0．01）；在胆道梗阻解除后，IGF－I显上升，SIL－2R则显下降（P＜0．01）。在良性梗阻性黄疸时，血清中的IGF－I浓度的变化与SIL－2R的浓度变化呈负相关（r=0.723,P=0.028)。结论IGF－I对梗阻性黄疸的免疫功能变化具有一定的作用。     

高压氧对梗阻性高胆红素血症术后多脏器病理影响的实验研究

目的为梗阻性黄疸患者术后的围手术期处理寻求有效的辅助治疗方法。方法作者对梗阻性黄疸两周的兔于手术后采用高压氧辅助治疗。结果解除梗阻后两周,高压氧组与手术组改善程度比较ＣＲＥＡ、ＴＢＩＬ、ＤＢＩＬ、ＴＰ、ＡＬＢ、ＡＬＴ均有差异．其中Ｐ、ＡＬＢ、ＴＢＩＬ,ｔ检验Ｐ＜０．０１,差异有极显著性意义。高压氧组肝脏、肾脏病理恢复强于手术组。结论梗阻性黄疸患兔术后附加高压氧治疗,通过提高血氧张力,改善细胞和组织的新陈代谢,抑制细菌尤其是厌氧菌的生长繁殖,利于各脏器功能及病理尽快恢复,是梗阻性黄疸患者术后围手术期处理积极、有效的辅助治疗措施。     

葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠中的表达及意义

目的研究梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达的改变及意义,探讨梗阻性黄疸影响糖代谢的分子机制。方法 30只健康雄性大鼠随机分为5组:假手术组(A组)、梗阻性黄疸1周组(B组)、梗阻性黄疸2周组(C组)、梗阻性黄疸1周再通1周组(D组)、梗阻性黄疸2周再通1周组(E组)。检测各组动物血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、直接胆红素(DBIL),总胆红素(TBIL)水平;光镜观察肝脏形态学改变;采用RT-PCR方法检测大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA的表达。结果胆道梗阻后,B、C两组血清TBIL、DBIL、ALT水平较A组明显升高,尤其是C组升高的更明显;光镜下可见B组和C组肝细胞肿胀,炎性细胞浸润,汇管区可见胆管增生,C组较B组除以上改变更加严重外,还可见典型的片状肝细胞坏死;B、C两组肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达显著升高。相比,D、E两组血清TBIL、DBIL、ALT水平均分别低于B、C两组,肝脏形态改变也明显趋于正常,肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达亦均低于B、C两组,且D组在血清、肝组织mRNA表达及光镜下肝细胞损伤方面与E组比较均降低。结论梗阻性黄疸模型形成后,大鼠肝脏分泌的胆汁排泄不畅形成淤积。肝脏中G-6-P、PEPCK mRNA表达开始增强且随梗阻时间延长其表达增强趋势更加明显,加强了糖异生的过程,可导致血糖浓度的升高。梗阻解除后,受损肝脏形态及肝功能开始恢复,肝脏G-6-P、PEPCKmRNA表达开始降低,及早解除梗阻,恢复越快。提示肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达升高可能是梗阻性黄疸时糖代谢紊乱的主要原因之一。     

福辛普利对糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA表达的影响

目的 观察福辛普利对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶p22phox 亚基mRNA表达及细胞外基质（ECM）聚积的影响，并探讨其可能机制。 方法 STZ诱导的糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病非治疗组（DM组）和福辛普利治疗组（DM+Fosin组，福辛普利10 mg·kg-1·d-1），疗程12周。RT-PCR法检测肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA的表达；免疫组织化学方法检测肾脏纤连蛋白（FN）表达；白明胶酶谱法检测肾脏基质金属蛋白酶9（MMP-9）的活性；并检测Scr、尿蛋白排泄量和肾质量指数等指标。 结果 实验第4 周，DM+Fosin组大鼠肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA表达较DM组减少45％（P ＜ 0.05）。第8周时，DM+Fosin组的肾小球和肾小管间质FN表达较DM组分别降低52.5％和42.9％（均P ＜ 0.05）；肾脏MMP-9的活性升高29.6％（P ＜ 0.05）。实验第12周时，DM+Fosin组大鼠Scr水平、尿蛋白量（24 h）和肾质量指数较DM组分别降低35.9％、50.2％和17.2％（均P ＜ 0.05）。DM+Fosin组和DM组血糖的差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论 福辛普利可延缓糖尿病肾病的发生和发展，其机制可能与通过抑制NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA的表达有关。     

梗阻性黄疸SD大鼠肝热缺血再灌注损伤模型的建立

目的构建阻塞性黄疸合并肝热缺血再灌注损伤的SD大鼠模型。 方法选择SD大鼠40只随机分为4组：假手术组（Sham组）、梗阻7天组（7 d组）、梗阻14天组（14 d组）及梗阻21天组（21 d组）,每组10只。通过双重结扎并切断胆总管建立SD大鼠阻塞性黄疸模型,探索最佳梗阻时间。梗阻7 d后另择SD大鼠62只,再随机分为4组：未缺血组（0 min组,10只）、缺血15 min组（15 min组,12只）、缺血30 min组（30 min组,16只）、缺血45 min组（45 min组,24只）,分别行肝门部血管阻断0、15、30、45 min后再灌注,建立后续肝热缺血再灌注损伤模型,观察生化指标、生存率及病理学改变。 结果梗阻7 d时适合下一步建模。建立阻塞性黄疸模型后,随着肝门部血管阻断时间的延长,肝功能进行性下降,大鼠死亡率逐渐升高,各组间的差异具有统计学意义（P<0.05）;随阻断时间的延长,肝脏损害的病理学表现更为严重。其中肝门部血管阻断30 min时24 h死亡率50%,再灌注2 h后病理学上出现严重的肝细胞变性、坏死改变。 结论对于梗阻性黄疸的SD大鼠,在梗阻7 d后行肝门部血管阻断30 min再恢复血流,可有效建立梗阻性黄疸大鼠的肝缺血再灌注损伤模型。     

Experimental and clinical studies on renal disturbance in obstructive jaundice

Renal functions and the clinical courses of 14 patients with renal disturbances associated with obstructive jaundice were studied. All patients had high concentrations of serum bilirubin, long durations of jaundice and episodes of shock due to massive hemorrhage or severe inflammation. In an experimental study on jaundiced rats, effects of hypotension or bilateral renal antery occlusion on renal function and renal cortical mitochondrial respiration at 1 week, 3 or 6-weeks after biliary obstruction were investigated. In jaundiced rats, there was no remarkable difference in renal function, but the renal mitochondrial respiration indices decreased with prolongation of the biliary obstruction. In hypotensive rats with prolonged biliary obstruction, the mitochondrial function was impaired, and in the rats with renal artery occlusion, the mitochondrial impairment was more severe. Based on these clinical and experimental data, it is tentatively suggested that patients with prolonged jaundice should be considered in a prodromal state of renal failure and that any minute circulatory failure may induce acute renal failure.     

Inhibition of hepatic DNA synthesis after partial hepatectomy in the rats with obstructive jaundice with special reference to the enhancement of hepatic protein synthesis

We studied the liver regeneration after partial (68%) hepatectomy in rats with obstructive jaundice followed by the relief of obstruction. Rats received bile duct ligation, then 5 or 14 days later choledocho-duodenostomy was performed. Partial hepatectomy was done at various intervals after the relief of obstruction. DNA synthesis of the regenerating liver, hepatic protein synthesis and mitochondrial swelling induced by exogenous phospholipase A2 (PLA2) were determined. Hepatic DNA synthesis was significantly inhibited in obstructive jaundiced rats compared to controls. While the inhibition disappeared 5 days after the relief of obstruction in 5-day-obstructed group, it was still detectable as late as 21 days after the drainage in 14-day-obstructed group. Hepatic protein synthesis was markedly increased by obstructive jaundice, and this increase continued until 10 days after drainage in 14-day-obstructed group. Partial hepatectomy also increased the hepatic protein synthesis significantly in normal rats, but failed to show any significant changes in obstructive jaundiced rats. Any difference could not be found in PLA2-induced hepatic mitochondrial swelling between obstructive jaundiced rats and normal rats. We concluded the preceding energy-requiring responses in obstructive jaundiced liver resulted in the reduction of hepatic DNA synthesis and in the lack of additional increase of hepatic protein synthesis as the responses to a further insult of partial hepatectomy.     

阻塞性黄疸大鼠法尼酯衍生物X受体表达及加味大柴胡汤作用的研究

目的:研究法尼酯衍生物X受体(FXR)对胆汁酸代谢的作用,以及加味大柴胡汤对FXR的表达的影响.方法:制作急性阻塞性黄疸大鼠模型,分为7、14、21 d 3个时段,每个时段又分为胆总管结扎 加味大柴胡汤组、胆总管结扎 TUDCA、胆总管结扎组 生理盐水组、假手术 生理盐水组等4组,每组6只.生化检测ALT、TB、TBA、ALP;免疫组化法检测FXR蛋白表达.结果:胆道梗阻后,随梗阻时间的延长,FXR表达减弱.血清TBA、ALT、ALP、TB含量明显增加.加味大柴胡汤使FXR表达上调,血清TBA、ALT、ALP、TB明显下降,肝脏病变减轻.结论:阻塞性黄疸时FXR表达可调节胆汁酸代谢.加味大柴胡汤可以上调FXR蛋白表达,促进胆汁酸代谢,从而减轻肝脏损害.     

肝切除联合肝动脉切除对梗阻性黄疸大鼠肝细胞再生和凋亡的影响

目的 探索在梗阻性黄疸时,不同范围肝切除联合肝动脉切除对肝细胞再生和凋亡的影响.方法 155只雄性SD大鼠行胆总管结扎制备梗阻性黄疽模型,5 d后二次手术分为:胆肠再通内引流组;肝切除(42%、70%)联合胆肠再通内引流组;肝切除(42%,70%)联合肝固有动脉切除、胆肠再通内引流组.动态观察二次手术后24 h、72 h、7 d肝组织HGF、bcl-2 mRNA含量及蛋白表达、肝细胞增殖和凋亡指数的变化,并统计各组死亡率.结果 高胆红素血症、行胆肠冉通内引流的同时,大鼠肝切除或肝切除联合肝动脉切除后,肝再生均受抑制,凋亡增多;较之肝切除组和42%肝切除联合肝固有动脉切除组.70%肝切除联合肝固有动脉切除组术后肝组织HGF、bcl-2 mRNA含量显著减少,肝细胞再生明显受抑而凋亡显著增多,死亡率显著增高(P<0.05).结论 高胆红素血症时,肝切除量是影响大鼠肝切除联合肝动脉切除实施安全性的重要因素,42%肝切除联合肝固有动脉切除、胆肠再通内引流,对肝细胞再生和凋亡影响较小,安全町行;70%肝切除联合肝动脉切除、胆肠再通内引流后肝细胞再生显著受抑制,凋亡增多,死亡率高,应避免实施.     

阻塞性黄疸大鼠肠黏膜屏障功能变化及力肽的治疗作用

目的探讨阻塞性黄疸大鼠肠黏膜屏障功能变化以及力肽的治疗作用。方法将36只Wistar大鼠随机分成胆管结扎组（BDL）、假性手术组（SL）、胆管结扎＋力肽治疗组（Dipeptiven）3组,分别于术后24h、72h、1周和2周测定血浆内毒素值（Endotoxin,ET）,并于2周后作细菌移位率和肠黏膜组织学检查。结果BDL组厌氧菌移位阳性率（58．33％）及各时间点血浆ET值显著高于SL组（0）和Dipeptiven组（8．33％）（P〈0．01）,Dipeptiven组在各时间点血浆ET值较BDL组显著降低（P〈0．01）。组织学检查显示,BDL组肠黏膜发生了实质性损害。结论阻塞性黄疸时肠黏膜屏障损害可能促进肠道细菌移位,导致感染易感性增高。而力肽可改善受损小肠黏膜结构及减轻肠道细菌移位。