丹酚酸B诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的:体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并研究中药单体丹酚酸B诱导MSCs向心肌样细胞分化.方法:用贴壁培养法分离、培养、纯化MSCs,免疫荧光法检测细胞抗原CD44和CD34.分别用含5 μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)和30 mg/L丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs 24 h后,RT-PCR法检测培养1,7,14和21 d心肌特异性转录因子NKX2.5,GATA-4和心肌特异性蛋白α-actin mRNA的表达,用免疫荧光法检测诱导后α-actin的表达情况.结果:获得纯化的MSCs,免疫荧光检测细胞表面标记CD44呈阳性,CD34呈阴性.诱导后细胞形态逐渐发生变化.RT-PCR显示NKX2.5和GATA-4 mRNA在MSCs有基础性的表达,而分别以5-aza和丹酚酸B处理24 h后,NKX2.5和GATA-4mRNA表达增强,7 d时表达达高峰,以后维持在高水平,与空白对照组相比,有统计学差异(P＜0.01).未诱导的MSCs α-actin mRNA表达呈阴性,丹酚酸B诱导后的第14日,出现α-actin mRNA的表达.结论:用贴壁培养法可获得纯化的MSCs,丹酚酸B可诱导MSCs向心肌样细胞分化.     

加味丹参饮体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的探讨加味丹参饮体外诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)向心肌样细胞分化的实验研究。方法采用贴壁法获取大鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原。MTT法检测加味丹参饮对BMSCs最大无毒浓度,用第3代细胞分组诱导:正常对照组,加味丹参饮组,5-氮胞苷组,加味丹参饮+5-氮胞苷组,应用western blot检测各组细胞结合蛋白(Desmin),α-肌球蛋白重链(α-MHC),心肌肌钙蛋白T(c Tn T)蛋白表达,RT-PCR法检测各组细胞GATA-4,缝隙连接蛋白43(CX43)及Nkx2-5 mRNA表达。结果大鼠BMSCs表面CD90阳性率高于95%,CD34及CD45阳性率低于5%。加味丹参饮对BMSCs最大无毒浓度为0.625 g/L。与正常对照组比较,加味丹参饮组,5-氮胞苷组,加味丹参饮+5-氮胞苷组中Desmin,α-MHC及c Tn T蛋白表达量上调,GATA-4,CX43及Nkx2-5 mRNA表达量上调,差异有统计学意义(P0.01)。与加味丹参饮组或5-氮胞苷组比较,加味丹参饮+5-氮胞苷组中Desmin,α-MHC及c Tn T蛋白表达量上调,GATA-4,CX43及Nkx2-5 mRNA表达量上调,差异有统计学意义(P0.01)。结论加味丹参饮能够诱导BMSCs向心肌样细胞转化,与5-氮胞苷联合给药具有协同作用。     

丹酚酸B诱导体外培养大鼠骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的研究*

[目的]探讨大鼠骨髓基质细胞的体外培养及丹酚酸B(Salvianolic acid B)诱导其向心肌样细胞分化的可能.[方法]取大鼠股骨及胫骨干骨髓基质细胞(MSCs)培养,保留贴壁细胞进行传代;免疫细胞化学行肌动蛋白抗原、肌钙蛋白T抗原染色;观察丹酚酸B对骨髓基质细胞向心肌细胞分化的影响.[结果]大鼠骨髓基质细胞在形态上呈贴壁集落生长,具有成纤维细胞样外观.丹酚酸B加入5-氮胞苷诱导组后细胞死亡较少,长方形、多角形细胞明显增多.[结论]丹酚酸B能够促进体外诱导骨髓基质细胞向心肌样细胞的分化.     

Study of the induction condition of ICA on α-MHC and β-MHC produced by MSCs

目的 寻找淫羊藿苷(ICA)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的最佳诱导时间和浓度.方法 把MSCs随机分为6组,即正常对照组、4个浓度的ICA组(10-6,10-7,10-8,10-9 mol/L)、5 -氮胞苷(5-Aza)组,每组又分为4个诱导时间组,即24h+1 d、24h+1周、48 h+1 d、48 h+1周.利用RT-PCR方法检测各组的--心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β-心肌肌球蛋白重链(β-MHC)表达量.结果 与其他时间组相比,ICA( 10-7 mol/L)在培养24h+1周时,α-MHC和β-MHC表达最高.结论 ICA( 10-7mol/L)与MSCs共同培养24 h +1周时,能更好地促进α-MHC和β-MHC的表达.     

丹酚酸B体外干预骨髓间充质干细胞分化过程中cTnT的表达

[目的]观察丹酚酸B(SalB)体外干预骨髓间充质干细胞(MSCs)后细胞形态及心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[方法]培养、纯化及鉴定MSCs,用SalB、5-氮胞苷组(5-aza)、SalB联合5-aza(SalB+5-aza)分别定向诱导分化,观察此过程中MSCs的形态学变化并采用免疫细胞化学法鉴定诱导后MSCs心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[结果]诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示诱导后MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT。[结论]SalB在体外定向诱导MSCs分化为心肌细胞的过程中发挥了一定的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓间质干细胞诱导分化为心肌细胞的影响

[目的]探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用.[方法]取大鼠股骨骨髓,采用直接贴壁法分离、培养骨髓间质干细胞;取P3代骨髓间质干细胞,分别以5-氮胞苷、5-氮胞苷联合bFGF诱导.30 d后用免疫组化法检测细胞的心肌肌钙蛋白,RT-PCR法检测心肌细胞转录因子GATA-4、结蛋白(desmin),并用倒置显微镜在镜下观察细胞的跳动情况.[结果]大鼠骨髓间质干细胞经5-氮胞苷或5-氮胞苷 bFGF诱导30 d后,均呈现心肌肌钙蛋白表达阳性和GATA-4、desmin表达阳性.镜下观察单用5-氮胞苷诱导组未见细胞跳动;联合bFGF诱导组则可见所诱导的细胞呈心肌细胞样跳动.[结论]骨髓间质干细胞在体外能被5-氮胞苷诱导分化为心肌细胞,但单用5-氮胞苷诱导比不上联用bFGF诱导的效果好.bFGF在体外有促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用.     

丹酚酸B诱导体外培养大鼠骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的研究

[目的]探讨大鼠骨髓基质细胞的体外培养及丹酚酸B(SalvianolicacidB)诱导其向心肌样细胞分化的可能。犤方法犦取大鼠股骨及胫骨干骨髓基质细胞(MSCs)培养,保留贴壁细胞进行传代;免疫细胞化学行肌动蛋白抗原、肌钙蛋白T抗原染色;观察丹酚酸B对骨髓基质细胞向心肌细胞分化的影响。犤结果犦大鼠骨髓基质细胞在形态上呈贴壁集落生长,具有成纤维细胞样外观。丹酚酸B加入5-氮胞苷诱导组后细胞死亡较少,长方形、多角形细胞明显增多。犤结论犦丹酚酸B能够促进体外诱导骨髓基质细胞向心肌样细胞的分化。     

外源性内皮素-1对兔骨髓间质干细胞诱导的心肌样细胞中GATA-4转录因子磷酸化的影响

目的 研究外源性内皮素-1(ET-1)对经5-氮胞苷体外诱导免骨髓间质于细胞分化的心肌样细胞转录因子GATA-4磷酸化的影响。方法 取幼年兔股骨干骨髓基质细胞经5-氮胞苷诱导分化为心肌样细胞，分别加入不同浓度(10、30、50nmol／L)的外源性ET-1，Western—blot分析心肌细胞GATA-4转录因子的蛋白表达及其磷酸化的改变。结果 分化的心肌样细胞可表达心肌细胞特异性GNTA-4转录因子；外源性ET-1不影响GATA-4蛋白表达，但可快速诱导GATA-4转录因子的磷酸化；其中，30nmol／L ET-1时GATA-4转录因子磷酸化的程度最高。结论 ET-1可介导5-氮胞苷诱导兔骨髓间质干细胞分化的心肌样细胞GNTA-4转录因子的磷酸化而影响其活性。     

丹酚酸B对大鼠骨髓间充质干细胞分化过程中Desmin、α-actinmRNA表达的影响

[目的]探讨丹参单体丹酚酸B(SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Desmin和α-actin mRNA的表达,确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点。[方法]选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增。免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)及250μg/LSalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24h,于诱导后第4周,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Desmin、α-actin mRNA的表达。[结果]1)第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达。2)诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构。5-aza组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比,5-aza+SalB组的Desmin和α-actin mRNA表达明显增强。[结论]SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用。     

体外培养鼠骨髓间充质干细胞及其向心肌样细胞诱导分化的实验研究

目的 通过体外培养骨髓间充质干细胞(MSCs),并用5-氮胞苷诱导其向心肌样细胞分化,研究MSCs生物学特性和5-氮胞苷效能.方法 将SD大鼠的骨髓采用贴壁法进行分离培养及传代增殖,相差显微镜下观察细胞形态变化,绘制生长曲线,并用流式细胞仪技术检测CD29、CD45的表达,进行细胞成分鉴定.用5-氮胞苷体外诱导MSCs,观察其形态结构.用免疫组化检测肌钙蛋白T(cTnT)、结蛋白(Desmin),用RT-PCR检测心肌特异因子基因β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达.结果 贴壁法分离培养的MSCs生长稳定,增殖较快.经5-氮胞苷诱导后,MSCs形态发生变化,可见肌管样结构.免疫组化和RT-PCR证实MSCs经体外诱导发生了向心肌样细胞的分化.结论 采用贴壁筛选法,简便易行,短期内可获得大量的纯度较高的骨髓间充质干细胞;在5-氮胞苷的诱导下,骨髓间充质干细胞呈现向心肌样细胞分化的趋势.     

在规范中改革 从改革中创新——教案设计与管理刍议

写教案是备课的中心环节。教案设计是否规范、科学、实用,直接影响着课堂教学的质量。对教案的管理是教学管理的重要组成部分。在规范中改革,从改革中创新,是我校对备课这一教学环节的一贯倡导和要求。笔者现将几年来自己在教案设计与管理中探索的一些认识、方法和体会提出与同行交流切磋。1正确认识教案在课堂教学中的作用教学过程是一种创造性的活动。教案则是体现教师创造性劳动的一种设计方案和主要记录,也是课堂教学所遵循的章法。教学大纲是“一项工程的总设计”,教案则是“工程施工的具体方案”。要完成一份高质量的教案,教师必须认…     

榼藤藤茎醋酸乙酯部位化学成分的研究

目的 对榼藤Entada phaseoloide藤茎醋酸乙酯部位的化学成分进行研究。方法 综合运用硅胶、反相硅胶RP C18、Sephadex LH-20等色谱法进行分离,NMR、MS等波谱学方法进行结构鉴定。结果 从榼藤藤茎甲醇提取物的醋酸乙酯萃取部位中分离得到了11个化合物,通过波谱分析鉴定为表没食子儿茶素没食子酸酯（1）、表儿茶素没食子酸酯（2）、落新妇苷（3）、木犀草素（4）、（?）-表儿茶素（5）、甘草苷（6）、β-香树脂醇（7）和日耳曼醇（8）的混合物、没食子酸（9）、β-谷甾醇（10）、胡萝卜苷（11）。结论 所有化合物均为首次从榼藤中分离得到,其中化合物1～9在榼藤子属植物首次报道。     

从“经水出诸肾”论治人流术后月经过少

《傅青主女科》有云:"经水出诸肾",为临床辨治人流术后月经过少提供了理论依据,且人工流产多为金刃损伤肾精肾气,以致冲任损伤,气血不足,血海空虚,离经之血瘀阻冲任胞宫,阻碍新血生成。中医学多从肾论治,根据其肾虚、血虚、血瘀、肝郁的病因病机辨证论治,以补肾为根本,大致从补肾养血、补肾活血、补肾疏肝等方面论治。