生血增白汤对骨髓移植后小鼠造血重建中黏附分子表达水平的影响

目的探讨生血增白汤对骨髓移植后小鼠骨髓中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制。方法将实验动物随机分为5组：正常组、对照组、G-CSF组、生血增白汤组、G-CSF＋生血增白汤组,建立小鼠骨髓移植模型,生血增白汤组及G-CSF＋生血增白汤组胃饲生血增白汤浓缩煎剂。骨髓移植后第9天、第14天、第24天,采用免疫组化方法检测ICAM-1表达水平,进行外周血细胞和骨髓单核细胞计数,并做骨髓组织学观察。结果骨髓移植后第9天、第14天、第24天,生血增白汤组ICAM-1的表达水平、外周血细胞、血红蛋白、骨髓有核细胞计数及骨髓细胞增生程度均高于其他各组（P〈0.05或P〈0.01）。结论生血增白汤能促进骨髓移植后骨髓中ICAM-1的表达,可能是生血增白汤重建造血的机制之一。     

生血增白汤对骨髓移植小鼠造血微环境的影响

目的:探讨生血增白汤对骨髓移植小鼠造血微环境的影响。方法:将实验动物随机分为5组:正常组,未做任何处理;对照组、G-CSF组、生血组、生血+G-CSF组,建立小鼠骨髓移植模型,生血组及生血+G-CSF组胃饲生血增白汤浓缩煎剂。骨髓移植后的第9、14、24天进行外周血细胞和骨髓单核细胞计数,并做骨髓组织学观察。结果:骨髓移植后第9、14、24天生血组外周血细胞、血红蛋白、骨髓有核细胞计数及骨髓细胞增生程度均高于其他各对照组(P﹤0.05或P﹤0.01)。结论:生血增白汤具有一定的升高外周血白细胞、红细胞、血红蛋白的作用,并且能够促进骨髓移植小鼠骨髓组织增殖分化,骨髓细胞造血组织容量和成熟红细胞容量增加,脂肪组织容量减少,骨髓造血微环境得到有效改善。     

生血增白汤在小鼠骨髓移植后造血重建中的作用

目的 探讨生血增白汤对骨髓移植后小鼠骨髓中细胞间黏附分子(ICAM-1)、干细胞因子(SCF)表达水平的影响.方法 将实验动物采用随机数字表法分为5组各30只:正常组,未做任何处理;对照组、G-CSF组、生血组、生血+G-CSF组,建立小鼠骨髓移植模型,生血组及生血+G-CSF组胃饲生血增白汤浓缩煎剂.骨髓移植后的第9...     

生血丸对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用

目的观察生血丸对60Co合并环磷酰胺致骨髓抑制小鼠造血功能的影响,探讨该方促进全血细胞上调的作用机制。方法通过全自动血细胞分析仪检测外周血象;流式细胞术检测骨髓细胞细胞周期;ELISA(酶联免疫吸附法)检测骨髓基质中红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)、粒细胞生长因子(G-CSF)的量。结果 生血丸能明显改善骨髓抑制小鼠外周血中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HB)、血小板计数(PLT)、骨髓有核细胞(BMC)的量(P0.05),生血丸组升红细胞疗效更为突出(P0.05);生血丸组能解除G0/G1期细胞阻滞,促进G0/G1期细胞进入增殖周期;生血丸能有效平衡微环境中TPO的量;能改善EPO的表达;对骨髓抑制小鼠骨髓细胞上清中G-CSF有明显的正调控作用。结论生血丸能提高骨髓抑制小鼠外周血血细胞和骨髓有核细胞计数;可促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞从G0/G1期进入增殖周期;并能有效调节骨髓微环境中TPO、EPO和G-CSF的表达,从而促进骨髓抑制小鼠的造血功能。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用,用60 Coγ射线身全照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例,细胞固定后PI染色测定细胞周期,Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡,结果：四物汤对小鼠骨髓造 血干祖细胞,外周血细胞的恢复有明显促进作用,有保护骨髓和促进骨髓细胞由G1期进入S期的效应,四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡,促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一。     

补肾解毒活血法对骨髓抑制小鼠造血功能的影响

目的探讨补肾解毒活血法对骨髓抑制小鼠造血功能的影响。方法取昆明小鼠60只,随机分成空白对照组、模型组和中药治疗组,每组各20只,模型组和中药治疗组腹腔注射环磷酰胺100mg/(kg·d),连续3天;造模完成后次日起,中药治疗组给予补肾解毒活血中药浓煎液灌胃,0.36g/(kg·d),空白对照组与模型组灌服等量生理盐水,连续10天。各组随机抽取10只,于造模前1天及造模后第1、3、5、7、10、14天检测小鼠外周血象;其余10只于造模后第11天,颈椎脱臼处死,检测骨髓造血祖细胞集落形成和骨髓有核细胞(Bone Marrow Nucleated Cell,BMNC)的情况。结果外周血白细胞,模型组和中药治疗组均在造模后第1天降到最低点,与空白对照组相比差异均有显著性意义(P<0.01);模型组和中药治疗组均在第3天开始回升,中药治疗组在第5天恢复正常且保持稳定,而模型组在第7天出现异常性增高后又逐渐下降至正常。外周血血小板,模型组在模后第5天降到最低然后回升至第10天恢复正常,而中药治疗组自第3天即开始回升,第7天时即与空白对照组持平,其最低值明显高于模型组(P<0.01)。造模后第11天检测粒细胞-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、定向体外红系集落形成单位(CFU-E)、红细胞爆裂型集落生成单位(BFU-E)和小鼠骨髓有核细胞数(BMNC),模型组和中药治疗组均低于空白对照组(P<0.05),而中药治疗组高于模型组(P<0.01)。结论补肾解毒活血法治疗骨髓抑制可通过增加骨髓造血祖细胞数量,从而促进环磷酰胺致骨髓抑制小鼠外周血白细胞、血小板的稳定恢复。     

大黄素补骨脂素对辐射损伤小鼠造血功能的影响

目的通过观察大黄素、补骨脂素对辐射损伤模型小鼠的外周血有形成分、造血干/祖细胞和CD34+细胞表达的影响,探讨益髓生血颗粒治疗地中海贫血的药效物质基础。方法采用60Coγ射线3.5 Gy全身一次性照射,造成小鼠骨髓造血抑制、外周血象有形成分减少,致小鼠肾虚髓损。照射前大黄素、补骨脂素(60mg·kg-1,ig)预防给药2 d,造模后再连续给药14 d。在照射前及照射后的1,3,5,7,11,13,15,17,21 d检测外周血象;并在照后7d分别进行骨髓造血干/祖细胞集落培养(CFU-GM,CFU-E,BFU-E,CFU-Meg)及CD34+细胞检测。结果与照射对照组比较,从造模后第5天开始,G-CSF、大黄素、补骨脂素均表现出明显的促白细胞和血红蛋白升高的作用,但对红细胞均无明显的作用;在照射后7天,G-CSF、大黄素、补骨脂素均表现出显著促进CFU-GM,CFU-E的增殖的作用(P0.001),而对CFU-GM,CFU-E均表现出轻微的抑制作用;此外,三组药物对照射后7 d的小鼠骨髓CD34+细胞均有促进增殖的作用,其中G-CSF(P0.01)和大黄素(P0.05)的作用具有统计学意义。结论大黄素、补骨脂素可一定程度的提高照射损伤小鼠外周血白细胞和血红蛋白的含量,可提高照射后小鼠骨髓造血干/祖细胞及骨髓CD34+细胞的增殖。研究结果提示,大黄素、补骨脂素是益髓生血颗粒的部分有效活性组分,具有提高小鼠造血功能的作用。     

补肾益髓对辐射损伤小鼠造血功能的影响——对辐射小鼠外周血相影响的研究

目的:探讨补肾益髓方药(益髓生血颗粒)对辐射损伤致小鼠肾虚髓损模型的治疗作用.方法:采用60Co γ射线3.5Gy全身一次性照射,造成小鼠骨髓造血抑制、外周血象有形成分减少,致小鼠肾虚髓损.用益髓生血颗粒高、中、低剂量(含生药23.6,11.8,5.9g·kg-1,ig)照射前预防给药2d,造模后再连续给药14 d.在照射前、照射后1,3,5,7,11,13,15,17,21 d检测外周血象.结果:与模型组比较,阳性药粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在造模后1-17 d白细胞数显著升高(P＜0.05,P＜0.01);益髓生血颗粒各剂量组均能升高白细胞,高、中、低剂量组分别在造模后1,5,7,13,17 d,促进白细胞致升高(P ＜0.05或P＜0.01);照射后各组的红细胞、血红蛋白均有一定程度的下降,G-CSF和益髓生血颗粒各剂量组红细胞数在15,17d高于模型组(P＜0.05或P＜0.01);模型组血小板计数在照后5d开始下降,照后7d达最低值,此后缓慢回升,而用药组动物从照射后5d起较模型组恢复快,其中高剂量组在5,11,13d、中剂量在13 d明显高于模型组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).结论:益髓生血颗粒各剂量组均能显著升高辐射损伤致小鼠外周血白细胞数,能促进辐射损伤小鼠外周血红细胞、血红蛋白的恢复,促进照射小鼠外周血血小板数的回升,补肾益髓方药具有补肾填精保护骨髓促进造血作用.     

补肾生血药对顺铂损伤的小鼠骨髓间充质干细胞的影响

目的：观察补肾生血药对顺铂损伤的骨髓间充质干细胞（BMSC）的影响,探讨补肾生血改善化疗后骨髓抑制的机制。方法：将50只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、补肾生血药组,每组25只,分别制备补肾生血血清和空白血清,原代培养BALB/c小鼠BMSC,随机分组,CCK-8法确定顺铂和补肾生血血清干预浓度。干预48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,酶联免疫吸附试验法检测培养液中造血调控因子含量。结果：干预48 h后,骨髓细胞凋亡率明显增高（P<0.01）,补肾生血血清组G1期细胞比例显著降低（P<0.05）,S期细胞比例显著增加（P<0.05）,增殖期细胞比例明显增加（P<0.05）。补肾生血血清组骨髓细胞凋亡率明显降低（P<0.001）,G1期细胞比例显著降低（P<0.05）,增殖期细胞比例显著增加（P<0.05）,IL-3含量明显升高（P<0.01）,TNF-α、TGF-β、IFN-γ含量显著降低（均P<0.05）。结论：补肾生血药能减轻顺铂造成的BMSC凋亡,促进细胞进入增殖期,促进造血生长因子分泌,减少造血抑制因子分泌,提示该药对化疗后骨髓抑制具有一定的改善作用。     

不同剂量补髓生血颗粒对再生障碍性贫血模型大鼠外周血及骨髓的影响

目的:研究不同剂量补髓生血颗粒对再障模型大鼠的外周血及骨髓的影响是否有差异.方法:Wistar.大鼠用60Co-γ射线8.0Gy照射造成再障模型,分别给予不同剂量补髓生血颗粒灌胃治疗,连续给药3周后,取血进行外周血细胞计数,取股骨做骨髓病理组织学检查并进行有核细胞计数.结果:治疗后各剂量组比较,外周血白细胞计数及骨髓有核细胞计数无明显差异,高剂量组大鼠外周血中的血红蛋白含量及血小板计数高于低剂量组,高剂量组大鼠骨髓造血组织增生程度优于中、低剂量组.结论:不同剂量补髓生血颗粒对再障模型大鼠血红蛋白、血小板及骨髓造血组织增生的影响是不完全相同的.而对白细胞及骨髓有核细胞计数的影响无明显差异,导致这种对药物反应的差异性的原因尚待进一步研究.     

当归补血汤促进小鼠骨髓移植后造血组织重建的研究

目的:探讨当归补血汤对小鼠同基因骨髓移植(BMT)后骨髓造血组织重建的影响。方法:建立典型同基因BMT小鼠模型,随机分成BMT模型对照组和BMT+当归补血汤组,另取正常小鼠外周血及骨髓作空白对照。分别给以生理盐水、当归补血汤10g·kg^-1·d^-1灌胃治疗。于BMT后第1,11,22天观察外周血细胞、骨髓单个核细胞(BMMNC),镜下观察小鼠骨髓切片。结果:BMT+当归补血汤组第11,22天外周血白细胞、红细胞、血小板、BMMNC水平均显著高于BMT模型对照组(P<0.05或P<0.01),骨髓造血组织学情况也明显好于对照组。结论:当归补血汤有促进造血组织重建的作用。     

补肾活血方药对CAA患者骨髓单个核细胞C-met SF基因表达的影响

目的:探讨补肾活血方药对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓造血细胞C-met SF基因表达的影响。方法:60例CAA病人随机分为治疗组和对照组,治疗组给予补肾活血中药汤剂,每日1剂,分2次口服;对照组给予再障生血片,5片,每日3次,口服,疗程为3个月,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞C-met SFmRNA基因含量的变化。结果:CAA患者骨髓单个核细胞C-met SF mRNA表达水平高于正常对照组,治疗后C-met SF mRNA表达水平有不同程度下降,并且补肾活血方药对C-met SF表达水平的下调程度优于再障生血片组(P<0.05)。结论:CAA患者骨髓C-met SF的基因表达存在异常;补肾活血方药可能通过调节骨髓C-met SF基因的表达而改善CAA的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复。     

复方活血汤对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血细胞粘附分子及细胞周期蛋白表达作用

目的：探讨复方活血汤（简称中药）对免疫诱导的再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓造血细胞粘附分子及细胞周期蛋白表达的作用。方法：建立免疫诱导的再障小鼠模型，喂饲１００％复方活血汤每次０２ｍｌ，每日２次，第１３日用流式细胞仪检测小鼠骨髓单个核细胞β１整合素家族（ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９，α４β１；又称ＶｅｒｙＬａｔｅＡｎｔｉｇｅｎｓ，ＶＬＡ家族）及细胞周期蛋白Ｄ２的表达水平。结果：中药组ＣＤ４９ｄ表达明显高于再障组（Ｐ＜００５），且与正常组无明显差异；中药组细胞周期蛋白Ｄ２表达明显高于再障组（Ｐ＜００１）；而其Ｇ０＋Ｇ１期细胞数显著低于再障组（Ｐ＜００１）。结论：复方活血汤能增强免疫再障小鼠骨髓造血细胞粘附分子ＣＤ４９ｄ和细胞周期蛋白Ｄ２的表达，促进造血细胞的增生。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓基质细胞碱性成纤维细胞生长因子及其受体的影响

目的观察补髓生血颗粒对治疗慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)患者的临床疗效及骨髓基质细胞相关细胞因子的影响。方法将124例CAA患者按随机数字表法分为两组,试验组(61例)使用补髓生血颗粒治疗,对照组(63例)使用再造生血片治疗,疗程均为6个月,并设立10名健康人作为正常对照组。观察患者治疗前后症状积分、疗效判定与外周血象的变化,采用RT-PCR法检测CAA患者治疗前后骨髓基质细胞中碱性成纤维细胞生长因子(b-fibroblast growth factors,bFGF)及碱性成纤维细胞生长因子受体(b-fibroblast growth factors receptor,bFGFR)信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达变化。结果试验组总有效率(75.0%,45/61)明显优于对照组(58.7%,37/63),其症状积分及外周血象明显改善,也明显优于对照组(P<0.05)。CAA患者骨髓基质细胞bFGF及bFGFRmRNA表达水平较正常对照组明显降低(P<0.05),治疗后两组bFGF与bFGFRmRNA表达水平均有所提高(P<0.05,P<0.01),且试验组优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论补髓生血颗粒具有较好的临床疗效,能改善CAA患者症状积分以及外周血象,提高临床疗效,且对细胞因子bFGF与bFGFRmRNA表达水平有调节作用,通过调控CAA骨髓基质细胞的增殖和定向分化以及促进骨髓新生血管的形成改善了造血微环境,促进骨髓造血功能的恢复。     

益髓生血颗粒对AA大鼠CD4 + CD25 + Foxp3调节性T细胞的影响

目的：观察益髓生血颗粒对再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）大鼠CD4 + CD25 + 调节性T细胞（Regulatory T Cell,Treg细胞）的影响及其治疗AA的作用机制。方法：取雄性SD大鼠按体重随机分组。其中模型组连续7周隔天皮下注射苯（1 mL ? kg -1 ）、取材10天前开始腹腔注射环磷酰胺（25 mL ? kg -1 ）,连续3天,第4周将模型组大鼠按体重随机分为模型组、司坦唑醇组、益髓生血颗粒组,灌胃给药。正常组及模型对照组给予等体积生理盐水。实验结束时,检测外周血WBC、RBC、HGB、PLT;制备血涂片、骨髓涂片;免疫组织化学法检测脾组织Treg细胞Foxp3蛋白表达;RT-PCR法检测骨髓组织Foxp3 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组WBC、RBC、HGB、PLT均显著减少（P<0.01）,血涂片示血细胞通透性差、白细胞减少、退化细胞增多,骨髓涂片示脂肪滴明显增加、造血细胞均明显降低、非造血细胞增多;经益髓生血颗粒组治疗后WBC、RBC、HGB、PLT均显著增加（P<0.01）,血涂片及骨髓涂片显示细胞通透性好转、形态趋于正常、脂肪滴明显减少,造血细胞均明显增加,脾组织Foxp3蛋白及骨髓组织Foxp3 mRNA表达明显升高（P<0.01）。结论：益髓生血颗粒可上调Foxp3的因及蛋白表达,调控AA免疫功能,进而改善AA免疫环境,促进骨髓造血功能的恢复,发挥治疗AA的重要作用。     

脑心通胶囊促进后下肢缺血损伤小鼠内皮祖细胞动员与归巢

内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是一种能分化为血管内皮细胞的前体细胞,组织缺血缺氧所产生的信号分子可促使骨髓EPCs动员至外周循环,并归巢于损伤组织参与新生血管的形成。脑心通胶囊(Naoxintong capsule,NXT)具有活血化瘀、行气止痛之功效,其多成分具有血管保护作用,可以有效改善组织缺血症状,但其对EPCs动员和归巢的作用尚不明确。该研究采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)联合后下肢缺血损伤模型(unilateral hind limb ischemia,UHLI)研究脑心通胶囊对EPCs动员和归巢的作用。受体小鼠经CS137全身照射后,从目内眦静脉丛输注GFP标记的骨髓单个核细胞,建立BMT模型,经过4周骨髓重建后取外周血检测GFP阳性细胞比例。取BMT模型成功的小鼠,采用股动脉结扎复制UHLI模型,术后随机分为3组:模型组、NXT组(模型+NXT)和阳性对照组(模型+辛伐他汀)。采用流式细胞术检测骨髓重建4周后GFP阳性细胞比例,术前及术后第1,3,7,14天外周血中EPCs细胞数;采用免疫荧光组织化学染色检测给药3,7 d缺血腓肠肌组织EPCs细胞归巢数目。BMT小鼠与GFP基因鼠相比,GFP阳性细胞比例无显著性差异;术后1,3 d,NXT组和辛伐他汀组外周血EPCs数量显著性上调;术后3,7 d,NXT组和辛伐他汀组EPCs归巢数量显著高于模型组(P0.001),因此脑心通胶囊能显著促进EPCs的动员与归巢。