骨形态发生蛋白-2基因转染对舌癌细胞增殖活性的影响

目的 探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)基因转染舌癌Tca8113细胞后,对Tca8113细胞形态和增殖活性的影响.方法 分别以感染复数(MOI)为0、50、100的腺病毒为载体的BMP-2基因转染体外培养的舌癌Tca8113细胞.采用荧光倒置显微镜观察转染前后Tca8113细胞形态的变化,Weste...     

转染BMP-II型突变受体基因对Tca8113舌癌细胞增殖的影响

目的：明确转染BMP-Ⅱ型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用，以进一步探讨BMPs对口腔上皮恶变的作用机制。方法：用FuGENll6(Transfection Reagent Kit)真核转染试剂盒将携带BMP-Ⅱ型突变受体cDNA的真核表达载体转染Tca8113细胞(命名为Tca8113ZR细胞)；然后对Tca8113ZR和Tca8113细胞分别进行生长曲线、MTT检测，FCM分析，BrdU标记检测细胞的增殖活性及DNA合成；以观察转染前后舌癌细胞生物学性状的变化。结果：Tca8113ZR细胞和Tca8113细胞相比，形态未见明显变化，但是细胞的增殖活力明显下降。结论：BMPs信号表达水平的改变在口腔上皮组织的恶变过程中起着十分重要的调控作用。     

PTEN下调FAK磷酸化抑制人舌癌细胞增殖与迁移

目的:观察肿瘤抑制基因PTEN对体外培养的人舌癌细胞系Tca 8113增殖、迁移的影响,并探讨其对细胞中黏着斑激酶(FAK)磷酸化水平的影响.方法:体外培养Tca 8113细胞,以腺病毒为载体将野生型PTEN基因瞬时转染细胞;采用MTT法检测细胞增殖;改良的Boyden双腔系统检测细胞迁移;Western blot方法检测细胞PTEN、FAK及p-FAK的表达变化.结果:PTEN高表达可呈时间依赖性地抑制Tca 8113细胞的增殖、迁移,并可下调FAK 397位点磷酸化水平.结论:PTEN可能通过下调FAK 397位点磷酸化水平抑制Tca 8113细胞的增殖、迁移.     

腺病毒介导nm23-H1基因在Tca8113细胞中表达的实验研究

目的:利用人nm23-H1基因重组腺病毒转染Tca8113细胞,检测nm23-H1基因在Tca8113细胞中的表达。方法:制备人nm23-H1基因重组腺病毒并转染人舌癌Tca8113细胞系,采用Western blotting、免疫荧光法、免疫组化法和流式细胞术检测nm23-H1基因的表达。结果:Western blotting、免疫荧光法、免疫组化法和流式细胞术均检测到nm23-H1在Tca8113细胞中的表达,表达产物主要存在于细胞质中。结论:重组腺病毒载体Ad-nm23-H1成功介导了Tca8113细胞内nm23-H1基因的表达,为肿瘤的基因治疗提供了依据。     

RNA干扰FAT10基因对舌癌细胞系Tca8113增殖和侵袭的影响

目的:应用RNA干扰技术抑制人舌癌细胞株Tca8113中FAT10基因的表达,探讨FAT10基因表达下调对舌癌细胞生物学行为的影响。方法:构建针对FAT10基因特异性siRNA真核表达载体pU-FAT10-siRNA,将其转染至舌癌细胞株Tca8113,采用RT-PCR、Western印迹等方法检测转染后的Tca8113细胞中FAT10的表达。通过流式细胞仪分析siRNA对舌癌细胞周期的影响,并通过细胞侵袭能力实验观察siRNA对Tca8113细胞恶性生物学行为的影响。结果:siRNA干扰Tca8113细胞后,FAT10的表达无论是在mRNA水平还是在蛋白质水平均显著下降(P<0.05),细胞周期被阻滞在G1期,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降。结论:通过RNAi技术阻断FAT10的表达,可抑制Tca8113细胞的生长、增殖、迁徙,提示FAT10基因在舌癌的发生发展过程中起重要作用。     

靶向siRNA干扰hTERT联合顺铂抑制Tca8113增殖的实验研究

目的：应用hTERT特异性siRNA干扰舌癌Tca8113细胞hTERT基因的表达,探讨hTERT-siRNA联合顺铂对舌癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外化学合成针对hTERT的siRNA,通过阳离子脂质体将siRNA-hTERT1转染舌癌Tca8113细胞,RT-PCR检测hTERTmRNA表达水平,Western印迹检测其蛋白表达水平,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）及流式细胞分析法分别测定hTERT-siRNA联合顺铂处理后对舌癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响。数据采用SPSS13.0进行方差分析。结果：靶向hTERT的siRNA可以有效抑制舌癌Tca8113细胞株hTERT的表达,hTERT-siRNA和顺铂均可抑制Tca8113细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡。当联合应用靶向hTERT的siRNA和顺铂时,上述作用显著加强（P〈0.05）。结论：体外化学合成的hTERTsiRNA可以有效抑制舌癌Tca8113细胞hTERT的表达,hTERT表达受抑制后,可增强顺铂作用舌癌Tca8113细胞的敏感性。     

EGFR 抑制剂对舌鳞癌多药耐药细胞 Tca8113／CBP耐药蛋白的影响

目的：探讨表皮生长因子受体（ EGFR）抑制剂在舌鳞癌多药耐药中的作用。方法：免疫细胞化学技术和Western blot方法检测舌癌细胞系Tca8113及多药耐药细胞系Tca8113／CBP EGFR的表达,Western blot检测EGFR受到抑制后舌癌多药耐药细胞Tca8113／CBP耐药蛋白MRP,GTS-π的表达。结果：细胞系Tca8113和Tca8113／CBP均有EGFR的表达（P＞0．05）,EGFR受到抑制后细胞Tca8113／CBP的多药耐药蛋白MRP,GST-π的表达均下降（P＜0．05）。结论：抑制EGFR可下调舌癌多药耐药细胞耐药蛋白的表达。     

诱导型一氧化氮合酶基因转染对人舌癌细胞体内致瘤力的影响

目的研究外源性基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)转染人舌癌细胞系Tca8113后,对肿瘤细胞生物学特性以及裸鼠体内致瘤力的影响。方法采用脂质体转染法将真核表达载体pCMV-iNOS/Tca转染入舌癌细胞系Tca8113,得到高表达iNOS的细胞系pCMV-iNOS/Tca,转染空白质粒的细胞系pCMV-Tca,并以Western blot方法鉴定转染效果。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色绘制生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期分布;通过裸鼠成瘤实验,比较转染前后体内成瘤能力的差别。结果与未转染组和转染空白载体组比较,pCMV-iNOS/Tca组的细胞生长速度比Tca组快(P>0.05),细胞周期中G2/M和S期比例增加(P<0.05)。体内成瘤能力试验结果显示,pCMV-Tca、pCMV-iNOS/Tca组和Tca组平均瘤重分别为(1.1±0.24)g、(2.5±0.48)g和(1.3±0.32)g,pCMV-iNOS/Tca组的成瘤力高于pCMV-Tca和Tca组(P<0.01)。结论转染iNOS基因后,Tca8113细胞具有更强的体外增殖能力和体内致瘤能力。     

SIP1在人舌癌Tca8113细胞中的定位和融合蛋白表达鉴定的研究

目的检测Smad相互作用蛋白1(SIP1)在人舌癌Tca8113细胞系中的定位及融合蛋白的表达鉴定。方法 PCR扩增SIP1编码序列的全长,克隆到pCMV-Flag-MAT-Tag 1载体。利用共聚焦激光扫描显微镜观察SIP1和SIP1-Flag在人舌癌Tca8113细胞系中定位,并将构建好的Flag标签SIP1(SIP1-Flag)真核表达载体转染到人舌癌Tca8113细胞系中,提取蛋白进行Western blot检测,利用Flag标签抗体进行免疫沉淀纯化SIP1-Flag融合蛋白。结果构建了SIP1-Flag真核表达载体。SIP1和SIP1-Flag融合蛋白主要定位于人舌癌Tca8113的细胞核中,Western blot检测到SIP1-Flag融合蛋白表达,且在人舌癌Tca8113细胞中成功纯化SIP1-Flag蛋白。结论成功构建真核表达载体。SIP1和SIP1-Flag主要定位于细胞核,成功鉴定融合蛋白表达并纯化SIP1-Flag融合蛋白。     

舌癌患者自体 CIK 细胞的实验研究

目的:研究舌癌患者自体 CIK 细胞的体外增殖能力、细胞表型变化、及对舌鳞癌细胞株 Tca8113 的细胞毒作用,寻求对舌癌过继免疫治疗的新途径.方法:提取 20 例舌癌患者外周血单核细胞用 IFN-γ、抗 CD3mAb、IL-2 和IL-1β共同培养诱导 CIK 细胞,流式细胞仪检测细胞表型特征,用 MTT 法检测细胞对 Tca8113 的杀伤活性;同时培养LAK细胞和 CIK 细胞在增殖和杀瘤活性上作比较.结果:舌癌患者 CIK 细胞较培养前明显增高,于 14-21 d达高峰.比较培养前后 CIK 细胞的表型可发现 CD3 、CD3 、CD5 、CD3 、CD8 、CD2 在培养后均有明显提高 (P<0.05).CIK 细胞与LAK相比增殖倍数和对 Tca8113 的杀伤活性均明显提高(p<0.05).结论:舌癌患者 CIK 细胞体外增殖倍数和杀瘤活性明显优于 LAK 细胞,有望作为临床过继免疫治疗舌癌的一种新方法.     

RNA干扰TEAD基因对舌癌细胞系Tca8113增殖和侵袭的影响

目的：应用RNA干扰技术抑制人舌癌细胞株Tca8113中内源TEAD基因的水平,观察TEAD基因对舌癌细胞生物学行为的影响。方法：构建针对TEAD基因特异性siRNA真核表达载体,将其转染至Tea8113,采用RT—PCR法检测转染后的Tca8113细胞中TEAD基因的表达。采用CCK8技术检测细胞的增殖情况,采用Transwell法检测细胞的迁移情况。实验数据采用SPSSl3．0软件包进行单因素方差分析。结果：siRNA干扰Tea8113细胞后,TEAD基因的表达水平显著下降（P〈0．05）,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降。结论：通过RNA干扰技术阻断TEAD的表达,可抑制,rca8113细胞的生长、增殖、迁移,提示TEAD基因在舌癌的发生、发展过程中起着重要作用。     

过表达外源性Notch1对舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体表达的影响

目的研究过表达外源性Notch1对人舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法用脂质体将编码Notch1胞内域的表达质粒体外转染人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞,用甲基噻唑基四唑法（MTT）和流式细胞仪分别检测细胞增殖活性和凋亡情况,用逆转录聚合酶链式反应和Western blot检测Notch1和EGFR的mRNA和蛋白的变化,用免疫细胞化学检测EGFR蛋白的表达。结果转染后Tca8113细胞的增殖活性降低（Р<0.05）,细胞凋亡率增高（Р<0.05）,Notch1表达上调（Р<0.05）,而EGFR表达下调（Р<0.05）。结论体外过表达外源性Notch1抑制人舌鳞癌细胞增殖,诱导其凋亡,并下调其表皮生长因子受体的表达。     

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。     

TRPM8在舌癌组织及Tca8113中的表达及其意义

目的 观察瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin type 8,TRPM8)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其在肿瘤生成与发展中的意义.方法 应用免疫组织/细胞化学方法检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞株、舌乳头状瘤组织和正常舌体组织中的表达;应用Western blot检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞及正常舌体组织中的表达.结果 免疫组织化学显示:TRPM8在舌癌组织中100%(22/22)呈强阳性表达;而在舌乳头状瘤组织中18%(2/11)呈强阳性表达,45%(5/11)呈弱阳性表达,余为阴性表达;正常舌体组织中10%(1/10)呈弱阳性表达,余为阴性表达.TRPM8在舌癌、舌乳头状瘤及正常舌体组织中的表达有统计学差异(P＜0.05).免疫细胞化学显示:TRPM8在舌癌细胞Tca8113中呈阳性表达.Western blot结果显示舌癌细胞及组织中TRPM8表达水平明显高于正常舌体组织.结论 TRPM8在舌癌中的高表达提示肿瘤的发生发展可能受到离子通道蛋白的调节.     

VEGF-ASODN转染对舌癌Tca8113细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)转染舌癌Tca8113细胞对其VEGF表达和生长的抑制作用.方法:人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染舌癌Tca8113细胞,24h后,应用原位杂交及免疫细胞化学法检测细胞VEGF mRNA及蛋白表达,ELISA法检测培养液上清中VEGF蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响.结果与对照组比较,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析.结果:VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA及蛋白水平,降低培养液中VEGF蛋白含量,增加细胞凋亡,抑制细胞活性及生长(P<0.05).结论:VEGF-ASODN转染舌鳞癌Tca8113细胞,能显著抑制VEGF mRNA及蛋白表达,增加细胞凋亡,抑制细胞生长.     

Fas基因转染对舌鳞癌细胞系Tca8113凋亡的影响

目的探讨外源性Fas基因介导舌鳞癌细胞凋亡的可行性及其可能的分子机制。方法脂质体法将重组人Fas真核表达载体转染人舌鳞癌细胞系Tca8113，抗Fas单克隆抗体诱导其凋亡，Western blotting检测转染前后Tca8113细胞Fas蛋白表达水平，TUNEL法检测转染前后细胞凋亡水平。结果转染后Tca8113细胞Fas蛋白表达上调；抗Fas单克隆抗体可诱导Tca8113细胞凋亡，凋亡指数升高。结论上调Fas基因表达及应用抗Fas单克隆抗体可诱导肿瘤细胞凋亡，有可能作为肿瘤基因治疗的新途径。     

VEGF靶向RNA干扰质粒构建及其对人舌鳞癌Tca8113细胞的影响

目的：用RNA干扰技术阻断人舌鳞癌系Tca8113细胞中VEGF基因的表达,观察细胞增殖及凋亡特征。方法：检测人舌鳞癌系Tca8113细胞中血管内皮生长因子VEGF表达水平;采用真核转录质粒pRNA-U6.1/Neo构建针对VEGF基因的重组转染质粒。将4种不同序列的VEGF-shRNAV1、VEGF-shRNAV2、VEGF-shRNAV3、VEGF-shRNAV4质粒以及含与VEGF无关序列的VEGF-shRNAVc和空白质粒VEGF-shRNAU6分别转染Tca8113细胞,48h后检测其VEGF表达水平,筛选稳定转染RNAi-VEGF的细胞;CCK8检测其增殖能力;流式细胞仪检测其细胞周期;Anexin-V-PI检测其凋亡特征。结果：RT-PCR和Western blot检测：Tca8113细胞阳性表达VEGF;用Lipofectamine 2000成功将不同VEGF片段的质粒转染入Tca8113细胞;RT-PCR发现,VEGF-shR-NAV2组细胞VEGF表达被显著抑制,用400ng/mLG418压力筛选获得VEGF稳定被抑制的细胞系;CCK8检测各组Tca8113细胞增殖见VEGF-shRNAV2组增殖能力小于VEGF-shRNAVc组和VEGF-shRNAU6组;转染VEGF-shRNAV2的Tca8113细胞G0-G1期细胞较VEGF-shRNAVc组和VEGF-shRNAU6组高,且细胞凋亡多。结论：用RNA靶向干扰能明显降低人舌鳞癌Tca8113细胞内VEGF的表达并抑制肿瘤细胞增殖及促进凋亡。     

rhBMP-2对舌癌细胞Tca8113增殖能力影响的研究

目的 :探讨人重组骨形成蛋白 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein 2 ,rhBMP 2 )对舌癌细胞Tca8113增殖能力的影响 ,以深入了解口腔舌癌的恶变机制。方法 :用含 10 0ml/L胎牛血清的RMPI 164 0培养基 ,加入 5 0 μg/L的rhBMP 2培养舌癌细胞Tca8113 ,通过细胞生长曲线、MTT检测、流式细胞仪分析观察细胞的生长状态 ,免疫组化检测细胞周期蛋白依赖性激酶 4(cyclin dependent kinases 4,CDK 4)的表达来观察细胞的周期变化。 结果 :5 0 μg/L的rhBMP 2能显著增进Tca8113细胞的增殖 ,免疫组化结果显示周期蛋白CDK 4的表达增强。结论 :5 0 μg/L的rhBMP 2能显著促进Tca8113细胞的增殖 ,并上调细胞周期蛋白的表达 ,说明BMP 2可能在舌癌的发生发展过程中起着重要作用。     

Tca8113舌癌细胞转染骨形成蛋白-Ⅱ型突变受体前后细胞周期相关因子表达的定量分析

目的明确转染骨形成蛋白(BMP)-Ⅱ型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用,以进一步探讨BMPs对口腔上皮恶变的作用机制。方法检测转染BMP-Ⅱ型突变受体的Tca8113舌癌细胞(Tca8113ZR细胞)和Tca8113细胞的细胞周期相关因子Cyclind1、CDK-4、p27和p57的表达。结果转染了BMP-Ⅱ型突变受体后,肿瘤细胞的增殖能力显著减弱。结论BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用,BMPs信号的改变可能导致细胞恶性程度的改变。     

5-氟尿嘧啶对人舌癌细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响

目的 :研究 5 -氟尿嘧啶对人舌癌Tca8113细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响 ,进一步探讨它的抗癌机理。方法 :应用MTT法、双层琼脂培养法、倒置显微镜观察、HE染色观察、透射电镜观察研究细胞用药前后的生长增殖活性和大体及超微结构变化 ,用免疫组化法、TRAP -PCR -ELISA法研究细胞用药前后部分癌基因表达及端粒酶活性的变化。结果 :5 -氟尿嘧啶对人舌癌Tca8113细胞有明显的抑制作用且呈浓度依赖性 ,对细胞大体形态和超微结构有明显的改变 ,下调c -myc、bac - 2的表达 ,抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性 (用 876ng/ml5 -氟尿嘧啶处理舌癌细胞后 12h、2 4h、4 8h、72h、96h端粒酶活性分别为 0 .76± 0 .0 3、0 .4 5± 0 .0 6、0 .32± 0 .0 5、0 .14± 0 .0 2 ,阴性 )。结论 :5 -氟尿嘧啶可以明显抑制Tca8113细胞的增殖活性及其转移复发倾向 ,还可以作用于线粒体 ,在下调c -myc、bac - 2表达的同时抑制端粒酶活性