芪红合剂含药血清对体外培养人外周血内皮祖细胞NO及NOS的影响

目的观察芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞（EPCs）一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的影响,探讨其对人外周血内皮祖细胞的保护机制。方法12只雄性Wistar大鼠随机分为芪红合剂组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采集健康成人外周血,分离单核细胞,体外培养7d后,收集贴壁细胞,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪鉴定正在分化的EPCs,加入含不同浓度芪红合剂药物血清及空白血清的M199培养基孵育24h,将其在倒置荧光显微镜下计数,硝酸还原酶法测定NO,化学比色法测定NOS。结果芪红合剂药物组的血清NO水平和NOS活性明显高于空白血清对照组（P〈0.05）,并且呈剂量依赖性。结论芪红合剂可能通过增加EPCsNOS活性,促进NO分泌,防止血管内皮损伤及动员血管内皮祖细胞修复损伤血管来发挥血管内皮保护作用。     

血府逐瘀汤诱导内皮祖细胞对心肌缺血模型大鼠缺血区血管新生的影响

目的 观察血府逐瘀汤诱导内皮祖细胞(EPCs)对心肌缺血模型大鼠缺血区血管新生的影响,探讨其作用机制.方法 采用结扎冠状动脉左前降支方法 制备急性心肌缺血模型.实验大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、他汀组和血府逐瘀汤低、中、高剂量组.造模后将荧光标记的EPCs尾静脉注射植入模型大鼠体内,成模后灌胃给药,给药第3日和...     

血府逐瘀汤动员骨髓内皮祖细胞的影响因素分析

目的探讨血府逐瘀汤影响血管新生的相关因素。方法将24只SD大鼠随机分成血府逐瘀汤高、中、低剂量组和空白对照组,分别检测各组大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、促红细胞生成素(EPO)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)和一氧化氮(NO)的含量,观察血府逐瘀汤对内皮祖细胞动员因素的影响。结果与空白对照组比较,血府逐瘀汤高剂量组对血清VEGF、血府逐瘀汤中剂量组对血清SDF-1和GM-CSF,3个药物剂量组对血清NO的水平均有显著提高(P0.05或P0.01),但高、中剂量组均能降低血清G-CSF的含量(P0.05)。结论血府逐瘀汤可通过提高VEGF、SDF-1、GM-CSF和NO的水平动员骨髓内皮祖细胞参与血管新生,动员途径呈现多样性和复杂性。     

血府逐瘀汤药理作用及临床应用研究进展

正血府逐瘀汤为清代王清任《医林改错》方。方中桃仁、红花、赤芍、川芎活血祛瘀,配伍当归、生地黄活血养血,柴胡、枳壳条达气机,桔梗载药上行,牛膝引瘀血下行。诸药合用共奏活血化瘀之功。现将血府逐瘀汤的药理作用及临床应用进展综述如下。1药理作用抗动脉硬化作用。血府逐瘀汤通过提高体内NO水平,改善NO/ET平衡,改善内皮功能,保护血管内皮,并且可以促进缺血区血管新生,促进加快坏死区肉芽组织的良性生长,改善缺血区供血,从而促进修复坏死组     

血管内皮生长因子通路在血府逐瘀汤影响内皮祖细胞功能中的作用研究

目的:观察血府逐瘀汤对内皮祖细胞(EPC)功能以及血管内皮生长因子-血管内皮生长因子受体(VEGF-VEGFR)的影响。方法:血府逐瘀汤含药血清和空白对照血清诱导处理内皮祖细胞后,采用MTT,Boyden小室、黏附试验和RT-PCR技术分别观察药物对EPCs增殖、迁移、黏附以及VEGF-VEGFR转录的影响。结果:与空白对照组相比,10%含药血清对EPC增殖和黏附均有明显促进作用;药物对细胞迁移的影响表现为从5%含药血清的显著抑制到10%和15%含药血清的显著促进作用,且10%和15%含药血清均可明显上调VEGF和VEGFR的转录。结论:血府逐瘀汤通过上调VEGF-VEGFR通路,影响内皮祖细胞功能,具有诱导内皮祖细胞参与血管新生的作用。     

血府逐瘀汤联合5-氟尿嘧啶治疗小鼠移植性肿瘤的实验研究

目的探讨化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合血府逐瘀汤治疗小鼠移植性肿瘤的效果。方法72只小鼠常规移植肿瘤细胞H22制作移植肿瘤模型后,随机分为6组,并予生理盐水、5-Fu注射及血逐瘀汤低、中、高剂量灌胃和5-Fu与血府逐瘀汤的剂量联合应用观察其抑瘤作用和肿瘤坏死情况。结果联合治疗可以降低5-Fu的毒副反应,且小鼠抑瘤率明显高于血府逐瘀汤组和血府逐瘀汤组小鼠肿瘤可见明显的较大面积坏死区。结论抗血管生成制剂血府逐瘀汤联合5-Fu治疗小鼠移植性肿瘤有较好疗效。     

血府逐瘀汤对心肌缺血大鼠模型血清NO及缺血区心肌组织VEGF、DLL4蛋白表达的影响

目的：探讨血府逐瘀汤对心肌缺血大鼠模型缺血区心肌血管新生的影响及其祛瘀生新（生新络）作用机制。方法：采用结扎大鼠冠状动脉左前降支制备急性心肌缺血模型,用血府逐瘀汤进行干预,分别于第7天、第14天处死动物取血,采用硝酸还原酶法检测大鼠血清NO的含量,HE染色观察缺血区心肌形态学的改变,免疫组化法检测缺血区心肌血管内皮细胞生长因子（VEGF）、Delta样配体4（Delta-like ligand 4,DLL4）蛋白的表达。结果：与假手术组比较,模型组血清NO含量明显降低（P〈0.01）,缺血区心肌VEGF、DLL4蛋白表达增加（P〈0.05）;与模型组比较,血府逐瘀汤组、麝香保心丸组血清NO含量均升高（P〈0.05）,缺血区心肌VEGF、DLL4蛋白表达明显增加（P〈0.01）。结论：血府逐瘀汤可促进心肌缺血大鼠模型缺血区心肌血管新生,对实验性心肌缺血损伤有保护作用,其祛瘀生新（生新络）作用与提高血清NO含量及缺血区VEGF、DLL4蛋白表达有关。     

血府逐瘀汤对内皮祖细胞功能的影响

目的:观察血府逐瘀汤对骨髓内皮祖细胞功能的影响。方法:用不同浓度的血府逐瘀汤含药血清和空白对照血清诱导处理内皮祖细胞后,采用MTT、Boyden小室、黏附和吞噬实验观察药物对EPCs增殖、迁移、黏附和吞噬能力的影响。结果:与空白对照组比较,24h15%浓度,48h10%浓度的含药血清对EPCs增殖有明显促进作用;10%和15%含药血清作用3个时间段对EPCs的迁移和黏附功能均有显著的促进作用,但5%含药血清影响黏附功能的作用从抑制到促进;10%和15%药物作用48h均可影响EPCs的吞噬功能,诱导时间延长至72h,只有10%浓度有显著性差异。结论:血府逐瘀汤能显著影响内皮祖细胞增殖、迁移、黏附和吞噬ac-LDL的能力,提示其具有诱导内皮祖细胞转化成内皮细胞参与血管新生的作用。     

血府逐瘀汤诱导内皮细胞血管新生中一氧化氮的作用

目的研究血府逐瘀汤促进内皮细胞参与血管新生的作用机制。方法选择SD大鼠12只,随机分为血府逐瘀汤组和空白对照血,每组6只。分别制备血府逐瘀汤含药血清和空白对照血清,采用1.25%、2.5%、5.0%不同浓度血府逐瘀汤含药血清和空白对照血清诱导内皮细胞48h,检测不同浓度血清对内皮细胞ECV304增殖、迁移和体外成血管的影响,并检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)浓度、胞内NO浓度和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)活性及表达。结果与空白对照组相同血清含量比较,1.25%、2.5%药物浓度下细胞增殖明显增加(P<0.05),2.5%、5.0%药物浓度下迁移细胞数明显增加(P<0.01),各药物浓度下管腔个数均明显增加(P<0.01);各浓度药物均可显著提高内皮来源的胞内、胞外NO浓度及eNOS表达(P<0.05或P<0.01),1.25%、2.5%浓度药物还可显著提高eNOS的活性(P<0.05或P<0.01)。结论血府逐瘀汤通过促进eNOS的表达和活性,提高胞内、外气体分子NO水平发挥促血管新生作用。     

川芎赤芍干预脑缺血再灌注大鼠血管新生的实验研究

目的:观察川芎赤芍对大鼠脑梗死再灌注后血管生成素-1(Ang-1)、缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)的影响。方法:线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,将SD大鼠随机分为空白组、模型组、川芎赤芍低、高剂量组、银杏叶片组。ELISA法测定大鼠血清Ang-1,实时荧光定量PCR方法检测缺血脑组织HIF-1a mRNA表达。结果:大鼠血清Ang-1测定:给药3d、7 d、14 d模型组与空白组相比升高,具有统计学意义(P0.05);给药3 d、7 d、14 d模型组与川芎赤芍低剂量组、高剂量组、银杏叶组相比水平低,具有统计学意义(P0.05);实时荧光定量PCR检测HIF-1a mRNA:给药3 d、7 d、14 d模型组与空白组相比表达升高,具有统计学意义(P0.05);给药3 d、7 d、14 d模型组与川芎赤芍低剂量组、高剂量组、银杏叶组相比表达水平低,具有统计学意义(P0.05)。结论:川芎赤芍可升高缺血再灌注大鼠血清中Ang-1的水平及缺血脑组织中HIF-1a mRNA的表达,提示川芎赤芍治疗脑梗死机制可能与促进血管新生有关。     

血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞一氧化氮适度刺激作用的研究

目的：探讨血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞一氧化氮（Nitric oxide,NO）产生的影响。方法：以人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cell -12,HUVEC-12）为材料,采用不同血府逐瘀汤含药血清浓度和干预时间处理HUVEC-12,检测细胞培养上清液中NO浓度的变化。结果：与空白对照组对比,血府逐瘀汤可在一定干预时间段,适度诱导HUVEC-12胞外NO的产生（ P＜0.05）。结论：血府逐瘀汤可能通过适度刺激人内皮细胞NO产生,发挥促进血管新生作用,又避免增生过度的不良反应。     

预适应对肢体缺血再灌注后血浆和肺组织NO/ET-1的影响

目的:观察肢体缺血预适应对大鼠肢体缺血再灌注后血浆和肺组织NO/ET-1比值的影响。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C),肢体缺血再灌注组(LIR),缺血预适应组(IPC),每组8只。分别测定血浆及肺组织一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)含量,计算NO/ET-1比值。结果:LIR组血浆及肺组织的NO/ET-1比值明显减小;与LIR组比较,IPC组血浆及肺组织的NO/ET-1比值明显增大,差异均具有显著性。结论:缺血预适应可以调节肢体缺血再灌注后NO/ET-1比值失平衡而使组织损伤减轻。     

丹参饮对胃溃疡大鼠部分粘膜防御因子的影响

目的观察丹参饮对乙酸性胃溃疡大鼠部分粘膜防御因子的影响,探讨其抗溃疡的可能作用机制.方法用乙酸涂抹法建立SD大鼠胃溃疡模型,分别给予生理盐水、雷尼替丁、丹参饮治疗14 d后,检测溃疡指数、血清NO、血浆PGE2和溃疡底部肉芽组织内微血管的数量.结果丹参饮组和雷尼替丁组的溃疡指数均明显小于模型组(P＜0.01);模型组NO、PGE2含量比正常组均有所减少,而微血管数有所增加;与模型组比较,丹参饮组血清NO和血浆PGE2含量明显提高,溃疡底部微血管数量亦有显著增加,7 g/kg丹参饮的疗效优于雷尼替丁(P＜0.05).结论提高血清NO、血浆PGE2的含量、促进溃疡底部血管生成可能是丹参饮抗胃溃疡的作用机制之一.     

血府逐瘀汤影响小鼠骨髓造血干细胞的实验研究

目的观察血府逐瘀汤对小鼠骨髓造血干细胞的数量、表型、细胞周期和集落形成能力的影响。方法昆明小鼠随机分为对照组及血府逐瘀汤高（13g/kg）、中（6.5g/kg）、低剂量（3.25g/kg）组,灌胃给药7天后,分离骨髓造血干细胞,进行细胞计数,流式细胞仪检测造血干细胞表型Sca和细胞周期,并采用甲基半固体培养基检测集落的形成。结果各组小鼠骨髓单核细胞和悬浮细胞数量以及集落产率差异无显著性（P〉0.05）,但低剂量组CD34和Sca-1的表达提高（P〈0.05）,中剂量组只能明显增加Sca-1的表达（P〈0.05）。结论血府逐瘀汤通过增加较早期造血干细胞的数量和功能,提高造血能力,从而达到去瘀生新的作用。     

通痹合剂乙酸乙酯部位调节CIA大鼠细胞免疫的作用机制研究

目的评价通痹合剂乙酸乙酯部位(TBHJ)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的影响,揭示其抗炎抗风湿的作用机制。方法牛Ⅱ型胶原混合弗氏完全佐剂于Wistar大鼠尾根部注射造模,随机分为模型组,甲氨蝶呤(MTX)组和TBHJ治疗组,容积法评价后肢肿胀度;给药后30 d,乳腺钼靶机大鼠四肢摄片,计分法评价各组大鼠X光片四肢96块骨侵蚀和100个关节间隙变化;处死动物,取后肢踝关节苏木素-伊红染色,观察中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润,滑膜细胞增生和软骨破坏的情况;免疫组化法观察关节内IL-17和CD28表达;RT-PCR法比较CD28 mRNA表达。结果 CIA大鼠出现严重的关节炎症和破坏,TBHJ给药后7 d即可明显抑制CIA大鼠关节肿胀;给药后30 d,TBHJ和MTX可明显抑制大鼠关节肿胀和关节破坏,与模型组比较有统计学差异(P<0.01);TBHJ可明显抑制CIA大鼠中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞的浸润、滑膜增生和软骨破坏(P<0.05),MTX可抑制滑膜增生和软骨破坏;CIA大鼠IL-17,CD28 mRNA和蛋白表达明显增加,TBHJ可明显抑制IL-17和CD28。结论 TBHJ具有抑制关节免疫炎症和关节破坏的作用,其机制可能是通过抑制T细胞第二信号分子CD28的表达,减少IL-17的产生实现的。     

脑心通胶囊促进后下肢缺血损伤小鼠内皮祖细胞动员与归巢

内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是一种能分化为血管内皮细胞的前体细胞,组织缺血缺氧所产生的信号分子可促使骨髓EPCs动员至外周循环,并归巢于损伤组织参与新生血管的形成。脑心通胶囊(Naoxintong capsule,NXT)具有活血化瘀、行气止痛之功效,其多成分具有血管保护作用,可以有效改善组织缺血症状,但其对EPCs动员和归巢的作用尚不明确。该研究采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)联合后下肢缺血损伤模型(unilateral hind limb ischemia,UHLI)研究脑心通胶囊对EPCs动员和归巢的作用。受体小鼠经CS137全身照射后,从目内眦静脉丛输注GFP标记的骨髓单个核细胞,建立BMT模型,经过4周骨髓重建后取外周血检测GFP阳性细胞比例。取BMT模型成功的小鼠,采用股动脉结扎复制UHLI模型,术后随机分为3组:模型组、NXT组(模型+NXT)和阳性对照组(模型+辛伐他汀)。采用流式细胞术检测骨髓重建4周后GFP阳性细胞比例,术前及术后第1,3,7,14天外周血中EPCs细胞数;采用免疫荧光组织化学染色检测给药3,7 d缺血腓肠肌组织EPCs细胞归巢数目。BMT小鼠与GFP基因鼠相比,GFP阳性细胞比例无显著性差异;术后1,3 d,NXT组和辛伐他汀组外周血EPCs数量显著性上调;术后3,7 d,NXT组和辛伐他汀组EPCs归巢数量显著高于模型组(P0.001),因此脑心通胶囊能显著促进EPCs的动员与归巢。     

蜂毒素抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究

目的:研究蜂毒素对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的抑制作用。方法:建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,光镜下观察蜂毒素对正常鸡胚绒毛尿囊膜微血管形态的影响,应用医学图像分析软件定量检测蜂毒素对鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的影响。结果:光镜下可见经蜂毒素作用后,鸡胚绒毛尿囊膜微血管数目减少,管径变细,分布零乱。定量检测结果表明,蜂毒素浓度为:2.0、4.0、8.0μg/mL时的血管生成抑制率分别为:12.11%、29.85%和45.09%,血管数目明显少于生理盐水对照组(P<0.01),却多于沙利度胺组(P<0.01)。结论:蜂毒素可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成,并且呈现浓度依赖关系。     

国产与进口银杏提取物治疗缺血性脑中风60例疗效比较

目的观察国产银杏提取物制剂舒血宁注射液对缺血性脑中风的治疗作用。方法92例患者随机分为治疗组60例,对照组32例。治疗组用舒血宁注射液25 m l加入0.9%生盐水500 m l内静脉滴注,对照组金纳多注射液25 m l加入0.9%生理盐水500 m l内静脉滴注,1次/d,15 d为1疗程,进行双盲对照。结果舒血宁注射液对缺血性脑中风临床有效率为90%,与进口同类产品金纳多注射液比较差异无显著性(P>0.05)。对四肢关节及综合功能等治疗前后计分测定比较,2组差异均有显著性(P<0.05)。中医辨证分类疗效发现舒血宁对风痰瘀血、痹阻经脉疗效显著。对气虚血瘀也有满意疗效。结论国产银杏提取物舒血宁注射液对缺血性脑中风具有较好的治疗作用,且价格低,不良反应少。     

麝香保心丸对内皮祖细胞功能及分泌一氧化氮的影响

目的 察麝香保心丸（Shexiang Baoxin Pill）对人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能及分泌一氧化氮（NO）的影响。     

Traditional Chinese medicine, Xue-Fu-Zhu-Yu decoction, potentiates tissue plasminogen activator against thromboembolic stroke in rats

Aim of this study

The Xue-Fu-Zhu-Yu decoction (XFZYD) is a well-known traditional Chinese medicine for treating cardiovascular diseases. The therapeutic effects of this XFZYD have been well documented especially in treating of atherosclerosis and hyperlipidemia. Since this decoction can induce endothelial progenitor cell angiogenesis, it can provide experimental evidence for the treatment of ischemic diseases. Patients who are admitted to the hospital with acute ischemic stroke are initially considered candidates for the recombinant tissue plasminogen activator (rt-PA). However, rt-PA therapy is still lesser than ideal due to its major side effect of hemorrhaging. Therefore, medical research has been devoted to finding an alternative and/or complementary therapy for ischemic stroke. In the present study, we evaluated the protective effect of the combination of XFZYD with or without rt-PA in a rat model of thromboembolic stroke.

Materials and methods

A cerebral thromboembolic stroke animal model and immunoblotting analysis were used to assess the effects of XFZYD and rt-PA.

Results

Treatment with rt-PA (8 mg/kg) or XFZYD (1.5 and 3.0 g/kg/day) alone showed slight reductions in the infarct volume compared to solvent-treated rats. However, XFZYD (1.5 and 3.0 g/kg/day) obviously potentiated rt-PA-mediated reduction in the infarct volume in cerebral ischemic regions. In addition, treatment with rt-PA significantly reduced both tumor necrosis factor (TNF)-α and inducible nitric oxide synthase (iNOS) but not hypoxia-inducible factor (HIF)-1α or active caspase-3 expressions in ischemic regions, whereas treatment with XFZYD (3.0 g/kg/day) significantly reduced all of these protein expressions in ischemic regions. Moreover, treatment with XFZYD (1.5 and 3.0 g/kg/day) obviously potentiated rt-PA-mediated reductions in TNF-α, iNOS, HIF-1α, and active caspase-3 expressions.

Conclusions

Results of this study suggest that XFZYD potentiated rt-PA-mediated neuroprotection against thromboembolic stroke in rats. This neuroprotection is probably mediated by the inhibition of HIF-1α and TNF-α, followed by the inhibition of inflammatory responses (i.e., iNOS) and apoptosis (active caspase-3). These results provide a better understanding of the scientific validation of the therapeutic value of the combination of XFZYD with rt-PA in ischemic stroke.