腺相关病毒载体介导的人类HIF-1α基因对海马神经细胞凋亡的影响

目的构建人类缺氧诱导因子-1α(human hypoxia inducible factor,HIF-1α)的腺病毒相关载体(rAAV-HIF-1α),并观察其对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导原代培养海马神经细胞凋亡及细胞内游离钙离子浓度的影响。方法构建含人类HIF-1α基因的AVV载体rAAV-HIF-1α转染BHK21细胞并选择培养获得的G418抗性细胞,即AVV载体细胞株。以重组单纯疱疹病毒感染此细胞株获得rAAV-HIF-1α,PCR技术鉴定病毒,地高辛标记的CMV探针点杂交方法测定重组病毒滴度电泳测定病毒纯度,SDS-PAGE电泳测定病毒纯度,Aβ25-35旅导原代培养海马神经细胞凋亡。Western印迹检测目的蛋白的表达。流式细胞术分析细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度。结果 PCR证实rAAV-HIF-1α内含有人HIF-1α基因序列,病毒滴度为1×1012/ml,纯度大于98%,感染原代培养海马神经细胞后能够表达目的蛋白,同时可显著降低Aβ25-35诱导海马神经细胞凋亡百分率及细胞内游离子浓度上调(P0.05)。结论缺氧诱导因子-1α基因转染可能通过抑制细胞内游离钙离子浓度上调使海马神经细胞对Aβ25-35产生抗凋亡作用。     

缺氧诱导因子-1α调节研究的进展

缺氧诱导因子-1(HIF-1)广泛参与哺乳动物细胞中缺氧诱导产生的适应性反应,是机体细胞适应低氧的重要转录调节因子.HIF-1蛋白α亚基(HIF-1α)受细胞内氧分压精细调节,对于低氧环境中机体的生存和肿瘤组织的生长具有重要意义.正常氧分压条件下,HIF-1α通过泛素-蛋白水解酶系统迅速降解,在胞浆中含量很低.当受到细胞氧分压降低或其它调节因素作用时,HIF-1α降解途径被阻断,从而在胞浆中积聚、活化,并转移到细胞核,与HIF-1蛋白β亚基(HIF-1β)形成二聚体HIF-1分子,后者与相应的靶基因序列结合,调节基因的转录.在对HIF-1α蛋白质稳定性及转录活性的调节过程中,其氨基酸残基的羟基化和磷酸化是多种因素的主要调节方式.     

缺氧诱导因子-1α在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α在卵巢癌中的表达及临床意义。方法:选取2005年1月～2006年12月承德医学院附属医院卵巢上皮性肿瘤及正常卵巢的蜡块组织145例,利用免疫组织化学S-P方法对卵巢组织HIF-1α表达情况进行检查。结果:与正常卵巢和良性卵巢肿瘤相比,交界性卵巢肿瘤及卵巢癌组织HIF-1α表达相对较高(P<0.05);卵巢癌组织HIF-1α表达与病理分级间具有正相关关系(P<0.01)。结论:卵巢癌初期HIF-1α表达水平开始增加,随着病情发展水平逐渐上升,以HIF-1α为靶点的治疗对于卵巢癌治疗具有重要意义。     

缺氧诱导因子-1α在大肠腺癌组织中的表达及与血管生成的关系

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达与大肠腺癌发生、发展的关系。方法用免疫组织化学方法检测61例大肠腺癌组织中HIF-1α的表达,并分析其与大肠腺癌生物学行为和微血管密度(MVD)的关系。结果HIF-1α在正常黏膜组织中无表达;腺瘤组织中阳性表达率为15.4%,且均为弱阳性表达,HIF-1α表达在正常黏膜与腺瘤组织中差异无统计学意义(P>0.05)。癌组织中HIF-1α阳性表达率为65.6%,显著高于腺瘤组织(P<0.01)。HIF-1α表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期密切相关(P<0.01),而与肿瘤大小无关(P>0.05);HIF-1α阳性表达程度与MVD呈正相关。结论HIF-1α过表达可能与大肠腺癌的浸润、转移及新生血管形成密切相关。     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子在子宫内膜癌中的表达及相关性

目的:探讨HIF-1α、VEGF在子宫内膜癌中的表达及其临床意义,并分析两者的相关性。方法:采用免疫组织化学S-P方法检测11例正常子宫内膜、14例不典型增生子宫内膜、38例子宫内膜癌组织中HIF-1α和VEGF的表达。结果:HIF-1α和VEGF在子宫内膜癌和不典型增生子宫内膜组织中的阳性率明显高于正常子宫内膜,差异有统计学意义(P<0.05)。在子宫内膜癌组织中HIF-1α蛋白阳性表达与组织病理学分级、手术病理分期无关(P>0.05);VEGF随病理组织学分级的增加、手术病理分期的进展阳性率逐渐上升,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α和VEGF的表达呈正相关(r=0.429,P=0.007)。结论:在缺氧状态下,子宫内膜癌组织中HIF-1α基因被激活,过渡表达HIF-1α蛋白,并通过VEGF的上调而刺激肿瘤新生血管的生成,使肿瘤耐受缺氧,促进子宫内膜癌的转移。     

缺氧诱导因子1α调控人精子凋亡的作用研究

目的 探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha, HIF-1α)调控人精子凋亡的作用及机制,为弱精症等疾病的诊疗提供新的理论依据。方法 将成年人精液分为精子活力正常组和弱精症组,分别加入HIF-1α干扰剂氯化钴或鸟苷酸环化酶激活剂利非西呱(lificiguat, YC-1),并分别设置不加药物处理的对照组。用全自动计算机辅助精液质量分析系统检测各组精子活力(以前向运动率表示);用酶联免疫检测仪检测精子凋亡水平、顶体酶活性;蛋白质印迹法检测HIF-1α、Bcl-2及Bax水平。结果 与正常对照组相比,氯化钴处理组精子凋亡水平、HIF-1α和Bax蛋白的表达水平上升,精子活力、顶体酶活性、Bcl-2下降。与弱精症对照组相比,YC-1处理组精子凋亡水平、Bax表达下降,精子活力、顶体酶活性、HIF-1α、Bcl-2的表达上升。结论 HIF-1α水平可影响精子凋亡和活力。     

缺氧条件下大豆异黄酮对胃癌细胞增殖和缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的:研究缺氧条件下大豆异黄酮(soy bean isoflavone,SI)对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用及可能机制。方法:运用产气袋法(GasPaK)制造缺氧条件,实验分为正常对照、SI、缺氧对照和缺氧SI四组,用MTT法检测常氧和缺氧条件下药物效应。流式细胞仪分析各组细胞周期分布,透射电镜观察细胞超微形态的改变,免疫细胞化学法检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α和FAS的表达。结果:不同浓度SI在常氧和缺氧条件下都对人胃癌细胞株SGC-7901生长有抑制作用,并呈剂量-效应关系,细胞均滞留于G2/M期,缺氧条件下SI组抑制作用增加,细胞凋亡率增加。透射电镜观察常氧下SI处理后细胞出现凋亡,缺氧条件下出现凋亡和坏死。SI在不同氧条件下均上调Fas表达,并能下调因缺氧表达增加的HIF-1。结论:SI对人胃癌细胞生长有抑制作用,其机制可能通过阻抑细胞周期进程,上调FAS蛋白表达,从而诱导胃癌细胞凋亡而实现的。缺氧条件下SI抑制作用增强,抑制HIF-1α的表达可能是其重要机制。     

缺氧诱导因子HIF-1α在妊娠高血压综合征中的作用

目的探讨缺氧诱导因子HIF-1α在妊娠高血压综合征(PIH)中的作用。方法采用免疫组化法检测40例PIH患者和40例正常妊娠孕妇胎盘组织中HIF-1α的表达。结果PIH患者胎盘组织中HIF-1α高于正常妊娠对照组,中度、重度PIH组HIF-1α与正常对照组相比差异均有显著性(P<0.01),中度组高于轻度组(P<0.01),重度组高于中度组(P<0.01)。结论HIF-1α参与了PIH缺氧的病理生理改变,而且HIF-1α在PIH患者胎盘组织中的表达与PIH的严重程度有关。     

缺氧诱导因子-1α在百草枯中毒大鼠肾组织中的表达

目的 通过观察百草枯染毒大鼠肾组织的变化及中毒后不同时间点血清肌酐水平和肾组织中缺氧诱导因子(HIF)-1α蛋白及转化生长因子(TGF)-β蛋白表达的变化,探讨HIF-1α和百草枯中毒后肾损伤的相关性.方法 将48只健康SD雄性大鼠随机分为对照组(6只)和染毒组(42只):对照组大鼠予生理盐水1 ml一次性灌胃;染毒组按照50 mg/kg将质量浓度为20％的百草枯原液用生理盐水稀释至1 ml后一次性灌胃,按灌胃后2、6、12、24、48、72及120 h分为7个亚组,每组6只.分别收集动脉血做血气分析及乳酸和血清肌酐检测;肾组织切片行HE染色;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测肾组织HIF-1 α和TGF-β蛋白表达.结果 百草枯中毒大鼠在中毒后6h血乳酸和血清肌酐开始升高,与对照组比较,6、12、24、48、72、120h染毒组大鼠乳酸和血清肌酐明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);72、120h染毒组大鼠出现低氧血症,与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05).6h染毒组大鼠肾组织的HIF-1 α表达明显升高,72 h达高峰,染毒后6、12、24、48、72及120 h组HIF-1o蛋白表达与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05).染毒后24 h TGF-β蛋白开始升高,72 h达高峰,120 h呈下降趋势,染毒后24、48、72 h组TGF-β蛋白表达与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05).HIF-1α蛋白表达水平与血清肌酐(r=0.9308,P=0.0008)呈正相关;与动脉血氧分压(r=-0.6996,P=0.0534)无相关;与血乳酸(r=0.9483,P=0.0003)呈正相关.肾组织病理学表现主要为肾小管上皮细胞的变性和坏死,并随中毒时间的延长而加重,至120 h有好转趋势.结论 百草枯中毒后早期肾组织HIF-1 α表达明显升高,且和血乳酸、血清肌酐的上升存在相关性,可能同时上调了促肾纤维化因子TGF-β的表达.     

缺氧诱导因子HIF-1α在子痫前期胎盘组织中的表达及意义

[目的]探讨缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)在子痫前期胎盘组织中的表达及意义.[方法]选取2008年9月～2009年12月在某院分娩病例56例.分为:对照组:正常孕妇30例；子病前期组26例,其中轻度12例、重度14例.所有病例均排除内、外科合并症及其他产科并发症,均为单胎.应用免疫组织化学方法及Western blot法,比较各组胎盘组织HIF-1α的表达.[结果]HIF-1α的表达主要位于胎盘滋养细胞胞核；与正常分娩妇女胎盘组织相比较,子痫前期患者胎盘组织中HIF-1α染色程度及表达水平明显升高(P＜0.01)；且随着病情的加重,染色程度、表达水平亦呈上升趋势:各组间表达差异有统计学意义(P＜001).[结论] HIF-1α在子病前期患者胎盘组织中的高表达,从蛋白水平进一步证实缺氧为子病前期发病机制之一.     

缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的:初步阐述缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在宫颈鳞癌组织中异常表达的可能机制及两者与各种临床病理因素的关系及其预后价值。方法:应用免疫组化S-P法和蛋白印迹免疫分析法测定HIF-1α及VEGF,所得数据应用SPSS11.0系统软件包进行处理。结果:免疫组化结果:HIF-1α和VEGF在宫颈组织中阳性表达率分别为62.07%和49.43%;HIF-1α和VEGF的表达随着临床分期的增高及病理分化的降低表达增强,两者在原位癌、早期浸润癌和晚期浸润癌中的表达差异有统计学意义,脉管内见癌栓者HIF-1α的表达增强,两者的表达与淋巴结转移情况无关。VEGF的表达与HIF-1α的表达呈正相关。蛋白印迹免疫分析显示:在120KD和23KD位置可见HIF-1α和VEGF的蛋白条带,早期宫颈鳞癌组织中HIF-1α蛋白表达量是正常宫颈组织中蛋白表达量的(5.1±1.62)倍,早期宫颈鳞癌组织中VEGF蛋白表达量是正常宫颈组织中蛋白表达量的(4.2±1.62)倍。结论:HIF-1α和VEGF的联合检测对判断宫颈鳞癌的病情和预后具有重要的意义。     

果糖-1,6-二磷酸酶1和缺氧诱导因子1α在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)和缺氧诱导因子1α(HIF1α)蛋白表达与乳腺癌临床病理特因素的关系及二者表达的相关性.方法 采用免疫组化En Vision法检测68例乳腺癌和68例相应癌旁正常组织中FBP1和HIF1α蛋白的表达情况.结果 乳腺癌组织中FBP1蛋白的阳性表达率为38.23％,明显低于癌旁...     

缺氧诱导因子HIF-lα在子痫前期胎盘组织中的表达及意义

[目的]探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在子痫前期胎盘组织中的表达及意义。[方法]选取2008年9月～2009年12月在某院分娩病例56例。分为:对照组:正常孕妇30例;子痫前期组26例,其中轻度12例、重度14例。所有病例均排除内、外科合并症及其他产科并发症,均为单胎。应用免疫组织化学方法及Western blot法,比较各组胎盘组织HIF-1α的表达。[结果]HIF-1α的表达主要位于胎盘滋养细胞胞核;与正常分娩妇女胎盘组织相比较,子痫前期患者胎盘组织中HIF-1α染色程度及表达水平明显升高(P﹤0.01);且随着病情的加重,染色程度、表达水平亦呈上升趋势;各组间表达差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]HIF-1α在子痫前期患者胎盘组织中的高表达,从蛋白水平进一步证实缺氧为子痫前期发病机制之一。     

缺氧诱导因子-1对缺氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的调控作用

【目的】探讨细胞凋亡在缺氧肺损伤的作用及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对细胞凋亡的调控作用。【方法】体外培养大鼠肺泡上皮细胞加入氯化钴(cobalt chloride,COCl2)制作细胞缺氧模型,将小分子干扰缺氧诱导因子-1(HIF-1αsmall interference RNA,HIF-1αsi RNA)有效的转染至细胞内,检测常氧、缺氧4、24 h、小分子干扰后缺氧4、24 h后HIF-1αmRNA的表达水平变化,同时应用荧光显微镜以及流式细胞术检测非转染以及转染组不同缺氧时间细胞凋亡率的变化。【结果】常氧下HIF-1αmRNA表达水平较低,随缺氧时间增加HIF-1αmRNA的表达水平明显升高(P<0.05);HIF-1αsiRNA可有效沉默HIF-1α,下调率为56%、57%(P<0.01)。细胞凋亡率随着缺氧时间延长而增加(P<0.05),48 h细胞开始出现坏死现象;通过HIF-1αsi RNA预处理细胞后,可降低缺氧诱导的细胞凋亡的发生率(P<0.05)。【结论】缺氧引起肺泡上皮细胞的凋亡,随缺氧时间增加凋亡增加,HIF-1α在缺氧诱导细胞凋亡中起着重要的作用,HIF-1αsiRNA可以减少肺泡上皮细胞凋亡的发生。     

妊娠期高血压疾病患者胎盘缺氧诱导因子-1α与脐血瘦素的关系及临床意义

目的:通过对胎盘缺氧诱导因子-1α及脐静脉血瘦素水平的检测,探讨两者之间的关系,以及两因子对妊娠和妊娠期高血压疾病的影响。方法:随机选取住院病人65例,其中正常孕足月孕妇10例(正常组),妊娠期高血压疾病55例(高血压组)。高血压组中包括妊娠期高血压15例、轻度子痫前期15例、重度子痫前期15例、子痫患者10例。用免疫组化法检测胎盘组织中的缺氧诱导因子-1α,用放射免疫法检测脐静脉血的瘦素水平。用彩色病理图像处理软件将免疫组化结果进行平均光密度量化,数据用SPSS10.0统计软件分析。结果:①高血压组胎盘缺氧诱导因子-1α及脐静脉血瘦素水平较正常组增高,差异有显著性(P<0.01)。②高血压组胎盘缺氧诱导因子-1α与脐静脉血瘦素水平、新生儿体重呈正相关(P<0.01),而正常组相关性不明显(P>0.01)。结论:缺氧诱导因子-1α在妊娠期高血压疾病中,对胎儿的发育有促进作用,并对胎盘瘦素的分泌有影响。     

缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1在子宫内膜癌中的表达及其与预后的关系

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在子宫内膜癌中的表达及其与预后的关系.方法:选取2010年7月～2013年8月在该院行手术切除的子宫内膜腺癌存档蜡块标本74例,另选取同期进行手术切除或门诊刮取的子宫内膜不典型增生病例23例、复杂性增生病例18例及正常子宫内膜15例.采用免疫组化SP二步法检测不同组织中HIF-1α和GLUT-1的表达情况,分析其与临床病理特征之间的关系.结果:HIF-1α在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生、复杂性增生和正常子宫内膜中的阳性表达率分别为79.7％、52.2％、25.0％和6.7％,差异均有统计学意义(P＜0.05);GLUT-1在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生、复杂性增生和正常子宫内膜中的阳性表达率分别为75.7％、43.5％、11.1％和0.0％,差异均有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α和GLUT-1表达与病理分期、组织学分级、浸润深度及淋巴结转移有关(P＜0.05),病理分期越高、组织分级越低、浸润深度越深、有淋巴结转移,HIF-1α和GLUT-1的阳性表达率越高;HIF-1α与GLUT-1表达呈正相关(r=0.654,P＜0.05).结论:HIF-1α和GLUT-1在子宫内膜癌病理进程中发挥重要作用,可以作为判定子宫内膜癌恶性程度及预后的敏感指标.     

缺氧诱导因子-1α与百草枯中毒致急性肺损伤早期肺纤维化的关系

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织急性肺损伤早期肺纤维化中的作用.方法 将48只健康SD大鼠随机分为对照组(6只)和PQ染毒组(42只).对照组大鼠予生理盐水1 ml,一次性灌胃;将质量分数为20％的PQ用生理盐水稀释,对染毒组大鼠一次性灌胃染毒1 ml(500 mg/kg),按灌胃后2、6、12、24、48、72及120 h分为7个亚组,每组6只.分别测定各组大鼠的动脉血氧分压(PaO2);进行肺组织HE染色、Mason染色,观察病理学变化;肺组织荧光染色观察肺组织变化及HIF1-a蛋白表达;用免疫蛋白印迹(Western blot)法检测HIF-1α蛋白表达.结果 染毒72h组大鼠动脉血PaO2为(62.33±0.22) mm Hg,与对照组[(96.00±5.20) mm Hg]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色可见,染毒后2h大鼠肺泡毛细血管内皮细胞、肺泡上皮细胞和肺间质的急性弥漫性损害,广泛肺间质炎性细胞浸润,增厚;染毒后12h肺间质水肿减轻,肺泡间距变窄;染毒后120 h,肺泡结构紊乱,较多量片状分布瘢痕条索,成纤维细胞明显增多,外周炎症吸收.Masson染色可见,染毒后2h大鼠肺泡上皮出现明显胶原沉积;24、48 h蓝染的胶原纤维逐渐增加;染毒后120 h肺泡组织明显破坏,大片纤维结缔组织沉积.免疫荧光及Westem blot法均显示,染毒组大鼠染毒后2h肺组织中HIF1-a蛋白表达明显升高,至12h达峰值,24、48 h逐渐下降,但仍高于对照组,染毒组各时间点HIF-1α蛋白表达与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05).染毒组各时间点HIF-1α蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PQ中毒大鼠肺组织早期即出现肺纤维化及HIF-1α蛋白的表达,HIF-1α可能参与了肺纤维化的形成.     

缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）反义寡核苷酸对宫颈癌细胞增殖的影响

目的研究缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸（asHIF-1α）对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其相关机理。方法使用宫颈癌细胞株He1a建立裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为3组,分别注射生理盐水,HIF-1α正义寡核苷酸和HIF-1α反义寡核苷酸,观察三组动物的肿瘤生长曲线,四周后处死裸鼠,计算肿瘤的体积及其抑制率,绘制皮下肿瘤生长曲线。应用免疫组化技术检测种植瘤内VEGF和HIF-1α的变化。结果 asHIF-1α有明显的抑瘤作用,肿瘤生长曲线减缓,体积抑制率为33%、瘤重抑制率为54%（P〈0.05）;反义治疗组种植瘤内HIF-1α和VEGF蛋白含量显著降低（P〈0.05）。结论 asHIF-1α对实验动物荷瘤生长具有明显的抑制作用,其机制是通过抑制HIF-1α表达,进而抑制VEGF的合成,从而使肿瘤组织的血管形成被抑制。     

不同海拔高度地区缺氧诱导因子-1α与宫颈癌血管生成的关系

目的:探讨不同海拔高度地区宫颈癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其与微血管密度(MVD)的相关性。方法:采用免疫组化S-P法检测HIF-1α、VEGF的表达;用CD34单克隆抗体标记肿瘤微血管密度。结果:宫颈癌组织HIF-1α及VEGF在不同海拔地区差异有显著性(P0.05);HIF-1α及VEGF表达呈一致性,呈正相关;HIF-1α或VEGF的MVD值有显著性。结论:提示高海拔地区检测HIF-1α对早期诊断、预防宫颈癌有重要意义。     

缺氧诱导因子-1α在大肠腺癌组织中的表达及与血管生成的关系

目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达与大肠腺癌发生、发展的关系。方法用免疫组织化学方法检测61例大肠腺癌组织中HIF-1α的表达，并分析其与大肠腺癌生物学行为和微血管密度（MVD）的关系。结果HIF-1α在正常黏膜组织中无表达；腺瘤组织中阳性表达率为15．4％，且均为弱阳性表达，HIF—lq表达在正常黏膜与腺瘤组织中差异无统计学意义（P〉0．05）。癌组织中HIF-1α阳性表达率为65．6％，显著高于腺瘤组织（P〈0．01）。HIF-1α表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期密切相关（P〈0．01），而与肿瘤大小无关（P〉0．05）；HIF-1α 阳性表达程度与MVD呈正相关。给论 HIF-1α过表达可能与大肠腺癌的浸润、转移及新生血管形成密切相关。