成体干细胞与干细胞疾病

目的 结合文献对成体干细胞的特性进行总结，描述干细胞疾病的定义及特性。方法 广泛查阅近期相关文献，回顾成体干细胞及干细胞疾病。结果 成体干细胞是一类位于成熟组织器官内、维持正常组织细胞数量和功能的原始细胞，具有自我更新和多潜能分化能力，随着生物个体生命周期增长，成体干细胞出现老化。起源于干细胞的疾病可视为干细胞疾病。当成体干细胞自我更新能力增强和／或分化障碍时，细胞增殖能力变强，引起增生性疾病特别是肿瘤疾病。当成体干细胞自我更新减弱，提前老化或分化不全时，可导致功能细胞形成减少，如不能满足组织器官功能的需要，将导致相应器官功能衰竭，形成退行性疾病。结论 对成体干细胞自我更新、分化及老化的研究，在理论上将指导干细胞疾病的研究，并有助于发展干细胞疾病的诊断及治疗方法。     

体外肝切除自体肝移植在复杂肝切除中的应用

目的 评估体外肝切除自体肝移植在巨大肝癌患者复杂肝切除中的临床价值.方法 回顾性分析2008年1月至2010年5月首都医科大学附属北京朝阳医院收治的4例巨大原发性肝癌患者的临床资料.肿瘤最大直径10 ～ 18 cm,病灶不同程度地累及了第一、二、三肝门.患者难以耐受常规肝切除,均行体外肝切除自体肝移植.结果 4例患者顺利完成手术,手术时间690 ～840 min,无肝期250～300 min,术中出血量400～1400 ml,术中无肝期未行门、腔静脉转流术.4例患者在体外肝切除后行下腔静脉或肝静脉及门静脉修复成型,均应用成型异体血管来延长剩余肝脏肝上腔静脉以利于腔静脉吻合及第一肝门的重建.本组患者1例术后肝功能正常,1例出现腹腔出血再次手术止血,1例发生肝功能不全,1例出现肝肾功能不全于术后5d放弃治疗而死亡.3例术后生存的患者术后1～2个月间剩余肝脏均发生不同程度的代偿增生.术后生存的3例患者中2例分别于术后8、9个月发现肺部多发转移瘤,分别于术后13个月及15个月死亡.随访截至2012年4月,1例患者无瘤生存37个月.结论 体外肝切除自体肝移植为复杂肝切除的巨大肝癌患者提供了技术上的可行性,术后肝功能代偿不全及近期肿瘤的复发是限制该手术发展的主要问题.     

前列腺成体干细胞研究进展

成体干细胞维持着组织器官的正常形态和功能,与组织器官疾病的发生发展密切相关。已有证据显示前列腺组织可能存在前列腺成体干细胞。本文主要就近年来有关前列腺成体干细胞及其标志物、前列腺成体干细胞与良性前列腺增生发生发展的关系作一综述。     

成体干细胞在骨组织工程中的应用

种子细胞的来源、分离纯化、规模化扩增和保持体内成骨活性等是制约骨组织工程研究与应用发展的重要瓶颈问题之一.干细胞研究的进展和突破给骨组织工程种子细胞的选择带来了新希望.该文在论述骨组织工程对种子细胞要求的基础之上,对成体干细胞与胚胎干细胞进行比较,并对研究较多的骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞、外周血干细胞及新近提取的胎盘来源干细胞的生物学特性、成骨能力、临床应用及其在骨组织工程中的应用前景进行阐述与讨论,以最终实现根据临床实际需要而选择合适的种子细胞的目标.     

自身成体干细胞移植治疗心肌梗死

心血管疾病 ,尤其是心肌梗死已成为人类死亡的主要疾病。自身成体干细胞移植为心肌梗死的治疗带来了新的希望。目前可供移植的种子细胞包括骨骼肌卫星细胞 ,骨髓干细胞 ,内皮祖细胞 ,自体移植避免了免疫排斥和伦理道德问题。近期实验表明移植的干细胞能在心肌疤痕中存活 ,增强心功能。当前需要进一步研究干细胞移植后与心肌微环境的联系 ,理想的移植细胞数目和移植技术以及对整个心功能可能产生的影响。     

tTG在肝纤维化形成中的作用

转谷氨酰胺酶（transglutaminase，TGs）家族是一类能够催化蛋白质酰基转移反应的钙依赖性酶，生成ε-（γ-谷氨酶）-赖氨酸异肽键或N，N-双（γ-谷氨酰）多胺键，通过共价结合使蛋白质内部或蛋白质之间形成不可逆性交联，被称为天然生物胶。人类基因组编码8种TGs包括因子Ⅶa、角质形成细胞TG（TG1）、组织TG（tTG）、表皮TG（TG3）、前列腺TG（TG4）、TGx、TGy及TGz。tTG（也称TG2）是TGs的家族成员，广泛存在于在内皮、系膜、平滑肌细胞成纤维组织中，而肝脏是表达tTG最活跃的器官。tTG具有多种生物学功能，参与细胞膜完整性的维持、细胞分化格凋亡、信号传导、细胞粘附、组织重塑等。近年来的研究发现，tTG在慢性肝损伤和肝纤维化的发生发展中也起着重要作用，本文就tTG的生物学特性及其在肝纤维化和肝细胞再生中的作用作一综述。     

成体干细胞在组织修复及再生中的治疗现状与展望

诱导性多能干细胞的研究正在兴起,有可能取代胚胎干细胞和成体干细胞而广泛应用于发育生物学以及组织修复与再生研究等多个领域[1-2].但就目前而言,成体干细胞作为多能干细胞的一种,从细胞到器官的修复与替代作用已经得到证实,并有较多研究.本文以骨髓间充质干细胞(MSC)为代表,对损伤修复与再生的现状进行概述,并探讨将来的发展方向.     

瘦素在肝纤维化中的作用

近年来大量研究显示,瘦素与肝纤维化有着密切联系。瘦素可以放大炎症反应,其炎症放大作用可独立诱发肝纤维化的发生。当患者发生肝纤维化或肝硬化时,瘦素水平随纤维化的程度而逐渐升高,且两者之间呈正相关。肝脏星状细胞(HSC)的增生、活化是肝纤维化发生发展的关键环节。瘦素的作用机制可能是通过上调TGFβ1,激活HSC并抑制其凋亡,从而促进以胶原为主的细胞外基质合成增多,加速肝维化的发生发展。     

骨髓间充质干细胞对肝纤维化的免疫调节研究进展

在各种原因所致的肝纤维化、肝硬化中,病毒性肝炎是最常见且主要的原因。据统计,全球每年因肝纤维化、肝硬化导致死亡的慢性肝病患者例数达140万[1]。我国是肝病大国,拥有大量的乙型病毒性肝炎(乙肝)及丙型病毒性肝炎(丙肝)患者,其中大部分患者未经有效治疗逐渐发展为肝纤维化、肝硬化。因此,积极防治肝纤维化、肝硬化的发生、发展,显得尤为重要。近年研究表明肝纤维化是一种可逆性的病变,合理的治疗可以达到缓解甚至治愈肝纤维化的目标,这为治疗肝纤维化、     

成体干细胞分化的可塑性及其在组织工程中的应用

组织器官的病损或功能障碍是人类健康所面临的主要危害之一.修复或替代因疾病、创伤或遗传因素所造成的组织器官缺损或功能障碍一直是人类的"梦想"和难以攻克的医学高峰.组织器官工程是应用现代生命科学、材料科学、计算机科学和工程学等学科的原理与方法,研究和开发用于替代、修复或改善人体各种组织或器官损伤(包括功能和形态),是继基因工程之后现代生物技术又一新兴的前沿技术领域,它标志着医学将走出组织/器官匮乏的困境和以牺牲健康组织为代价的"拆东墙补西墙"模式,步入制造组织和器官的"再生医学"新时代.     

成体干细胞在男性不育领域的应用及展望

干细胞是目前生物医学研究领域的热点,并由基础医学研究扩展到了临床应用。根据干细胞所处发育阶段和分化性质,通常可分为胚胎干细胞、诱导性多能干细胞(iPS)和成体干细胞。其中成体干细胞在诸多系统疾病中已经开展临床应用。目前,对成体干细胞范畴内的精原干细胞、间充质干细胞的基础研究走在生殖男科治疗研究的前列,应用于临床尚需时日。本文综述成体干细胞在男性不育领域的应用前景。     

间充质干细胞移植对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植促进大鼠减体积肝移植术后肝脏缺血再灌注损伤修复及再生的作用.方法 本研究①取同龄健康Wistar大鼠骨髓进行BMSCs体外培养,用第3代细胞制备悬液.②建立同龄健康Wistar大鼠50%减体积肝移植模型,分为实验组(BMSCs经门静脉植入)和对照组(生理盐水经门静脉注射)观察大鼠术后生存状态,术后不同时间留取血清和肝组织标本,采用免疫组化、流式细胞等方法进行检测.结果 成功体外分离培养BMSCs和建立50%减体积肝移植模型;大鼠肝移植术后2 h,自由活动和饮水.实验组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)不同时间点与相应的对照组相比差异有统计学意义(均P＜0.05).实验组细胞周期:术后第2、3天时肝组织的G0/G1期细胞比例显著低于对照组(分别F=22.061,44.572,均P＜0.01).增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数增高,术后第2、3和7天时比较,差异有统计学意义(分别F=30.716,28.281,8.975,均P＜0.05).结论 移植肝局部植入BMSCs后,可以促进大鼠肝细胞增殖和加快减体积肝移植术后缺血再灌注损伤的修复.     

胚胎肝干细胞分离与移植治疗裸鼠急性肝损伤

目的 探讨胚胎肝脏原始/干细胞移植治疗急性肝功能损伤裸鼠的可能性与有效性.方法 酶消化法分离孕13.5 d的BALB/C小鼠的胚胎肝脏原始/干细胞,免疫荧光染色法及RT-PCR法鉴定AFP、Albumin、CK19、c-Met等肝系和胆系标志物,给四氯化碳(CCl4)诱发的肝毒性损伤的裸鼠尾静脉注射4×105个干细胞,于注射前和注射后第1、2、4、7天取裸鼠血清,测定肝功能指标,观察肝脏组织学的改善情况.结果 经分离可得到具有干细胞特点的胚肝原始细胞,治疗组裸鼠在干细胞移植后肝功能指标逐渐降低,第1、2、4天均低于对照组,治疗组裸鼠肝脏组织学的病理损伤的恢复比对照组快. 结论酶消化法能够分离得到较多胚胎肝脏原始/干细胞,并且具有一定的改善急性肝损伤裸鼠的肝功能及肝脏病理指标的作用.     

人脐带间充质干细胞来源的细胞外囊泡增强纤维化肝脏再生能力

目的  探讨人脐带间充质干细胞来源的细胞外囊泡（hUC-MSC-EV）在纤维化肝脏再生中的作用。 方法  将C57BL/6小鼠随机分为正常肝脏70%肝切除组（Oil+PHx组）、肝纤维化70%肝切除组（CCl₄+PHx组）、肝纤维化70%肝切除+间充质干细胞来源的细胞外囊泡（MSC-EV）治疗组（CCl₄+PHx+MSC-EV组）,每组8只。将LX-2细胞分为磷酸盐缓冲液（PBS）组、转化生长因子（TGF）-β组、TGF-β+MSC-EV组。检测各组小鼠肝部分切除术后丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）水平,分析各组小鼠肝组织纤维化及增殖相关指标的表达情况。检测各组LX-2细胞表皮细胞生长因子（EGF）、成纤维母细胞生长因子（FGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）信使RNA（mRNA）的表达水平。观察对小鼠肝脏HGF表达的影响。 结果  与Oil+PHx组比较,CCl₄+PHx组小鼠血清AST、ALT、LDH水平升高,纤维化程度较高,天狼星红及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）染色阳性区域面积增大,α-SMA蛋白表达水平升高;与CCl₄+PHx组比较,CCl₄+PHx+MSC-EV组小鼠血清AST、ALT、LDH水平下降,纤维化程度较轻,天狼星红及α-SMA染色阳性区域面积缩小,α-SMA蛋白表达水平下降,差异均有统计学意义（均为P < 0.05）。与Oil+PHx组比较,CCl₄+PHx组Ki67、增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达水平降低;与CCl₄+PHx组比较,CCl₄+PHx+MSC-EV组Ki67、PCNA蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（均为P < 0.05）。与PBS组比较,TGF-β组LX-2细胞内CollagenⅠmRNA表达水平升高,α-SMA蛋白表达水平升高,HGF蛋白表达水平下降;与TGF-β组比较,TGF-β+MSC-EV组LX-2细胞内CollagenⅠmRNA表达水平下降,HGF mRNA和蛋白表达水平升高,α-SMA蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（均为P < 0.05）。CCl₄+PHx组HGF蛋白表达水平较Oil+PHx组下降,但差异无统计学意义（P > 0.05）;CCl₄+PHx+MSC-EV组HGF蛋白表达水平较CCl₄+PHx组上升,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论  纤维化肝脏再生能力较正常肝脏减弱,hUC-MSC-EV可以减轻肝纤维化,并可能通过促进活化的肝星状细胞分泌HGF,有效改善纤维化肝脏的肝再生能力。     

输注转染人白细胞介素10基因的骨髓间充质干细胞对移植肝的保护作用

目的研究输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞（hIL-10-MSC）对大鼠原位异种肝移植后移植肝的保护作用及机制。方法建立豚鼠对Wistar大鼠的非协调性异种原位肝移植模型,受体分为3组：空白对照组、骨髓间充质干细胞（MSC）对照组、hIL-10-MSC组。术后12h取移植肝,HE染色观察移植肝组织形态学变化,用RT-PCR、蛋白质印迹法观察移植肝组织IL-10、穿孔素、颗粒酶B的表达情况。结果与空白对照组、MSC对照组相比,hIL-10-MSC组大鼠移植肝排斥反应最轻,穿孔素、颗粒酶B的表达明显降低,而IL-10的表达显著升高（均P〈0.05）。结论 hIL-10-MSC对移植肝的保护作用可能与其减少穿孔素/颗粒酶B的表达有关。     

小鼠成体肝脏干细胞体外培养模型的建立

目的 观察正常成体小鼠肝细胞的增殖能力和分化潜能,分离成体小鼠肝脏内可能存在的干细胞或祖细胞,建立细胞培养模型.方法 应用改良的Seglen二步法灌注和离心分离肝脏细胞,用含血清的改良DMEM培养基进行培养,持续观察超过60 d.应用免疫荧光技术对肝细胞及其形成的克隆进行Albumin、AFP和CKl9染色.结果 部分肝脏细胞培养第2～3天后活化,迅速增殖并形成细胞克隆,培养30 d后克隆内出现类似成熟的肝细胞,细胞克隆持续扩增超过60d.该类细胞培养第1天强阳性表达肝细胞标记物Albumin,培养第5天细胞克隆开始表达肝脏干细胞标记物AFP,第55天表达胆管细胞标记物CKl9.结论 在成体小鼠未损伤肝脏内存在一种成体肝脏祖细胞(adult hepatic progenitor cells,AHPCs),该细胞体外培养具有较强的增殖能力,可分化为肝细胞和胆管细胞,并成功建立了AHPCs的体外培养模型.     

Role of stem cells in kidney repair

End-stage renal disease and acute renal failure are the most important issues of practical and clinical nephrology, bearing in mind their high mortality rate, solely symptomatic treatment, and overall economic impact on society. The advances in stem cell biology opened the door for the new era in treatment of many disorders, including renal, offering new therapeutical solutions. Findings suggesting that the adult kidney contains stem cells and that stem cells from bone marrow have potential to differentiate into renal cells focused research on the possible application of these cells in therapy of kidney disorders. The other promising candidates for stem cell therapy for the kidney are embryonic stem cells and amniotic fluid-derived stem cells. This article focuses on the characteristics and possible application of these types of stem cells.     

间充质干细胞及其衍生物对供肝修复的潜在价值

近年来,我国器官移植工作发展迅速,器官供需比例严重失衡。为解决供肝短缺问题,修复扩大标准供肝、改善供肝质量是当前的重要研究方向。间充质干细胞是一类具有自我更新、分化潜能的干细胞,具有免疫调节和组织修复等功能,其衍生物具有低免疫原性和良好的生物相容性等优点,因而广泛应用于各种疾病的治疗。本文通过综述间充质干细胞及其外泌体和细胞外囊泡在改善肝脏脂肪变性、修复缺血-再灌注损伤、促进小体积供肝再生方面的相关研究进展,总结间充质干细胞及其衍生物在供肝修复应用中的可行性及安全性,为修复边缘供肝、改善供肝质量提供新思路。     

Hepatocyte transplantation for total liver repopulation

Hepatocyte transplantation (HT) is an attractive therapeutic alternative to liver transplantation. A number of experiments have shown the feasibility of total liver parenchymal cell replacement by transplanted hepatocytes. In this review, we would like to highlight researches and clinical reports of HT for liver repopulation. Cellular source of clinical HT should be safety. Immortalized cells, hepatic stem cells, and other stem cells have been used for an experimental model for HT. The exact mechanism of the cell engraftment after HT has not been completely understood, although there were some markers to detect and investigate transplanted cells. In order to achieve liver repopulation following HT, a mild hepatic damage may need to facilitate cell engraftment and replace the host liver by transplanted cells. Hormonal factor may use for the same purpose. Despite the results of preclinical studies promising clinical benefits for cell therapy, the clinical experience of HT has been disappointing, except in a few cases. HT may become an alternative for liver transplantation in the future; however, many efforts should made before establishing an effective method for HT and liver replacement therapy.