超声分散液相微萃取-气相色谱法同时测定食品中11种防腐剂

目的建立食品中11种防腐剂的超声分散液相微萃取-气相色谱法。方法样品经9∶1二氯甲烷-乙酸乙酯超声分散液相微萃取,FFAP毛细管色谱柱分离、FID检测器检测。结果方法线性范围为0.068~400μg/ml,相关系数为0.9990~0.9999,回收率为84%~122%,相对标准偏差为3.11%~5.83%,方法检出限为0.026~0.23μg/ml。结论该法简便、高效、经济、环境友好,适于不同食品中11种防腐剂同时快速测定。     

高效液相色谱法测定菟丝子中绿原酸、对-香豆酸和金丝桃苷的含量

[目的]建立同时测定菟丝子中绿原酸、对-香豆素和金丝桃苷的含量的高效液相色谱法,为菟丝子的质量标准建立提供依据。[方法]色谱柱为依利特ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-0.05%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为1 m L/min,检测波长为360 nm。[结果]在此色谱条件下,3种成分可完全分离。绿原酸、对-香豆素和金丝桃苷的线性分别为2.00~100μg/m L(r=0.999 3),6.25~100μg/m L(r=0.999 1),0.50~50μg/m L(r=0.999 1)。平均回收率分别为100%(RSD=3.2%)、102%(RSD=1.7%)和102%(RSD=3.1%)。[结论]该方法简便可行,重复性好,可用于菟丝子的质量评价。     

HPLC梯度洗脱法同时测定玉女煎多指标成分含量

[目的]建立同时测定玉女煎中芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷含量的高效液相色谱法。[方法]采用Ultimate XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速:1.0 m L/min;检测波长:250 nm(芒果苷、β-蜕皮甾酮)和330 nm(毛蕊花糖苷)。[结果]芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷质量浓度在10.0~400.0μg/m L(r=0.999 9)、2.4~96μg/m L(r=0.999 9)、2.0~80μg/m L(r=0.999 9)范围内线性关系良好,3种成分的平均加样回收率(n=9)分别为100.2%、101.0%、98.1 8%,RSD分别为2.73%、1.95%、1.39%。[结论]该方法简便,重复性好,可为玉女煎的质量控制提供参考。     

食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的高效液相色谱法

目的:建立起食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的检测方法。方法:不同种类的食品经前处理后,加入适量0.02mol/L氢氧化钠超声提取防腐剂、甜味剂,用10%乙酸铅,10%硫酸钠沉淀大分子物质,最后用0.02mol/L氢氧化钠溶液定容,取上清液,过0.22μm水系滤膜,进高效液相色谱分析。结果:安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸在10.0mg/L-100.0mg/L范围内线性良好,相关系数在0.999以上,方法加标回收率均在95%-105%,相对标准偏差RSD值在1.56%-3.21%。结论:该方法操作简单,干扰小,结果精密度良好,准确度可靠,适用于各类食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的测定。     

HPLC法同时测定景天三七中没食子酸、没食子酸甲酯和对羟基苯甲酸的含量

目的建立同时测定景天三七3个酚类成分的HPLC分析方法。方法采用TOP ODS-AQ(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(D)为流动相,梯度洗脱(0~30 min,10%A→35%A;30~55 min,80%A→80%A),流速0.8 mL/min,检测波长为254 nm。结果没食子酸、没食子酸甲酯及对羟基苯甲酸进样浓度分别在2.42~242.20μg/mL(r=0.9999),2.47~246.8μg/mL(r=0.9999),0.473~47.3μg/mL(r=0.9999),范围内线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为99.21%、102.11%、104.12%;不同产地及不同药用部位的3个酚类成分在数量上或质量上有明显差异。结论本法操作简便,结果准确,可用于景天三七药材中酚类多指标成分的质量控制。     

砂炒马钱子HPLC指纹图谱的研究

[目的]建立砂炒马钱子的指纹图谱。[方法]采用色谱分析法建立砂炒马钱子的指纹图谱,色谱指纹图谱条件:色谱柱为Krom asilC18(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水(每100mL水含乙酸1mL含三乙胺0.05mL)二元梯度洗脱(乙腈5%/0min～10%/20m in;10%/20m in～12%/60m in);柱温为25℃;流速为1.0m L m/in;检测波长为260nm。[结果]10批砂炒马钱子有9个共有峰,相对保留时间的重现性较好,RSD<0.36%;方法学考察稳定性、重现性、精密度RSD小于5%。[结论]初步建立了砂炒马钱子生物碱药效部位指纹图谱的分析方法,该方法可作为鉴别砂炒马钱子的依据。     

HPLC-ELSD测定心脑舒通胶囊中Terrestrinin A的含量

[目的]建立心脑舒通胶囊及其总皂苷中Terrestrinin A含量的测定方法。[方法]采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法,色谱柱为Hedra-C_(18)柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:乙腈-水,流速:1 mL/min,柱温:40℃,漂移管温度:60℃,气体(N2)压力:30 psi,增益值:100,进样量:20μL。[结果]线性范围:48.5~970.6μg/mL,回归方程:Y=1.693 1X+1.264 4(r~2≥0.999 0),精密度、重复性和稳定性实验的RSD值分别是1.21%、1.62%、1.90%,加样回收率是96.0%~103.2%,RSD值是2.40%。[结论]该法简便可靠,可以应用于心脑舒通胶囊及其总皂苷中Terrestrinin A的含量测定及质量控制标准建立。     

气相色谱法快速测定水蛭中短链脂肪酸含量

[目的]建立水蛭中短链脂肪酸（乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸）的含量测定方法。[方法]采用气相色谱法以2-乙基丁酸和2-乙基己酸为内标物,同时测定水蛭样品中7种短链脂肪酸的含量。采用DB-FFAP弹性石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）程序升温分离各成分,以氢火焰离子化检测器检测（检测器温度：240℃）,进样口温度：240℃,载气：高纯氮气,流速1.0 mL/min;尾吹气：高纯氮气,流速25 mL/min。[结果]不同批次水蛭样品中各短链脂肪酸含量差异较大,短链脂肪酸总含量范围为1 101～8 571μg/g,其中乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、己酸的含量范围分别为783.0～3 479、246.7～5 166、0～87.73、0～73.02、0～112.8、0～65.65μg/g。[结论]研究建立的水蛭中短链脂肪酸的含量测定方法简便、快速、稳定,可为水蛭的质量控制提供依据。     

HPLC同时测定复方苦参片中苦参碱、氧化苦参碱含量

目的:建立HPLC同时测定复方苦参片中苦参碱、氧化苦参碱的含量测定方法。方法:采用氨基柱(4.6mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-异丙醇-5%磷酸溶液(80∶10∶10),流速0.8 mL/min,检测波长为220 nm,柱温30℃。结果:苦参碱在0.24~3.00μg(r=0.999 9),氧化苦参碱在0.3368~4.2100μg(r=0.999 9)呈良好的线性关系,平均回收率苦参碱为99.94%,RSD 0.25%(n=6),氧化苦参碱为99.97%,RSD 0.54%(n=6)。结论:该法准确可靠,重复性好,可用于复方苦参片的质量控制。     

LC-MS法测定比格犬血浆中长春氟宁浓度及其药代动力学

目的:建立测定比格犬血浆中长春氟宁浓度的LC-MS方法,用于研究其在犬体内的药代动力学。方法:血浆样品中加入内标非那雄胺,0.25 mol/L NaOH碱化后用乙酸乙酯提取,取上清真空挥干,流动相150μL溶解,取40μL进行LC-MS测定。色谱柱为Shimadzu VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm ID,5μm);流动相为0.01 mol/L乙酸铵水溶液-甲醇(20∶80),流速为1 mL/min。ESI选择正离子检测:长春氟宁,m/z:817.3;非那雄胺,m/z:373.2。结果:线性范围为0.025~12.5μg/mL,日内和日间的精密度均小于7.8%,方法回收率在97.0%~100.2%之间,提取回收率大于80%。结论:该方法选择性好,灵敏度高,操作简便,符合生物样品的测定要求,可应用于长春氟宁在犬体内的药代动力学研究。     

Tenuigenin对转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白生成的抑制作用及机制

目的用转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞模型,研究tenuigenin对β-淀粉样蛋白(Aβ)生成的抑制作用及其作用机制。方法应用免疫沉淀和蛋白印迹法(Westernblot)检测Aβ含量,应用MTT和LDH法测定tenuigenin的细胞毒性。结果Tenuigenin降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ分泌水平;无细胞增生和毒性作用;能抑制SH-SY5YAPP695细胞APPC99的生成,但对SH-SY5YSPA4CT细胞APPC99生成无抑制作用,亦不影响该细胞株Aβ的分泌。结论Tenuigenin可能通过抑制β-分泌酶对APP的水解,降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ水平。Tenuigenin这一针对阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)上游病理环节的药效,显示了其在AD治疗方面重要的开发和临床应用的价值,值得进一步研究。     

PGN激活BV2内吞Aβ寡聚体后对PC12的影响

目的探讨前炎性介质肽聚糖(peptidoglycan,PGN)激活BV2细胞内吞β淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)1～42寡聚体后对PC12的影响。方法采用细胞株传代法培养PC12细胞及BV2细胞,分别替代神经元细胞和小胶质细胞;用转移筛网进行PC12、BV2细胞共育培养;制备Aβ1～42寡聚体;分别采用MTT方法检测PC12细胞抑制率、Western blotting方法检测各组PC12细胞tau(pS396)蛋白表达情况、流式细胞仪检测PC12细胞凋亡。结果 Aβ寡聚体、Aβ寡聚体作用BV2细胞后及PGN作用BV2细胞后均能抑制PC12细胞增殖、增加PC12细胞tau(pS396)表达量、增加PC12细胞凋亡率;而PGN激活BV2细胞内吞Aβ寡聚体后对PC12细胞增殖抑制、tau(pS396)表达量、PC12细胞凋亡率与前面三种情况比较明显增加。结论 Aβ寡聚体可引起PC12细胞的细胞抑制率,tau蛋白异常磷酸化水平,细胞凋亡的增多;PGN激活BV2细胞内吞Aβ后,加重Aβ寡聚体引起PC12细胞的细胞抑制率,tau蛋白异常磷酸化水平,细胞凋亡的增多。     

终末糖基化产物、高脂诱导内皮细胞凋亡的作用途径及葛根素的保护作用*

[目的]探讨葡萄糖和高脂诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用途径及葛根素的保护作用。[方法]采用终末糖基化产物、高脂共同诱导内皮细胞凋亡建立模型,并用葛根素进行干预。采用免疫细胞化学法检测Gaspase3阳性细胞数。流式细胞分析仪检测终末糖基化产物及高脂预处理后内皮细胞凋亡百分率。[结果]中浓度终末糖基化产物（AGE50ug／mol）以及氧化低密度脂蛋白（ox—LDL50mg／L）36h作用于人脐静脉内皮细胞与正常水平的内皮细胞相比,凋亡细胞数量显著增加P〈0．05,葛根素预处理12h后显著降低高糖诱导的凋亡率P〈0．05。[结论]葛根素可以抑制高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,这在防治糖尿病及动脉粥样硬化并发症的过程中起到一定作用。     

Propofol may protect PC12 cells from induced apoptosis through the signaling pathway

Background There are two major pathological hallmarks of AIzheimer's disease.One is the progressive accumulation of beta-amyloid (Aβ) in the form of senile plaques; the other is hyperphosphorylated tau,causing neuronal apoptosis.Some inhalation anesthetics,such as isoflurane and desflurane,have been suggested to induce Aβ accumulation and cause AD-like neuropathogenesis.Whether intravenous anesthetics have similar effects is still unclear.We therefore set out to determine the relationship between propofol and AD-like pathogenesis.Methods PC12 cells were cultured in serum-free medium for 12 hours prior to drug treatment.Various concentrations from 5 μmol/L to 80 μmol/L of aggregated Aβ25-35 were added to determine a proper concentration for further study.After exposure to 10 μmol/L Aβ25-35 alone or with 20 μmol/L propofol for 6 hours,PC12 cell viability was determined by MTT assay.Western blotting and immunocytochemical staining were performed to observe the protein expression of the Bcl-2 family,tau phosphorylation at different sites,and tau protein kinases and phosphatases.Results Aβ25-35 induced a decrease in PC12 cell viability in a dose-dependent manner.Exposure to 10 μmol/L Aβ25-35 for 6 hours resulted in the mild cell survival,accompanied by a decline in Bcl-2,and an increase in phosphorylation of GSK-3β and tau at different sites.Compared with the Aβ25-35 group,cells treated with propofol alone showed no significant difference,while cells co-incubated with propofol and Aβ25-35 showed a significantly higher survival rate (P ＜0.01 or P ＜0.05).Tau phosphorylation at Ser396,Ser404 and Thr231 and the level of GSK-3β in PC12 cells increased after exposure to 10 μmol/L Aβ25-35.Co-incubation with propofol attenuated cellular apoptosis by inhibiting tau phosphorylation.Conclusions These data indicate that propofol may protect PC12 cells from Aβ25-35-induced apoptosis and tau hyperphosphorylation through the GSK-3β pathway,therefore it may be a safer anesthesia for AD and elderly patients.     

补肾调冲含药血清对离体卵巢颗粒细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响

【目的】探讨补肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞原癌基因蛋白表达的影响。【方法】采用血清药理学的方法，以不同含药量的大鼠血清与体外培养的卵巢颗粒细胞共同孵育24h，用免疫组化法检测Bcl-2、P53蛋白的表达。【结果】补肾调冲含药血清可增强Bcl-2蛋白的阳性表达。【结论】原癌基因作为卵巢内局部调节因子，参与卵巢颗粒细胞凋亡过程。补肾调冲含药血清可通过促进卵巢颗粒细胞内抑癌基因的蛋白表达，抑制颗粒细胞的凋亡。     

洛罗兰糖苷激活Bcl-2通路诱导髓样抑制性细胞凋亡研究

[目的]促进髓样抑制性细胞（MDSCs）凋亡是抑制肿瘤生长的一个有效途径。因此,该实验旨在探究盘龙参活性成分络罗兰糖苷对MDSCs的抑制效应以及可能机制。[方法]采用MTT法分别检测洛罗兰糖苷对MDSCs细胞系（MSC-2）的毒性;采用流式分析法检测洛罗兰糖苷对MSC-2的促凋亡作用;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测洛罗兰糖苷作用后MSC-2细胞内凋亡相关基因的蛋白表达水平。[结果]细胞活性检测证实洛罗兰糖苷可以抑制MSC-2的活性;凋亡抗体染色结果显示洛罗兰糖苷可以促进MSC-2凋亡;Western Blot结果表明,洛罗兰糖苷作用下,JNK2、细胞色素C、caspase-9、caspase-3表达明显上调,而Bcl-2表达下降。[结论]洛罗兰糖苷可以通过激活Bcl-2信号通路,促进MDSCs凋亡增强免疫正调控,从而达到抗肿瘤的效果。     

桑仙降压颗粒对自发性高血压大鼠心肌VEGF及nm23的干预

[目的]观察桑仙降压颗粒对自发性高血压大鼠(SHR)心肌血管内皮生长因子(VEGF)及nm23的影响,探讨其对高血压病心肌血管生长促进因子、抑制因子的干预作用。[方法]SHR随机分为3组,空白对照组、吲哒帕胺西药对照组、桑仙降压颗粒组,以Wistar大鼠为正常对照,4周及8周后观察SHR心肌VEGF及nm23的表达。[结果]实验前正常对照组与空白对照组相比VEGF及nm23蛋白光密度值差异均无统计学意义。实验4、8周后相较空白对照组,桑仙降压颗粒组VEGF表达明显增多而nm23蛋白密度值显著减少。[结论]桑仙降压颗粒能增强VEGF的表达及降低nm23的蛋白密度值。     

生肌象皮膏对糖尿病大鼠溃疡创面肉芽组织的终末糖基化产物及受体的影响*

[目的]通过对糖尿病大鼠溃疡创面肉芽组织的终末糖基化产物及受体的含量的动态观察,探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠难治性溃疡愈合的机制.[方法]制备糖尿病溃疡动物模型,按照血糖和体质量分层随机分为糖尿病空白对照组、凡士林组、生肌象皮膏组.生肌象皮膏组外用生肌象皮膏纱条外敷,凡士林组用凡士林纱条外敷,空白组、糖尿病对照组均以生理盐水纱条外敷,分别于1、7、14、21 d每组处死动物10只,手术取新鲜肉芽组织160例.采用实时荧光定量PCR法检测终末糖基化产物受体的含量,免疫组化法检测终末糖基化产物的含量.[结果]终末糖基化产物的含量于糖尿病各组与空白组比较无显著性差异,均呈强阳性表达.糖尿病各组间比较无统计学意义.糖尿病各组终末糖基化产物受体(RAGE)于7 d有升高的趋势,14d达到高峰,各组间无统计学意义.从均数趋势上看生肌象皮膏组明显低于凡士林组、糖尿病对照组,在均数趋势上看生肌象皮膏组可以抑制RAGE的产生,随时间的延长,更为明显.第21天糖尿病各组的RAGE呈低表达,生肌象皮膏组、凡士林组与空白组比较有统计学意义.糖尿病各组组间比较,无统计学意义.[结论]生肌象皮膏对终末糖基化产物无明显影响,可以减少终末糖基化产物受体的产生,随时间的延长,更为明显.     

贝甲汤(散)治疗痤疮88例

患者均为2001-2003年门诊病人,其中男48例,女40例,年龄14～35岁。病程最短者两个月,最长者7a。88例中轻度(Ⅰ级)13例,中度(Ⅱ级)21例,中度(Ⅲ级)28例,重度(Ⅳ级)26例。并发皮脂溢出症26例,并发脂溢性皮炎6例,伴便秘33例,形体偏胖者47例。     

毛酸浆内酯通过抑制STAT3诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

[目的]旨在探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在毛酸浆内酯（PPB）诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中发挥的作用。[方法]采用荧光染色法分析PPB诱导MCF-7细胞凋亡;使用生物信息学方法预测PPB抗乳腺癌的潜在机制;采用噻唑蓝（MTT）法考察STAT3抑制剂S3I-201以及STAT3小干扰RNA(siRNA)对PPB抑制MCF-7细胞生长的作用;采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法考察PPB单独处理或STAT3 siRNA预处理后对MCF-7细胞中STAT3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、细胞色素c(Cytochrome c)以及多聚ADP核糖聚合酶（PARP）蛋白表达的影响。[结果] MCF-7细胞经PPB作用后凋亡形态特征明显,凋亡比例上升;生物信息学结果显示PPB与乳腺癌疾病的共同靶点STAT3在乳腺癌组织中高表达,单基因GSEA结果提示STAT3高表达与凋亡信号通路呈负相关;Western Blot法检测结果显示PPB能够抑制STAT...