糖尿病肾病肾阳虚证DNA消减文库的构建

目的：采用抑制性消减杂交技术(suppression subtractire hybridization，SSH)构建汉族人糖尿病肾病(dialbetic nephropth1y，DN)肾阳虚证DNA消减文库。方法：选择汉族人DN且中医辨证为肾阳虚证的患者以及正常人作为其对照组，进行正向和反向消减杂交。用硅胶法抽提血白细胞DNA，用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段，分别与两种不同的接头连接，进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将PCR产物与U载体连接，经蓝白斑筛选后，再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒，构建DN肾阳虚证DNA消减文库。结果：用SSH方法筛选出了DN肾阳虚证的差异DNA片段，得到600个白色克隆，再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒，从而成功地构建了DN肾阳虚证的DNA消减文库。结论：SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建。DN肾阳虚证DNA消减文库，为进一步筛选和克隆DN肾阳虚证相关基因奠定了基础。     

运用抑制性消减杂交技术构建糖尿病肾阳虚证DNA消减文库

目的:运用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建糖尿病(Diabetic mellitus,DM)肾阳虚证DNA消减文库。方法:选择汉族中医辨证为肾阳虚证的DM患者以及正常人做对照组,进行正向和反向消减杂交。用RsaⅠ酶切用硅胶法抽提基因组DNA成大小不等的片段,分别连接两种不同的接头,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U/A载体连接,经蓝白斑筛选及菌液PCR筛选出阳性重组质粒,构建DM肾阳虚证DNA消减文库。结果:用SSH方法筛选出DM肾阳虚证的差异DNA片段,经克隆及PCR筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DM肾阳虚证的DNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DM肾阳虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆DM肾阳虚证相关基因奠定了基础。     

狼疮性肾炎肾阴虚证cDNA消减文库的构建

目的:采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建汉族人狼疮性肾炎(LupusNephritis LN)肾阴虚证cDNA消减文库。方法:选择汉族人LN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和消减杂交。采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART(Switch Mechanism At 5 end of RNA Template)技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaI酶切基因组cDNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建LN肾阴虚证消减文库。结果:用SSH方法筛选出了LN肾阴虚证的差异cDNA片段,得到了450个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了LN肾阴虚证的cDNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建LN肾阴虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆LN肾阴虚证相关基因奠定了基础。     

糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建

在多年糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)肾虚证的研究中，结果发现血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensin Ⅰ—converting enzyme．ACE)基因多态性与肾阴虚证密切相关。这提示肾阴虚证存在其相关基因。目前克隆疾病的相关基因有多种方法，其中抑制性消减杂交(suppression subtractiv ehybridization。SSH)对研究复杂基因组的差异基因具有一定的优越性。目的：采用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridiration，SSH)构建汉族人糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)肾阴虚证DNA消减文库。方法：选择汉族DN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组，进行正向和反向消减杂交。用硅胶法抽提血白细胞DNA。用Rsa Ⅰ酶切基因组DNA成大小不等的片段，分别与两种不同的接头连接．进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将PCR产物与U载体连接，经蓝白斑筛选后，再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒，构建DN肾阴虚证DNA消减文库。结果：用SSH方法筛选出了DN肾阴虚证的差异DNA片段，得到586个白色克隆，再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒，从而成功地构建了DN肾阴虚证的DNA消减文库。结论：SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DN肾阴虚证DNA消减文库．为进一步筛选和克隆DN肾阴虚证相关基因奠定了基础。     

糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建

在多年糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾虚证的研究中,结果发现血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensin Ⅰ-converting enzyme,ACE)基因多态性与肾阴虚证密切相关[1].这提示肾阴虚证存在其相关基因.目前克隆疾病的相关基因有多种方法,其中抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)对研究复杂基因组的差异基因具有一定的优越性.目的:采用抑制性消减杂交技术(suppression sub-tractive hybridization,SSH)构建汉族人糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾阴虚证DNA消减文库.方法:选择汉族DN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交.用硅胶法抽提血白细胞DNA,用RsaⅠ酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建DN肾阴虚证DNA消减文库.结果:用SSH方法筛选出了DN肾阴虚证的差异DNA片段,得到586个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DN肾阴虚证的DNA消减文库.结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DN肾阴虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆DN肾阴虚证相关基因奠定了基础.     

狼疮性肾炎肾阴虚证DNA消减文库的构建

目的：采用抑制性消减杂交技术(Suppression subtractive hybridization，SSH)构建狼疮性肾炎(lupus nephritis，LN)肾阴虚证DNA消减文库。方法：选择汉族人LN中医辨证为肾阴虚证患者以及正常人作为其对照组，用硅胶法抽提血白细胞DNA，经过酶切、接头连接、两次抑制性消减杂交及抑制、巢式PCIR后，将PCIR产物与A载体连接，经蓝白斑筛选，再用PCIR方法插入片段筛选出阳性重组质粒，构建LN肾阴虚证DNA消减文库。结果：用SSH方法筛选出了LN肾阴虚证的差异DNA片段，得到581个白色克隆，再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒，从而成功地构建了DN肾阳虚证的DNA消减文库。结论：SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建LN肾阴虚证DNA消减文库，为进一步筛选和克隆LN肾阴虚证相关基因奠定了基础，亦为寻找肾虚证相关基因提供重要线索。     

连作地黄cDNA消减文库的构建及分析

目的:通过构建连作地黄cDNA消减文库,探讨地黄连作障碍的分子机制.方法:利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建连作地黄的正反消减文库,通过蓝白斑筛选、PCR的方法鉴定出阳性克隆,并对其进行测序和生物信息学分析.结果:连作地黄cDNA消减文库构建成功,正向和反向消减文库均筛选了300个阳性克隆.测序结果表明:正库、反库分别获得232条、214条特异的EST序列;经NCBI数据库分析,正库、反库中分别有200,195条EST序列的基因具有蛋白功能注释;COG基因功能预测结果表明,正库、反库中分别有60,61条EST序列具有相应的的基因功能分类,涉及21个代谢途径.结论:差异表达基因的功能注释表明,连作对地黄体内的基因表达具有深刻的影响.本研究筛选地黄响应连作的关键基因,为揭示地黄连作障碍的分子机制奠定了基础.     

菌根真菌诱导的铁皮石斛根差减cDNA文库构建

 目的 构建菌根真菌共生诱导的铁皮石斛根的差减cDNA文库,从中筛选出差异表达基因。方法 采用SMARTer PCR cDNA合成方法直接以总RNA为模板合成并富集稀少cDNA,再利用抑制消减杂交（SSH）方法构建受菌根真菌共生诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库。结果 成功构建了受菌根真菌诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库,共获得1 975个阳性克隆。经检测,90%以上克隆能扩增出有效产物,其插入片段大小在150~1 000 bp之间。随机挑取了20个克隆菌液测序并进行了比对分析,大部分为植物应对环境胁迫防御性基因。结论 该技术体系所构建的差减cDNA文库质量较好,操作方便,尤其适用于珍稀濒危的植物材料。     

肾阳虚证论析

从动态发展的角度将肾阳虚体质、肾阳虚证发生及其发展转归的认识有机地结合起来 ,探索其内在规律性 ,为肾阳虚体质的改善、肾阳虚证及其发展转归的防治进行有益的探索 ,在理论和临床实践方面均有着实际意义     

从肾阳虚证的研究谈中医药走向世界

值此改革开放的大好形势,迎接新世纪的到来,我们的责任是在医学上走出具有中国特色、时代特征的新路。这完全符合小平同志提出的建设有中国特色的社会主义理论与一系列的方针政策。 中医从宏观的角度来观察人体的病理生理变化,调整     

肾阳虚证的定位研究

肾阳虚证的定位研究沈自尹中医的藏象（脏象）是“藏居于内，形见于外”，这是生理概念。临床上的病理则以“证”而表现。“证”是一种功能态，它是动态的，可以发展、转化，辨证又因人（医师）而异，灵活性很大，故而难以定量。肾在五脏之中，历来为医学家所推崇，喻为先...     

肾阳虚证基因表达谱的研究进展

肾阳虚证的本质一直是中医的研究重点,基因芯片技术为肾阳虚证的微观整体研究开辟了一个前所未有的领域。肾阳虚证动物模型的基因表达谱研究主要包括肾阳虚证皮质酮大鼠和肾阳虚证"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠的基因表达谱研究。临床肾阳虚证基因表达谱研究包括肾阳虚体质青少年差异表达基因研究、肾阳虚骨关节炎基因表达研究、典型肾阳虚家系基因表达研究、老龄肾阳虚证基因表达谱研究。针对肾阳虚证基因表达谱的研究现状,提出了一些自己的思路和看法。     

大鼠心肾阳虚证动物模型实验研究

目的　心肾阳虚证是中医临床上一种常见的病证 ,本实验研究欲建立与临床相应的大鼠心肾阳虚证动物模型。方法　从对中医心肾阳虚证的模拟入手 ,依据相关中医理论及心肾阳虚证的症状、体征 ,将大鼠甲状腺切除并 ip阿霉素 ,从而造成大鼠心肾阳虚模型。结果　大鼠甲状腺切除并 ip阿霉素后 ,动物左心室功能明显减退且甲状腺功能显著性低下 ,以及伴畏寒、蜷缩、呼吸微弱等 ,出现了非常类似人类心肾阳虚证的主要症状 ,认为该方法可造成大鼠心肾阳虚模型。结论　大鼠甲状腺切除并 ip阿霉素后 ,动物的症状、体征能体现所模拟的心肾阳虚证型 ,可将该方法作为中医心肾阳虚证动物模型的制作方案     

强直性脊柱炎肾阳虚证研究探析

本文主要通过总结近年肾阳虚证的主症、机理及其与神经内分泌的关系以及强直性脊柱炎肾阳虚证主症、治疗及相关的免疫学指标等方面的一系列文章,回顾、分析各项研究的成果,从而为下一阶段的研究提供可参考的资料,并对研究方向提出建议。     

肾阳虚证本质的中西医结合研究

肾阳虚证本质一直是中医研究的重点,近年来,随着老龄化加剧,肾阳虚证的诊治标准成为中西医结合基础研究的热点。通过介绍肾阳虚证的神经内分泌学、细胞分子免疫学、亚细胞学、代谢组学、基因组学、蛋白质组学等相关研究进展。提出应重点将中医学、代谢组学、蛋白质组学、基因组学相结合,从中西医结合角度,整体的、动态的方向进行肾阳虚证本质的研究。     

肾阳虚证症状表现规律的临床研究

系统整理近20年肾阳虚证相关文献,对肾阳虚证的诊断标准进行深入梳理,以期对肾阳虚证的辨证标准提供参考依据.     

肾阴虚证和肾阳虚证血浆蛋白质表达谱的比较研究

目的 本研究通过对肾阴虚证和肾阳虚证共同的血浆蛋白差异表达进行研究,挖掘肾虚证的本质。方法 对肾阴虚证、肾阳虚证和健康正常人进行蛋白芯片表达谱的比较研究。结果 选取典型肾阴虚证5例、肾阳虚证5例、正常健康人6例进行蛋白芯片检测,与正常健康人对比,获得2组间共同表达上调的差异蛋白BMP-5。结论 肾阴虚、肾阳虚证之间存在着共同的差异蛋白,这可能是2者均有肾虚的表现有关,这为探讨肾虚证的发生机制,特别是在蛋白水平的改变提供了依据。     

肝肾阳虚证患者心理健康状况分析

分析肝肾阳虚证患者的心理健康状况。方法：运用心理学量表SAS、SDS、SCL-90对肝肾阳虚证患者进行评估,并与相应的全国常模比较。结果：SAS、SDS总分及SCL-90中的躯体化、强迫、抑郁、焦虑、敌对性、恐怖、偏执、精神病性等8个因子的评分均高于相应的全国常模;有68．4％患者存在抑郁,其中35．5％为中重度抑郁症状;有55．2％患者存在焦虑症状,其中19．7％为中重度焦虑症状。结论：精神／心理症状尤其抑郁症状是肝肾阳虚证的突出临床表现。     

微火针治疗肾阳虚证238例

2009年3月-2010年12月笔者采用微火针治疗肾阳虚证238例,现报道如下.1 一般资料238例均为我院门诊患者,男133例,女105例;年龄20～64岁,平均(48.6±3.7)岁;病程1～20年,平均(7.6±6.4)年.临床主要表现为腰膝酸软,耳鸣头晕,面色胱白,神疲倦怠,喜卧嗜睡,形寒肢冷,尿清便溏;舌淡、苔白润,脉沉迟,尺脉偏弱.2治疗方法取穴:肾俞、足三里.操作方法:患者取俯卧位,充分暴露双侧肾俞穴,穴位皮肤常规消毒.采用长25 mm不锈钢毫针用95％乙醇棉球点燃将针烧红至白亮,刺入穴位20 mm,留针5 min.再嘱患者仰卧位,充分暴露双侧足三里,操作同上.每3日治疗1次,10次为一疗程,1个疗程后评定疗效.