全蝎、蜈蚣对CIA大鼠关节和小肠粘膜IL-1β、TNF-α表达的影响

目的:观察全蝎、蜈蚣对CIA大鼠关节和小肠粘膜IL-1β、TNF-α表达的影响。方法:采用Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎(CIA)模型后给药40天,ELISA法检测关节和小肠组织匀浆IL-1β、TNF-α表达水平。结果:IL-1β、TNF-α在模型组大鼠关节组织匀浆表达水平均明显高于正常组,而在小肠粘膜表达则正好相反,并均具有统计学意义;与模型组比较,全蝎、蜈蚣高、中剂量组大鼠关节组织匀浆IL-1β表达水平显著下降,仅中剂量组TNF-α表达显著下降;全蝎、蜈蚣高中低三剂量组大鼠小肠组织匀浆IL-1β表达水平显著升高,而对小肠粘膜TNF-α的表达则作用不明显。结论:全蝎、蜈蚣对CIA大鼠关节和小肠TNF-α和IL-1β表达的调节作用不一致。     

全蝎、蜈蚣对胶原诱导型关节炎大鼠肠黏膜免疫状态的调节作用

目的:观察全蝎、蜈蚣对胶原蛋白诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠肠黏膜免疫状态的调节作用。方法:Wistar大白鼠60只,随机分成6组,即正常组,模型组,全蝎蜈蚣高,中,低剂量组,Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,CII)组。采用Ⅱ型胶原蛋白诱导法复制大鼠关节炎模型,并ig给予全蝎蜈蚣混悬液(0.4,0.2,0.1 g.kg-1)进行干预,CII组予CII蛋白冻干粉60μg.kg-1 ig进行对照,共计40 d。采用流式细胞术分别检测大鼠肠道派伊尔(peyer’s patches,PP)结淋巴细胞亚群水平,采用酶联免疫吸附试验法检测小肠组织匀浆转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、分泌型免疫球蛋白(secreted immunoglobulin,sIgA)的表达水平。结果:与模型组比较,各治疗组均可明显下调CD4+,CD8+ T细胞水平,升高CD4/CD8水平,并具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。同时,除中剂量组外,其他各治疗组小肠组织匀浆sIgA水平均明显上升(P<0.01),至于TGF-β1,则仅中剂量组和CII组小肠组织匀浆中TGF-β表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:全蝎、蜈蚣调节胶原免疫性关节炎黏膜免疫的作用可能通过调节小肠黏膜局部PP结T淋巴细胞亚群平衡,降低肠黏膜TGF-β1和升高sIgA表达水平来实现的。     

全蝎蜈蚣对胶原免疫性关节炎大鼠的关节损伤改善作用

目的:观察全蝎蜈蚣对胶原免疫性关节炎大鼠的病理损伤改善作用。方法:大鼠随机分成6组:正常对照组、模型对照组、全蝎蜈蚣高、中、低剂量组和Ⅱ型胶原蛋白治疗组(CⅡ组),全蝎蜈蚣高中低剂量组分别给予全蝎蜈蚣混悬液0.4g/kg、0.2g/kg、0.1g/kg灌胃、CⅡ组予Ⅱ型胶原蛋白冻干粉60μg/kg灌胃;正常对照组和模型对照组分别用等容积生理盐水灌胃,连续给药40d。采用Ⅱ胶原蛋白诱导大鼠关节炎,同时就大鼠体重、关节疼痛评分、病理损伤评分及病理形态学改变进行观察。结果:在第三周后全蝎蜈蚣高中剂量(0.4g/kg、0.2g/kg)组大鼠体重明显高于模型组(P<0.01或P<0.05),第15天以后各剂量组(0.4g/kg、0.2g/kg、0.1g/kg)即可缓解CIA大鼠的关节疼痛,其疼痛评分明显低于模型组(P<0.01或P<0.05),且治疗组病理形态学可见关节软骨破坏程度减轻,少量炎细胞浸润,滑膜细胞增生,伴有纤维结缔组织增生,其病理损伤评分也明显低于模型组(P<0.01或P<0.05)。结论:全蝎蜈蚣药对可有效抑制CIA大鼠关节疼痛,促进体重增长和病理性损伤修复。     

全蝎蜈蚣对CIA大鼠外周血CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg细胞的调节

目的:观察全蝎蜈蚣对胶原免疫性关节炎(Collagen-Induced Arthritis,CIA)大鼠外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的调节作用。方法:Wistar大鼠60只,随机分成6组,分别为正常对照组、模型对照组、全蝎蜈蚣高(0.4 g/kg)、中(0.2 g/kg)、低剂量(0.1 g/kg)组和Ⅱ型胶原蛋白(60μg/kg)治疗组(CⅡ组),二型胶原蛋白诱导大鼠关节炎,并采用流式细胞术检测大鼠外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞及酶联免疫吸附试验检测血清中IL-2表达水平。结果:与模型组比较,全蝎蜈蚣高、低剂量组大鼠外周血CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞水平显著升高,且中、低剂量组血清IL-2水平显著下降。结论:全蝎蜈蚣治疗关节炎大鼠可能是通过上调外周CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞表达水平以恢复或重建免疫耐受而实现的。     

全蝎-蜈蚣对CIA大鼠外周血协同刺激分子B7-1,B7-2表达的影响

目的:观察全蝎-蜈蚣对胶原免疫性关节炎( collagen-induced arthritis,CIA)大鼠外周血协同刺激分子B7-1(CD80)、B7-2(CD86)表达的影响.方法:Wistar大白鼠60只,随机分成6组,即正常组,模型组,全蝎-蜈蚣高,中,低剂量组,Ⅱ型胶原蛋白( typeⅡcollagen,CⅡ)组.采用Ⅱ型胶原蛋白诱导法复制大鼠关节炎模型,并ig给予全蝎-蜈蚣混悬液(0.4,0.2,0.1 g·kg-1)进行干预,CⅡ组予CⅡ白冻干粉60 μg· kg -1 ig进行对照,共计40 d.并采用流式细胞术检测大鼠外周血单核细胞表达CD80,CD86情况.结果:与正常组大鼠外周血 CD80+(44.8±11.61)％ CD80+CD86-(32.4±9.18)％比较,模型组大鼠外周血CD80+细胞(55.7±6.31)％及CD80+ CD86 -细胞(43.7±10.26)％水平显著升高(P＜0.05);与模型组比较,全蝎-蜈蚣中、低剂量组大鼠外周血CD80+细胞(46.6±6.34)％,(30.8±15.14)％明显降低(P＜0.05),及且全蝎-蜈蚣低剂量组大鼠外周血CD80+ CD86 -细胞(25.3±12.67)％水平显著下降(P＜0.05).结论:全蝎-蜈蚣药对治疗CIA大鼠的作用机制可能与降低外周血单核细胞表达CD80+及CD80+ CD86 -分子表达水平相关.     

祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达的影响

目的研究中药祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制。方法选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组(50只)及正常对照组(正常组,10只),造模组采用牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen of bovine,BCⅡ)乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射,建立CIA模型。造模成功后,选取30只造模成功大鼠随机分为模型组(10只)、甲氨喋呤(methotrexate,MTX)组(10只)、祛痹镇痛方组(中药组,10只)。中药组大鼠按22.9g/kg剂量灌胃中药祛痹镇痛方,正常组、模型组灌胃等量生理盐水,每日1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平,并予给药前后进行关节炎指数(arthritis index,AI)评分。结果与模型组及本组治疗前比较,治疗后中药组和MTX组大鼠AI评分明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论降低CIA大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平可能是中药祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制之一。     

持续光照对艾灸调控类风湿性关节炎大鼠褪黑激素与类风湿性关节炎血浆IL-1β、IL-4水平的影响

目的:观察持续光照下艾灸对实验性类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)大鼠足容积、血清褪黑激素、血浆IL-1β、IL-4含量的影响,探讨褪黑激素在艾灸抗炎效应中的地位和作用。方法:以佐剂性关节炎(AA)作为RA疾病模型,艾灸实验性RA大鼠"肾俞"、"足三里"两穴,采用24h光照作为干预研究手段,观测大鼠足容积,采用ELISA双抗夹心法检测血清MT和血浆IL-1β、IL-4含量。结果:大鼠右后足容积,模型组显著高于空白组(P<0.01),艾灸组显著低于模型组(P<0.01),24h光照+艾灸组与艾灸组相比无显著性差异。大鼠血清MT水平,模型组显著高于空白组(P<0.05),艾灸组显著低于模型组(P<0.05),24h光照+艾灸组显著低于艾灸组(P<0.01);血浆IL-1β含量,模型组显著高于空白组(P<0.05),艾灸组显著低于模型组(P<0.05),24h光照+艾灸组与艾灸组无显著性差异;大鼠血浆IL-4含量,模型组略高于空白组但两组间无显著性差异,艾灸组显著高于模型组(P<0.05),24h光照+艾灸组显著高于艾灸组(P<0.01)。结论:艾灸能够有效抑制RA大鼠足肿胀、抑制血浆IL-1水平、升高IL-4水平,具有明确的抗炎作用;MT与RA炎症过程中密切相关,MT对抗炎因子IL-4可能有抑制作用,MT在艾灸治疗RA炎症中可能不是发挥抗炎作用,而是起到致炎作用。艾灸、持续光照可能通过抑制MT分泌,从而促进抗炎因子IL-4分泌而发挥抗炎作用。     

针灸对CIA 大鼠的脾脏单个核细胞IL-17、IL-12 表达的影响

目的：探讨针刺、艾灸对胶原诱导型关节炎大鼠（CIA）的脾淋巴细胞增殖能力及脾脏单个核细胞IL-17、IL-12等表达的影响。方法：将Wister大鼠随机分成正常组、模型组、艾灸组、针刺组,每组8只。采用免疫学方法制备胶原诱导型关节炎模型大鼠。艾灸组、针刺组于初次免疫后第12天,选取双侧阳陵泉、昆仑穴分别施温和灸、针刺干预。治疗结束后,观察各组大鼠四肢关节炎症评分;应用MTT比色法观察针灸对脾淋巴细胞增殖能力的影响;采用实时定量PCR技术检测脾脏单个核细胞IL-17、IL-12、TNF-α、IL-6、和IFN-γ mRNA表达的变化。结果：与正常组比较,模型组大鼠关节炎症评分明显增加（P<0.01）;与模型组比较,艾灸组、针刺组大鼠关节炎症评分均明显低于模型组（P<0.01）。与正常组比较,模型组脾淋巴细胞的增殖能力增高（P<0.01）,脾脏单个核细胞IL-17、IL-12、TNF-α、IL-6、IFN-γ mRNA表达显著增加（P<0.01）;与模型组比较,艾灸组脾淋巴细胞的增殖能力下降（P<0.01）,针刺和艾灸均能显著降低脾脏单个核细胞IL-12、IL-17、TNF-α、IL-6、IFN-γ mRNA的表达（P<0.01）;与艾灸组比较,针刺组在降低脾脏单个核细胞的IFN-γ mRNA的表达上优于艾灸组（P<0.05）。结论：针刺和艾灸治疗对CIA大鼠四肢关节炎症均具有改善作用,可能与艾灸能有效降低脾淋巴细胞增殖能力,针刺和艾灸均能调节脾单个核细胞异常变化的炎症细胞因子mRNA表达水平有关。     

风湿清对Ⅱ型胶原诱发类风湿关节炎大鼠白细胞介素-4、γ-干扰素及趋化因子的影响

目的 了解风湿清对类风湿关节炎大鼠血清及滑膜细胞培养上清液中白细胞介素4（IL- 4） 、γ干扰素（γ-IFN）、巨噬细胞趋化因子1α（MIP-1α）、Ⅱ型胶原抗体（CⅡ抗体）的调节作用,探讨清热活血法治疗类风湿关节炎的作用机理。方法 CⅡ抗体加弗氏完全佐剂诱发类风湿关节炎大鼠动物模型,ELISA方法检测大鼠血清及滑膜细胞培养上清液中CⅡ抗体、IL- 4 、γ-IFN及MIP-1α的含量。结果 与正常组比较,模型组血清CⅡ抗体含量均明显升高（P<0.01）,模型14天、28天组血清和滑膜细胞培养上清液中IL-4 含量下降,γ-\IFN、MIP-1α含量升高,差异有统计学意义（P<0.05 或P<0.01）;与模型组同期比较,风湿清14天组血清和滑膜细胞培养上清液IL- 4 含量升高、滑膜细胞培养上清液MIP-1α含量下降（P<0.05 或P<0.01）;风湿清28天组血清和滑膜细胞培养上清液MIP-1α含量均下降（P<0.05）。结论 风湿清能明显上调类风湿关节炎大鼠血清及滑膜局部IL- 4含量,对血清及滑膜局部γ-IFN有下调趋势,能明显下调全身和局部滑膜细胞MIP-1α的高表达,从而维持Th1/Th2细胞平衡,抑制滑膜局部的细胞及体液免疫反应,减轻慢性关节滑膜炎及血管炎病变。     

黑骨藤追风活络胶囊对胶原诱导性关节炎大鼠IL-1β、IFN-γ、IL-15的影响

目的观察黑骨藤追风活络胶囊对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节炎症的缓解作用及对血清白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-15(IL-15)表达水平的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、雷公藤多苷片组和黑骨藤追风活络胶囊组,每组10只,对除正常组外,其余3组建立CIA模型,于初次免疫后10 d开始,给各组大鼠进行相应药物灌胃处理以延缓炎症进展,并每隔7 d评定一次各组大鼠的关节炎指数(AI),给药21 d后处死大鼠检测各组大鼠血清中IL-1β、IFN-γ和IL-15的表达水平。结果正常组大鼠关节正常,而模型组关节红肿较为明显,AI指数评分较高(P0.001),雷公藤多苷片组和黑骨藤追风活络胶囊组大鼠AI均较模型组有所缓解(P0.01)。模型组大鼠血清IL-1β、IFN-γ、IL-15水平均较正常组升高(P0.01),雷公藤多苷片组及黑骨藤追风活络胶囊组大鼠IL-1β、IFN-γ、IL-15水平均显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论黑骨藤追风活络胶囊可在一定程度上抑制CIA大鼠促炎因子分泌,缓解关节炎症,可作为临床上治疗类风湿关节炎的辅助用药。     

雷公藤多苷片对胶原诱导性关节炎大鼠血清HMGB1和IL-17的影响

目的:观察雷公藤多苷片对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠血清中高迁移率族蛋白B1(high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB1)及白介素17(interleukin 17,IL-17)含量的影响.方法:40只SD大鼠被随机分为正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤对照组(3 mg·kg-1)、雷公藤多苷片低、高剂量组(5,10 mg·kg-1).用牛Ⅱ型胶原蛋白加不完全氟氏佐剂诱导大鼠关节炎模型,于免疫12d开始灌胃给药,连续4周.CIA大鼠模型建立后,观察各组大鼠关节指数变化,并采用ELISA法检测各组大鼠血清中HMGB1和IL-17的含量.结果:与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀明显,血清中HMGB1和IL-17含量明显升高(P＜0.01或P＜0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠关节肿胀程度均有一定程度缓解,甲氨喋呤组和雷公藤多苷片高剂量组大鼠血清中HMGB1和IL-17的含量显著低于模型组(P＜0.01或P＜0.05).结论:雷公藤多苷片治疗CIA大鼠关节肿胀可能与降低血清中HMGB1,IL-17的含量相关.     

胡蜂毒提取物对胶原诱导性类风湿性关节炎大鼠的作用研究

目的建立胶原诱导性类风湿关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型来探讨胡蜂毒提取物对大鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(注射用蜂毒冻干粉,1.25 mg·kg^-1)和胡蜂毒提取物低、中、高剂量(0.125、0.25、0.5 mg·kg^-1)组,除正常组外,其余各组采用多点注射鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂的方法来诱导大鼠RA模型,每7 d一次,共14 d。造模结束后,各给药组于足趾皮下注射对应剂量的药物,连续给药14 d。分别于造模前、造模第14天和给药第14天测量大鼠踝关节直径和周长,并进行AI评分;观察大鼠脏器指数和踝关节组织HE染色的变化;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中相关炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8、前列腺素(PG)E-2、环氧化酶(COX)-2和类风湿因子免疫球蛋白(Ig)G、Ig A、Ig M的含量变化;利用流式细胞术检测大鼠脾脏T细胞亚群的变化。结果与模型组比较,胡蜂毒提取物对CIΑ大鼠的关节肿胀(直径及周长)抑制效果显著(P<0.01),能明显降低其AI评分(P<0.01或P<0.05),能不同程度恢复大鼠的脏器指数(P<0.01或P<0.05),改善踝关节组织病理学结构病变,降低大鼠血清中各炎症因子和类风湿因子的表达(P<0.01或P<0.05),调节和改善T细胞亚群比例的紊乱(P<0.01或P<0.05)。结论胡蜂毒提取物对CIA大鼠具有较好的治疗作用,这与其对炎症细胞因子网络的调控和对免疫的调节有关系。     

基于TLR4/MAPKs/NF-κB炎症信号通路探讨三痹颗粒对Ⅱ型胶原性关节炎大鼠的治疗作用及机制研究

目的探讨三痹颗粒对Ⅱ型胶原性关节炎大鼠的治疗作用以及对TLR4/MAPKs/NF-κB信号通路的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组(CTL)、模型组、阳性对照组(地塞米松片,DXM)和受试药物低、中、高剂量组,每组各10只。建立胶原性关节炎(CIA)大鼠模型,各组于初次免疫2周后开始灌胃。连续灌服20 d,至免疫后35 d处死大鼠,观察大鼠状态、足肿胀度、关节炎指数(AI)、踝关节病变观察。采用ELISA法检测白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。采用qRT-PCR法和Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)(p65)、p-NF-κB(p65)、p38、p-p38、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK mRNA和蛋白的表达水平。结果实验结束时,DXM组、受试药物高、中、低剂量组大鼠足踝关节肿胀程度和AI值均低于模型组(P<0.05)。经H&E染色和肉眼观察,受试药物可明显减轻足水肿以及滑膜组织病理学变化。DXM组和受试药物低、中、高剂量组大鼠外周血IL-1β、IL-6、TNF-α水平均明显低于模型组大鼠(P<0.05);而受试药物高剂量组大鼠外周血IL-1β、IL-6、TNF-α水平与DXM组大鼠比较未见统计学差异(P>0.05)。另外,模型组大鼠足踝关节滑膜组织TLR4、p-NF-κB(p65)、p-p38、p-ERK1/2、p-JNK mRNA和蛋白表达量明显高于CTL组(P<0.05);而且DXM组以及受试药物低、中、高剂量组较模型组明显降低(P<0.05);尤其以DXM组和受试药物高剂量组降低最为明显,与CTL组比较,无统计学差异(P>0.05)。结论三痹颗粒可能通过负性调控TLR4/MAPKs/NF-κB信号通路保护胶原性关节炎大鼠模型足踝关节炎症损伤。     

补肾化痰法对肥胖型多囊卵巢综合征模型大鼠IL-1β、VEGF表达水平的影响

目的探讨中医补肾化痰法对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠血清及卵巢组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。方法选取3周龄雌性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为空白组(等量生理盐水灌胃)、模型组(等量生理盐水灌胃)、阳性组(二甲双胍0.043 g/kg)、高剂量组[补肾活血生药3.0 g/(kg·d)灌胃]、中剂量组[补肾活血生药2.0 g/(kg·d)灌胃]和低剂量组[补肾活血生药1.0 g/(kg·d)灌胃]各10只大鼠,除空白组外其余各组均建立肥胖型PCOS模型大鼠,对比各组大鼠连续干预14d后的血清及卵巢组织中IL-1β、VEGF的表达水平。结果模型组的血清IL-1β、VEGF水平显著高于其他组别(P<0.05),空白组和阳性组、中药高、中、低剂量组的IL-1β、VEGF水平比较,差异均不具有统计学意义(P>0.05);与空白组相比,模型组大鼠子宫匀浆液中VEGF浓度明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,阳性组大鼠子宫匀浆液中VEGF浓度明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);中药高剂量组大鼠子宫匀浆液中VEGF浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05);其余各组大鼠子宫匀浆液中VEGF浓度无明显差异,不具备统计学意义(P>0.05);与空白组相比,模型组大鼠卵巢匀浆液中IL-1β浓度明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,阳性组大鼠卵巢匀浆液中IL-1β浓度明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);中药高剂量组大鼠卵巢匀浆液中IL-1β浓度降低,差异有显著统计学意义(P<0.05);其余各组大鼠卵巢匀浆液中IL-1β浓度无明显差异,不具备统计学意义(P>0.05)。结论中医补肾化痰法可显著降低肥胖型PCOS模型大鼠血清、子宫及卵巢组织中的IL-1β、VEGF表达水平。     

山茱萸水提液对胶原诱导关节炎模型小鼠滑膜组织中IL-12家族调控作用的实验研究

目的观察山茱萸水提液对胶原诱导的关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠的干预作用,并通过检测山茱萸水提液对CIA小鼠滑膜组织中IL-12、IL-23、IL-27及IL-35表达的影响,探讨山茱萸水提液通过调控IL-12家族发挥对CIA小鼠干预作用的机制,揭示"酸入肝,酸补肝"中药性味理论指导下的补肝养血疗法治疗痹证的分子机制。方法SPF级DBA/J小鼠,雄性,8~10周龄,40只。采用随机数字表法随机分为4组:空白对照组、模型对照组、山茱萸组、西药对照组,每组10只。然后对模型对照组、山茱萸组、西药对照组小鼠以Ⅱ型胶原诱导CIA小鼠模型,采用关节炎指数评分法进行模型评价,评价成功的小鼠开始给予药物干预,空白对照组不作处理;模型对照组给予等量生理盐水经口灌胃;山茱萸组给予山茱萸[24 g/(kg·d)]悬液经口灌胃,1次/d,连续2周;西药对照组给予布洛芬[0.08 g/(kg·d)]悬液经口灌胃,1次/d,连续2周。末次给药后2 h,评价各组小鼠关节炎指数评分并记录;然后将小鼠过量麻醉处死,取左侧膝关节,剥离滑膜组织,冻存于-80℃冰箱中,用于ELISA法检测滑膜组织中IL-12、IL-23、IL-27及IL-35的含量;同时取右侧膝关节,去皮肤及肌肉,浸泡于4%多聚甲醛溶液中,固定24 h以上,EDTA螯合脱钙剂脱钙,制备石蜡切片,采用IHC法检测滑膜组织中IL-12、IL-23、IL-27及IL-35的表达水平。结果与空白对照组比较,模型对照组小鼠关节炎指数评分及病理评分显著升高(P<0.01),差异有统计学意义;与模型对照组比较,山茱萸组、西药对照组关节炎指数评分及病理评分显著降低(P<0.01),差异有统计学意义;山茱萸组与西药对照组间关节炎指数评分及病理评分差异无统计学意义。与空白对照组比较,模型对照组小鼠膝关节滑膜组织中IL-12、IL-23表达水平显著升高(P<0.01),IL-27、IL-35表达水平显著降低(P<0.01),差异有统计学意义;与模型对照组比较,山茱萸组、西药对照组小鼠膝关节滑膜组织中IL-12、IL-23表达水平显著降低(P<0.01),IL-27、IL-35表达水平显著升高(P<0.01),差异有统计学意义;山茱萸组与西药对照组间膝关节滑膜组织中IL-12、IL-23、IL-27及IL-35表达水平差异无统计学意义。结论山茱萸水提液对CIA小鼠干预作用明显,能够明显降低关节炎指数评分及病理评分。该作用可能是通过抑制CIA小鼠膝关节滑膜组织中IL-12、IL-23,促进IL-27、IL-35的表达而实现的。     

蒙药忠伦阿汤对胶原诱导性关节炎大鼠血清炎性细胞因子的影响

目的 探讨蒙药忠伦阿汤对类风湿关节炎(RA)模型大鼠抗Ⅱ型胶原(CⅡ)抗体及白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)炎性细胞因子的影响.方法 取Wistar大鼠80只,随机选取68只造模,其余12只作为空白组,以牛Ⅱ型胶原皮下注射诱导建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,再将造模成功的62只大鼠随机分为模型组及忠伦阿汤低、中、高剂量组和雷公藤组各12只,剩余大鼠剔除.忠伦阿汤低、中、高剂量组分别予忠伦阿汤0.35g/kg、0.7g/kg、1.5g/kg,雷公藤组予雷公藤多苷片5mg/kg,空白组和模型组给予等体积生理盐水,各组灌胃给药6周后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定抗CⅡ抗体、IL-1、IL-6、TNF-α的水平.结果 与空白组比较,模型组血清中抗CⅡ抗体、IL-1、IL-6、TNF-α含量均明显升高(P＜0.01),各药物组均可降低血清抗CⅡ抗体及炎性细胞因子的含量,忠伦阿汤中剂量组、高剂量组与雷公藤组在降低IL-1、IL-6、TNF-α水平方面差异无统计学意义(P＞0.05).结论 蒙药忠伦阿汤可能通过调节免疫,降低血清IL-1、IL-6及TNF-α的含量,减轻炎性细胞因子对关节炎的刺激作用,发挥干预类风湿关节炎的作用.     

藤莓汤改善CIA模型大鼠关节滑膜免疫炎性损伤的机制研究＊

目的 通过观察藤莓汤(Tengmei Decoction,TMD)对胶原诱导性(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜中突变型P53(Mutant P53,mt-p53)、增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)，白细胞介素2(Lnterleukin 2,IL-2)表达的影响，探讨藤莓汤抑制类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜免疫炎性损伤的分子机制。方法 建立CIA大鼠模型，中药给药组分为TMD高剂量组、TMD低剂量组，分别以TMD生药量31.8、15.9 g/(kg·d^-1)灌胃；模型组、阳性对照组分别予去离子水10 mL/(kg·d^-1)、来氟米特1.87 mg/(kg^-1·d^-1)灌胃；另设正常对照组，予去离子水10 mL/(kg·d^-1)，各组连续干预12周。干预结束后检测mt-P53、APRIL、IL-2蛋白及mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组APRIL、mt-P53、IL-2 mRNA转录水平上调(P < 0.01)；mt-P53、IL-2蛋白表达上调(P < 0.01，P < 0.05)。与模型组比较，各治疗组APRIL mRNA转录水平，mt-P53、IL-2mRNA转录水平及蛋白表达水平下调，(P < 0.01，P < 0.05)；结论 TMD能够降低大鼠关节滑膜、血清中mt-P53、IL-2、APRIL表达水平，改善关节炎模型大鼠关节滑膜免疫炎性损伤，可能与TMD抑制关节滑膜过度增殖，降低炎症因子的表达有关。     

RANKL、OPG、LIGHT表达在CIA大鼠骨侵蚀中的意义

目的：研究RANKL、OPG、LIGHT表达在胶原诱导性关节炎（collagen—inducingarthritis,CIA）大鼠骨侵蚀中的意义。方法：选用健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为造模组、正常对照组（10只,简称正常组）,造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。在造模成功大鼠中随机选取10只作为模型组（10只）。30天后,观察各组大鼠足趾肿胀度,取各组大鼠膝关节滑膜及血清。运用westernblot、免疫组化法分别检测大鼠外周血、滑膜RANKL、OPG、LIGHT表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义（P〈0．01）;模型组大鼠外周血、滑膜RANKL、LIGHT表达显著增加,OPG表达显著减少,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：CIA大鼠外周血、滑膜RANKL、LIGHT表达水平升高,OPG表达减少。CIA大鼠骨侵蚀可能由于低表达的OPG不能竞争性抑制RANK和高表达的RANKL结合,加上高表达的LIGHT,促进破骨细胞生成和活化而致。     

雷公藤甲素配伍甘草酸对CIA大鼠血清TNF-α,IL-10的影响

目的：观察雷公藤甲素与甘草酸配伍对CIA模型大鼠关节肿胀和血清TNF-α,IL-10水平的影响。方法：使用Ⅱ型胶原诱导出成功的关节炎模型大鼠60只,并随机分为模型组、雷公藤甲素组、甘草酸组、雷草1组、雷草2组和雷草3组,另设空白组。以关节炎指数和关节肿胀度作为疗效评判标准,并采用ELISA方法检测大鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体,TNF-α和IL-10的水平。结果：经雷公藤甲素配伍甘草酸治疗后,模型大鼠的关节炎指数和关节肿胀度均显著下降(P＜0.01),血清中抗Ⅱ型胶原抗体和TNF-α水平显著下降,而IL-10水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01)。结论：甘草酸配伍雷公藤甲素治疗CIA,可以在保持疗效的前提下减少雷公藤甲素的用量。     

木犀草素抑制类风湿关节炎大鼠NLRP3炎性小体活化增强关节骨保护作用研究

目的:考察木犀草素对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠NLRP3炎性小体调节作用,观察木犀草素对动物模型关节骨保护表现。方法:随机选取雌性SD大鼠分为空白组、模型组、木犀草素100mg/kg组(木犀草素组)、木犀草素50mg/kg+MCC95020mg/kg组(联合给药组)。除空白组外,其余各组构建关节炎模型。连续给药5周并测量大鼠足跖容积,免疫组化法检测骨组织内骨保护素(OPG)表达,免疫蛋白印迹法检测足跖内NLRP3、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、RANKL、血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达,ELISA试剂盒检测血浆白介素(IL)-1β和IL-18表达。结果:与模型组比较,木犀草素组、联合给药组大鼠足跖肿胀度显著降低(P<0.01);免疫组化显示木犀草素组、联合给药组骨组织内OPG蛋白表达较高(P<0.01);免疫蛋白印迹显示木犀草素组、联合给药组关节滑膜内NLRP3、Caspase-1、RANKL、VEGF和HIF-1α蛋白表达下调(P<0.01,P<0.05);ELISA显示木犀草素组、联合给药组血浆IL-1β、IL-18表达下调(P<0.01)。结论:木犀草素可抑制类风湿关节炎NLRP3炎性小体的表达,进一步降低足跖内Caspase-1、RANKL、VEGF和HIF-1α蛋白表达并增强骨组织内骨保护素OPG蛋白表达,从而起到骨关节保护作用。