miR-133调控靶基因HCN2在风湿性心脏病心房颤动中的作用机制

目的:通过检测风湿性心脏病﹙风心病﹚心房颤动﹙房颤﹚患者右心耳组织miR-133及靶基因HCN2表达,探讨其和风心病房颤的可能关系。方法:10例风心病患者根据是否存在房颤,分为房颤组和窦性心律﹙窦律﹚组,术前均行心脏彩色多普勒超声与心电图检测,术中取右心耳组织,应用荧光定量PCR技术检测miR-133及靶基因HCN2的表达。结果:房颤组miR-133表达小于窦律组[﹙0.143 600±0.021 767)︰(0.215 800±0.023 510),P0.05];而HCN2基因表达水平房颤组高于窦律组[﹙0.054 20±0.011 45)︰(0.030 40±0.003 29),P0.05]。结论:风心病房颤患者miR-133表达降低,通过上调靶基因HCN2表达,可能参与风心病房颤的发生。     

风湿性瓣膜病心房颤动患者心房肌HCN2基因mRNA及蛋白的表达

目的研究风湿性心脏瓣膜病(简称风心病)心房颤动(简称房颤)患者心房肌超极化激活环化核苷酸门控通道-2(HCN2)基因mRNA及蛋白表达的变化。方法选取风心病二尖瓣狭窄患者38例,根据是否合并房颤将其分为两组,房颤组(n=21),窦性心律组(n=17),术中取右心耳组织,应用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹法分别检测心房肌HCN2基因mRNA及蛋白的表达水平,并分析其与左右房内径的关系。结果与窦性心律组比较,房颤组心房肌HCN2 mRNA表达增加[(0.613±0.179)vs(0.439±0.158),P0.01],其蛋白表达亦增加[(0.431±0.195)vs(0.225±0.121),P0.01],但其表达与左右房内径无相关关系。结论风心病房颤患者心房肌HCN2基因表达上调。     

内皮素-1在心房颤动发生中的机制探讨

目的:探讨内皮素-1(ET-1)在心房颤动(房颤)和心房纤维化中的作用。方法:72例开胸手术患者,分为房颤组(39例)和窦性心律(窦律)组(33例)。实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测两组患者右心耳ET-1、血小板衍生生长因子-B(PDGF-B)、I型胶原(COL1)m RNA和蛋白表达水平。同时,检测ET-1刺激以及非选择性ET-1受体拮抗剂(磺胺异恶唑,Sulfafurazole,SIZ)对H9c2细胞PDGF-B m RNA和蛋白表达水平的影响。结果(:1)房颤组患者右心耳ET-1 mR NA表达水平和蛋白表达水平明显高于窦律组(2.830±2.276 vs 1.220±0.887)和(0.835±0.241 vs 0.286±0.083),P均0.01。房颤组患者右心耳PDGF-B mR NA表达水平和蛋白表达水平明显高于窦律组(2.568±2.348 vs 1.567±0.831)和(0.807±0.241 vs 0.381±0.105),P均0.05。房颤组患者右心耳I型胶原α1亚基(COL1α1)mR NA表达水平(3.376±1.598)明显高于窦律组(1.629±0.833),P0.05;蛋白表达水平(0.652±0.210)亦明显高于窦律组(0.312±0.122),P0.05。(2)两组患者右心耳I型胶原蛋白表达水平与ET-1蛋白表达水平呈明显的正相关(r=0.580,P0.01)。(3)ET-1促进H9c2细胞分泌PDGF-B,并表现出浓度和时间依赖性。SIZ可减轻上述效应。结论 :ET-1在房颤的发生中起着重要作用,其可能通过调控PDGF-B促进心房纤维化而导致房颤的发生。     

慢性心房颤动患者心房肌钙转运调控蛋白和钙激活中性蛋白酶基因转录表达的变化

目的探讨心房颤动(简称房颤)患者心房肌电和结构重构以及心功能下降的分子生物学机制。方法采集风湿性心脏瓣膜病(简称风心病)窦性心律患者12例(窦律组)和房颤患者16例(房颤组)的右心耳组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应方法,测定心房肌钙转运调控蛋白和钙激活中性蛋白酶(calpain1)的mRNA表达水平。结果与窦律组比较,房颤组L-型电压依赖钙通道a1c亚基(LVDCCa1c)、肌浆网Ca2+-ATP酶、兰尼碱受体的mRNA表达水平显著下调(P均<0.01),三磷酸肌醇受体的mRNA表达水平上调(P<0.05);房颤组心房肌cal-pain1的mRNA表达水平上调(P<0.05),且与LVDCCa1c的mRNA表达呈负相关(r=-0.583,P=0.019)。结论房颤患者心房肌钙转运调控蛋白和calpain1转录水平调控失衡可能是心房肌电和结构重构以及心功能下降的分2子生物学机制之一。     

microRNA-155在慢性心房颤动心房3型小电导钙激活钾通道重构中的作用

目的:初步探讨microRNA-155(miR-155)在慢性心房颤动(房颤)中3型小电导钙激活钾通道(SK3)重构中的作用。方法:将67例心脏瓣膜病外科手术患者分为房颤组(31例)和窦律组(36例),利用实时荧光定量PCR分别检测两组患者右心耳miR-155与SK3mRNA表达水平,免疫印迹法检测SK3蛋白表达水平;分别利用miR-155mimic和miR-155inhibitor干预人心肌细胞系(AC16细胞系),观察其对AC16细胞SK3mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:房颤组右心耳miR-155表达水平较窦律组显著上调(1.292±0.261︰0.310±0.161,P0.01)。房颤组右心耳SK3mRNA表达水平与窦律组无显著差异(0.855±0.295︰0.917±0.253,P0.05),但房颤组右心耳SK3蛋白表达水平较窦律组显著下调(0.182±0.043︰0.302±0.064,P0.01)。两组患者右心耳miR-155表达水平与SK3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.735,P0.01)。miR-155 mimic减少AC16细胞SK3蛋白表达,而miR-155inhibitor则增加SK3蛋白表达,但两者均对SK3mRNA的表达无影响。结论:慢性房颤患者右心房miR-155表达上调,可能通过下调SK3表达水平,参与房颤的发生与维持。     

大力水手结构域亚型在人右心耳中的表达及其与心房颤动的关系

目的探讨大力水手结构域(Popdc)各亚型在人心耳中的表达与心房颤动(简称房颤)的相关性。方法本研究以行心脏外科手术病人的右心耳为研究对象,分为窦性心律(简称窦律)组和房颤组,运用免疫组化(IHC)染色、Masson染色、免疫印迹试验(Western blot)和定量聚合酶链反应(qPCR)技术,验证Popdc1、2、3各亚型在人心耳中的表达,同时结合病人的年龄、性别、纽约心功能(NYHA)分级、基础疾病等临床资料,分析Popdc各亚型表达变化与房颤的相关关系。结果与窦律组比较,房颤组女性比例更大、风湿性心脏病占比更大、左房直径更大、左室射血分数更低(P均0.05)。房颤组的Popdc1(IHC 0.06±0.01 vs 0.04±0.01、蛋白1.44±0.51 vs 1.08±0.33、mRNA1.34±0.65 vs 1.07±0.42)、Popdc3(IHC 0.06±0.01 vs 0.05±0.01、蛋白1.75±0.70 vs 1.06±0.11、mRNA 1.23±0.40 vs 1.03±0.26)表达量明显高于窦律组(P均0.05),而Popdc2(IHC 0.06±0.002 vs 0.07±0.02、蛋白1.49±0.55 vs 1.21±0.53、mRNA 1.05±0.49 vs 1.08±0.37)在两组间无明显表达差别(P均0.05)。结论 Popdc1、Popdc3在房颤患者心房中表达显著升高,这可能是房颤发生及维持的一个新的靶点。     

整合素β1在心房颤动心房结构重构中的作用

目的探讨整合素β1在慢性心房颤动(房颤)心房结构重构中的作用。方法选择30例经心外科手术患者的右心耳肌组织,按有无房颤病史分为房颤组(15例)和无房颤组(15例)。Masson染色测定两组心房组织胶原容积分数(CVF);RT-PCR方法检测整合素β1 mRNA的表达;Western blot检测整合素β1蛋白的表达。结果与无房颤组比较,房颤组患者左心房直径增大[(4.96±0.50)mm vs (4.15±1.04)mm.P<0.05];房颤组患者CVF较无房颤组明显升高(42.38±9.79 vs 11.67±3.35,P<0.01);与无房颤组比较,房颤组患者整合素β1 mRNA及蛋白表达上调(0.43±0.03 vs 0.36±0.02,P<0.05;1 724.33±91.07 vs 853.13±30.34,P<0.01)。整合素β1蛋白与左心房直径(r=0.879,P<0.01)、房颤持续时间(r=0.830,P<0.01)及CVF(r=0.770,P<0.05)呈正相关。结论慢性房颤时,整合素β1基因及蛋白表达上调;整合素β1可能参与房颤时心房的结构重构。     

热休克蛋白在风湿性心脏病并发心房颤动患者中的表达

目的比较多种热休克蛋白(HSP)在风湿性心脏病(RHD)并发心房颤动(简称房颤)患者和窦性心律(简称窦律)患者中的表达。方法 73例RHD患者,其中伴慢性房颤患者(A组)38例和不伴房颤患者(B组)35例。测定两组患者血沉、血清超敏C反应蛋白水平。经开胸手术获取右心耳组织标本,进行免疫组织化学染色,测量HSP27、HSP60、HSP70和HSP90的分布密度。结果与B组比较,A组HSP27分布密度均显著降低(255±117μm2/mm2vs 558±133μm2/mm2,P<0.05),而HSP60、HSP70和HSP90的分布密度在两组间无显著差异。在A组,HSP27分布密度与左房直径呈负相关(r=-0.58,P<0.05),与性别、年龄、体重指数、射血分数、血沉和超敏C反应蛋白水平等无关。结论 HSP27的表达水平与RHD并发的房颤相关。     

持续性心房颤动患者IK1电流密度及其基因表达变化的研究

目的比较持续性心房颤动患者(房颤组)和正常窦性心律患者(窦律组)右心耳单个心房肌细胞内向整流钾通道电流(IK1)密度的变化及其亚基Kir2.1 mRNA表达的变化.方法用常规全细胞膜片钳技术记录了8例风湿性心脏病房颤患者和12例窦律患者急性酶分离法分离的右心耳单个心房肌细胞IK1的变化;用半定量一步法RT-PCR技术检测了19例房颤患者和18例窦律患者右心耳组织内向整流钾通道亚基Kir2.1 mRNA的表达.结果房颤组患者右心耳单个心房肌细胞IK1电流密度在电位水平更负时比窦律组明显升高,且电流升高只发生在静息电位水平更负的细胞,平均静息膜电位分别为(-78.95±4.67)mV和(-70.22±11.08)mV,P>0.05;超级化至-100 mV时IK1电流密度分别为(-9.59±2.47)pA/pF(n=15个细胞)和(-5.58±2.52)pA/pF(n=26个细胞),P<.01.Kir2.1 mRNA水平与对照组相比,升高了47.81%,为0.50±0.16与0.34±0.09,P<0.05.结论Kir2.1 mRNA表达升高可能是IK1电流升高的分子基础,IK1电流升高及其基因表达上调是房颤离子重构的机制之一,在房颤电重构中发挥一定的作用.     

风湿性心脏病慢性心房颤动患者右心耳肝细胞生长因子及其受体的表达

目的观察风湿性心脏病慢性心房颤动(简称房颤)患者右心耳肝细胞生长因子(HGF)及受体(c-Met)表达的变化。方法将术中获取右心耳的27例风湿性瓣膜病患者分为2组,其中窦性心律(简称窦律)组8例,慢性房颤组19例,另选先天性心脏病患者8例(均为窦律)作为对照组,以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照基因,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RealtimePCR)技术测定心房组织中HGF、c-MetmRNA的含量,用免疫组织化学方法评价HGF及c-Met的蛋白表达情况。结果与对照组和窦律组比较,慢性房颤组HGF表达显著下降(P<0.01)。而风心窦律组与对照组无差异。c-MetmRNA的表达三组无差异。结论慢性房颤患者心房组织HGF的表达显著降低,而其受体c-Met在房颤患者心房组织中未见明显变化。