STAT3靶向抑制剂LLL-HS-1对人结肠癌HT-29细胞和动物模型的作用

[目的] JAK2/STAT3信号是传递外膜表面信号至细胞核内的通路之一.利用结构为基础的计算机高通量虚拟筛选的设计、合成化合物LLL-HS-1,观察化合物LLL-HS-1作用结肠癌HT-29细胞和动物模型的效果.[方法]采用Western Blot检测结肠癌HT-29细胞系中STAT3蛋白表达及其磷酸化STAT3情况.人结肠癌HT-29细胞系接种到BLBA/c裸鼠左后肢上表皮,观察肿瘤生长情况,当肿瘤直径达5mm左右后随机分组(高剂量LLL-HS-1组,低剂量LLL-HS-1组,5-Fu对照组和空白对照组),每组8只,持续4周腹腔给药.以肿瘤体积大小为衡量药效的指标.[结果] LLL-HS-1对结肠癌HT-29细胞的IC50为0.1μM,化合物LLL-HS-1可以抑制STAT3酪氨酸残基705磷酸化.LLL-HS-1对肿瘤的生长具有抑制作用,以高剂量组尤为明显.[结论] STAT3抑制化合物LLL-HS-1可以成为新型的结肠癌靶向治疗药.     

3.0T磁共振弥散加权成像多b值在局部晚期肺癌鉴别中的应用

摘 要：［目的］ 探讨3.0T磁共振多b值弥散加权成像（DWI）在不同组织类型局部晚期肺癌鉴别中的临床应用价值。［方法］ 59例肺癌患者应用3.0T磁共振行3种b值DWI检查（b=600、800、1000s/mm2）,测量肿瘤的ADC值。［结果］ 59例肺癌DWI检查,三种b值的肺癌病灶在DWI像上均呈明显的高信号,癌肿平均ADC 均值分别为(1048±211)×10-6mm2/s、(978±169)×10-6mm2/s、(966±159)××10-6mm2/s(P=0.108)。病灶ADC均值在小细胞癌与鳞癌、腺癌之间存在差异（P<0.05）,鳞癌与腺癌之间无统计学差异(P=0.534)。［结论］ 三种b值均可进行肺癌DWI检查,通过DWI检查可为临床鉴别小细胞肺癌与非小细胞肺癌提供一定的参考价值。     

RNF8促进表皮生长因子受体野生型非小细胞肺癌吉非替尼耐药的机制分析

摘 要：［目的］ 探讨RNF8在携带野生型表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）非小细胞肺癌吉非替尼（Gefitinib）耐药中的作用及机制。［方法］ 通过RNAi法敲低RNF8，通过CRISPR/Cas9方法敲除RNF8，采用细胞敏感性实验和细胞克隆形成实验法评估敲低或敲除RNF8的A549细胞对Gefitinib的敏感性变化；采用Western blot法检测细胞中p-EGFR、EGFR、p-Akt、Akt和RNF8的表达水平；以裸鼠异体成瘤模型评估在体内敲除RNF8对Gefitinib敏感性的影响；以药物浓度逐步递增法构建对Gefitinib耐药的A549稳定细胞系，通过药物敏感性实验检测敲低RNF8的耐药细胞系对Gefitinib敏感性变化。［结果］ 在A549细胞中敲低RNF8，与对照组相比，不同浓度（2、5、10 μmol/L）的Gefitinib对细胞的抑制率均显著增强（12.21%±1.68% vs 45.48%±1.35%；25.13%±1.57% vs 60.93%±1.40%；36.67%±5.89% vs 78.92%±2.36%）（P均<0.001）。在不同浓度（5、10 μmol/L）Gefitinib处理下，与对照组相比，RNF8敲除的A549细胞克隆形成数量显著减少（45.00±16.05 vs 26.00±4.18；34.33±9.82 vs 11.67±1.21）（P均<0.001）。机制上，在A549细胞中敲低或敲除RNF8，Gefitinib对细胞中Akt磷酸化水平的抑制作用增强；过表达RNF8，Gefitinib对细胞中Akt磷酸化水平的抑制作用减弱。在裸鼠异体移植模型中，Gefitinib处理后，与对照组相比，RNF8敲除组小鼠肿瘤体积显著缩小［(450.98±98.54) mm3 vs (163.48±37.72) mm3，P<0.001］。在Gefitinib抵抗的A549细胞中用不同的siRNA敲低RNF8，Gefitinib对细胞的增殖抑制率均显著增强（P均<0.001），且敲低RNF8重新诱导Gefitinib对细胞中Akt磷酸化的抑制。［结论］ RNF8通过调节Akt的磷酸化激活促进野生型EGFR非小细胞肺癌细胞Gefitinib耐药。     

Akt抑制剂MK-2206清除衰老神经母细胞瘤细胞的实验研究

摘 要：［目的］ 探讨Akt抑制剂MK-2206清除衰老神经母细胞瘤细胞IMR-32的效果及可能机制。［方法］ 极光激酶A抑制剂MLN8237处理神经母细胞瘤细胞系IMR-32,利用衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色检测细胞状态、免疫荧光法检测组蛋白磷酸化和甲基化情况评估细胞衰老状况。CCK-8检测不同浓度MK-2206及MK-2206与MLN8237联合对IMR-32细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡状况。Western blot法检测MK-2206与MLN8237联合用药对IMR-32细胞 Akt、p-Akt、STAT3和N-Myc表达的影响。［结果］ MLN8237作用IMR-32细胞后,细胞核体积明显增大,细胞呈现大而扁平的衰老状态,细胞蓝染数显著增多;组氨酸 H3 Ser10磷酸化水平和组氨酸 H3 K9甲基化水平显著性升高。Western blot显示衰老IMR-32细胞内磷酸化Akt和STAT3蛋白显著性上调。10μmol/L MK-2206干预衰老细胞72h和96h后细胞存活率分别为（80.13±5.30）%、（74.29±4.06）%,较不干预衰老细胞组显著性下降。在MK-2206与MLN8237联合作用下细胞出现明显凋亡,凋亡率为（15.70±0.97）%,而不干预衰老细胞组细胞凋亡率为（8.81±1.33）%。同时两药联合组胞内p-Akt、STAT3和N-Myc蛋白显著性下调。［结论］ MK-2206可能通过抑制衰老神经母细胞瘤细胞内p-Akt,下调STAT3和N-Myc蛋白的机制,诱导细胞凋亡,从而达到清除MLN8237诱导的衰老细胞目的。     

抑制膜联蛋白A2表达对人胃癌细胞株裸鼠移植瘤生长的影响及机制

摘 要：［目的］ 通过体内研究探讨膜联蛋白A2（ANXA2）对胃癌生长的影响及相关作用机制。［方法］ 常规培养人胃癌细胞株BGC-823;将细胞接种到裸鼠皮下制备移植瘤模型。制模成功后随机分组,分别以脂质体/ANXA2-siRNA复合物（实验组）、脂质体/Non-siRNA复合物（对照组）或生理盐水（空白组）分别在各组肿瘤局部注射,每4d干预1次。干预4次后处死,绘制肿瘤生长曲线并比较瘤重。应用荧光定量RT-PCR及免疫组化技术检测各组ANXA2、增殖细胞核抗原（PCNA）、p27mRNA和蛋白表达。［结果］ 裸鼠皮下移植瘤造模成功率100.00%（15/15）。实验组肿瘤生长比其他两组缓慢,最终体积实验组为（1680.26±110.51）mm3,对照组为（2194.18±188.48）mm3,空白组（2172.37±212.36）mm3（F=9.341,P=0.004）;肿瘤重量实验组（20.63±0.46）g,对照组为（22.92±0.86）g,空白组为（23.44±0.90）g（F=11.688,P=0.002）。PCR及免疫组化结果显示实验组ANXA2、PCNAmRNA和蛋白表达明显低于其他两组（P<0.05）,而p27mRNA和蛋白表达明显高于其他两组（P<0.01）。［结论］ 抑制ANXA2基因表达后胃癌移植瘤的生长明显受到抑制,这可能与ANXA2基因调控PCNA、p27表达有关。     

rmhTNF-α对胃癌细胞系MKN45的生物学效应及其机制研究

摘 要：［目的］ 研究rmhTNF对胃癌细胞系MKN45的生物学效应及其机制。［方法］ 采用不同浓度（50、100、200IU/ml）重组改构人肿瘤坏死因子（rmhTNF）处理胃癌细胞MKN45,增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)观察其细胞增殖抑制率;实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测MKN45细胞p53异构体Δ133p53、STAT1及 STAT3 mRNA的表达变化。［结果］ CCK-8结果显示,随 rmhTNF 作用浓度增高（50、100、200IU/ml）,MKN45 细胞抑制率分别为17.133%,24.800%和31.733%,差异有统计学意义（F=16.246,P<0.01）。RT-PCR结果显示,随 rmhTNF 浓度增高,MKN45 细胞STAT1 mRNA表达上升（F=164.290,P<0.001）,STAT3、Δ133p53 mRNA表达下降（F=29.921,F=24.243;P均<0.001）。Pearson 相关性分析结果显示,Δ133p53 与STAT1表达呈负相关（r=-0.951,P<0.01）,与STAT3表达呈正相关（r=0.840,P<0.01）。［结论］MKN45细胞中,Δ133p53是STAT1、STAT3调控肿瘤细胞的共同靶基因,STAT1、STAT3-Δ133p53-p53通路可能是rmhTNF抑制胃癌细胞MKN45的机制。     

二甲双胍对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力及乳酸生成的影响

摘 要：［目的］ 探讨二甲双胍对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力、乳酸生成的影响。［方法］ 应用AnnexinV/PI和API等标记,流式细胞仪对肺癌A549细胞凋亡及周期特异性的检测,运用RT-PCR的方法检测Caspase-3、Caspase-9活化情况。MTT检测细胞增殖活力;Transwell体外迁移实验检测细胞体外迁移和侵袭能力;并检测乳酸生成情况。［结果］ 二甲双胍诱导的细胞凋亡主要在细胞周期的G1期发生。采用二甲双胍凋亡诱导,对照组未做处理,结果显示观察组的Caspase-3 mRNA（1.12±0.56）、Caspase-9 mRNA（1.10±0.29）的表达值显著高于对照组（0.82±0.31,0.72±0.26）。Transwell结果显示,第7d二甲双胍组体外迁移细胞数（2.69±0.56）明显增加;二甲双胍组细胞活力（52.39%±5.96%）下降;二甲双胍组乳酸生成（12.89±1.03）明显降低。［结论］ 二甲双胍诱导的细胞凋亡与肺癌A549细胞的细胞周期相关,存在G1期细胞周期阻滞的周期特异性,且此过程中发生了caspase活化,抑制细胞活性及迁移侵袭能力,降低乳酸的生成,促进肿瘤细胞凋亡。     

化疗联合吉非替尼小分子靶向治疗50例肺癌的疗效及安全性

摘 要：［目的］ 分析化疗联合吉非替尼小分子靶向疗法在肺癌患者中的疗效及安全性。［方法］ 肺癌患者100例,参照抽签法分为对照组和试验组,每组50例,对照组予以常规化疗,试验组基于对照组予以吉非替尼小分子靶向治疗,对比两组患者治疗后血清肿瘤标志物水平［鳞状细胞癌抗原（SCCA）、细胞角蛋白19片段（CYERA21-1）癌胚抗原（CEA）］及临床疗效、不良反应。［结果］ 治疗后,试验组血清肿瘤标志物SCCA（2.86±0.50）ng/L、CYERA21-1（3.06±0.92）ng/l、CEA（16.53±2.11）mg/ml分别低于对照组SCCA（3.72±0.68）ng/L、CYERA21-1（4.43±1.10）ng/L、CEA（27.38±2.50）mg/ml,差异有统计学意义（P均<0.05）;试验组总有效率66.00%（33/50）高于对照组38.00%（19/50）,差异有统计学意义（Z=7.850,P=0.005）;两组总不良反应率比较差异无统计学意义（P>0.05）。［结论］ 化疗联合吉非替尼小分子靶向治疗对肺癌患者疗效确切,能够显著降低血清肿瘤标志物水平,安全性较好。     

MicroRNA-1254靶向组蛋白去乙酰化酶7调控胃癌细胞增殖和侵袭

摘 要：［目的］ 探究microRNA-1254（miR-1254）对胃癌细胞增殖、侵袭的调控作用及分子机制。［方法］ 使用TargetScan7.1工具预测分析miR-1254对组蛋白去乙酰化酶7（histone deacetylase 7,HDAC7）的靶向作用位点;miR-1254 mimics和miR-1254 inhibitor转染胃癌细胞系SGC-7901,用实时荧光定量PCR检测miR-1254及HDAC7 mRNA表达;CCK-8法检测胃癌细胞增殖活性;Transwell法检测胃癌细胞侵袭能力;蛋白质免疫印迹实验检测STAT3、磷酸化STAT3的表达水平。［结果］ MiR-1254可以靶向结合HDAC7 mRNA 3′UTR区域。与对照组相比,转染miR-1254 mimics组miR-1254表达水平升高（t=13.51,P=0.0002）,HDAC7 mRNA表达水平显著性降低（t=4.667,P=0.0095）,而转染miR-1254 inhibitor组miR-1254表达水平显著性降低（t=10.41,P=0.0005）,HDAC7 mRNA表达水平显著性升高（t=4.008,P=0.016）。与对照组相比,转染miR-1254 mimics组细胞增殖活性显著性下降（F=30.4,P<0.0001）,细胞侵袭能力显著性减弱（t=6.284,P=0.0033）;与转染miR-1254 mimics组相比,miR-1254 mimics+HDAC7组细胞增殖活性升高（F=22.16,P=0.0002）,且侵袭能力增强（t=5.842,P=0.0043）。转染miR-1254 mimics抑制了STAT3的磷酸化,转染HDAC7表达载体可以减弱miR-1254对STAT3磷酸化的抑制作用。［结论］ MiR-1254可以通过靶向HDAC7抑制胃癌细胞STAT3的活化,并抑制细胞的增殖和侵袭。     

RNAi抑制iASPP基因表达对大肠癌细胞凋亡的影响及机制

摘 要：［目的］ 探讨RNAi抑制iASPP基因表达对大肠癌细胞凋亡的影响。［方法］ 参照脂质体LipofectamineTM2000转染说明转染iASPP的siRNA（iASPP-siRNA组）进入人大肠癌LoVo细胞株,并设置阴性对照组（转染无义的siRNA序列）和空白对照组（仅加入脂质体）,Western bloting检测转染48h的3组细胞中iASPP的蛋白表达;CCK8法于转染的24h、48h、72h检测细胞活力;流式细胞术检测转染48h的细胞凋亡率;Western blotting检测Ki-67、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。［结果］ iASPP-siRNA组（0.108±0.013）LoVo细胞株iASPP的蛋白表达显著低于空白对照组（0.389±0.036）（P<0.05）;iASPP-siRNA组细胞在24h（0.267±0.034）、48h（0.495±0.067）和72h（0.682±0.068）的活力细胞均显著低于空白对照组（0.385±0.042、0.688±0.074、0.977±0.097）（P<0.05）,在48h的细胞凋亡率（11.18%±0.78%）显著高于空白对照组（2.13%±0.45%）（P<0.05）。Ki-67（0.126±0.018）和p-STAT3（0.110±0.012）的蛋白表达水平显著低于空白对照组（0.365±0.045、0.169±0.018）,Caspase3（0.197±0.020）表达水平高于空白对照组（0.086±0.009）（P<0.05）,3组间STAT3蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。［结论］通过RNAi抑制iASPP基因表达可降低大肠癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,机制可能是下调STAT3信号,对细胞增殖的影响是下调Ki-67表达,凋亡的影响是上调Caspase3表达。     

砷化物治疗肿瘤的研究近况

近年来临床研究表明 ,三氧化二砷 (As2 O3 )和四硫化四砷 (As4S4)对急性早幼粒细胞白血病有显著的疗效 ;有机砷美拉砷醇也试用于治疗难治或耐药的白血病患者。大量研究资料表明 ,As2 O3 、美拉砷醇、二硫化二砷 (As2 S2 )和As4S4等砷化物对各种血液肿瘤细胞和许多实体瘤细胞均有诱导凋亡和 或抑制其生长作用。As2 O3 治疗多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征、原发性肝癌等某些实体瘤Ⅱ期临床研究均获得一定疗效。     

索拉非尼治疗原发性肝癌的研究进展

原发性肝癌是我国高发常见的恶性肿瘤，起病隐袭，早诊困难，确诊时大多数已达局部晚期或远处转移，治疗棘手，预后很差；常规化疗药物的作用有限，没有证据显示有明显的生存获益。已知肝癌的发病机制十分复杂，其发生、发展和转移与多种基因突变、细胞信号传导通路和新生血管增生异常密切相关，其中存在着多个关键性环节，正是采用分子靶向治疗的理论基础和潜在的靶点。近年来，应用分子靶向药物治疗肝癌的研究逐渐受到重视，正在成为新的热点，而多靶点、多激酶抑制剂索拉非尼（多吉美）作为代表性药物，已经取得突破性成果，能够有效地延长晚期患者的生存时间，开创了肝癌靶向治疗的新时代。为了尽快地熟悉了解有关动态，本文全面而系统地综述了索拉非尼治疗肝癌的实验研究、临床上单药和联合治疗研究的新进展，并讨论展望了未来的发展方向。     

Concise review on the safety of exercise on symptoms of lymphedema

Lymphedema is an atypical accumulation of high-protein fluid located just beneath the skin, which often occurs in the arm or leg. Exercising with lymphedema was traditionally considered to be unsafe. However, recent research indicates that exercise may be beneficial to individuals with lymphedema. Studies indicate that exercise can improve the range of motion and strength of the afflicted limb(s), as well as overall fitness and functional quality of life, and can be performed without exacerbating symptoms of lymphedema.     

三氧化二砷作用机制研究进展

砷化合物在我国作为药物应用已有2400多年的历史了。自从20世纪90年代,我国学者应用三氧化二砷（As2O3）治疗急性早幼粒细胞性白血病并获得成功以来,人们对砷化合物进行了深入的研究,发现As2O3不仅对各型白血病有效,对其他多种恶性肿瘤也有良好的治疗效果。As2O3主要是通过抑制肿瘤细胞生长和肿瘤新生血管形成、诱导肿瘤细胞部分分化和凋亡等发挥抗肿瘤作用的。本文不仅对上述问题进行总结,还展望了新发展起来的基因表达谱分析技术--基因芯片技术在研究As2O3作用机制方面的应用前景。     

奥沙利铂抗肿瘤作用的研究

观察奥沙利铂抗肿瘤作用。方法采用药物学体内实验法及体外人癌细胞培养药杀伤法，观察了奥沙利铂抑瘤活性并与顺铂相比较。结果奥沙利铂（９ｍｇ／ｋｇ－２．２５ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，３次）用药的３组小鼠，在体内接种Ｌ１２１０后，观察３０天均无腹水出现，全部存活，达到治愈水平。在相同剂量下（９ｍｇ／ｋｇ－２．２５ｍｇ／ｋｇ，腹注射，３次）败类沙利铂的毒性明显低于顺铂，每剂量组小鼠体重增加都高于顺铂组。结论体外     

Histopathological study on the effects of hyperthermia on microvasculature

Recent experimental evidence suggests that hyperthermia has profound effects on tumor tissue microcirculation. Indeed, this is one of the suggested mechanisms involved in the anti-tumor effects of heat. Groups of WAG-Rij rat transplanted tumors (rbabdomyosarcoma-BA1112) were ireated with local hyperthermia (Radio-Frequency). Various temperatures (ranging from 38° to 43°C) were used. Animals were subsequently sacrificed at 1, 3, and 24 hours after beating and tumors were subjected to detailed pathological studies for evaluation of the effects of heat on microcireulation as well as on tumor cells. The results are indicative of no specific changes in microvasculature up to 40.5°C. At intermediate temperatures (42°C) vessels show marked dilatation and congestion (?stasis). At higher temperatures (44.5°C) there is massive hemorrhage and necrosis with rupture of vessel walls. The degree and intensity of this process also depends on the interval between heating and time of sacrifice of the animal. Detailed results are presented. The correlation of pathological findings and blood flow observations as well as their relevance to treatment of cancer patients are discussed.     

基于新抗原免疫疗效预测研究进展

近年来,新抗原被认为是人体免疫系统识别和触发有效抗肿瘤免疫应答的关键分子,具有高度的免疫原性。研究显示免疫检查点抑制剂的疗效与新抗原的数量相关。因此,新抗原相关的生物标志物可能预测免疫治疗的疗效。全文主要讨论程序性死亡配体1、肿瘤突变负荷、肿瘤新抗原负荷、循环肿瘤DNA和微卫星不稳定性等对免疫治疗的预测价值,新抗原的鉴定方法,以及基于新抗原免疫疗法的应用成果。但实施检测和治疗的过程中也会遇到一些阻碍,例如：检测生物标志物过程繁琐,新抗原疫苗的制作费用高昂等。未来研究者们还需不断探索,找到更有效的生物标志物,使更多的患者从中受益,实现个体化的精准治疗。