黄酮醇类化合物对心肌细胞凋亡过程caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达影响

 目的研究槲皮素、杨梅素、桑色素和芦丁对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞凋亡模型;随机分组:正常组,损伤组和用药组。用药组分别加入30μmol·L^-1的4种黄酮醇类化合物,孵育1h后,除正常组之外,加入H₂O₂诱导细胞凋亡。加入不同浓度的药物后,采用MTT法观察细胞存活情况,来进行药物有效浓度的筛选。采用TUNEL、流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果MTT结果显示,4种黄酮醇类在5和30μmol·L^-1时对细胞没有毒性。4种黄酮醇类化合物与损伤组比较,槲皮素、杨梅素、桑色素的心肌细胞凋亡率降低、Bcl-2/Bax比值增大、抑制caspase-3蛋白的活化。结论槲皮素、杨梅素和桑色素对心肌细胞凋亡有保护作用,可以通过抑制caspase-3蛋白的活化、上调Bcl-2蛋白的表达或是降低Bax的表达来发挥作用,槲皮素表现出较强的抗凋亡活性。     

冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡

目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法。结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性。27μmol.L^-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化。ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-X_L表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用。结论:冬凌草甲素(27μmol.L^-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-X_L的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡。     

紫草素通过线粒体途径诱导A375-S2细胞凋亡

目的 :研究紫草素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法 :MTT法测定紫草素对A375-S2细胞的生长抑制实验 ,形态学观察分析细胞凋亡的形态学变化 ,DNA电泳研究细胞死亡的机制 ,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。结果 :紫草素可明显地抑制A375-S2细胞的生长 ,在 25～40 μmol·L^-1之间呈明显的量效关系和时效关系。 10μmol·L^-1紫草素可诱导A375-S2细胞凋亡 ,琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA“梯状”条道。caspase-3和caspase-9的抑制剂阻止紫草素诱导的凋亡 ,紫草素可诱导A375-S2细胞caspase-9的活力增加 ,免疫印迹结果显示的上调的Bax和下调的Bcl-X_L 表达证实了紫草素诱导的A375-S2细胞的凋亡是通过线粒体途径发挥作用的。结论 :10μmol·L^-1紫草素可明显地诱导A375-S2细胞凋亡 ,并经历了caspase-9激活的线粒体信号转导途径。     

三七皂苷R1对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护机制. 方法: MTT法检测细胞存活率;PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中Bax,Bcl-2的表达;ELISA法检测caspase-3,caspase-8及caspase-9的酶活性. 结果: 6.25,12.5,25,50,100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡均有一定保护作用,并呈剂量依赖关系;PI/Annexin V双染流式细胞术检测结果表明Aβ_1-42可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可显著降低细胞凋亡率.Western blot结果显示,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;ELISA分析显示不同剂量的三七皂苷R₁可抑制Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞caspase-3和caspase-9的激活,但对caspase-8的激活没有影响. 结论: 三七皂苷R₁通过抑制线粒体相关的凋亡通路激活,减少Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡.     

半边旗二萜类化合物5F诱导人翼状胬肉成纤维细胞凋亡及对caspase-3表达的研究

 目的观察半边旗二萜类化合物5F(5F)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的影响。方法采用5F不同药物浓度组(0,8,32,128 mg·L^-1)作用不同时间处理细胞。噻唑蓝比色法检测5F对细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;RT-PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase-3的转录水平;Western blot检测细胞caspase-3蛋白表达;化学比色法检测细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化。结果给药组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P<0.01),细胞增殖抑制率呈剂量和时间的依赖关系;Hoechst33258荧光染色显示,给药组部分细胞呈典型的凋亡表现;流式细胞术检测在32 mg·L^-1浓度作用下,12 h即出现“凋亡峰”,其峰值达(12.48±1.29)%;RT-PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达上调;Western blot检测细胞caspase-3蛋白表达水平升高;caspase-3活性检测显示,其活性呈剂量和时间依赖性增高,5F浓度达到128 mg·L^-1时,其活性为对照组的3.52倍。结论5F可显著地抑制HPF增殖、诱导细胞凋亡、升高caspase-3活性,并呈明显的量效与时效关系;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与升高caspase-3活性,促进caspase-3基因转录和蛋白翻译,使细胞内caspase-3增加从而促进细胞凋亡有关。     

南瓜蛋白对人胰腺癌细胞CFPAC-1增殖抑制及诱导凋亡作用

 摘要：目的 探讨南瓜蛋白（CUS）体外对人胰腺癌细胞CFPAC-1的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法 甲基噻唑基四唑法检测南瓜蛋白对CFPAC-1细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,蛋白质印迹法检测caspase-3及bcl-2蛋白表达水平。结果 不同浓度（0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1及2 μmol·L^-1）南瓜蛋白作用不同时间（24、48及72 h）后,南瓜蛋白对胰腺癌细胞有增殖抑制作用,并呈时间和剂量依赖性（P＜0.05）。1 μmol·L^-1南瓜蛋白作用72 h后,电镜下可见明显凋亡改变,并可见凋亡小体。流式细胞仪结果示,与对照组相比,S期细胞减少,G₀/G₁期细胞增多,细胞由G₀/G₁期进入S期延缓;不同浓度（0、0.062 5、0.25及1 μmol·L^-1）南瓜蛋白作用72 h后细胞凋亡率分别为（0.33±0.37）％、（19.26±1.49）％、（37.13±2.07）％及（55.64±2.91）％。随着药物浓度的增高,caspase-3蛋白表达逐渐增强,bcl-2蛋白表达逐渐减弱。结论 南瓜蛋白对人胰腺癌细胞CFPAC-1具有明显抑制作用;南瓜蛋白可能通过上调caspase-3及下调bcl-2蛋白表达诱导胰腺癌细胞凋亡。
     

脱氢枞胺对氟苯甲醛对人肝癌细胞的抑制作用

 目的 观察脱氢枞胺对氟苯甲醛对人肝癌细胞的抑制作用及其分子机制。方法 运用四甲基偶氮唑蓝、倒置显微镜、流式细胞仪、Western blot、荧光分光光度法等分别检测脱氢枞胺对氟苯甲醛对肝癌细胞增殖的抑制作用、观察凋亡细胞细胞核的形态变化、检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cyt-c的表达和caspase-3活性的影响。建立H22小鼠体内移植实体瘤模型,观察脱氢枞胺对氟苯甲醛对瘤体质量的影响。结果 四甲基偶氮唑蓝法显示脱氢枞胺对氟苯甲醛能显著抑制肝癌细胞株（SMMC-7721、HepG2和BEL-7402细胞）的增殖,IC₅₀值分别为SMMC-7721 (44.47±2.15)μmol·L^-1、HepG2（52.83±2.25）μmol·L^-1和BEL-7402 (48.64±1.76) μmol·L^-1。倒置显微镜下发生细胞皱缩变圆等变化,细胞凋亡率明显增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2表达减少,Bax、p53 和Cyt c表达增加,caspase-3活力增加,且均具有浓度依赖性。小鼠 H22 肝癌模型中,脱氢枞胺对氟苯甲醛对肿瘤的生长也有一定的抑制作用。结论 体内外实验显示脱氢枞胺对氟苯甲醛能明显抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能是通过凋亡线粒体信号通路而实现的。     

白附子提取物抑制人胃癌 SGC-7901 细胞增殖及诱导凋亡的机制研究

 目的 探讨白附子提取物对人胃癌 SGC-7901 细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其可能机制。 方法 分别采用噻唑蓝（ MTT ）法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡、光镜观察细胞结构变化、 Hoechst33342/PI 荧光染色检测细胞凋亡、 Western blotting 法检测 caspase-3 、 Bax 和 Bcl-2 蛋白表达。 结果 0.072~7.2 mg · L^-1 白附子提取物处理 24 h 后,细胞增殖明显受到抑制,且抑制率随时间延长而增加;光镜下可观察到细胞凋亡形态的改变; Western blotting 结果显示,半胱氨酸蛋白酶（ caspase-3 ）酶原蛋白的激活, Bcl-2 蛋白表达的降低和 Bax 蛋白表达上调。 结论 白附子提取物通过影响 SGC-7901 细胞的增殖、周期和凋亡相关蛋白的表达发挥凋亡诱导作用。     

川芎嗪对白血病U937细胞增殖和凋亡的作用及其机制研究

目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白血病U937细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。 方法:应用CCK-8法检测TMP对U937细胞的增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,采用Real-time PCR法检测bcl-2,P27 mRNA表达,Western blot检测bcl-2,caspase-3,cyclin E1,CDK2,P27的表达。 结果:川芎嗪呈时间剂量依赖的方式抑制U937细胞的增殖,作用48 h的IC₅₀为160 mg·L^-1;并且诱导U937细胞凋亡,阻滞细胞周期于G₀/G₁期;Real-time PCR及Western blot结果显示川芎嗪使U937细胞中凋亡相关分子bcl-2表达下调,caspase-3上调,周期相关蛋白cyclin E1,CDK2表达下调,P27上调。 结论:川芎嗪对白血病U937细胞呈抑制增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是通过影响细胞周期分布,下调bcl-2的表达,最终激活caspase-3,启动凋亡途径,诱导细胞凋亡。     

辣椒碱通过TRPV1诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的 探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制。方法 设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测辣椒碱（50,100,200,300,400,500,600,800,1 000 μmol·L^-1）处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预（200,400,800 μmol·L^-1）后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（200,400 μmol·L^-1）干预后TRPV1,肿瘤抑制蛋白p53,磷酸化p53（p-p53）,抑癌基因［B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）］,活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）,cleaved Caspase-8,活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）的蛋白表达的影响;此外,利用微小RNA（mRNA）沉默技术作用TRPV1,观察200 μmol·L^-1辣椒碱处理沉默TRPV1的SW480细胞凋亡率的变化,以及上述蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,辣椒碱50,100 μmol·L^-1作用对细胞活性未出现显著影响,浓度在200 μmol·L^-1以上时,随浓度增加细胞活性逐渐降低（P<0.01）,呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱200,400,800 μmol·L^-1处理可明显诱导细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）;200,400 μmol·L^-1 辣椒碱干预下,细胞生长表现为G₂/M期阻滞,800 μmol·L^-1表现为G₀/G₁期阻滞（P<0.05）;与空白组比较,辣椒碱200,400 μmol·L^-1处理细胞能够明显上调上述凋亡途径中相关蛋白（p53,p-p53,Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-8,cleaved PARP）的表达（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.01）;沉默TRPV1能明显抑制辣椒碱诱导的细胞凋亡及凋亡通路蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 辣椒碱可能通过TRPV1受体抑制SW480细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

大黄素通过减轻氧化应激和肝细胞凋亡对脂多糖诱导急性肝损伤的保护机制研究＊

目的 观察大黄素对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的急性肝损伤大鼠的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 40只雄性清洁级SD大鼠随机分为空白组（Control），模型组（Model）、大黄素低浓度组（Emodin L），大黄素高浓度组（Emodin H），每组10只。除空白组，其他组均腹腔注射LPS建立急性肝损伤模型，造模后四组均给予正常食水，另大黄素低浓度组给予浓度为20 mg·kg^-1的大黄素（ig，bid），大黄素高浓度给予浓度为40 mg·kg^-1的大黄素（ig，bid），空白组及模型组给予等体积蒸馏水（ig，bid），苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠肝组织病理变化，大鼠血清中天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）的变化，大鼠肝脏中氧化应激指标谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA），运用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肝细胞凋亡情况，免疫荧光标记法（IF）观察促凋亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。免疫印迹试验（Western Blot）检测抗凋亡因子中B淋巴细胞瘤-2基因Bcl-2、促凋亡因子中抑癌基因p53的蛋白表达。结果 与Control组相比，LPS腹腔注射可以导致大鼠肝脏病理性损伤和肝功能异常，致使肝脏氧化应激明显增强，肝细胞凋亡数量明显增多，促凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）分泌明显增加，抗凋亡因子B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）蛋白表达受到抑制，促凋亡因子肿瘤抑制基因（p53）蛋白表达明显增强；而与模型组相比，大黄素组可以改善肝功能水平及肝脏病理变化，调节肝脏氧化应激，减轻肝细胞凋亡，减少半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的分泌，增强抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达，降低促凋亡因子p53的蛋白表达。结论 大黄素对LPS诱导的急性肝损伤起保护作用，其作用机制可能通过调节氧化应激和减轻肝细胞凋亡途径来实现。     

甘草查尔酮B诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡作用

目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B)诱导小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:取对数生长期B16F0细胞按5 000个/孔接种于96孔板中,MTT染色法检测甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5,15 mg·L-1)作用24 h后,对B16F0细胞的增殖抑制作用;取对数生长期B16F0细胞按1×105个/孔接种于6孔板中,甘草查尔酮B(7.5,15mg·L-1)作用24 h后,Hoeehst 33258染色法观察细胞凋亡形态;取对数生长期B16F0细胞按5×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5 mg·L-1)作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测与凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2) mRNA表达;荧光法检测半胱氨酸蛋白酶蛋白9(Caspase-9)和半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)相对活性.结果:甘草查尔酮B能有效抑制B16F0细胞增殖,作用24 h后对细胞的生长有明显的抑制作用,IC.011.3 mg·L-1,在5～15 mg·L-1表现出明显的剂量依赖,细胞出现明显凋亡特征,随甘草查尔酮B浓度的增加凋亡率逐渐升高;甘草查尔酮B(10,12.5 mg·L-1)能明显下调Bcl-2/Bax,上调Caspase-3,Caspase-9的表达,其中7.5 mg·L-1甘草查尔酮B引起Caspase-9,Caspase-3的活化程度较12.5 mg·L-1高.结论:甘草查尔酮B可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导B16F0细胞凋亡.     

构树叶总黄酮调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG-2细胞凋亡的研究

目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)诱导HepG-2细胞凋亡的机制。方法:采用体外细胞培养方法,取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,应用MTT法检测TFBP对人肝癌细胞HepG-2生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察各浓度TFBP作用细胞48 h后的细胞的形态变化;通过免疫细胞化学SP法检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;比色法检测半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性。结果:TFBP在体外对人肝癌细胞HepG-2有较强的浓度依赖性和时间依赖性抑制作用,9,12 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可分别达52.46%,64.72%,与对照组具有显著性差异(P<0.01),可诱导细胞凋亡,质量浓度9,12 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞48 h后就可出现典型的凋亡小体,TFBP可升高caspase-3活性,并具有浓度效应,同时还可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2/Bax。结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。其诱导凋亡的机制可能与其下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2/Bax以及增强caspase-3的活性有关。     

何首乌醇提物对人正常肝细胞L02的毒性作用及其机制

目的:探究何首乌醇提物(PME)对人正常肝细胞L02的毒性损伤和作用机制,为何首乌合理安全用药提供依据。方法:以PME(5,10,20 g·L^-1)作用于L02细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Hoechst 33342染色法观察细胞核形态;Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;相关试剂盒检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9前体(pro Caspase-9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3前体(pro Caspase-3)的表达水平。结果:与空白组比较,L02细胞在PME作用下存活率下降,呈时间浓度依赖性;Hoechst 33342染色后荧光下可见细胞核皱缩,碎裂,染色质凝集;Annexin V-FITC/PI双染法结果表明PME20 g·L^-1组凋亡率上升;PME 20 g·L^-1组LDH释放率显著增加(P<0.01),细胞内ROS水平显著上升(P<0.01),SOD活力显著下降(P<0.01),PME 5,10,20 g·L^-1组MMP明显降低(P<0.05)。与空白组比较,随着PME给药组浓度增加,PME 10,20 g·L^-1组pro Caspase-3,pro Caspase-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),PME 5,10,20 g·L^-1组Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01),PME 20 g·L^-1组Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:PME对L02细胞存在毒性损伤作用,可一定程度破坏肝细胞的结构,促进ROS水平升高,诱导氧化应激,激活线粒体途径,活化凋亡通路相关蛋白引起肝细胞损伤,提示ROS介导的线粒体通路参与了PME诱导肝细胞凋亡的过程。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。     

扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

 目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol·L^-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol·L^-1PCF组、UVA+2.84mmol·L^-1 PCF组、UVA+1.42mmol·L^-1 PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42～5.69mmol·L^-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。     

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+梓醇3 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+三七总皂苷12 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+草酸铵1.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+青藤碱0.75 mg·L~(-1)组。流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P0.05)。而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显。结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡。而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性。