TNFα对微血管内皮细胞的损伤作用及其分子机制(摘要)

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的。ＴＮＦα（简称ＴＮＦ）引起微血管内皮细胞功能、代谢的早期损伤及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞早期损伤的部分分子机制。 １细胞增殖动力学在体外培养的肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）中发现,加入 ＴＮＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）后,细胞形态从圆形、多角形变成梭形,细胞的纵轴拉长,横轴缩小。此种变化从培养６ｈ开始,７２ｈ最显。光镜下未见明显细胞损伤表现,电镜下（透射电镜及扫描电镜）细胞器无明显改变,但见内皮细胞表面微绒毛减少。当ＴＮＦ的浓度增高到４０ｎｇ／ｍｌ以上,将其与ＰＭＶＥＣ共同孵育培养７２ｈ后,ＴＮＦ组内皮细胞总数比对照组（ＰＢＳ组）显著减少（５．２３ ±０．５０减到４．３０±０．３４,Ｐ＜０．０１）。用流式细胞仪分析细胞增殖周期发现,ＴＮＦ组处于Ｇ_１期的细胞明显增多,Ｓ期和Ｍ期的细胞明显减少（Ｐ＜０．０５）。结果提示,高浓度ＴＮＦ抑制内皮细胞增生,使细胞分裂延缓。 ２ ＰＧＩ_２和ｔ－ＰＡ前列腺素Ｐ     

TNFα引起的微血管内皮细胞功能障碍及其分子机制

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子 (ＴＮＦα)作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα 引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｍＴＮＦα(简称ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞的功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系 ,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞功能障碍的部分分子机制。1 细胞增殖动力学　在体外培养的肺微血管内皮细胞 (ＰＭＶＥＣ)中发现 ,加入ＴＮＦ( 2 0ｎｇ/ｍＬ)后 ,细胞形态从圆形、多角形变成梭形 ,细胞的纵轴拉长 ,横轴缩小 ,…     

TNFα对培养的脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的 :探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对脐静脉内皮细胞的损伤作用。方法 :将培养的内皮细胞分为对照组和实验组 ,实验组培养液中含有TNFα(4× 10 5U/L) ;通过普通光镜、扫描电镜、透射电镜观察TNFα对内皮细胞形态和超微结构的影响 ,并运用免疫组化染色来观察TNFα对内皮细胞表达细胞间粘附分子 (ICAM 1)的影响。结果 :(1)光镜、电镜观察结果显示 :实验组内皮细胞拉长 ,由原来的多边形变为成纤维状 ,细胞间距不均且变大 ;微绒毛变短甚至呈泡状 ,个别拉长 ,有些部位细胞膜有缺损以及内质网扩张、线粒体凝聚等改变。并且这些改变有时间依赖性。 (2 )实验组内皮细胞ICAM 1表达明显增强。结论 :TNFα(4× 10 5U/L)对内皮细胞有明显的损伤作用     

免疫球蛋白IgG对TNF-α诱导的内皮细胞损伤的作用及其机制

目的探讨免疫球蛋白IgG对TNF-α诱导的内皮细胞黏附分子、细胞因子的表达及其作用机制。方法不同剂量的免疫球蛋白IgG预处理内皮细胞30 min,再加入TNF-α孵育2 h,或不同剂量的IgG与TNF-α预孵育30 min后加入内皮细胞孵育2 h,RT-PCR及实时定量PCR检测黏附分子ICAM-1、VCAM-1、E-Selectin及细胞因子IL-6、GM-CSF、IFN-β的mRNA表达;进一步应用Western blot检测黏附分子的蛋白表达及免疫球蛋白IgG自身抗体的表达情况。结果 IgG预处理内皮细胞再加入TNF-α或IgG与TNF-α预孵育后加入内皮细胞,IgG均可剂量依赖性地抑制了TNF-α诱导的黏附分子(ICAM-1、VCAM-1、E-Selectin)及细胞因子(IL-6、GM-CSF、IFN-β)的表达,IgG含有anti-IFN-γ,anti-TNF-α,anti-MCP-1的自身抗体。结论 IgG对TNF-α诱导的内皮细胞损伤有治疗作用,其机制与抑制内皮细胞分泌的黏附分子,细胞因子的表达及IgG存在抗细胞因子的自身抗体有关。     

二苯乙烯苷对LPC损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制

目的: 观察在溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导下,二苯乙烯苷(TSG)对血管内皮细胞的保护作用及非对称性二甲基精氨酸(ADMA)、NO和细胞凋亡的影响。方法: 体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),细胞经培养、传代,将第3、4代用于实验。随机将细胞分为对照组、LPC组和TSG+LPC组。10 mg/L LPC作用于HUVECs,孵育24 h诱导内皮细胞损伤,建立细胞损伤的模型;10.0、1.0、0.1 μmol/L TSG预先作用于HUVECs 1 h后,再给予10 mg/L LPC作用于HUVECs共同孵育24 h,建立TSG+LPC组。然后,分别检测细胞的存活率、ADMA、NO和凋亡率的变化。结果: LPC组与对照组比较,细胞培养上清液中ADMA含量显著增加,而NO含量明显降低,细胞的凋亡有所增加,细胞的存活率降低。与LPC损伤组比较,10.0、1.0、0.1 μmol/L TSG作用HUVECs 1 h后,再予10 mg/L LPC作用HUVECs 24 h后,细胞培养上清液中ADMA显著降低, NO含量显著升高,细胞凋亡率降低和细胞存活率显著升高。结论: 二苯乙烯苷能够通过抑制ADMA的表达,增加NO 的生成,并抑制细胞的凋亡,增加细胞的存活,从而对LPC损伤的血管内皮细胞发挥保护作用。     

阿魏酸钠对血管内皮细胞的作用及其机制研究

目的:探讨阿魏酸钠(SF)对血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:将人脐静脉内皮细胞(VEC)于培养箱中孵育,待细胞贴壁生长成亚融合状态时,分成四组继续培养:(1)对照组:常规培养的内皮细胞;(2)阿魏酸钠组:培养液中加入阿魏酸钠;(3)肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)组:培养液中加入TNF-ɑ;(4)TNF-ɑ+阿魏酸钠组:培养液中同时加入TNF-ɑ和阿魏酸钠。每组6瓶细胞,培养24h后,收集各组细胞,采用扫描和透射电镜观察细胞形态和超微结构,采用免疫组化染色检测Bcl-2和Bax的表达。结果:与对照组比较,TNF-ɑ组VEC皱缩变小,胞膜表面干裂或呈不规则锯齿状,可见凋亡细胞;超微结构显示,微绒毛水肿、僵直、断裂、分布不规则,减少甚至消失,核膜缺损,核周间隙增宽,或出现空泡和线粒体肿胀;Bcl-2表达减少,Bax表达显著增多。阿魏酸钠组和阿魏酸钠+TNF-ɑ组VEC超微结构与对照组细胞相似,Bcl-2表达增多,Bax表达减少。结论:阿魏酸钠可减少TNF-ɑ导致的内皮细胞损伤,其机理可能与阿魏酸钠降低Bax表达,提高Bcl-2表达,减少血管内皮细胞凋亡有关。     

TNF对于血管内皮细胞肿瘤的坏死作用

TNF是巨噬细胞产生的一种细胞激肽。TNF注射给移植肿瘤的小鼠时,能引起肿瘤出血坏死,并且可见到完全治愈的病例。作为TNF新的知识是在各种细胞表面都有TNF的受体存在,从而使杀伤细胞的效果提高到mRNA水平。体内实验,将从癌症患者分离出的肿瘤细胞移植给裸鼠,再拄射TNF,则肿瘤完全消退。如将TNF和α或γ干扰素并用,可明显地增强其效果。其次也表明了TNF有活化白细胞和增殖纤维细胞作用、从软骨细胞     

TNFα对血管内皮细胞PDGF-B链基因转录的影响

ＴＮＦα主要由巨噬细胞、Ｔ细胞和ＮＫ细胞产生,是一种在急、慢性炎症过程中均有重要作用的炎症介质。动脉粥样硬化（ＡＳ）是以动脉壁内皮结构、功能损害和平滑肌细胞增殖变化为主的慢性炎症过程。ＡＳ时ＴＮＦα合成增多,且与ＡＳ的严重程度成正比。ＰＤＧＦ是以二聚体（ＡＡ,ＢＢ和ＡＢ）形式存在的促分裂剂。其中,ＰＤＧＦ－Ｂ链由ＰＤＧＦ－Ｂ链基因编码,该基因ｍＲＮＡ在ＡＳ血管内皮细胞中表达明显增高。因此,研究在ＴＮＦα作用下,血管内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达调控的分子机制对于阐明动脉粥样硬化的发病机制具有重要…     

预热应激对缺氧血管内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究预热应激对缺氧血管内皮细胞的保护作用及其发生机制,探索新的防治措施。方法:将血管内皮细胞分为:(1)缺氧组;(2)热应激组;(3)预热应激+缺氧组;(4)对照组。用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,以台盼兰染色法测定细胞死亡率,用Griess化学法测定细胞培养液中NO₂^-含量,以观察细胞NO生成量。结果:缺氧血管内皮细胞LDH的释放量和细胞死亡率显著大于对照组,39℃预热应激可使其分别降低29.47%和33.67%,41℃预热应激对缺氧细胞无明显保护作用。缺氧使血管内皮细胞NO生成量显著降低。39℃预热应激的缺氧血管内皮细胞NO生成量显著高于缺氧组,41℃预热应激的缺氧血管内皮细胞NO生成量显著低于对照及相应的缺氧组;血管内皮细胞NO生成量与细胞LDH释放量及细胞死亡率呈显著负相关。结论:一定强度的预热应激可以对缺氧血管内皮细胞产生保护作用。细胞NO产生增多在这种保护作用机制中可能具有重要作用。     

大鼠失血性休克对内毒素诱导TNFα产生的影响及其分子机制

笔者观察了大鼠失血性休克（ＨＳ）对内毒素诱导肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）产生的影响及其细胞来源，并结合休克后组织内脂多糖结合蛋白（ＬＢＰ）ｍＲＮＡ的表达变化，对其分子机制进行了初步分析。研究结果显示，静脉注射ＬＰＳ后９０ｍｉｎ，ＨＳ＋ＬＰＳ组血浆ＴＮＦα水平分别较ＨＳ组高２０倍（Ｐ＜０．０１），ＬＰＳ组高２．７倍（Ｐ＜０．０５）；休克和复苏后，外周血白细胞产生ＴＮＦα的能力明显受抑，而肝Ｋｕｐｆｅｒ＇ｓ细胞产生ＴＮＦα的能力却明显增强；休克后不仅肝组织内ＬＢＰｍＲＮＡ表达增多，肺、肾组织内ＬＢＰｍＲＮＡ也相继表达增加。研究结果提示，失血性休克能显著增敏内毒素诱导ＴＮＦα的产生作用，其机制可能与休克后组织内ＬＢＰ表达上调有关，组织巨噬细胞群（如Ｋｕｐｆｅｒ细胞）可能是休克后细胞因子产生的主要来源。     

复方丹参滴丸对过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用与机制

目的：观察复方丹参滴丸对过氧化氢（H202）损伤人脐静脉内皮细（HUVEC）损伤的保护作用，探讨其对心脑血管疾病治疗的机制，以及在防治心脑血管疾病中的意义。方法：用0.1mmol／L H2O2制造HUVEC损伤模型，按分组分别把不同浓度的丹参滴丸（0．5g／L、0．25g／L、0．1g/L）于损伤前、损伤后加入，分别测定细胞活力（MTT法）即观察滴丸对H2O2损伤内皮细胞活性的影响；硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛（MDA），硝酸酶还原法测定细胞培养液中一氧化氮含量；免疫细胞化学法观察内皮细胞NOS2 NOS3,NF-κB的表达情况。     

葛根素对血管内皮细胞DNA损伤的保护作用

目的研究葛根素对血管内皮细胞DNA损伤的保护作用.方法不同浓度葛根素预处理人脐静脉内皮细胞24 h后,用500 μmol/L过氧化氢造成细胞的过氧化损伤,MTT法判断细胞存活率并选用合适的药物浓度,应用单细胞凝胶电泳技术(彗星实验)检测DNA损伤程度.结果未用过氧化氢处理的各组细胞拖尾率及彗星尾长无显著性差异(P》0.05);加用过氧化氢后彗星百分率及彗星尾长显著增高(P《0.005);过氧化氢处理组之间拖尾率及彗星尾长有显著性差异,葛根素的两个剂量组的拖尾率和彗星尾长均明显低于对照 H2O2组(P《0.05).结论葛根素对人脐静脉内皮细胞DNA损伤具有保护作用.     

黄芪多糖对淋巴细胞与血管内皮细胞粘附的影响及其分子机制

目的 从影响淋巴细胞与血管内皮细胞粘附的角度探讨黄区欧糖免疫增强作用的机制。方法 以体外培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）为模型,应用蛋杂料染色、细胞ＥＬＩＳＡＳ、免疫细胞化学等方法。研究黄芪多糖对淋巴细胞与血管内皮细胞粘附的影响及其分子机制。结果 黄芪多糖作用于ＨＵＶＥＣ,能促进ＨＵＶＥＣ与淋巴细胞粘附,并与ＩＬ－１、ＴＮＦ有协同增强作用,其主要分子机制为促进ＨＵＶＥＣ表面粘附分子ＣＡＭ－１的     

亚麻酸改善高血压老年患者血管内皮细胞损伤的作用机制

目的:探讨亚麻酸改善高血压老年患者血管内皮细胞损伤的作用机制。方法:筛选中度高血压老年患者116例,随机分为试验组(n = 58)和对照组(n = 58)。试验组在食品中添加亚麻酸,对照组予以安慰剂。测量患者的收缩压(SBP)和舒张压(DBP)以及血糖(BS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、内皮素1(ET-1)、肿瘤坏死因子(TNF-β)、白介素-6(IL-6)、高敏C 反应蛋白(hsCRP)、颗粒膜蛋白140(GMP-140)、血栓素B2(TXB2)和6前列腺素F1 (6-K-PGF1 );检测内皮细胞依赖性舒张功能(FMD%)和内皮细胞非依赖性舒张功能(GTN%)。结果:试验组BS、TG、TC、TNF-β、hsCRP GMP-140、TXB2、ET-1 和IL-6 较治疗前降低(P<0.05);6-K-PGF1水平明显升高(P<0.05);两组患者治疗后FMD 和GTN 均较治疗前升高(P<0.05)。结论:琢鄄亚麻酸能够降低轻中度高血压病患者的血糖、血脂,并降低炎症细胞因子和内皮素水平,改善血管内皮功能,并具有抗血小板聚集性等多种功效。     

TNF-α引起的微血管内皮细胞功能障碍及其细胞分子机制

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ α)作用的靶细胞之一。由ＴＮＦ α引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｒｈＴＮＦ α(简称ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系 ,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞功能障碍的表现及其部分细胞分子机制。实验是在体外培养的第二代大鼠肺微血管内皮细胞(ＲＰＭＶＥＣ ,简称内皮细胞 )中进行的。细胞经光镜、电镜的形态观察 ,ｖＷＦ免疫组化阳性 ,ＣＤ3 1免疫…     

大蒜素对血管内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用

目的 :观察大蒜素对培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)脂质过氧化损伤的保护作用。方法 :将HUVEC分成空白组、对照组和实验组 ,实验组分别用终浓度为 5 μg/ml、10 μg/ml、2 0 μg/ml、5 0 μg/ml的大蒜素培养液预处理后 ,再加入浓度为 0 .0 6mmol/L的联胺 37℃孵育 2h ,用扫描电镜观察细胞的形态 ,同时测定细胞培养液中一氧化氮 (NO)、丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)的含量。结果 :对照组HUVEC明显受损 ,MDA含量增加 (P <0 .0 1) ,NO、SOD减少 (均为P <0 .0 1) ;实验组与对照组比较 ,HUVEC损伤明显减轻 ,MDA含量降低 (P <0 .0 1) ,NO增加 (P <0 .0 1)、SOD增加 (P <0 .0 1) ,且呈剂量依赖性。结论 :大蒜素对HUVEC脂质过氧化损害具有保护作用。