人巨细胞病毒短时培养快速诊断改良技术的建立及其应用

目的 建立人巨细胞病毒（HCMV）短时培养快速诊断改良技术；检验临床样本，与病毒分离比较。方法 （1）用含细胞飞片培养板离心吸附AD169株，设时间梯度培养后用SABC法检测培养物中HCMV即刻早期抗原（IEA）；（2）用改良法检测156例患儿尿样本（7例留取脑脊液），其中54例与病毒分离对照；147例检测血清特异性IgM；（3）9例更昔洛韦（GCV）治疗后随访尿排毒和特异性IgM变化。结果 （1）标准毒株培养16－24h，能100％检出培养物中HCMV IEA。（2）快速法检测尿样本178份，阳性率46.6%。与病毒分离比较，敏感性和特异性分别达100％和91.7%。（3）147例检测血清HCMV IgM，50例阳性（34.0%），其中49例和另25例特异性IgM阴性者尿快速培养阳性，后25例中，年龄＜1岁22例；2例免疫抑制者快速培养阳性。（4）2例先天感染儿脑脊液快速培养阳性伴蛋白增高。（5）9例GCV治疗后随访2－4次，2例无效，1例尿排毒减少；6例尿排毒停止。结论 改良快速培养法敏感性高、特异性强，操作更为简便，是快速诊断活动性HCMV感染和评估抗HCMV疗效的可靠方法。     

苦参碱注射液治疗婴儿巨细胞病毒性肝炎的疗效观察

目的 探讨苦参碱注射液治疗婴儿巨细胞病毒(CMV)肝炎的疗效. 方法 CMV肝炎患儿42例随机分成2组:苦参碱注射液治疗组22例与更昔洛韦治疗组20例.苦参碱治疗组用苦参碱注射液(20～25 mg/d)静脉滴注,1次/d,连用14 d.间隔7～10 d 后,用苦参碱注射液20～25 mg/d静脉滴注,1次/d,连用5 d,共2、3个疗程.更昔洛韦治疗组用更昔洛韦15 mg/(kg·d)静脉滴注,2次/d,连用14 d.间隔7～10 d后,用更昔洛韦5 mg/(kg·d)静脉滴注,1次/d,连用5 d,共2、3个疗程.治疗前后予荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测各组血清人巨细胞病毒(HCMV)DNA拷贝数,于不同时间放射免疫法测定其血清TNF -α水平.观察二组临床及实验室结果.结果 1.苦参碱治疗与更昔洛韦治疗组治疗6周血清HCMV DNA拷贝数均明显下降,二者比较无显著性差异(P＞0.05).2.用药第4周苦参碱治疗组血清TNF-α水平下降最明显,与更昔洛韦治疗组比较有显著性差异(P＜0.01).3.二组治疗6周前后ALT、总胆红素(TBIL)、结合胆红素(DBIL)、未结合胆红素(IBIL)、胆汁酸(TBA)比较均无显著性差异(Pa＞0.05).4.二组治疗6周前后肝大比较无显著性差异(P＞0.05).结论 苦参碱注射液可有效抑制HCMV DNA复制,并能调控TNF-α分泌,调节免疫功能,发挥抗HCMV感染、保护肝细胞的作用.     

更昔洛韦治疗特发性血小板减少性紫癜应用指征

目的探讨更昔洛韦(GCV)治疗人巨细胞病毒(HCMV)感染相关的特发性血小板减少性紫癜的(ITP)应用指征。方法选择血清HCMV DNA PCR和(或)HCMV IgM检测呈阳性ITP患儿46例,采用逆转聚合酶扩增反应(RT-PCR)检测巨核系祖细胞中HCMV晚期抗原mRNA,并行GCV治疗,判定其疗效及应用指征。结果46例血清HCMV-DNA PCR阳性和(或)血清HCMV-IgM阳性的ITP骨髓巨核祖细胞HCMV晚期抗原基因mRNA阳性19例,GCV治疗有效16例,mRNA阴性27例,GCV治疗有效4例。阳性组疗效高于阴性组,有显著性差异(P<0.01)。结论HCMV感染的ITP患儿,若对常规治疗无效,应检测其巨核祖细胞内HCMV晚期抗原基因mRNA,阳性者是应用更昔洛韦的有效指征。     

小儿巨细胞病毒活动性感染的两种诊断方法比较

目的　通过血清人巨细胞病毒 (HCMV)IgM和尿快速培养HCMV检测临床标本的比较 ,进一步评价血清特异性IgM诊断活动性HCMV感染的价值。 方法　①ELISA法检测患儿血抗HCMV IgG、IgM。②通过检测尿培养物中HCMV即刻早期抗原 (IEA)快速诊断活动性HCMV感染。结果　① 119例尿培养阳性者 ,血抗HCMV IgG均为阳性。②与尿快速培养法相比 ,血IgM的特异性和敏感性分别达到 97 7%和 6 9 7% ;血IgM阳性数与尿快速培养阳性数比率在≤ 1个月、～ 1岁和～ 3岁组分别为 4 5 8%、75 75和 82 4 % ,表明IgM检测结果在各年龄组均有假阴性 ,其中尤以 1个月以下婴儿多见。③ 2例 3个月左右患儿血IgM阳性而尿培养阴性。 11例随访患儿中 ,9例在结束更昔洛韦治疗后 1个月复查 ,3例IgM迟于尿培养转阴 ,2例尿培养阴性而血IgM仍为阳性 ,表明IgM检测结果可有假阳性。 结论　血清特异性IgM检测可用于诊断活动性CMV感染 ,但其意义有一定局限性 ,应结合其他指标综合判断     

特发性血小板减少性紫癜巨核系祖细胞巨细胞病毒感染的临床研究

目的特发性血小板减少性紫癜（ITP）是儿童常见的出血性疾病,其病因尚不十分清楚。很多研究表明,该病的发生与病毒感染密切相关。探讨人类巨细胞病毒（HCMV）感染巨核系祖细胞致ITP血小板减少的发病机制及其有效的治疗方法。方法HCMV相关ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）体外培养技术收集集落细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCMV晚期抗原基因mRNA,并给予更昔洛韦治疗。结果46例血清HCMV-DNAPCR阳性或血清HCMV-IgM阳性的ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）集落细胞HCMV晚期抗原基因mRNA阳性19例,更昔洛韦治疗有效16例;mRNA阴性27例,更昔洛韦治疗有效4例。阳性组疗效高于阴性组,P〈0．01,差异有统计学意义。结论HCMV可感染CFU—MK而成为1TP血小板减少的原因之一。巨核系祖细胞HCMV晚期抗原基因mRNA检测阳性者更昔洛韦治疗有效,能使血小板上升或恢复正常。     

妊娠期低分子质量肝素干预对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒的影响

目的 探讨妊娠期应用低分子质量肝素(LMWH)对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)的病理改变和病毒DNA载量的影响.方法 取健康纯系清洁级Balb/c小鼠48只.随机选择配对,每对雌雄小鼠各1只.实验组20对,正常对照组4对.实验组每4对为1组,共5组,每只分别腹腔内注射6.0 log半数组织培养感染剂量(TCID50)HCMV-AD169.正常对照组4对,每只腹腔内注射相应细胞维持液高糖改良Eagles培养液(DMEM)1.0 mL.所有小鼠于接种后配对,隔离喂养,并观察受精情况,记录受精时间.发现妊娠后,分别予实验Ⅰ组皮下注射LMWH 1 000 U·kg-1,实验Ⅱ组皮下注射 LMWH 500 U·kg-1,实验Ⅲ组皮下注射LMWH 250 U·kg-1,实验Ⅳ组肌肉注射更昔洛韦(GCV)60 mg·kg-1,各10 d;实验Ⅴ组为阳性对照组,孕鼠不注射LMWH和GCV.每组随机取10只新生鼠,出生1 d处死,取出肝脏,进行病理学检查和荧光定量PCR检测.结果 实验Ⅰ组肝组织病理损害较阳性对照组明显减轻,HCMV DNA载量[(1.60±1.12)×103拷贝数/50 mg]较阳性对照组[(5.91±2.91)×107拷贝数/50 mg]显著降低(P＜0.01),与实验Ⅳ组[(1.75±1.05)×103拷贝数/50 mg]比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验Ⅱ组肝组织炎性反应较阳性对照组稍减轻.实验Ⅲ组肝组织炎性反应与阳性对照组比较无明显变化,实验Ⅲ组HCMV DNA载量为(5.49±2.76)×107拷贝数/50 mg,与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论在妊娠期给予LMWH 1 000 U·kg-1干预能显著降低HCMV AD169株先天性感染Balb/c新生鼠肝细胞病毒感染和复制,减轻细胞炎性反应.     

荧光定量PCR方法检测婴儿尿液中人类巨细胞病毒基因的含量

目的探讨FQ-PCR方法检测婴儿尿液中HCMV-DNA含量对于临床症状性HCMV感染的诊断价值,同时,比较FQ-PCR方法与定性PCR方法的敏感性.方法应用双标探针水解的FQ-PCR方法检测89例临床怀疑有巨细胞病毒感染患儿(病例组)尿液中的HCMV-DNA拷贝数,并以82例同年龄组健康婴儿做对照,比较两组阳性标本中HCMV-DNA含量.同时,在两组中随机选取94例(其中疑诊为HCMV感染的56例,健康儿38例),用FQ-PCR方法与普通定性PCR方法共同检测进行比较.结果病例组阳性52例,称为症状性感染组,对照组阳性30例,称为无症状性感染组.症状性感染组52例,尿液HCMV-DNA拷贝数对数值(log10X)在3.81-9.93,平均为5.30;无症状性感染组30例,尿液中HCMV-DNA拷贝数对数值在2.70-4.60,平均为3.46,两组均值差异有显著性(T=8.09,P＜0.01),拷贝数大于105拷贝/mL高度预示症状性HCMV感染.FQ-PCR方法阳性率为60.64%(57/94),定性PCR方法阳性率32.98%(31/94),两方法一致率70.21%(χ2=25.30>6.63,P＜0.01),FQ-PCR方法优于定性PCR方法(χ2=23.32>6.63,P＜0.01).结论婴儿尿液中HCMV-DNA拷贝数与临床症状性HCMV感染密切相关,FQ-PCR方法检测婴儿尿液中HCMV-DNA量可以作为临床诊断HCMV症状性感染的一种快速、有效的实验室方法.     

黄芪注射液对人巨细胞病毒感染的粒-单系祖细胞体外增殖的影响

目的：探讨黄芪注射液对人巨细胞病毒(HCMV)感染的粒—单系祖细胞(CFU-GM)体外增殖的影响。方法：采用造血祖细胞体外培养技术,用黄芪干预HCMV感染的CFU-GM,观察计数CFU-GM的产率,大小,峰期及维持时间。结果：①黄芪组每2×105个细胞中CFU-GM簇和集落的产率分别为 333.33±12.69 和81.23±4.93,病毒组每2×105个细胞中簇和集落的产率分别为 167.80±16.63,53.70±1.67,两者相比差异有显著性(P<0.01)。②黄芪组大集落的比例占(9.5±0.8)%,明显高于病毒组(2.7±1.0)%,P<0.01。③黄芪组大集落峰期出现早,集落和大集落维持时间长。结论：在体外黄芪注射液可以促进HCMV感染的CFU-GM增殖。     

pp65抗原血症检测法监测婴儿巨细胞病毒肝炎的研究

目的探讨pp65抗原血症检测方法(AA)对婴儿巨细胞病毒(HCMV)肝炎临床应用价值。方法对2001年11月～2002年10月入院的76例婴儿肝炎患儿应用间接荧光染色法检测外周血pp65抗原血症,并与血清ELISA法检测HCMVIgM进行比较。对部分婴儿HCMV肝炎患儿应用更昔洛韦治疗后短期随访。结果76例中64例为HCMV肝炎。AA、ELISA法HCMV阳性检出率分别为92.2%(59/64例)、64.1%(41/64例)。抗原血症呈高水平、中水平者所占比例分别为81.4%(48/59例)、18.8%(11/59例),无低水平者。47例婴儿HCMV肝炎更昔洛韦治疗2周,治疗前、后抗原血症水平,经卡方检验,P<0.01。治疗后随访中肝功能正常与肝功能异常组,抗原血症水平经精确概率法检验,P<0.01。结论pp65抗原血症检测方法有助于监测婴儿巨细胞病毒肝炎的动态变化,指导治疗。     

婴儿巨细胞病毒肝炎临床分析及更昔洛韦疗效评价

目的　分析婴儿巨细胞病毒 (CMV)肝炎的临床特征及观察更昔洛韦的治疗效果。方法　①回顾性分析 12 1例婴儿CMV肝炎的临床特征。②观察更昔洛韦正规治疗的 5 3例婴儿CMV肝炎治疗前后血清总胆红素水平、肝脾大小、肝酶 (ALT、AKP、γ GT)变化 ,定量检测 (FQ PCR法 )尿CMV DNA ,同时观察药物不良反应。结果　婴儿CMV肝炎绝大部分以黄疸为首发表现就诊 (90 9% ) ,但亦有以其他不典型症状就诊者。多伴有肝脾肿大 (96 7%和 49 6 % ) ,先天性感染者易合并先天畸形 (39 7% )。病程中可并发机会致病菌败血症、呼吸道感染、血液系统受累、维生素K缺乏等。应用更昔洛韦 5mg/kg每 12h静滴 1次 ,用 (14± 2 )d后 ,血清胆红素下降、肝脾回缩、血清ALT降低、尿CMV DNA定量减少 ,所有指标均差异显著 (P <0 0 1)。未见更昔洛韦的明显副作用。结论　对以黄疸为首发症状就诊的患儿应警惕CMV肝炎的发生 ,治疗中除应用特异抗病毒药物外应同时进行抗细菌、预防出血治疗。并加强母孕期监测及保健。更昔洛韦 5mg/kg每 12h用 1次静滴治疗 ,安全、有效、副作用小 ,值得推广。