扶正化瘀方对DMN肝纤维化模型鼠肝细胞凋亡的影响

探讨扶正化瘀方(主药:丹参、桃仁、蝙蝠蛾青霉菌、绞股蓝、松花粉、五味子)对DMN肝纤维化大鼠肝脏细胞凋亡的影响。Wistar雄性大鼠 60只,随机分造模组及正常对照组。其中 52只隔日腹腔注射 0 .5% DMN造模, 4周后随机分为模型对照组、扶正化瘀方组、秋水仙碱组,各组分别以自来水、3. 69g·100ml-1扶正化瘀方、0 .1%的秋水仙碱按 10ml·kg-1灌胃,每周 6次,共 4周;正常对照组 8只,前 4周腹腔注射生理盐水,后 4周用自来水灌胃。8周时处死动物取材,检测相关指标。结果:扶正化瘀方组大鼠死亡率、腹水发生率较模型组明显降低,肝功能好转;肝组织Hyp含量以及肝组织胶原分期下降,纤维化程度减轻;肝组织α- SMA表达明显降低,HSC凋亡增多,肝细胞凋亡减少,与模型组相比均有显著性差异。结论:促进活化HSC凋亡、抑制肝细胞凋亡是扶正化瘀治疗肝纤维化的机理之一。     

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡机制的研究

目的研究荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi Chinensis Sonn,TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响及其作用机制。方法以二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,同时分别以高、低剂量的TFL灌胃6周进行干预治疗,HE及Masson染色观察肝纤维化程度,免疫组化二步法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果模型组大鼠肝组织中Bcl-2、Bax的表达较正常组均显著升高(P<0.01);TFL高、低剂量给药组Bcl-2的表达较模型组升高(P<0.05)、Bax表达较模型组降低(P<0.05);TFL高剂量组与低剂量组比较Bcl-2升高(P<0.05)、Bax显著降低(P<0.01)。结论 TFL抗肝纤维化的作用可能是通过上调Bcl-2、下调Bax的表达,抑制肝细胞的凋亡来实现的,且具有一定的量效关系。肝纤维化的严重程度与Bcl-2的表达负相关、Bax的表达正相关。     

中药抗氧化应激诱导视网膜神经节细胞凋亡的研究进展

氧化应激反应诱导视网膜神经节细胞凋亡,在青光眼疾病的发生、发展过程中发挥了重要作用.近年来有大量文献报道,中药及其有效成分具有显著的抗氧化应激诱导视网膜神经节细胞凋亡的生物活性.文章综述了近5年来相关药物的研究进展,以期阐释中药如何通过抗氧化机制达到视神经保护作用,为临床工作中更有效地防治青光眼视神经损害提供参考依据和...     

肝星状细胞(HSC)凋亡机制研究进展

肝星状细胞是一种肝脏非实质性细胞,它的活化、增殖与凋亡在肝纤维化过程中起着核心作用。HSC的凋亡是减少活化的HSC的主要途径,其凋亡机制非常复杂,主要与一些细胞因子、相关基因和蛋白、粘附分子等有关。     

茵陈蒿汤对酒精性肝纤维化模型大鼠内质网应激介导肝细胞凋亡相关分子的影响

目的观察茵陈蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠肝组织内质网应激凋亡通路的影响,探讨茵陈蒿汤抗酒精性肝纤维化的作用机制。方法将40只SD大鼠采用白酒-玉米油-吡唑混合液灌胃联合小剂量CCl_4腹腔注射复制大鼠酒精性肝纤维化模型,8周后随机分为对照组、模型组和茵陈蒿汤低剂量组、茵陈蒿汤高剂量组,每组10只。模型组以白酒混合物低剂量(6 mL/kg)持续灌胃,茵陈蒿汤低剂量组、高剂量组分别给予茵陈蒿汤1.75 g/kg(5 mL/kg)、3.5 g/kg(10 mL/kg),对照组灌胃给予等量的0.9%NaCl溶液。4周后检测大鼠肝指数及血清AST、ALT水平;采用流式细胞学技术检测各组大鼠肝细胞悬液凋亡率的比例;采用Western blot法检测各组大鼠肝脏GRP78、Cleaved-Caspase-12和Cleaved-Caspase-3蛋白表达情况。结果①与对照组比较,模型组大鼠肝指数水平显著升高(P0.05);与模型组比较,茵陈蒿汤各剂量组大鼠肝指数水平显著降低(P0.05);与茵陈蒿汤低剂量组比较,茵陈蒿汤高剂量组大鼠肝指数水平显著降低(P0.05)。②与对照组比较,模型组大鼠血清中ALT、AST水平显著升高(P0.05);与模型组比较,茵陈蒿汤各剂量组ALT、AST水平显著降低(P0.05);与茵陈蒿汤低剂量组比较,茵陈蒿汤高剂量组大鼠血清中ALT、AST水平显著降低(P0.05)。③与对照组比较,模型组大鼠肝细胞晚期凋亡率及总凋亡率显著升高(P0.05);与模型组比较,茵陈蒿汤各剂量组晚期凋亡率及总凋亡率显著降低(P0.05);与茵陈蒿汤低剂量组比较,茵陈蒿汤高剂量组大鼠肝细胞早期、晚期及总凋亡率均明显降低(P0.05)。④与对照组比较,模型组大鼠肝组织Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著上调(P0.05);与模型组比较,茵陈蒿汤各剂量组大鼠肝组织GRP78、Cleaved-Caspase-12和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著下调(P0.05);与茵陈蒿汤低剂量组比较,茵陈蒿汤高剂量组大鼠肝组织GRP78和Cleaved-Caspase-12蛋白表达水平显著下调(P0.05)。结论茵陈蒿汤可明显改善酒精性肝纤维化大鼠的肝组织损伤,抑制内质网应激介导的肝细胞凋亡。     

酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞及肝细胞凋亡和清肝活血方调控机制研究

目的 观察酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞（HSC）、肝细胞凋亡及清肝活血方对不同细胞凋亡的影响。方法 将大鼠分为空白组,模型组,清肝活血低、中、高剂量组,易善复组,清肝活血方低剂量组[4．75g／（kg·d）]、中剂量组[14．25g／（kg·d）]、高剂量组[28．5g／（kg·d）]及易善复组[66．5mg／（kg·d）],分别予相应药物灌胃,空白组和模型组以等量生理盐水代替,给药2周。比色法检测血清ALT、AST、γ-GT,HE、Masson染色观察肝脏炎症和纤维化程度。TUNEL法检测肝细胞凋亡,TUNEL-α-SMA双标记法检测HSC凋亡。结果 清肝活血方能降低大鼠血清ALT、AST、γ-GT水平,减轻炎症及纤维化程度（P〈0．05）;诱导活化的HSC凋亡,减少肝细胞凋亡（P〈0．05）。结论 清肝活血方能有效减轻大鼠肝纤维化程度,并减少酒精引起的肝细胞凋亡,诱导活化的HSC凋亡。     

基于肝细胞凋亡与网状支架破坏探讨抗肝纤维化中药的作用机制与治法特点

近年研究表明：肝细胞凋亡与网状支架破坏是肝纤维化形成的重要病理机制，抑制肝细胞凋亡及其支架结构破坏是防治肝纤维化的根本措施之一，TNF受体（TNF-R）半胱天冬酶（Caspases）通路是细胞凋亡的分子病理基础，ERK-MMP2途径是网状支架破坏的重要分子病理机制。在既往工作基础上，我们拟以抗纤维化有效中药-扶正化瘀方为对象，首先采用析因设计，动态观察扶正化瘀方影响肝细胞凋亡、网状支架破坏与纤维化之间的关系，继而探讨该方及其扶正与化瘀治法拆方对小鼠体内肝细胞凋亡与网状支架破坏的作用机制与治法特点。随后建立中药影响肝细胞凋亡的药物高内涵分析方法，探讨扶正化瘀方及其拆方对培养小鼠肝细胞TNF-R／Caspase通路信号分子的影响；并将经复方与拆方作用的凋亡肝细胞与原代肝星状细胞共培养，观察该方及其拆方通过抗肝细胞凋亡而影响肝星状细胞活化的作用。该项研究阐明了抗肝纤维化有效中药对肝细胞凋亡与支架破坏的作用机制与治法特点，拓展了抗肝纤维化的治疗新途径与药理研究新领域，为进一步开展中医药逆转肝硬化作用机制的研究奠定基础。     

心脉通抗氧化应激所致心肌细胞凋亡的机制探讨

目的探讨心脉通含药血清抗氧化应激所致心肌细胞凋亡的分子机制。方法培养乳鼠心肌细胞,采用400μmol/LH2O2建立氧化应激损伤导致心肌细胞凋亡模型。采用MTT法检测细胞活力改变,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测HSP70、NF-κB、caspase-3在细胞内表达。结果H2O2作用1h对心肌无损伤作用,HSP70表达轻度增加。H2O2作用6h可导致心肌细胞凋亡,心脉通含药血清可减轻H2O2导致的细胞活力下降,显著抑制心肌细胞凋亡,明显增加HSP70在细胞内的表达,减少NF-κB核转位,减少心肌细胞内caspase-3表达。结论心脉通含药血清对H2O2导致的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其可能机制是增加HSP70蛋白表达,抑制NF-κB活化,减少心肌细胞内caspase-3表达。     

基于肝细胞凋亡与网状支架破坏探讨抗肝纤维化中药的作用机制与治法特点

近年研究表明:肝细胞凋亡与网状支架破坏是肝纤维化形成的重要病理机制,抑制肝细胞凋亡及其支架结构破坏是防治肝纤维化的根本措施之一,TNF受体（TNF-R）半胱天冬酶（Caspases）通路是细胞凋亡的分子病理基础,ERK-MMP2途径是网状支架破坏的重要分子病理机制。在既往工作基础上,我们拟以抗纤维化有效中药-扶正化瘀方为对象,首先采用析因设计,动态观察扶正化瘀方影响肝细胞凋亡、网状支架破坏与纤维化之间的关系,继而探讨该方及其扶正与化瘀治法拆方对小鼠体内肝细胞凋亡与网状支架破坏的作用机制与治法特点。随后建立中药影响肝细胞凋亡的药物高内涵分析方法,探讨扶正化瘀方及其拆方对培养小鼠肝细胞TNF-R/Caspase通路信号分子的影响;并将经复方与拆方作用的凋亡肝细胞与原代肝星状细胞共培养,观察该方及其拆方通过抗肝细胞凋亡而影响肝星状细胞活化的作用。该项研究阐明了抗肝纤维化有效中药对肝细胞凋亡与支架破坏的作用机制与治法特点,拓展了抗肝纤维化的治疗新途径与药理研究新领域,为进一步开展中医药逆转肝硬化作用机制的研究奠定基础。     

Protective effects of Phellinus linteus extract against iron overload-mediated oxidative stress in cultured rat hepatocytes

Phellinus linteus (PL) mushroom has been reported to possess antioxidant activity. The present study was designed to investigate whether an ethanol extract obtained from PL might ameliorate oxidative stress and enhance antioxidant enzyme activities in primary rat hepatocytes, which were overloaded with iron using ferric nitrilotriacetate (FeNTA) complex. FeNTA enables hepatocytes to accumulate substantially redox-active iron and stimulates the production of injurious hydroxyl radicals, which in turn, initiate oxidative stress-mediated cytotoxicity. The results showed that pretreatment of hepatocytes with PL extract (50, 100 and 200 microg/mL) for 24 h significantly reversed FeNTA-induced cell viability loss, lactate dehydrogenase leakage (LDH), lipid peroxidation (LPO) and protein carbonyl formation in a dose-dependent manner. It was further observed that PL extract produced an inhibitory effect on intracellular reactive oxygen species (ROS) formation caused by FeNTA. Concomitantly, the amount of GSH content and the activities of glutathione reductase (GSH Rd) and glutathione peroxidase (GSH Px) in hepatocytes pretreated with PL extract increased substantially compared with those treated with FeNTA alone. These results suggest that PL may be useful in protecting against FeNTA-induced oxidative damage and also be capable of attenuating cytotoxicity of other oxidants.     

金钗石斛多糖对高糖诱导的大鼠肾系膜细胞氧化应激的影响

目的 观察金钗石斛多糖对高糖作用下大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)氧化应激的影响.方法 采用水提醇沉法进行多糖的提取并经过DEAE-FF对提取粗多糖进行分离纯化;鉴定方法包括红外光谱分析该多糖的特征性吸收峰;紫外分光光度法对多糖纯度进行判定;苯酚-硫酸法进行多糖含量测定.后将HBZY-1细胞分为6组,对照组(NC)、高糖作用组(HG)、NAC组(NAC)、金钗石斛多糖低(LD)、中(MD)、高(HD)剂量干预组,药物作用时间24h,ABTS法检测各组细胞的总抗氧能力;流式细胞术检测细胞内活性氧的变化;WST-1法检测各组细胞的增殖情况.结果 经水提醇沉及阴离子交换柱纯化得到金钗石斛多糖组分FDP1,测得金钗石斛多糖相对含量为98.1％.与对照组相比,高糖作用组细胞的总抗氧能力下降,而ROS表达明显增加(P＜0.05).金钗石斛多糖干预组与高糖作用组相比,增加ROS生成.高糖作用组较正常组细胞的增殖速度加快(P＜0.05),金钗石斛多糖各剂量组对高糖诱导的细胞增殖无影响.结论 金钗石斛多糖FDP1具有抑制高糖诱导下的HBZY-1细胞总抗氧化能力的下降、ROS生成的增加,对高糖诱导下细胞氧化应激损伤有保护作用.     

芦荟大黄素对CCl4损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的 :研究芦荟大黄素 (AE)对原代培养大鼠肝细胞的保护作用。研究拟探讨AE对肝细胞的保护作用 ,以CCL4体外损伤的原代培养大鼠肝细胞为实验模型 ,通过测定培养液中谷丙转氨酶 (ALT)、谷胱甘肽 -S转移酶 (GSH)、脂质过氧化物丙二醛 (MDA)水平和MTT法检测细胞增殖活性 ,观察AE对急性肝细胞损伤的影响 ,并探讨其作用机理。方法 :以CCL4体外损伤的原代培养大鼠肝细胞为实验模型 ,通过测定培养液中谷丙转氨酶 (ALT)、谷胱甘肽 -S转移酶 (GSH)、脂质过氧化物丙二醛 (MDA)水平和MTT法检测细胞增殖活性 ,观察AE对急性肝细胞损伤的影响。结果 :AE浓度为 10 -4mol/L - 10 -7mol/L时能显著抑制CCL4所致ALT和MDA水平的上升 ,提高GSH水平及细胞存活率 ,并呈一定的浓度—效应关系。结论 :AE能有效保护CCL4所致肝细胞损伤。     

小檗碱对氧化应激损伤中枢神经细胞的保护作用

 目的:研究小檗碱(berberine,Ber)对培养大鼠神经细胞氧化应激损伤的保护作用?方法:体外培养大鼠胎鼠大脑皮质神经细胞,观察谷氨酸、“缺血"或“缺血/再灌注"及血红素对细胞的毒性及Ber的保护作用?结果:在培养的大鼠胎鼠大脑皮质神经细胞中,加入谷氨酸、血红素及“缺血"或“缺血/再灌注"损伤,细胞出现明显损伤性变化,死亡率明显升高,培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放增加,而细胞匀浆中谷胱甘肽(GSH)含量明显减少,丙二醛(MDA)生成显著增多?Ber 1～25μmol·L^-1能不同程度地抑制谷氨酸、血红素或“缺血/再灌注"引起的损伤性改变,培养上清液中LDH释放减少,而细胞匀浆中GSH含量明显增加,MDA生成显著降低?结论:Ber对氧化应激损伤中枢神经细胞具有保护作用,其作用机制可能与其提高抗氧化物质谷胱甘肽含量,减少脂质过氧化物生成有关?     

Mycelial culture of Phellinus linteus protects primary cultured rat hepatocytes against hepatotoxins

Hepatoprotective activity of Phellinus linteus was studied using H(2)O(2)- or galactosamine-injured primary cultures of rat hepatocytes as screening systems. The methanolic extract of the mycelial culture of Phellinus linteus significantly protected against hepatotoxins-induced toxicity in primary cultured rat hepatocytes as seen from the decreased level of glutamic pyruvic transaminase released from the injured hepatocytes. The methanolic extract of the mycelial culture of Phellinus linteus was subsequently fractionated with n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water. Among these fractions, 100 microg/mL of the ethyl acetate fraction was the most active one. The relative protections were 68.9 +/- 5.3% in H(2)O(2)-injured hepatocytes and 46.8 +/- 3.9% in galactosamine-injured hepatocytes, respectively. The ethyl acetate fraction appeared to maintain the glutathione level which was decreased by the treatment of H(2)O(2) or galactosamine and restored the level of RNA synthesis more than two times compared to galactosamine-injured hepatocytes. These results suggest that the ethyl acetate fraction of the mycelial culture of Phellinus linteus protects hepatocytes from H(2)O(2)- or galactosamine-induced injury by maintaining hepatic glutathione level and RNA synthesis as well.     

糖脂平对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌氧化应激的影响

目的建立喂养型胰岛素抵抗（insulinresistance,IR）大鼠模型,观察糖脂平对喂养型IR大鼠氧化应激的影响。方法选用体重在180～200g的8周龄雄性SD大鼠60只,适应性喂养一周后,随机分为空白对照组15只和造模组45只。空白对照组采用普通饲料喂养,造模组采用高脂饲料喂养。8周造模成功后,将造模组随机分为：模型组、糖脂平组、罗格列酮组各15只。糖脂平组给予糖脂平按生药20g/kg·d灌胃;罗格列酮组给予罗格列酮0．8mg／kg·d灌胃;模型组和空白对照组灌服等量的生理盐水;末次给药后禁食12小时,用正常血糖胰岛素钳夹技术评价胰岛素敏感性,检测各组大鼠的体重、血糖、血清胰岛素水平,并留取骨骼肌,检测组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）等指标。结果糖脂平能增加胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗,糖脂平组的M值显著高于模型组,体重、血糖、胰岛素均低于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）,与罗格列酮组比较,体重一项有统计学意义（P〈0．05）,血糖与胰岛素无统计学意义（P〉0．05）;糖脂平组SOD、GSH—Px、CAT水平显著高于模型组,MDA显著低于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）,与罗格列酮组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论糖脂平可改善胰岛素抵抗,也可改善氧化应激,反应了糖脂平可以通过改善胰岛素抵抗的上游通路——氧化应激来提高机体代谢活力,改善胰岛素抵抗,其作用机制可能是通过改善骨骼肌中线粒体的活性氧。     

Protective effect of indigo naturalis extract against oxidative stress in cultured human keratinocytes

Ethnopharmacological relevance

Indigo naturalis is used in traditional Chinese medicine to treat various skin disorders.

Aim of the study

The aims were to explore the effect of indigo naturalis on suppressing oxidative stress and protein modifications by hydrogen peroxide (H₂O₂) and 4-hydroxy-2-nonenal (HNE), a lipid peroxidation product, in cultured primary human keratinocytes.

Materials and methods

Indigo naturalis extract at a dose that did not cause cytotoxicity was added to cultured keratinocytes in the absence or the presence of H₂O₂ or HNE. The degree of cytotoxicity, levels of reactive oxygen species (ROS), and amount of protein carbonyl groups were evaluated.

Results

Indigo naturalis extract at the concentration of 10 μg/ml had no protective effect against H₂O₂ or HNE-induced cytotoxicity, but decreased intracellular levels of ROS after H₂O₂ treatment and suppressed the increase of protein carbonyl groups induced by HNE.

Conclusion

Indigo naturalis possesses an inhibitory effect on formation of intracellular ROS induced by exogenous ROS and protein modification induced by HNE in human keratinocytes, which is relevant to the alleviation of inflammatory skin diseases.     

Protective effects of Panax quinquefolium saponin on oxidative damage of cultured rat cardiac cells]

When cultured cardiac cells of rats were exposed to X-XOD containing medium, the absolute values of electronic parameters were decreased the percentage of beating clusters reduced and the microscopic structure destroyed. PQS significantly converted all the indices, which shows that PQS can protect the cells from oxidative damage.     

当归多糖对辐射大鼠肾脏氧化应激防护作用及Nrf2相关机制研究

目的:观察当归多糖对X射线辐射SD大鼠肾脏氧化应激损伤防治作用及其相关机制。方法:48只雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、贞芪扶正颗粒组、当归多糖低、中、高剂量组,共6组,每组8只,贞芪扶正颗粒组灌喂2.62g/kg贞芪扶正颗粒溶液,当归多糖低、中、高剂量组分别灌喂63.6 mg/kg、127.1 mg/kg和254.2 mg/kg当归多糖,空白对照组和模型组分别灌胃等体积的生理盐水,连续灌胃7d后,用X射线6Gy分两次照射,照射后继续灌胃3天。检测各组小鼠体重、肾脏指数变化情况;肾脏HE病理切片;Cr、BUN肾功能结果;GSH-Px、LPO、MDA、SOD氧化应激功能指标和Nrf2蛋白表达情况。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠一般状况差,体重下降,肾脏指数升高;Cr和BUN表达升高;LPO和MDA水平增高,SOD、GSH-Px水平降低;Nrf2蛋白表达升高。与模型组相比,63.6 mg/kg、127.1 mg/kg和254.2 mg/kg当归多糖各组大鼠一般状况尚可,体重增加,肾脏指数降低;Cr和BUN表达下降;LPO和MDA表达降低,SOD、GSH-Px水平升高;Nrf2蛋白表达降低。结论:当归多糖对X射线辐射SD大鼠所致的肾脏氧化应激损伤具有防护作用,可能和Nrf蛋白表达有关。