烧伤后瘢痕组织中成纤维细胞ET-1表达及血管新生和胶原分布研究

目的 研究烧伤后不同时期瘢痕组织中成纤维细胞内皮素1（ET-1）表达以及新生血管形成和胶原纤维分布情况.方法 收集烧伤创面愈合后不同时期瘢痕组织标本（发生早期、增生期、消退期、成熟期各8例）和正常皮肤组织标本（正常对照,n=8）作为研究对象.体外分离培养成纤维细胞,RT-PCR半定量检测成纤维细胞中ET-1 mRNA的表达情况;新生血管标志物CD34免疫组织化学染色检测瘢痕组织内新生血管形成（CD34阳性细胞面积百分率）;Masson三色染色法观察瘢痕组织胶原纤维分布.结果 瘢痕组织的发生早期,成纤维细胞ET-1 mRNA的表达水平逐渐升高,并于增生期达到高峰,消退期逐步降低,成熟期下降至最低水平.发生早期、增生期、消退期、成熟期瘢痕组织及正常对照组织中CD34阳性细胞面积百分比分别为（1.961±0.159）%、（3.432±0.237）%、（0.412±0.026）%、（0.354±0.025）%和（0.1917±0.018）%,不同时期瘢痕组织间及其与正常对照比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.Masson三色染色观察发现,增生期瘢痕组织胶原纤维显著增加,排列致密.结论 烧伤后瘢痕发生和演变过程中,成纤维细胞ET-1表达水平呈现发生早期逐步升高、增生期达到高峰、消退期下降的变化,与不同时期瘢痕组织中新生血管形成及胶原纤维分布变化趋势一致.     

瘢痕组织HO-1的表达与血管生成的关系

目的：探讨瘢痕组织HO-1的表达与血管生成的关系，为研究瘢痕形成机制提供理论依据。方法：标本均采集自无严重并发症的志愿者，共24例，分为增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕3组，每组8例，第4组正常皮肤组织由上述24例患者正常皮肤标本中随机抽取8例。所取标本采用免疫组织化学的方法进行HO-1的表达和CD34血管计数以及成纤维细胞计数，比较不同类型瘢痕及正常皮肤HO-1量化指标、成纤维细胞数量与血管密度之间的关系。结果：CD34染色结果示增生性瘢痕、瘢痕疙瘩血管较丰富，而扁平瘢痕和正常皮肤较少，相比差异有统计学意义（P<0.01）。HO-1在各组瘢痕及正常皮肤表皮中均有不同程度表达，在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中表达较强，与其他组比较差异有统计学意义（P<0.01）。HO-1在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕及正常皮肤真皮中表达依次减弱；血管计数与表皮、真皮HO-1（均P<0.01）表达均存在正相关(r=0.761,P<0.01)。成纤维细胞数在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕及正常皮肤中依次减少；血管计数与成纤维细胞计数间存在正相关（r=0.731,P<0.01）。结论：HO-1可能是促进瘢痕血管生成的重要因素；烧伤瘢痕内HO-1及血管生成变化的原因可能在局部而不在全身；过量血管生成可能是病理性瘢痕的一种表象。     

瘢痕组织中转化生长因子β的免疫组化定位

目的：比较转化生长因子（ＴＧＦ）β１、β２、β３在瘢痕增生病理过程中的地位以及了解它们在瘢痕中的组织学定位。方法：利用免疫组化技术，分别比较３型ＴＧＦβ在增生期和成熟期瘢痕组织中的表达。结果：ＴＧＦβ１在增生期瘢痕大量的成纤维细胞、慢性炎症细胞、血管内皮细胞中持续高水平表达，远远高于在成熟期瘢痕中的表达水平；另外，ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３在瘢痕组织中的表达水平远远不如ＴＧＦβ１。结论：增生期瘢痕组织中大量的成纤维细胞、慢性炎症细胞、血管内皮细胞持续高水平表达的ＴＧＦβ１可能是引起瘢痕持续增生的重要因素；ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３的作用则远逊于ＴＧＦβ     

61例烧伤肥厚性瘢痕形态学观察与细胞增殖活性的研究

目的 探讨肥厚性瘢痕的形态学特点及成纤维细胞增殖活性与其发生的关系。方法 应用光镜和免疫组化染色对61例肥厚性瘢痕、8例正常皮肤进行形态学观察、成纤维细胞平均密度计数和增殖细胞核抗原（PCNA）表达检测。结果 肥厚性瘢痕按其形态改变可分为增厚期、成熟期和消退期，各其间成纤维细胞平均密度相差非常显著（P＜0.01）；肥厚性瘢痕增厚期、成熟期、消退期和正常对照组间PCNA标记指数差异均无显著性（P＞0.05）。结论 肥厚性瘢痕发展经历了增厚期→成熟期→消退期的病理过程，其成纤维细胞数的多少与细胞增殖活性无关，肥厚性瘢痕的形成并非成纤维细胞增生所致。     

成纤维细胞的自噬性溶解死亡在增生性瘢痕消退过程中的作用

目的 ·探索增生性瘢痕消退成熟过程中,成纤维细胞是否发生自噬性溶解死亡.方法 ·收集上海交通大学医学院附属瑞金医院烧伤科2018年6月-2019年6月烧伤患者16例的瘢痕组织,分为增生组(对照组,8例)和消退组(试验组,8例)2组.采用透射电镜观察细胞组织内的自噬情况.体外分别培养2组患者的成纤维细胞.建立缺氧模型,分...     

基质金属蛋白酶-3、层粘连蛋白及Ⅲ型胶原在人眼翼状胬肉组织中的表达及意义

目的检测人眼翼状胬肉组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型胶原(col Ⅲ)及胶原纤维和弹力纤维的表达。方法应用S-P免疫组织化学染色方法检测15例翼状胬肉组织及8例正常球结膜组织中MMP-3、LN、col Ⅲ的免疫学定位及表达情况，用Masson及VG染色法检测各标本中胶原纤维及弹力纤维的分布情况。结果HE染色：翼状胬肉组织上皮下基质中存在结缔组织的增生和血管形成；基质浅层存在一无定形物质透明区及粗糙的颗粒样嗜酸性物质，在翼状胬肉体部深层基质中存在粗糙的纤维组织；正常球结膜组织细胞排列整齐；基质为疏松结缔组织，胶原纤维平行排列，其间可见成纤维细胞，散在少量中性粒细胞、毛细血管；Masson染色：翼状胬肉浅层基质中存在致密的胶原纤维染色，深层基质中的胶原纤维存在变性样改变；VG染色：翼状胬肉组织深层基质中存在大量变性的胶原纤维，其间夹杂黑色的弹性纤维；免疫组化染色法：MMP-3在翼状胬肉上皮细胞中呈强表达，成纤维细胞中呈中等强度表达，血管内皮细胞中未见表达；LN在血管壁中呈强表达，在上皮细胞基底膜中呈中等强度表达，在整个基质中未见明显表达；col Ⅲ在整个翼状胬肉基质中呈强表达。结论翼状胬肉组织中ECM的成分较正常球结膜发生改变，有大量的弹性纤维变性、胶原纤维增生及新生血管形成；col Ⅲ在翼状胬肉组织中表达增加，LN及胶原纤维可能对翼状胬肉中血管形成、细胞粘附和迁移及ECM重建起作用；MMP-3在翼状胬肉组织中表达增加，其对ECM成分的降解作用可能有助于翼状胬肉的形成和向角膜中央侵袭。     

病理性瘢痕及正常皮肤中成纤维细胞CD90表达情况的研究

目的检测病理性瘢痕和周围正常皮肤组织中成纤维细胞CD90表达情况。方法取瘢痕疙瘩4例、增生性瘢痕12例、正常皮肤（瘢痕边缘）16例标本，免疫组织化学SABC法检测不同组织中成纤维细胞的CD90表达情况。结果4例瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤中未发现CD90阳性成纤维细胞，而12例增生性瘢痕组织中7例有较多肥大的CD90阳性成纤维细胞，增生性瘢痕周围正常皮肤中也有少量体积较小的CD90阳性细胞。结论增生性瘢痕中CD90表达阳性的成纤维细胞可能是瘢痕增生的特异表型。     

内皮抑素局部注射对兔耳增生性瘢痕的影响

目的探讨内皮抑素局部注射对兔耳增生性瘢痕的影响及其机制。方法建立兔耳增生性瘢痕模型,于建模后第4周,右侧兔耳瘢痕组织内注射内皮抑素（实验组,n=10）,左侧兔耳瘢痕组织内注射生理盐水（对照组,n=10）,每周注射1次,连续注射3次;于建模后第7周,分别采集实验组和对照组兔耳瘢痕组织,苏木精-伊红染色观察瘢痕组织形态学改变,免疫组织化学法检测微血管标志物CD34表达,TUNEL法检测成纤维细胞凋亡。体外培养脐静脉内皮细胞,分别将不同浓度的内皮抑素加入Martrigel培养体系中,观察内皮细胞在Martrigel上形成微血管管腔数目的变化。结果与对照组比较,实验组增生性瘢痕缩小明显,紫红色逐渐减退,瘢痕组织内成纤维细胞数量减少,胶原疏松。实验组兔耳瘢痕组织内CD34阳性细胞百分比显著少于对照组,分别为（2.21±0.39）%和（6.11±1.32）%（P〈0.05）,凋亡细胞百分比明显高于对照组,分别为（9.06±1.54）%和（5.21±1.11）%（P〈0.05）。体外实验观察发现：在未加入内皮抑素的Martrigel培养体系中,内皮细胞形成较多微血管分支,随着内皮抑素质量浓度的提高,微血管形成管腔的数目逐渐减少。结论内皮抑素局部注射具有抑制增生性瘢痕形成并促进其成熟消退的作用,其机制可能与抑制微血管形成有关。     

骨母细胞特异性因子-2在创伤性肌腱瘢痕组织中的表达及其作用

目的探讨骨母细胞特异性因子-2（Periostin,osteoblast-specific factor 2）在创伤性瘢痕组织中的作用与意义。方法利用RT-PCR验证Periostin基因在肌腱瘢痕成纤维细胞中的表达。用免疫组织化学染色观察肌腱增生性瘢痕形成早期组织中Periostin在成纤维细胞的分布。结果肌腱增生性瘢痕组织成纤维细胞与包皮正常成纤维细胞中Periostin基因表达水平存在显著差异,瘢痕疙瘩组织成纤维细胞中高阳性表达,而包皮正常成纤维细胞中表达微弱甚至阴性表达。免疫组化结果显示肌腱增生性瘢痕形成早期,组织中Periostin主要表达于增生的成纤维细胞。Periostin的阳性表达主要集中于大量增殖的成纤维细胞胞浆中,部分存在于胞核。结论Periostin的阳性表达主要集中于大量增殖的成纤维细胞胞浆,并且肌腱增生性瘢痕成纤维细胞中表达程度远高于正常成纤维细胞。     

良性胆管瘢痕中CD90、α-SMA的表达

目的 研究良性胆管瘢痕CD90、α-SMA的表达.方法 免疫组化SP法检测14例良性胆管瘢痕组织和10例正常胆管组织中CD90、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达,并进行图像分析.取由良性胆管瘢痕组织培养成纤维细胞,细胞免疫荧光、流式细胞仪检测检测CD90的表达.结果 CD90、α-SMA在良性胆管瘢痕组织中表达高于正常组(P<0.05)且两者表达正相关(r=0.681,P=0.000);Ⅰ型和Ⅲ型胶原在良性胆管瘢痕组织中表达高于正常组(P<0.05)且两者表达负相关(r=-0.413,P=0.011).取由良性胆管瘢痕组织培养成纤维细胞,细胞免疫荧光、流式细胞仪检测CD90高表达.在良性胆管瘢痕组织中,CD90、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达较正常组为高;CD90与α-SMA表达正相关;Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原表达负相关.结论 良性胆管瘢痕成纤维细胞CD90高表达;CD90可能是良性胆管瘢痕异常增生的特异表型之一.     

5-氟尿嘧啶对增生性瘢痕的作用研究

目的：探讨5‐氟尿嘧啶（5‐FU ）对兔耳增生性瘢痕组织的影响。方法建立兔耳外伤性皮肤早期瘢痕增生模型。将12只兔随机平均分为3组,设立生理盐水注射对照组（A组）、局部注射5‐FU组（B组）和局部涂抹5‐FU软膏组（C组）,观察各组瘢痕改变情况。60 d后空气栓塞法随机处死兔子,切取含创面的兔耳组织,分别进行苏木精‐伊红（HE）染色及Masson染色观察组织形态学变化及组织中细胞及胶原等的改变。Real‐time PCR及ELISA法检测TGF‐β、PDGF、bFGF和INF‐γ的表达水平。结果 HE和Masson染色显示,与A组和C组比较,B组真皮层变薄,成纤维细胞和胶原纤维数量较少,胶原纤维排列规则,无胶原结节或者胶原结节不明显。B组和C组TGF‐β、PDGF、bFGF、INF‐γmRNA表达水平和蛋白水平均显著低于A组,且B组效果好于C组。结论5‐FU对增生性瘢痕有治疗作用,瘢痕组织局部注射5‐FU比局部涂抹5‐氟尿嘧啶软膏更为有效。     

增生期和成熟期皮肤瘢痕中的神经纤维形态学观察

目的〓〖HTK〗观察不同时期增生性瘢痕(HS)中神经纤维数量和形态的变化。〖HTW〗方法〓〖HTK〗标本取自烧伤或创伤后HS形成1月～23年的患者，分为增生期瘢痕组（≤6月）和成熟期瘢痕组(＞6月)，正常对照组取自患者的供皮区。利用单克隆抗神经丝蛋白(NF)抗体免疫荧光染色技术，在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)下观察不同时期瘢痕组织和正常皮肤组织中神经纤维的差异。〖HTW〗结果〓〖HTK〗增生期瘢痕组神经纤维的阳性面积比明显高于正常对照组（P＜0.05），神经纤维分布杂乱，形态不规整，有局部的扭曲变细和肿胀断裂；成熟期瘢痕组神经纤维的阳性面积比明显低于正常对照组（P＜0.05），神经纤维排列较规整，内部结构和立体结构均接近正常。〖HTW〗结论〓〖HTK〗瘢痕增生过程中神经纤维的密度和形态皆随时间变化而变化。     

增生性瘢痕组织中血管形成的形态学

目的 研究血管形成在增生性瘢痕形成过程中的作用。方法 通过免疫组织化学方法采用CD34抗体对增生性瘢痕组织的微血管进行染色。结果 增生期的增生性瘢痕组织中微血管的含量明显高于萎缩期的增生性瘢痕及正常手术后瘢痕。结论 瘢痕的增生可能具有一定的血管依赖性。     

增生性烧伤瘢痕的超微病理改变

采用电子显微镜对４例正常皮肤，２０例增生性烧伤瘢痕进行透射电镜和扫描电镜下的超微结构观察。结果显示，增生性烧伤瘢痕与正常皮肤在超微结构方面存在显著的不同．增生性烧伤的超微病理变化表现为：瘢痕上皮细胞间水肿；皮肤附件缺如；成纤维细胞及成肌纤维细胞增殖、功能活跃；胶原纤维排列紊乱，致密分布，其胶原纤维表面有粘多糖沉积，毛细血管管腔闭塞或半闭塞。研究增生性烧伤的超微结构对于阐明其瘢痕增生的机理及探索其防治方法均有重要意义。     

RSK2通过调控人皮肤成纤维细胞的增殖与迁移促进皮肤创面修复

目的：探究RSK2对皮肤创面修复的影响及其可能机制。方法：采用Western blot与免疫荧光染色实验检测皮肤创伤组织中RSK2的表达差异。通过人原代真皮成纤维细胞（HDF）划痕实验、CCK-8增殖实验及Western blot实验,在细胞水平探究RSK2抑制剂Bix 02565对HDF的作用。通过HE染色、Masson染色与免疫荧光染色,在体内水平观察RSK2抑制剂对皮肤创面修复的影响。结果：Western blot及免疫荧光实验结果显示皮肤创伤并不影响皮肤成纤维细胞中RSK2总蛋白的表达,而在体外水平上利用Bix 02565抑制RSK2的活性可显著抑制成纤维细胞的增殖与迁移,抑制G1/S-特异性周期蛋白-D1（Cyclin D1）与纤维粘连蛋白（Fibronectin）的表达,在动物水平RSK2抑制剂可抑制成纤维细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）与胶原纤维生成,抑制血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）的表达,阻滞血管的新生,延缓小鼠皮肤创面修复速率。结论：RSK2可通过促进成纤维细胞的增殖与迁移、血管新生,进而促进皮肤创面修复。     

IV型胶原在肌性斜颈中的表达及意义

目的研究IV型胶原在先天性肌性斜颈胸锁乳突肌中的增生和表达,探讨肌性斜颈纤维化的发生机制。方法采用Masson三色胶原染色法观察胶原的增生情况,免疫组织化学染色法观察IV型胶原的表达情况。结果IV型胶原在病变组表达明显增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。对照组肌束间极少见IV型胶原纤维,病变组肌束间及肌细胞周围均可见大量的胶原纤维增生,肌细胞及肌束排列不规律,肌细胞有不同程度的萎缩。病变组中纤维型组IV型胶原较肌肉型组有更多的表达,两者比较有显著性差异(P<0.01),纤维型和肌肉型组与对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论先天性肌性斜颈胸锁乳突肌的纤维化程度与IV型胶原增生的量有关。     

声带损伤后自身修复特点研究

目的通过研究兔声带固有层损伤后不同时期组织病理及主要细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)的变化情况,探讨声带损伤后的自身修复特点。方法对实验用兔声带行锐性损伤深达声韧带,于术后3 d～12个月观察声带形态学变化,HE染色、Masson染色、Alcian Blue染色及免疫组化染色,观察声带组织学结构变化及固有层内胶原、透明质酸及纤维连接蛋白等主要ECM的分布及含量变化。结果兔声带损伤后3 d～3个月成纤维细胞明显增加,40 d～12个月纤维组织持续增生,12个月声带局部无分层结构。ECM中胶原在损伤后3 d～12个月含量均明显高于正常对照组(P<0.05),在固有层内不规则紊乱分布;透明质酸在损伤后40 d内含量有增加趋势,其后降低至正常对照组水平;纤维连接蛋白在损伤后40 d～12个月时含量均高于正常对照组(P<0.05),散在分布于固有层各层。结论兔声带损伤后,在损伤早、中期各种ECM分泌增加,主要表现为以胶原为主的纤维组织明显增多且呈无序排列,透明质酸略有增加,纤维连接蛋白明显增加;在损伤后期胶原和纤维连接蛋白含量持续高于正常,声带局部瘢痕形成。