丹参素和川芎嗪对血管紧张素Ⅱ致心肌间质成纤维细胞增殖相关基因的影响

目的通过研究活血药对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心肌间质成纤维细胞增殖相关基因的影响,从分子生物学角度探讨活血中药的有效组分丹参素和川芎嗪在AngⅡ诱导心肌肥大反应中的作用机制。方法以胶原Ⅰ和胶原Ⅲ基因表达为心肌间质指标,采用一步法,应用TRIZOL Reagent提取总RNA,然后用RT-PCR方法测定胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的mRNA表达。结果AngⅡ可显著增加胶原ⅠmRNA的表达(P<0.01),而Losartan可明显抑制AngⅡ所诱导的胶原ⅠmRNA的表达(P<0.01),而丹参素也可减少胶原ⅠmRNA的表达(P<0.01),川芎嗪虽无统计学意义,但也有减少胶原ⅠmRNA的趋势。AngⅡ同时也增加胶原ⅢmRNA的表达,Losartan可明显抑制AngⅡ所诱导的胶原ⅢmRNA的表达(P<0.01),而丹参素和川芎嗪也可减少胶原ⅢmRNA的表达(P<0.05)。结论活血药的有效组分丹参素和川芎嗪可抑制AngⅡ致心肌间质成纤维细胞胶原Ⅰ和胶原Ⅲ基因表达的增加,具有防止心肌细胞肥大和抗心肌间质纤维化作用,从而防治心脏肥厚。     

氟西汀对大鼠右心衰竭肺动脉高压的影响及机制探讨

目的 探讨氟西汀干预肺动脉压对右心衰竭大鼠心肌组织轴索生长抑制因子（Nogo）和胶原的影响。方法 将31只SD雄性大鼠随机分为治疗组、右心衰竭组、对照组。治疗组和右心衰竭组一次性腹腔注射野百合碱60 mg/kg诱发肺动脉高压致右心衰竭,对照组腹腔注射等量生理盐水。治疗组大鼠腹腔注射21 d后给予氟西汀10 mg/（kg·d）灌胃,直到第42天。右心衰竭组和对照组给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察各组大鼠肺动脉和右心室心肌组织,Masson染色观察右心室心肌组织胶原生成情况。采用实时荧光定量PCR检测各组大鼠心肌组织Nogo-A、Nogo-B、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达,同时采用Western blot方法对Nogo蛋白进行半定量分析。结果 氟西汀干预后,HE染色可见肺动脉狭窄明显减轻,右心室心肌组织病变减轻,Masson染色示右心室心肌组织胶原合成减少。实时荧光定量PCR结果显示,与右心衰竭组比较,治疗组心肌组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达下降,Nogo-A mRNA降低,Nogo-B mRNA上升（P均<0.05）。Western blot结果显示,与右心衰竭组比较,治疗组心肌组织Nogo-A蛋白表达降低,Nogo-B1蛋白表达增加（P均<0.05）,Nogo-B2蛋白表达无明显变化（P>0.05）。结论 Nogo可能影响右心衰竭的胶原合成,部分参与心肌纤维化。     

心肌营养素-1在高静水压刺激心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的 探讨心肌营养素-1（CT-1）在高静水压刺激心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法 用160mmHg的高静水压刺激原代培养的心肌成纤维细胞，同时以CT-1的反义寡核苷酸进行干预。分别用MTT法检测心肌成纤维细胞的增殖，放免法检测血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的浓度，Western blotting检测CT-1蛋白的表达。结果 高静水压能明显促使心肌成纤维细胞增殖，AngⅡ分泌增加，CT-1合成上调，而CT-1的反义寡核苷酸能抑制高静水压诱导的细胞增殖和AngⅡ分泌。结论 CT-1参与高静水压的促心肌成纤维细胞增殖作用，且这一作用与肾素血管紧张素系统（RAS）有关。     

芝麻素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的:观察芝麻素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CF)增殖及胶原分泌的影响,并探讨其可能机制。方法:应用双酶消化和差速贴壁法获得纯化的心肌成纤维细胞,采用MTT法测定芝麻素对AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖的影响,羟脯氨酸法测定胶原含量,ELISA法测定转化生长因子β1(TGF-β1)水平,比色法测定细胞总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量。结果:芝麻素可显著抑制AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖和胶原分泌,抑制TGF-β1表达(P<0.05或P<0.01),同时可提高细胞抗氧化能力,减少脂质过氧化产物MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结论:芝麻素可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成,其机制可能与提高成纤维细胞的抗氧化能力、减少氧化损伤、下调TGF-β1蛋白表达有关。     

苦参碱对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究苦参碱 (matrine)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导新生大鼠心肌成纤维细胞 (cardialfibroblasts,CFb)增殖和胶原合成的影响 ,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法 :建立AngⅡ诱导新生大鼠CFb纤维化模型 ,采用MTT法检测Mat对CFb增殖的影响 ;羟脯氨酸测定检测CFB胶原合成量 ;RT PCR检测Mat作用下CFb的Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP 13)、组织金属白酶抑制因子 1(TIMP 1)、TGFβ 1的基因表达情况。结果 :①在一定范围内 ,苦参碱以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFb的增殖和胶原合成 (P <0 .0 1) ,②苦参碱可以降低Ⅰ型胶原和TGFβ 1基因mRNA表达 ,③苦参碱可以提高MMP 13基因mRNA表达。结论 :苦参碱通过抑制AngⅡ诱导的CFb增殖和胶原合成增加 ,从而发挥有效的抗心肌纤维化作用     

TGF-β1/Smads信号通路在SIRT1抗心肌纤维化中的作用及机制研究

目的 观察沉默信息调节因子1(sirtuin 1,SIRT1)对压力超负荷致大鼠心肌纤维化及血管紧张素Ⅱ(angiotensin, AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。方法 在体实验通过不完全结扎大鼠腹主动脉,使压力负荷增加诱导心肌纤维化,给予SIRT1激活剂后,左室心肌组织行Masson染色,观察心肌间质纤维化并计算胶原容积分数,免疫组化染色检测心肌组织TGF-β1/Smads蛋白表达。提取新生大鼠心脏成纤维细胞,给予AngⅡ或AngⅡ加SIRT1激活剂后,采用MTT法检测细胞增殖,qRT-PCR和Western blot法检测心肌组织及成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原(collagenⅠ/Ⅲ,Col1α1/3α1)、SIRT1及TGF-β1/Smads mRNA及蛋白的表达。结果 与假手术组相比,压力超负荷模型组大鼠心肌间质出现显著的纤维化,心肌胶原容积分数增加,Col1α1/3α1、TGF-β1/Smads表达明显增多,SIRT1表达减少;给予SIRT1激活剂SRT1720干预后可改善压力超负荷诱导的心肌间质纤维化,下调Col1α1/3α1、TGF-β1/Sm...     

黄连素下调细胞周期蛋白依赖性激酶-2活性抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化

目的探讨黄连素对血管紧张素诱导的心肌纤维化的抑制作用是否是通过蛋白依赖性激酶-2（CDK2）起作用。方法在SD大鼠体内用血管紧张素Ⅱ灌注,构建心肌纤维化模型,然后用黄连素灌胃,观察心肌纤维化程度及CDK2-T160磷酸化水平。在体外用血管紧张素Ⅱ刺激大鼠心脏成纤维细胞,用黄连素处理,观察细胞分化、增殖及CDK2-T160磷酸化水平。结果体内实验表明,黄连素浓度依赖性地减轻Ang-Ⅱ所诱导的大鼠心脏功能不全及心肌纤维化,并降低心室组织CDK2-T160磷酸化水平;体外实验表明,黄连素浓度依赖性地抑制Ang-Ⅱ所诱导的心脏成纤维细胞增殖, 使细胞周期停滞于G0/G1期,并降低成纤维细胞CDK2-T160的磷酸化水平。体外超表达CDK2-T160D,可逆转黄连素对心脏成纤维细胞增殖的抑制作用及对CDK2磷酸化水平的降低作用。结论黄连素通过CDK2-T160活性依赖性显著抑制心肌纤维化、心脏成纤维细胞增殖及保护心脏功能。     

ALK7在高糖诱导的心肌成纤维细胞转化及Ⅰ型胶原合成中的作用

目的 研究高糖诱导的心肌间质纤维化(心肌成纤维细胞表型转化以及胶原分泌)过程中活化素受体样激酶7(ALK7)的作用。方法 体外高糖培养大鼠心肌成纤维细胞,免疫荧光法观察成纤维细胞表型转化, real time PCR法检测心肌成纤维细胞ALK7和Ⅰ型前胶原mRNA的表达水平,ELISA法检测心肌成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原水平,Western blotting法测定心肌成纤维细胞ALK7蛋白的表达水平;siRNA抑制ALK7表达,再次观察高糖对心肌成纤维细胞表型转化及上述各因子表达的影响。结果 高糖刺激心肌成纤维细胞转化为肌成纤维细胞;高糖促进Ⅰ型胶原mRNA 和蛋白的表达(P＜0.05);高糖促进成纤维细胞ALK7 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05); ALK7 siRNA 抑制ALK7的表达后,高糖促进心肌成纤维细胞转化及合成Ⅰ型胶原的作用下降(P＜0.05)。结论 ALK7参与了高糖诱导的心肌成纤维细胞表型转化及合成Ⅰ型胶原的代谢过程。     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:研究槲皮素(Quercetin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖的影响,并探讨其对心肌纤维化的可能作用机制.方法:采用细胞培养技术在体外建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖建立心肌纤维化细胞模型,采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,分别观察蛋白激酶A抑制剂(H-89)、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(genistein)及槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响.结果:genistein抑制AngⅡ诱导心脏成纤维细胞增殖作用(P＜0.01),加入Que后其抑制作用更加显著(P＜0.01),但对H-89的抑制作用不明显(P＞0.05),说明Que与genistein有协同作用,部分通过酪氨酸激酶途径抑制AngⅡ(10-6mol/L)诱导的细胞增殖.结论:槲皮素通过部分酪氨酸激酶途径抑制CFb增殖.     

盐酸尼卡地平对血管紧张素Ⅱ诱导成年大鼠心脏成纤维细胞增殖和PYK2表达的影响

目的研究盐酸尼卡地平对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的成年大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和粘附斑激酶新成员PYK2合成的影响,探讨盐酸尼卡地平抑制心肌纤维化的机制.方法建立AngⅡ诱导成年大鼠纤维化模型,采用MTT法检测盐酸尼卡地平对CFs增殖的影响,免疫组化法检测CFs纤维连接蛋白量的变化,RT-PCR法和Western blot法分别检测PYK2 mRNA和蛋白的改变.结果盐酸尼卡地平呈浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFs的增殖和纤维连接蛋白的合成,并可降低PYK2 mRNA和蛋白的表达.结论盐酸尼卡地平的抗心肌纤维化作用的作用机制之一可能是通过抑制PYK2的表达实现的.     

甲状腺素对血管紧张素Ⅱ所致心肌成纤维细胞胶原合成改变的影响

目的 :以AngⅡ处理培养的心肌成纤维细胞 ,促使细胞中胶原的合成发生改变 ,观测T3对AngⅡ所致细胞胶原合成改变的影响。方法 :以AngⅡ及T3分别或同时作用于培养的大鼠心肌成纤维细胞 ,通过测定3H TdR和3H Leu掺入来了解成纤维细胞增殖率和蛋白质合成率 ,同时用免疫细胞化学方法检测成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结果 :AngⅡ使成纤维细胞3H TdR和3H Leu掺入增加 ,同时细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达也显著增加。T3组成纤维细胞3H TdR和3H Leu掺入虽然也增加 ,但T3组细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达却呈显著性降低。当T3与AngⅡ共同作用于成纤维细胞时 ,与T3组和AngⅡ组比较 ,3H TdR和3H Leu的掺入率没有发生显著性的变化 ;与AngⅡ组比较 ,细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达显著性降低 ,与对照组的表达一致。结论 :T3能降低AngⅡ所致的心肌成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的增加     

Tribble 3在高糖促进心肌成纤维细胞合成Ⅰ型胶原中的作用

目的     探讨Tribble 3(TRIB3)在高糖促进心肌成纤维细胞合成Ⅰ型胶原中的作用。方法    体外培养大鼠心肌成纤维细胞,采用实时定量逆转录一多聚酶链反应和酶标记免疫吸附测定法分别测定TRIB3 mRNA及Ⅰ型前胶原的mRNA和蛋白的表达,化学合成针对大鼠TRIB3的siRNA,转染大鼠心肌成纤维细胞,观察高糖对心肌成纤维细胞合成Ⅰ型前胶原的变化。结果     高糖不仅促进心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA和蛋白质表达,而且增加TRIB3 mRNA的表达（P＜0.01）;TRIB3 siRNA抑制TRIB3的表达后,高糖促进Ⅰ型胶原mRNA和蛋白质表达的作用下降（P均＜0.01）。结论   TRIB3参与了高糖促进心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成。     

血管紧张素1-7对血管紧张素Ⅱ诱导的SD大鼠心室成纤维细胞的影响

目的 在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)存在情况下,探讨血管紧张素1-7(angiotensin1-7,Ang1-7)对SD大鼠心室成纤维细胞的影响.方法 采用新生1～3d的SD乳鼠,用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化心室,采用差速贴壁法获取成纤维细胞,将细胞完全随机化分组为对照组(不予处理)、AngⅡ组、Ang1-7组、AngⅡ+Ang1-7组(先用Ang1-7预处理30 min,再加入AngⅡ处理).采用免疫荧光鉴定细胞,CCK-8检测细胞增殖,Western blot检测细胞Rac1、Rad、gp91 phox(Nox2)、P65、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白的表达,实时荧光定量PCR测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅰ、ColⅢ)和纤维连接蛋白(fibronectin) mRNA的表达.结果 AngⅡ能够促进SD大鼠心室成纤维细胞增殖,Ang1-7能减弱AngⅡ的促增殖作用(P＜0.05);与对照组比较,AngⅡ组Rac1、Nox2、P65、CTGF表达增加,Rad表达下降,Col Ⅰ、ColⅢ、fibronectin转录增加(P＜0.05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+Ang1-7组Rac1、Nox2、P65、CTGF表达减少,Rad表达升高,Col Ⅰ、ColⅢ、fibronectin转录下降(P ＜0.05);Ang1-7组上述各项指标与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ存在时,Ang1-7对心室成纤维细胞具有保护作用.Ang1-7通过调节Rac1、Rad及下游蛋白的表达,能够抑制成纤维细胞合成细胞外基质.     

罗布麻提取物对AngⅡ诱导的大鼠心肌纤维化中ERK通路的影响

目的:探讨罗布麻提取物对血管紧张素Ⅱ (Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌纤维化模型中ERK通路的影响,并初步探索罗布麻提取物抗心肌纤维化机制。 方法： 采用1×10－6 mol•L^-1 Ang Ⅱ诱导大鼠心肌成纤维细胞复制心肌纤维化模型,细胞分为正常对照组、AngⅡ组、缬沙坦治疗组1×10-6 mg•L^-1)及罗布麻提取物高剂量组（0.8 mol•L^-1）、中剂量组（0.4 mol•L^－1）、低剂量组（0.2 mol•L^－1）。通过对羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原（ColⅠ、ColⅢ）的检测鉴定模型的成功复制,RT-PCR及 Western blotting方法检测raf、ERK、c-fos mRNA 及ERK蛋白在各组细胞中的表达量。 结果： 成功建立Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化模型。与AngⅡ组比较,不同剂量罗布麻提取物组羟脯氨酸及ColⅠ、ColⅢ的表达量均下调（P<0.05或P<0.01）;RT-PCR及 Western blotting检测发现,罗布麻提取物不同剂量组的raf、ERK、c-fos mRNA 及ERK蛋白表达量较AngⅡ组降低（P<0.05或P<0.01）。结论： ERK信号通路在罗布麻提取物调控心肌纤维化发生和发展的过程中发挥重要作用。     

尾加压素Ⅱ及其受体在大鼠肾成纤维细胞中的表达及银杏叶的干预作用

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠肾间质成纤维细胞尾加压素Ⅱ（UⅡ）及其受体（GPR14）表达的影响和银杏叶(GBE）的干预作用。方法：体外培养大鼠肾成纤维细胞，以未处理细胞作为正常对照组，以AngⅡ作为刺激因素，分别加入终浓度为0、25、50、100和200 g•L^-1的GBE，RT-PCR检测各组细胞UⅡ及GPR14 mRNA表达，免疫印迹法检测各组细胞UⅡ及GPR14蛋白含量，ELISA法检测培养上清中Ⅰ型胶原（ColⅠ）含量。结果： AngⅡ组UⅡ、GPR14表达量及培养上清中ColⅠ含量明显高于正常对照组（P<0.01），与AngⅡ刺激组比较，AngⅡ+GBE组UⅡ及GPR14的mRNA表达量下降（P<0.01），蛋白含量减少（P<0.01或P<0.05），培养上清中ColⅠ含量明显降低（P<0.01或P<0.05）。结论：GBE可抑制AngⅡ诱导的肾间质成纤维细胞UⅡ及受体mRNA表达，降低其蛋白含量，减少细胞外基质ColⅠ分泌。     

ERK1/2信号通路介导PDGF-CC诱导的鼠心肌纤维化及其机制

目的 研究ERK1/2通路在血小板源性生长因子(PDGF)-CC诱导的鼠心肌纤维化中的作用及其可能的机制.方法 取SD大鼠乳鼠心脏组织,差速贴壁法分离并纯化心肌成纤维细胞.按不同药物处理随机分成对照组(CON组)、PDGF-CC(P组)、PDGF-CC+ERK1/2抑制剂U0126(PU组).MTT法检测心肌成纤维细胞的增殖,qRT-PCR法检测mRNA含量,Western blot法分析蛋白表达量.结果 MTT法显示P组细胞数较CON组显著增加(P＜0.01),而PU组细胞数较P组明显减少(P＜0.01).qRT-PCR法显示P组中PDGF-α受体(PDGFR-α)、ERK1、ERK2、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅰ、ColⅢ)的mRNA表达水平均明显高于CON组(P ＜0.001),PDGFR-β的mRNA表达量在P组与CON组间差异无统计学意义.与P组相比,PU组中PDG-FR-α、ERK1、ERK2、Col Ⅰ和ColⅢmRNA表达均明显下降(P＜0.01).Western blot法显示P组中磷酸化PDGFR-α(p-PDGFR-α)、ERK1/2、p-ERK1/2、Col Ⅰ和ColⅢ的表达量均明显高于CON组(P ＜0.001),PU组中p-PDGFR-α、ERK1/2、p-ERK1/2、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白表达量均显著低于P组(P＜0.001).结论 PDGF-CC可能通过结合PDGFR-α激活ERK 1/2信号通路,诱导鼠心肌成纤维细胞过量增殖伴胶原蛋白的合成,参与心肌纤维化的发生.     

血管紧张素Ⅱ对高糖诱导NRK-52E细胞转分化作用研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化的干预作用。方法细胞培养72 h后,Western blot检测对照组（0 mmol/L葡萄糖）、高糖组（25 mmol/L葡萄糖）、血管紧张素Ⅱ干预组（10 nmol/L AngⅡ）、高糖血管紧张素Ⅱ干预组（10 nmol/L AngⅡ＋25 mmol/L葡萄糖）中转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2（MMP2）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）以及甲状旁腺素相关肽（PTHrP）在NRK-52E细胞中的表达。活性氧（ROS）含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达。AngⅡ明显上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP的表达,并提高ROS含量。结论AngⅡ可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化。