人白细胞介素13cDNA的克隆及序列测定

用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术从中国人外周血淋巴细胞中克隆了ＩＬ－１３ｃＤＮＡ，序列测定表明克隆的ＩＬ－１３ｃＤＮＡ含成熟的ＩＬ－１３蛋白全部编码，且存在编码第９８位Ｇｌｎ的密码子ＣＡＧ，这为进一步表达ＩＬ－１３并深入探究功能奠定了基础。     

藏猪白细胞介素4基因Cdna的克隆及序列分析

目的：克隆藏猪白细胞介素4基因cDNA。方法：从体外ConA刺激70小时的藏猪外周血淋巴细胞中提取总RNA，应用RT-PCR技术扩增，pMD-T载体连接，常规转化后，进行酶切及序列测定进行鉴定。结果：研究表明克隆得到的IL-4基因cDNA与成华猪的IL-4同源性达到99％，与长白杂交猪的同源率为98％。结论：从藏猪外周血淋巴细胞中成功地分离到IL-4基因。     

人白细胞介素15cDNA克隆及其在大肠杆菌中表达

从ＬＰＳ活化的人外周血单核细胞总ＲＮＡ中，用ＲＴＰＣＲ方法扩增出编码成熟人白细胞介素１５（ｈＩＬ１５）的ｃＤＮＡ，并将其克隆于ｐＢｌｕｅＳｋｍ质粒中，序列测定结果与预期一致。再将ｈＩＬ１５ｃＤＮＡ克隆于表达载体ｐＢＶ２２０，构建了高效表达克隆ｐＢＶＩＬ１５。热诱导４ｈ，ｈＩＬ１５蛋白表达即达高峰。表达的重组蛋白经ＳＤＳＰＡＧＥ及凝胶密度扫描分析，分子量约１３ｋＤ，占菌体总蛋白的３３％，经包涵体提取及ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ１００凝胶过滤纯化，重组蛋白纯度达９５％以上，具有显著的促鼠Ｔ淋巴母细胞增殖作用     

人白细胞介素17基因的克隆及序列测定

应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参照国外发表的白细胞介素１７（ｈＩＬ－１７）ｃＤＮＡ全基因序列，利用自行设计合成的１对引物，从ＰＨＡ活化的正常人外周血单个核细胞中，扩增出ｈＩＬ＿１７ｃＤＮＡ基因，并定向插入ＰＵＣ１８载体，构建了ｈＩＬ－１７基因重组体，经ＤＮＡ序列测定，确认为ｈＩＬ－１７基因，这为是一步研究ｈＩＬ－１７的生物学功能提供可靠的物质基础。     

中国人IL—18结构蛋白cDNA的克隆和序列分析

目的克隆人白介素 - 18结合蛋白 (h IL- 18BP)的 c DNA,以研究其结构与功能的关系。方法从中国汉族人的胎盘组织中提取总 RNA,以 RT- PCR方法扩增出全长 5 85个 bp的 IL- 18BP c DNA,将其与表达载体 pc DNA3连接 ,转化大肠杆菌 DH5 α,建立了 h IL- 18BP的 c DNA克隆。结果序列分析表明 ,与国外文献报道的人 IL- 18BP的 c DNA序列完全一致。结论 h IL- 18BP已成功地得到克隆。     

人白细胞介素10（hIL—10）基因的克隆和序列测定

应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，自行设计并合成一对引物，成功地从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因。并定向插入ｐＵＣ１８载体，经ＤＮＡ序列测定最终确定为ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因，这将为今后ｈＩＬ－１０基因探针的制备和基因表达，进一步在基因水平上探讨ｈＩＬ－１０的生物学功能提供了物质基础。     

人白细胞介素18cDNA编码区存在基因变异

目的：为了获得中国人白细胞介素１８ｃＤＮＡ。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ方法从中国人７种组织标本中获取ＩＬ－１８ｃＤＮＡ。结果：７种组织中有６种组织标本ＩＬ－１８ｃＤＮＡ序列与报道序列存在有意义突变。结论：ＩＬ－１８基因在人体多种组织表达,且存在多态性。     

人白细胞介素10（hIL－10）基因的克隆和序列测定

应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，自行设计并合成一对引物，成功地从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因。并定向插入ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列测定最终确定为ｈｌＬ－１０ｃＤＮＡ基困，这将为令后ｈＩＬ－１０基因探针的制备和基因表达，进一步在基因水平上探讨ｈＩＬ－１０的生物学功能提供了物质基础。     

白细胞介素13

IL-13是新近发现的一种新的细胞因子。由Th2细胞产生。人IL-13(hIL-13)的分子量为17kD(糖基化)和12.4kD(非糖基化);鼠IL-13(mIL-13)的分子量为14k ;二者的氨基酸序列同源性为58％。hIL-13和mIL-13的基因定位于人第5号染色体和鼠第11号染色体上,并与IL-4基因紧密连锁,二者的cDNA同源性为66%。重组IL-13(γIL-13)具有多种生物学活性包括刺激前髓样细胞增殖;诱导单核细胞表达MHCⅡ类抗原和CD23,促进B细胞增殖、分化和分泌Ig,抑制炎症因子的产生和HIV-1的复制,抗肿瘤等。对其深入研究将有助于认识IL-13在炎症反应的发生和发展以及调节免疫应答方面的作用,并为其临床应用的可能性提供理论依据。     

人白细胞介素18 cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达

白细胞介素１８（ＩＬ－１８）是１９９５年克隆的一种新型细胞因子，又称ＩＦＮ－γ诱导因子，主要由活化的巨噬细胞产生，其相对分子质量（Ｍｒ）为１８　３００［１、２］。ＩＬ－１８可诱导ＴＨ１细胞产生ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ等细胞因子，增强ＮＫ细胞和ＣＴＬ的活性［１、２］，促进ＩＬ－２介导的Ｔ细胞增殖；增强ＴＨ１等细胞产生ＴＨ１类细胞因子［３、４］；促进免疫细胞表达ＦａｓＬ，增强Ｆａｓ介导的细胞毒作用等多种生物学功能［５］，在抗病原微生物感染﹑抗肿瘤及抗超敏反应等方面具有潜在的应用前景。因此，我们采用Ｒ…     

白细胞介素13

白细胞介素１３是最近发现的由Ｔｈ２细胞产生的细胞因子。其对Ｂ细胞调节作用与白细胞介素４相似，另外它也具有Ｔｈ１细胞的功能，是一种多功能活性的细胞因子。本文对其生物学功能和分子生物学性质作一简单介绍。     

新型人白细胞介素-13在大肠杆菌中的表达及生物活性分析

目的 :在大肠杆菌中表达人白细胞介素 13的新型拼接体蛋白。方法 :用植物凝集素 (PHA)和刀豆凝集素 (ConA)共刺激人Jurkat细胞 ,通过半巢式RT PCR扩增在 98位缺失Gln、不含信号肽的人IL 13新拼接体基因 ,并克隆入 pBV2 2 0 ,构建 pBVIL 13表达载体 ,经温度诱导后在大肠杆菌DH5α中表达新型人IL 13蛋白。表达产物经S 2 0 0纯化、复性后 ,用TF 1细胞进行MTT比色测定其活性。结果 :成功地分离了人IL 13新拼接体基因 ,并在大肠杆菌中表达。分离纯化的新型IL 13蛋白 ,其比活性为 1.6× 10 6U/mg。结论 :获得具有生物学活性的新型人IL 13细胞因子 ,为用其治疗肿瘤和脓毒症提供了新的手段     

白细胞介素13

白细胞介素１３是１９９３年新命名的一种细胞因子。目前一般认为它属于机体免疫应答中的ＴＨ２型因子，ＩＬ－１３的基因和蛋白质分子结构已经探明，它对前骨髓细胞、单核巨噬细胞、Ｂ淋巴细胞、大颗粒淋巴细胞等多种免疫细胞发挥作用。ＩＬ－１３在机体免疫调节中的生理病理作用还有待于深入探讨。     

人肝肿瘤细胞选择性白细胞介素-7剪接变异体cDNA的克隆和序列测定

目的:寻找人肝肿瘤细胞选择性的白细胞介素-7(IL-7)剪接变异体。方法:运用自行设计的IL-7引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,分离正常肝组织、原发肝癌组织、培养肝癌细胞株IL-7mRNA,再对电泳所获条带进行克隆、测序。结果:正常肝组织、原发肝癌组织、培养肝癌细胞株(BEL-7402和SMMC-7721)都能检测到IL-7mRNA,而且从肝癌组织、培养肝癌细胞株分离出1条新带,经亚克隆及测序,证实该条带系人IL-7基因cDNA第4外显子缺乏所致。结论:肝癌组织及培养的肝癌细胞株存在选择性IL-7剪接变异体。该变异体的发现,为肝癌病人的免疫调节紊乱以及肝癌病人的临床免疫治疗提供了新的研究方向。     

中国人MBL cDNA的克隆与序列分析

从中国汉族人胎肝组织提取ＲＮＡ,以ＲＴ－ＰＣＲ方法获得了编码含号顺序的全长甘露聚糖结合凝集素肽链的ｃＤＮＡ片段,将其与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接,转化大肠杆菌ＴＧ１,     

白细胞介素13研究进展

白细胞介素１３研究进展王皓综述孔宪涛审阅上海第二军医大学附属长征医院解放军临床免疫中心上海２００００３１９９３年的ｋｅｙｓｔｏｎｅ细胞因子专论会上命名了一种新的人淋巴因子─—白细胞介素１３（ＩＬ－１３）。它是由Ｔｈ２细胞产生具有调节炎症和免疫应答功能...     

白细胞介素13抑制肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素6表达

目的:探讨白细胞介素13(IL-13)对体外培养的大鼠系膜细胞的增殖及其产生白细胞介素6(IL-6)的影响。方法:用四甲基偶氮唑(MTT)法测定系膜细胞增殖,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附法(ELISA)测定系膜细胞IL-6mRNA表达及其蛋白水平。结果:IL-13在1、10、100μg/L浓度范围呈剂量依赖性地抑制系膜细胞的增殖;5%FCSRPMI1640培养条件下系膜细胞IL-6mRNA表达及IL-6分泌水平较低,脂多糖(LPS)可刺激系膜细胞IL-6mRNA的表达及提高IL-6分泌水平,而IL-13可抑制LPS诱导的系膜细胞IL-6分泌及其mRNA表达。结论:IL-13抑制体外培养的系膜细胞增殖及LPS诱导的系膜细胞IL-6的产生,IL-13可能对于肾小球肾炎的系膜细胞炎症反应具有拮抗作用。     

大鼠白细胞介素10(IL-10)cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的:克隆大鼠白细胞介素10（IL-10）cDNA的全长序列,并使其在大肠杆菌中表达,为其分子生物学利用奠定基础。方法:无菌条件下切取大鼠的脾脏,收获脾细胞,用LPS刺激培养4h;提取细胞的总RNA,用RT-PCR技术克隆IL-10cDNA的全长序列;经测序后将IL-10cDNA插入表达载体 pJW2,转染 DH5α细胞后进行热诱导表达并对表达蛋白进行测定。结果:脾细胞经LPS刺激后IL-10转录水平增加,从提取的RNA易反转录并扩增出期望的PCR产物,测序结果表明得到的IL-10CDNA序列与基因库报告的序列完全一致。将其插入表达载体pJW2后经热诱导顺利表达出蛋白分子量与文献报道一致。Western-blot分析表明表达的条带可与小鼠抗大鼠IL-10抗体特异性结合。结论:大鼠的IL-10cDNA全长序列被成功克隆,克隆序列能够在大肠杆菌中表达。     

突变型人白细胞介素18 cDNA的克隆

目的:获得人白细胞介素18cDNA。方法:从1名健康献血者的外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA,通过PT-PCR扩增出人白介素18(hIL-18)的cDNA,与PUCmT载体连接,构成重组质粒,进行测序及同源性分析。结果:已获得hIL-18的编码序列,且与Ushio等报道的序列相比存在3处有意义突变。结论:克隆了突变型hIL-18cDNA。