栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究

[目的]探讨栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制。[方法]体外培养H9C2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。实验分为正常对照组,缺氧/复氧模型组,栀子苷预处理组。分光光度法测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量以及过氧化物歧化酶(SOD)活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术测定细胞凋亡率。[结果]与模型组比较,栀子苷预处理组能明显减少心肌细胞CK、LDH的漏出量,提高SOD活力,降低MDA含量,同时提高心肌细胞的存活率,减少心肌细胞的凋亡。[结论]栀子苷预处理对H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与增强心肌抗氧化能力、清除氧自由基以及抑制心肌细胞凋亡有关。     

丹皮酚和芍药苷配伍对大鼠心肌缺血损伤的保护作用

目的:研究丹皮酚和芍药苷配伍对实验性心肌缺血大鼠心肌损伤的保护作用.方法:采用在体结扎大鼠心脏冠状动脉前降支法建立大鼠心肌缺血损伤模型.实验分为假手术组、模型组、阳性药对照组(复方丹参片840 mg·kg-1)、丹芍配伍高剂量组(丹皮酚100 mg·kg-1+芍药苷25 mg·kg-1)、丹芍配伍中剂量组(丹皮酚50 mg·kg-1+芍药苷12.5 mg·kg-1)、丹芍配伍低剂量组(丹皮酚25 mg·kg-1+芍药苷6.25 mg· kg -).ig给药容积10 mL·kg-1,连续给药5d,1次/d,假手术组和模型组ig等量生理盐水.观测大鼠心电图(ECG),测定大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,硝基四氮唑蓝(N-BT)染色测定心肌梗死面积.结果:与梗死模型组比较,丹芍配伍高、中剂量组均可明显减轻冠脉结扎形成的大鼠急性心肌缺血性心电图的(ST段抬高及T波高耸)变化程度(P＜0.05),缩小心肌梗死面积(P＜0.05或P＜0.01),同时能够降低血清中AST、CK、LDH的升高程度(P＜0.05或P＜0.01).结论:丹芍配伍对大鼠急性心肌缺血损伤具有明显保护作用.     

黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的影响

目的:观察黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞干预作用。方法:H9c2心肌细胞培养,传代后随机分为5组,对照组、缺氧/复氧组、黄芪甲苷药物预处理组:培养液中加入终浓度分别为25、50和100μmol/L的黄芪甲苷预处理,12h后进行缺氧/复氧处理。分别收取细胞培养上清液,用酶联免疫吸附技术(Elisa)测定上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;采用RT-PCR技术检测NF-κB的基因表达。结果:黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)预处理12h后可明显降低IL-6、TNF-α、MDA的含量,可明显提高SOD含量,并可以减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平,并且具有一定的量效关系。结论:黄芪甲苷保护缺氧/复氧对H9c2心肌细胞损伤,通过提高SOD含量,降低MDA含量,发挥抗氧化作用,并且抑制炎性因子IL-6、TNF-α分泌,其机制与减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平有关。     

丹皮酚和芍药苷配伍对急性心肌缺血模型大鼠的保护作用

目的 研究丹皮酚和芍药苷配伍(简称:丹芍配伍)对实验性心肌缺血大鼠心肌损伤的保护作用.方法 采用在体结扎大鼠心脏冠状动脉前降支法建立大鼠心肌缺血损伤模型.观察丹芍配伍对大鼠心电图、心肌梗死面积、超氧歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)、CK(肌酸激酶)、LDH(乳酸脱氢酶)的影响.结果 与梗塞模型组比较,丹芍配伍能够显著减轻冠脉结扎形成的大鼠急性心肌缺血性心电图(ST段抬高及T波高耸)的变化程度(P＜0.05),降低梗死占全心面积的百分比,同时能够降低血清中AST、CK、LDH、MDA的含量,升高血清SOD、GSH-Px的含量.结论 丹芍配伍能通过保护心肌细胞、抗氧化而发挥对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用.     

基于蛋白组学探讨丹皮酚和芍药苷配伍抗心肌缺血损伤的作用机制

该研究观察丹皮酚和芍药苷配伍对心肌缺血损伤大鼠心肌蛋白差异表达的影响,探讨二者配伍抗心肌缺血损伤的作用机制.首先通过左冠状动脉前降支结扎术构建急性心肌梗死大鼠模型,用丹皮酚和芍药苷配伍对该模型大鼠进行灌胃给药.然后取大鼠心肌组织提取蛋白样品,运用串联质谱标签(tandem mass tags,TMT)定量蛋白质组学研究...     

川芎嗪预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的实验研究

目的:观察川芎嗪预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的保护。方法:利用心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,川芎嗪注射液预处理对心肌细胞进行预处理。结果:川芎嗪提高心肌细胞缺氧/复氧损伤后心肌细胞存活率、减少细胞丙二醛产生、减少乳酸脱氢酶的漏出。结论:川芎嗪对乳鼠心肌细胞有预处理保护作用。其机制与提高心肌细胞抗氧自由基的能力,抑制脂质过氧反应,减轻心肌细胞膜脂质过氧化损伤,保持细胞膜结构的完整性来实现的。     

银杏叶提取物对缺氧复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的:通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型,观察银杏叶提取物(EGB)对心肌细胞缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的影响,为心脏缺血/再灌注损伤的防治提供理论依据。方法:采用胶原酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞。分正常对照组、H/R组、H/R+银杏叶提取物组,用MTT法观察心肌细胞存活率、用Western blotting测定Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与空白对照组相比,H/R组心肌细胞存活率显著降低,Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax表达水平上调;银杏叶提取物预处理后进行H/R较大程度地逆转了上述指标变化,与H/R组相比差异均有显著性(P<0.05)。结论:H/R可以诱导心肌细胞损伤;银杏叶提取物可以通过上调Bcl-2,下调Bax而减轻心肌细胞凋亡,对心肌细胞有保护作用。     

黄芪总苷对大鼠神经元缺氧/复氧损伤的影响

目的 探讨黄芪总苷（astragalosides, AST）对大鼠神经元缺氧/复氧损伤的影响。 方法 建立原代培养的大鼠海马神经元的缺氧/复氧模型。采用四唑蓝（MTT）法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞活力;检测细胞上清液中丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性;Hoechst染色和AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;采用激光共聚焦显微镜和Ca2+荧光探针Fluo-3/AM观察细胞内游离钙[Ca2+]i。 结果 黄芪总苷可以提高缺氧/复氧后神经元的活力,降低细胞上清液中MDA和NO含量,提高SOD活性,降低细胞凋亡率,减轻神经元内的钙超载。 结论 黄芪总苷对缺氧/复氧损伤的神经元具有保护作用,其机制可能与抗氧化和减轻钙超载有关。     

皂荚皂苷对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究皂荚皂苷对缺氧/复氧(H/R)诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法采用原代培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分9组:正常对照组,H/R组,H/R 皂荚皂苷(100,50,25,12.5,6.25,3.12,1.56μg·mL-1)剂量组。观察各组细胞经H/R损伤后,细胞内天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化情况。结果皂荚皂苷(50,25,12.5,6.25μg·mL-1)剂量组可显著降低缺氧/复氧损伤心肌细胞内AST、CK、LDH释放量及MDA的生成,并能提高SOD活性。结论皂荚皂苷具有明显的抗缺氧/复氧损伤,保护心肌细胞的作用。     

HO-1介导黄芪甲苷抗原代心肌细胞缺氧/复氧损伤作用研究

[目的]研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及机制。[方法]培养乳鼠原代心肌细胞,以缺氧4 h,复氧4 h建立心肌H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力。检测细胞培养液中心肌肌钙蛋白(cTnT)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,炎症细胞因子超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。分别以聚合酶链式反应逆转录(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌细胞血红素氧化酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达水平。[结果]与H/R组比较,AS-Ⅳ、HO-1激动剂原卟啉氯化钴(CoPP)均可显著降低细胞上清中cTnT、LDH含量(P0.01),降低炎症因子hs-CRP、TNF-α水平(P0.01),而HO-1拮抗剂原卟啉Ⅸ锌(Ⅱ)络合物(ZnPP)作用趋势则相反。与H/R组比较,CoPP组及AS-Ⅳ组HO-1 m RNA、蛋白表达水平显著升高(P0.01),ZnPP组则显著下降(P0.01)。[结论]AS-Ⅳ对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有显著的保护作用,其机制与诱导具有保护作用的HO-1表达有关。     

黄芩茎叶总黄酮对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalelensis stem leaf total flavonoid SSTF)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧时凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,缺氧(hypoxia H)2h后,复氧(reoxygenation R)4h制备缺氧/复氧损伤模型。以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化。心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率表示。结果:缺氧2h再复氧4h,心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达指数(positive expressionindex PEI)显著低于对照组(P<0.01),Bax蛋白PEI显著高于对照组(P<0.01)。细胞存活率明显低于对照组(P<0.05)。SSTF干预组Bcl-2蛋白PEI明显高于缺氧/复氧组(P<0.05),Bax蛋白PEI显著低于缺氧/复氧组(P<0.05),细胞存活率明显高于缺氧/复氧组(P<0.05)。结论:心肌细胞缺氧再复氧时,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增强;细胞存活率降低。SSTF可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,减少细胞凋亡,从而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤时NO产量增加的抑制作用

目的 :观察葛根素对缺氧 复氧损伤诱导的大鼠乳鼠心肌细胞一氧化氮 (NO)产生的作用。方法 :采用硝酸还原酶法测定对照组、模型组、及 1,0 .1,0 .01g·L^-1Pue给药组在各个时间点时细胞培养上清液中NO含量的变化。结果 :复氧开始后 ,模型组NO合成显著性地增加 (P<0 .0 1)。复氧后 6h ,NO合成激增 ,并一直保持。 3种剂量的Pue在复氧后 6h才表现显著性抑制 (P<0.01)NO合成的作用 ,并保持至其后 24h。结论 :在NO合成量激增时Pue才表现出显著降低缺氧 复氧损伤时心肌细胞分泌的NO ,并呈剂量依赖趋势。     

四逆汤类方提取物对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：探讨四逆汤类方提取物对离体培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用。方法：培养的乳鼠心肌细胞经终浓度分别为1、5、25μg／mL的四逆汤类方提取物预处理，进行缺氧／复氧损伤后，比色法测定细胞内线粒体脱氢酶活性、丙二醛(MDA)含量及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果：与对照组比较，附子、干姜配葱白提取物(EAGO)，附子、干姜配甘草提取物(EAGL)，附子、干姜配胆汁提取物(EAGB)，附子、干姜配人参提取物(EAGG)可以提高细胞内线粒体脱氢酶活性，与附子配干姜提取物(EAG)组比较无显著差异。EAGO、EAGL、EAGB、EAGG可以降低上清液中乳酸脱氢酶活性，与EAG组比较差异显著。EAGL、EAGG可以降低细胞内MDA含量，与FAG组比较差异显著。结论：四逆汤类方均可以提高缺氧／复氧损伤的乳鼠心肌细胞内线粒体脱氢酶活性，降低上清液中乳酸脱氢酶活性。四逆汤和人参四逆汤提取物有降低细胞内MDA的作用。提示四逆汤类方对缺氧／复氧损伤的心肌细胞均有保护作用。     

HPLC测定柴芍丸中芍药苷、栀子苷及丹皮酚的含量

目的:建立以高效液相色谱法同时测定柴芍丸中芍药苷、栀子苷及丹皮酚含量的方法。方法:色谱柱为InertsilODS-SP(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长230 nm,流速1.0 mL.min-1。结果:芍药苷在0.494 4～12.36μg(r=1)线性关系良好,平均回收率为98.77%,RSD 2.1%;栀子苷在0.492 2～12.305μg(r=0.999 9)线性关系良好,平均回收率101.64%,RSD 1.9%;丹皮酚在0.260 2～6.505μg(,r=0.999 9)线性关系良好,平均回收率100.92%,RSD1.7%。结论:方法简便、快速、重复性好,可用于柴芍丸的质量控制。     

薯蓣皂苷对缺氧/复氧心肌细胞损伤的抗氧化作用研究

目的评价薯蓣皂苷对心肌细胞的抗氧化保护作用。方法对培养的乳鼠心肌细胞造成缺氧/复氧损伤模型,比较正常对照组、缺氧/复氧损伤组、以及薯蓣皂苷各组(10ml/L、30ml/L、100ml/L)培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量。结果缺氧/复氧损伤组SOD活性明显降低,MDA和NO含量较正常显著升高;而薯蓣皂苷中、高剂量组上述指标都有不同程度的改善。结论薯蓣皂苷对缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤具有保护作用,并呈现剂量依赖关系,作用机制与增强细胞抗氧化作用、减轻自由基和脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关。     

HPLC测定丹芍方提取物中丹皮酚、芍药苷的含量

目的:建立HPLC同时测定丹芍方提取物中丹皮酚、芍药苷含量的方法.方法:采用ODSHYPERSIL色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),乙腈-水梯度洗脱,柱温32℃,流速0.8 mL·min-1,检测波长230,274 nm.结果:丹皮酚、芍药苷分别在0～0.202 1,0～ 27.960 0 μg线性关系良好,平均回收率分别为97.40％,101.35％,RSD分别为1.18％,0.48％.结论:3批样品测定结果表明,建立的方法简便、准确、重复性好,可以用于丹芍方提取物中丹皮酚、芍药苷的含量测定.     

HPLC法同时测定参麦地黄丸中丹皮酚芍药苷和马钱苷的含量

目的：建立一种HPLC方法同时测定参麦地黄丸中丹皮酚、芍药苷和马钱苷的含量。方法：采用HPLC法,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18（4.6mm×250mm,5μm）柱,流动相：以乙腈-水为流动相,进行梯度洗脱;流速：1.0mL.min-1;柱温：30℃;检测波长：236nm（0～8min）→230nm（8～12min）→274nm（12～30min）。结果：丹皮酚、芍药苷和马钱苷线性范围分别为8.17～163.36μg·mL-1（r=0.9999）,2.37～48.54μg·mL-1（r=0.9997）和2.71～31.82μg·mL-1（r=0.9998）,平均加样回收率分别为98.62%（RSD=1.78%）,97.58%（RSD=0.91%）和99.00%（RSD=2.56%）。结论：新建方法简便、准确、易行,可用于控制制剂质量。     

同株凤丹皮的不同部位中丹皮酚和芍药苷的含量比较

目的:采用高效液相色谱法,比较同地同株凤丹皮中不同部位的丹皮酚和芍药苷含量差异。方法:采用Waters VP-ODS-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);丹皮酚含量测定流动相甲醇-水(55∶45),检测波长274 nm,柱温35℃,流速1.0mL·min-1;芍药苷含量测定流动相乙腈-0.1%H3PO4(20∶80),检测波长230 nm,柱温35℃,流速1.0 mL·min-1。结果:丹皮酚在1.073~5.365μg,芍药苷在0.593~2.965μg均呈良好线性关系,相关系数分别为0.999 9,0.999 1,平均回收率丹皮酚为99.96%(RSD 0.72%),芍药苷为99.03%(RSD 0.49%)。结论:在选定的同株凤丹皮最细部位的丹皮酚和芍药苷含量均高于最粗部位及中等部位。     

刺囊酸预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

 目的 研究刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法 用终浓度分别为0.5, 5和50 μmol·L^-1的刺囊酸预处理原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞1 h, 予以缺氧3 h后, 再复氧2 h后,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛含量及热休克蛋白70表达等指标,观察其对缺氧/复氧损伤的延迟保护作用,并探讨一氧化氮合成酶抑制剂0.1 mmol·L^-1的N-硝基-L-精氨酸甲酯、促分裂原活化蛋白激酶抑制剂50 μmol·L^-1的PD98059和1 μmol·L^-1K⁺-ATP通道阻断剂格列苯脲对其保护作用的影响。结果 与缺氧/复氧组比较,不同剂量的刺囊酸预处理组能显著提高细胞存活率,降低乳酸脱氢酶活性,呈剂量依赖性,且显著能增加超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低丙二醛含量,增加热休克蛋白70表达,能对抗缺氧/复氧损伤;而N-硝基-L-精氨酸甲酯和PD98059能部分取消刺囊酸预处理的上述保护作用。结论 刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤有显著抗氧化作用,且其保护作用机制可能与一氧化氮生成、促分裂原活化蛋白激酶活化及增加热休克蛋白70表达有关。