竞争PCR及其产物酶联杂交定量检测HBV DNA

目的 研究竞争性PCR及其产物酶联杂交定量检测法价值。方法 竞争性PCR对HBV基因进行扩增，并引入微反应板酶联杂交技术对扩增产物定量分析。结果 检测HBV DNA灵敏度、特异性及定量分析精确度均十分理想。结论 该法值得推广应用。     

聚合酶链反应荧光偏振技术在乙型肝炎病毒DNA检测中的应用及价值

目的　探讨聚合酶链反应荧光偏振技术 (PCR FP)检测乙型肝炎病毒 (HBV)DNA的临床应用价值。方法　将PCR扩增得到的HBVDNA特定片段 ,与荧光素标记探针和PCR产物中的一条DNA链杂交 ,形成特异杂交体 ,用荧光偏振光检测仪检测特异杂交体 ,最终判断HBVDNA是否存在。并对对 10 2份乙型肝炎患者和 30份非乙型肝炎患者血清进行检测结果比较。结果　PCR FP检测HBVDNA的最低检测限为 1× 10 1拷贝 ,在 4 0份乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)、乙型肝炎e抗体 (HBeAg)和抗乙型肝炎核心抗原 (抗HBc)均阳性患者血清标本中检出HBVDNA阳性率为 10 0 % ;33份HBsAg、抗乙型肝炎e抗体 (抗Hbe)和抗HBc均阳性患者血清HBVDNA阳性率为 81 8% ;2 9份HBsAg和抗HBc阳性患者血清HBVDNA阳性率为 72 4 % ;14份乙型肝炎患者和 30份非乙型肝炎患者血清均为阴性。方法的灵敏性和特异性分别为 86 %和 10 0 %。结论　PCR FP操作简单、灵敏、特异 ,适用于临床HBV基因检测。     

乙型肝炎患者3种血清标志物模式HBV DNA含量比较

目的比较乙型肝炎患者3种血清标志物模式HBV DNA含量。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物,同份血清标本采用荧光定量PCR法检测HBV DNA。结果乙型肝炎患者血清学标志物模式均表现出一定的HBV DNA水平,尤以模式(HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性)HBV DNA含量最高,为107.16±1.79,且明显高于模式(HBsAg、抗-HBc阳性)(P0.01)和模式(HBsAg阳性、抗-HBe、抗-HBc阳性)(P0.05)。结论应用定量PCR法检测HBV DNA含量对反映HBV复制情况及其传染性强弱优于HBV血清学检测指标,对乙型肝炎患者决定是否接受治疗以及疗效监控也优于血清学标志物。     

液相杂交技术在聚合酶链反应酶联免疫检测的应用

目的采用液相杂交技术,简化核酸杂交过程,建立乙肝病毒（HBV）的液相杂交的聚合酶链反应-酶联免疫检测（PCR-ELISA）方法。方法将5′端标记生物素的PCR扩增产物与5′端标记地高辛的探针呈液相混合,90℃2min,55℃1min杂交。杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定,经酶标记抗地高辛标记抗体结合、显色。结果液相杂交酶联免疫检测条件优化探针浓度3pmol/次,酶标记抗体稀释度1∶1000。液相杂交时间3min,固相杂交时间120min,但其检测结果无明显差别。检测灵敏度1×10     

HBV DNA PCR检测在HBsAg阴性献血人群中的应用

目的 探讨HBsAg阴性献血者HBV DNA榆测的应用价值,评估核酸检测的必要性.方法 采用PCR检测HBsAg阴性献血者HBV DNA.采用8人份混合血样测定,超离心浓缩病毒,磁珠法提取病毒核酸.如HBV DNA为阳性,则进一步检测乙型肝炎病毒血清标志物5项.结果 HBVDNA检测限量为25 U/ml,23 225份标本中有4份为HBV DNA阳性,检出率为0.17‰.进一步检测其他HBV感染的血清学指标,发现这4份标本中有2份为抗HBe和抗HBc阳性,1份为抗HBc阳性,1份为抗HBs、抗HBc阳性.对HBV DNA的定量测定表明,其含量在50～200 U/ml.结论 现行的2次酶联免疫技术的血液筛查存在HBV漏检,有必要在现有的血液筛查模式中增加抗HBc检测,或增加病毒核酸筛查.     

DNA芯片检测肝组织及血清中乙型肝炎病毒DNA的临床研究

目的：研究DNA芯片检测乙型肝炎和肝硬化患者肝组织及血清中乙型肝炎病毒（HBV）DNA的应用价值。方法：用点样仪将聚合酶链反应（PCR）扩增的HBV DNA探针制成基因芯片。对15例慢性乙型肝炎病人的血清和肝活检组织，99例乙型肝炎后肝硬化肝组织，分别用基因芯片、原位分子杂交、免疫组织化学和雅培试剂检测HBV DNA、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎表面抗原（HBsAg)和乙型肝炎e抗原（HBeAg)。结果：用基因芯片对15份HBsAg,HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清进行检测，HBV DNA均阳性，阳性率符合率为100％；15份肝活检组织标本，免疫组化法检测HBcAg阳性15例，原位分子杂交法和基因芯片检测HBV DNA均阳性14例，阳性率93％。99份肝炎后肝硬化患者肝组织标本，HBcAg阳性67份，HBV DNA阳性53份，基因芯片检测HBV DNA阳性46份，阳性率分别为69％、88％。32例HBcAg、HBV DNA阳性的肝组织中，基因芯片检测HBV DNA均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可检测肝组织及血清中HBV DNA，诊断准确率高，假阳性率低。     

荧光素和地高辛标记探针在聚合酶链反应-微孔板杂交检测TTV DNA中应用比较

目前聚合酶链反应 ( PCR)扩增产物常规检测采用琼脂糖凝胶电泳法 ,其敏感度、特异性均不能满足临床要求。对PCR产物进行限制性内切酶酶切片段长度多态性 ( PCR-RFLP)分析、变性梯度凝胶电泳 ( PCR-DGGE或 PCR-SS-CP)及 PCR产物直接测序 ,虽可特异性检测 PCR产物 ,但因操作繁杂 ,且需特殊试剂和仪器 ,无法在临床普遍开展。利用特异性探针与扩增产物杂交 ,引用微孔板杂交酶呈色技术 ,由于其特异性和敏感度高而被应用于临床。我们采用荧光素和地高辛分别标记探针 ,建立荧光素 -抗荧光素、地高辛 -抗地高辛酶偶联系统微孔板杂交酶…     

乙型肝炎血清标志物与HBV DNA含量的相关性分析

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测结果与血清标志物检测结果的相关性.方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)法同步检测125份血清标本HBV DNA含量和HBV标志物.结果 125份血清标本中,47例HBsAg( )、HBeAg( )、抗-HBc( )患者血清HBV DNA检测阳性率为95.7%;35例HBsAg( )、抗-HBe( )、抗-HBc( )患者血清中HBV DNA检测阳性率为65.7%,血清HBeAg阳性组HBV DNA检测含量明显高于HBeAg阴性组.结论 结论 FQ-PCR法检测HBV DNA具有良好的特异性和灵敏度,为临床了解病毒的复制情况,选择制定治疗方案的和疗效观察提供了有力的依据.     

DNA扩增法用于HBV DNA检测和直接测序

应用引物P_1,P_2和P_3扩增HBV DNA HBs 基因起始的301-559和447-559片段的核苷酸,反应产物与Alu I 消化的PBR 322分子量标记并排电泳,电泳后凝胶经EB 染色,在紫外灯下观察结果。Southern blot 杂交确定扩增产物中同源序列的存在。应用引物P_1和P_3对克隆的(亚型adz 或adw)及血清中提取的DNA 进行聚合酶链式反应(PCR),反应产物经微量离心后按Sanger 等改良法直接测定DNA 序列。结果:PCR 法在23名乙肝表面抗原(HBsAg)阳性慢肝者中的8名乙肝E 抗原(HBeAg)阳性者、2名HBeAg/抗HBe 阴性者均检出HBV DNA(100%),13名抗HBe 阳性者检出12名(92%)。而用点杂交法分别检出7名(88%),1名(50%)和3名     

乙型肝炎核心抗体阳性与DNA之间的关系

目的探讨单纯乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)阳性的乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒(HBV)标志物与HBV DNA的关系及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标志物,并对376份单纯抗HBc阳性的标本采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA。结果单纯抗-HBc阳性的乙型肝炎患者体内的HBV DNA的阳性率为5.58%。结论对于单纯-HBC阳性的乙型肝炎患者,应定期检测体内的HBV DNA,以便及时诊断和治疗。     

PCR-微板杂交-ELISA检测结核杆菌DNA

[目的]探讨PCR-微板杂交-ELISA方法检测结核杆菌DNA的临床价值。[方法]选择PCR扩增区域内的保守序列设计捕获探针和显色探针,分别用于DNA杂交和ELISA分析,建立PCR-微板杂交-ELISA方法并运用该方法对328份结核病人痰标本进行了检测。[结果]328份结核病人痰标本中有196例结核杆菌DNA阳性,阳性率为59．7％。检出率明显高于痰培养和痰涂片抗酸染色。[结论]PCR-DNA微板杂交-ELISA方法综合运用了PCR、DNA杂交和-ELISA技术,大大增加了DNA检测的特异性和灵敏度,在临床上具有良好的应用前景。     

上海地区献血人群隐匿性HBV感染状况

目的 了解HBsAg阴性、抗-HBc阳性的献血人群中HBV DNA感染情况.方法采用酶联免疫法(ELISA)检测5 121份HBsAg阴性的合格献血者血清抗-HBc和抗-HBc阳性反应滴度;对抗-HBc阳性样本采用ELISA法检测血清抗-HBs,采用巢式PCR三区段扩增法检测HBV DNA.结果HBsAg阴性的献血人群...     

乙型肝炎病毒聚合酶链反应液相杂交酶免疫检测的定性判断值研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)聚合酶链反应(PCR)液相杂交酶免疫检测的定性判断值设立和灰区范围的计算方法.方法以HBV为目的靶DNA,引物P15'端标记Bio,PCR扩增35个循环.扩增产物与5'端标记Dig的探针混合进行液相杂交,杂交后产物被SA酶标板固定,经酶标记抗Dig抗体结合、显色.结果实验结果显示,本试剂的检测敏感度在3×104拷贝/ml.3种参比品A450值的95%、99%分布范围之间不存在交叉区,其中临界阳性参比品95%分布范围下限值(A450)为0.182.585例献血员血清标本的A450均值为0.037,P99上限值为0.123,灰区范围在0.123～0.182.本试剂对"HBsAg+/HBeAg+/抗-HBc+”标本的阳性检出率为98.8%,"HBsAg+/抗-HBe+/抗-HBc+”标本的检出率为54.8%,阴性标本的检测有较高的特异性.结论本试剂设立的定性判断值(灰区计算方法)具有很高的正确性、可操作性和临床实用性.     

PCR/ABC-ELISA固相法检测痰中结核菌DNA的初步研究

聚合酶链反应(PCR)是一种敏感性高特异性强的分子生物学诊断手段,已广泛用于结核病病原学快速诊断。传统的PCR产物鉴定繁琐。本文对8例传统PCR-TB-DNA检测阳性的痰标本采用生物素-抗生物素蛋白固相化PCR产物,然后用酶联免疫显色检测PCR产物,以进一步探讨简化PCR技术的新方法。 1 材料和方法 1.1 材料 8份PCR扩增阳性的肺结核病人晨痰。对照组为8份健康成人晨痰。     

HBV免疫标志物及DNA检测结果分析

目的通过了解HBV免疫标志物(HBVM)与HBV DNA的相互关系,为临床诊断和治疗乙肝提供可靠的依据。方法收集1156例受检者临床血清标本,同时采用酶联免疫吸附试验检测HBVM和荧光定量PCR检测HBV DNA,比较HBVM不同血清模式HBV DNA检出率及其含量,分析HBVM与HBV DNA之间的关系。结果血清HBV DNA阳性检出率及其量与HBVM有关,HBsAg、HBeAg抗HBc阳性血清模式组与其它各组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论HBeAg与HBV DNA含量明显相关;HBeAg阴性不能代表病毒复制停止。     

实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA的比较

目的研究实时荧光聚合酶链反应(PCR)与COBAS Amplicor PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测血清标本中乙型肝炎病毒(HBV)DNA水平的相关性。方法采用实时荧光定量PCR与COBAS AmplicorPCR-ELISA平行检测110例HBV携带者和40名健康体检者的血清标本,比较2种方法检测结果的相关性和差异程度。结果实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA相关性较好,相关系数为0.944,对高浓度标本检测结果的差异性更小。结论我们采用的实时荧光PCR检测血清标本HBV DNA与COBAS Amplicor PCR-ELISA具有较好的相关性,可以为临床提供可靠的结果。     

乙型肝炎病毒聚合酶链反应液相杂交酶免疫检测的定性判断值研究

目的探讨乙型肝炎病毒 (HBV)聚合酶链反应 (PCR)液相杂交酶免疫检测的定性判断值设立和灰区范围的计算方法。方法以 HBV为目的靶 DNA,引物 P1 5’端标记 Bio,PCR扩增 35个循环。扩增产物与 5’端标记Dig的探针混合进行液相杂交 ,杂交后产物被 SA酶标板固定 ,经酶标记抗 Dig抗体结合、显色。结果实验结果显示 ,本试剂的检测敏感度在 3× 10 4拷贝 /m l。 3种参比品 A450 值的 95 %、99%分布范围之间不存在交叉区 ,其中临界阳性参比品 95 %分布范围下限值 (A450 )为 0 .182。 5 85例献血员血清标本的 A450 均值为 0 .0 37,P99上限值为 0 .12 3,灰区范围在 0 .12 3～ 0 .182。本试剂对“HBs Ag /HBe Ag /抗 - HBc ”标本的阳性检出率为 98.8% ,“HBs Ag /抗 - HBe /抗 - HBc ”标本的检出率为 5 4.8% ,阴性标本的检测有较高的特异性。结论本试剂设立的定性判断值(灰区计算方法 )具有很高的正确性、可操作性和临床实用性     

美国核心抗体(抗-HBc)筛查阳性供血者中HBV DNA的检出率:输血感染和供血者筛选的意义

要作核心抗体筛查的供血者,尤其是随之而来的HBV核酸检测很重要。设计与方法 从库存标本中找出HBsAg EIA反应、抗-HBc反应(Corzyme,Abbott实验室)标本进行抗-HBe和抗-HBs复检。PRISM核心抗体反应和抗-HBs阴性或每升低于100IU的反应的标本进一步抽样进行HBV DNA检测,采用每ml少于50个拷贝能检出95％以上的PCR法。结果1,231份标本中共有395份符合血清学标准并进行了PCR试验,4份抗-HBs阴性标本PCR检测阳性,其中计算两份标本的HBV     

高灵敏度等温扩增法可视化检测血液中的病毒核酸

目的探讨便携式、可灵敏、快速检测血液标本中病毒核酸的方法。方法以HBV病毒为例,针对其基因组保守序列设计特异性引物,采用环介导等温扩增法(LAMP)对待测HBV标本做核酸目标序列扩增,以高灵敏双链DNA嵌合荧光染料为指示剂,根据荧光信号指示扩增反应产物的有无;将本法与实时荧光PCR法对临床标本做HBV检测的对照分析。结果建立了血液病毒核酸的可视化检测方法,研制出扩增检测一体化仪器;灵敏度达到可在<1 h完成10 cp/管的HBV核酸扩增反应和产物检测。62例实时荧光PCR检测为HBV阳性的临床标本,本法亦都检测为阳性;而从42例实时荧光PCR检测为HBV阴性的临床标本中,本法检出了6例HBV阳性。结论所建立的方法和装置可实现高灵敏度单管快速检测血液病毒核酸,为特殊现场环境中的血液安全性筛查提供了新的手段。     

基因芯片检测输血传播病毒方法的实验研究

目的建立基因芯片快速检测经输血传播病毒核酸的方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。方法通过PCR获得TTV病毒ORF1基因的DNA片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片。与TTV病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒及戊型肝炎等病毒的PCR产物进行杂交,以检测探针的特异性。结果该基因芯片探针仅与TTV毒株的PCR产物杂交呈阳性,与对照病毒的PCR产物杂交呈阴性。敏感性试验显示,用该方法检测了27份疑似TTV临床病料,22份阳性;而用PCR法扩增TTV ORF1基因确诊为阳性的只有19份。结论利用基因芯片检测TTV的PCR产物,特异性和敏感性强,可作为TTV临床标本检测方法。