当归注射液对培养的兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

通过培养的免主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）氚 胸腺嘧啶核苷掺入量和培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）的测定，观察了当归注射液对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明：当归注射液有抑制ＶＳＭＣ增殖的作用，其作用呈剂量依赖关系。当归注射液可能通过增加ＳＯＤ活性，降低脂质过氧化物水平，升高ＰＧＩ２、ｃＡＭＰ水平（Ｐ均＜０．０５），从而抑制ＶＳＭＣ增殖。     

猕猴桃果汁抗环磷酰胺致突变作用及其机制

目的：研究猕猴桃果汁抗环磷酰胺（ＣＰ）的致突变作用及其可能的作用机制。方法：测定大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率及肝中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性，还原型谷光甘肽（ＧＳＨ）、丙二醛（ＭＤＡ）含量。结果：猕猴桃果汁对ＣＰ诱发的大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率有显著抑制作用，能明显诱导大鼠肝ＳＯＤ活性增强，以及ＧＳＨ的含量增加，降低ＭＤＡ含量。大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率与ＳＯＤ活性及ＧＳＨ含量呈明显负相关，与ＭＤＡ含量呈明显正相关。结论：猕猴桃果汁抗ＣＰ致微核形成作用的机制可能与通过提高机体抗氧化防御系统的功能，防止有害自由基对细胞内生物大分子的损伤有关。     

非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞膜ATPase活性改变及其影响因素

目的探讨非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ及Ｃａ２＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ活性改变的影响因素。方法测定７７例ＮＩＤＤＭ患者和５０例正常人血糖、总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、糖化血红蛋白（ＨｂＡｌｃ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性。ｔ检验、直线相关分析和多元逐步回归分析。结果ＮＩＤＤＭ组血糖、ＨｂＡｌｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＬＰＯ显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＳＯＤ、ＧＳＨＰＸ、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性低于对照组（除ＧＳＨ的Ｐ＜０．０５外，其他Ｐ＜０．０１）；不同ＨｂＡｌｃ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＬＰＯ、ＴＣ组的红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性有显著性差别。红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１２．８０＋０．２７（ＧＳＨ）－０．１２（ＬＰＯ）－０．０９（ＴＣ／ＨＤＬＣ），红细胞胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１０８．２０＋１．     

长期氧疗对慢性肺心病患者血中氧自由基代谢系统的影响研究

本文研究了慢性肺心病患者血清ＭＤＡ，ＳＯＤ含量和ＧＳＨ－ＰＸ，ＣＡＴ活性改变。结果血清ＭＤＡ，ＳＯＤ含量明显高于正常对照组，ＧＳＨ－ＰＸ，ＣＡＴ活性明显降低。长期氧疗后，ＭＤＡ，ＳＯＤ含量明显降低，而ＧＳＨ－ＰＸ，ＣＡＴ活性明显增高。而非氧疗组却无明显改变。说明肺心病人存在着自由基代谢的紊乱。长期氧疗对其有调节作用。     

衰老的分子机理研究

研究年龄对大鼠不同组织（脑、心和肝）内源性多胺与ｃＡＰＭ含量的影响，测定了不同年龄大鼠脑组织鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）的活性，分析鼠脑Ｂ型革胺氧化酶（ＭＡＯ－Ｂ）的活性，作为进一步支持多胺与衰老是否相关的论据。实验表明，老年或幼年大鼠的多胺和ｃＡＭＰ的含量以及ｏＤＣ的活性都明显降低，而ＭＡＯ－Ｂ的活性则随年龄增加而增加。实验结果证明，代谢调节物（多胺和ｃＡＭＰ）的含量如同ＭＡＯ－Ｂ一样与衰老相关。它们含量的改变可能是衰老分子基础。     

非霍奇金淋巴瘤细胞增殖活性和组织学恶性程度及预后的关系

１３１例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）按国际工作分类分低、中、高度恶性（ＬＧ、ＭＧ、ＨＧ）３组。对ＮＨＬ和１４例反应性增生淋巴组织（ＲＬＨ）作核分裂计数（ＭＦ），银染核仁组成区（ＡｇＮＯＲｓ）计数，并用ＭＢＣ法检测部分病例的增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和Ｋｉ＿６７抗原。ＭＦ、ＡｇＮＯＲｓ、ＰＣＮＡ及Ｋｉ＿６７检测结果有较好相关性（ｒ值０．６１２，Ｐ＜０．０１），均和ＮＨＬ恶性度呈正相关，ＬＧ、ＭＧ、ＨＧ及ＲＬＨ组间有显著性差异（Ｐ＜０．０１，但ＬＧ和ＲＬＨ组Ｐ＞０．０５），表明细胞增殖活性的检测有助于了解ＮＨＬ恶性度，但不能区分ＬＧ和ＲＬＨ。ＭＧ中弥漫小裂细胞型（ＤＳＣ）细胞增殖活性低于同组其它类型（Ｐ＜０．０５），但与ＬＧ无显著性差异（Ｐ＞０．０５），预后相对较好，拟属ＬＧ。ＭＦ、ＡｇＮＯＲｓ和ＰＣＮＡ值越高，生存期越短，表明细胞增殖活性有助于预测ＮＨＬ预后。ＭＦ和ＡｇＮＯＲｓ经济易行；Ｋｉ６７全面反映增殖细胞的数量，仅用于冰冻切片；ＰＣＮＡ可用于石蜡切片，便于回顾性研究。     

猕猴桃果汁抗环磷酰胺致突变作用及其机制

目的；研究猕猴桃果汁抗环磷酰胺（ＣＰ）的致为作用及其可能的作用机制。方法：测定大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率及肝中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性，还原型谷光甘肽（ＧＳＨ）、丙二醛（ＭＤＡ）含量。结果；猕猴桃果汁对ＣＰ诱发的大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率有显抑制作用，能明显诱导大鼠肝ＳＯＤ活性增强，以及ＧＳＨ的含量增加，降低ＭＤＡ含量。大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率与ＳＯＤ活性及ＧＳＨ含量呈明     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因c—fo …

动脉平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）的形成过程中极其重要利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（Ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ＯＸ－ＨＤＬ）对培养的人主动脉ＳＭＣ原癌基因ｃ－ｆｏｓ及ＰＤＧＦ受体基因转录表达的影响。     

小鼠造血干细胞因子基因克隆及在 C H O 细胞中的表达

目的： 克隆造血干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ）并在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达。方法： 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从ｐ Ｒ Ｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ（含 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ）中钓取 Ｓ Ｃ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 膜外段活性区,克隆入真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３,转染入 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞;用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 的 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞可表达 Ｓ Ｃ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ,其细胞培养上清可协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ刺激骨髓细胞形成集落数比 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 单独作用高 ２ 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达,转染细胞上清协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。     

基因工程人生长激素的纯化及鉴定

将在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中基因克隆表达的人生长激素（ｈＧＨ）培养物经Ｏｃｔｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ疏水层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ５２离子交换层析，得到了较纯的ｈＧＨ。通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），Ｎ－末端氨基酸分析及放免分析，证明基因工程ｈＧＨ与天然ｈＧＨ性质相符。     

DFMO诱导HL─60细胞分化和凋亡

细胞内多胺合成增加在维持细胞恶性表型中起重要作用，抑制其合成可负调控癌细胞的增殖。本文用多胺合成限速酶———鸟氨酸脱羧酶的抑制剂α二氟甲基鸟氨酸（ＤＦＭＯ）限制多胺合成，观察其对ＨＬ６０细胞生长的影响。发现ＤＦＭＯ使ＨＬ６０细胞向粒细胞分化并进行凋亡。提示，抑制多胺合成在细胞分化和凋亡中有重要作用，阻断此合成代谢可能是治疗恶性肿瘤的途径之一     

Ornithine decarboxylase activity as a prognostic marker for colorectal cancer

Ornithine decarboxylase (ODC) is a key enzyme in the biosynthesis of polyamines, which are essential for cell proliferation. ODC activity was measured in 47 colorectal cancer patients, 5 patients with adenoma of colorectum and 4 healthy volunteers. Mean ODC activities of cancer tissue, non-cancerous mucosa from cancer-bearing colorectum, adenoma tissue, and normal mucosa from healthy volunteers were 435+/-392, 154+/-173, 295+/-202, 103+/-60 pmol CO2/h/mg protein, respectively. ODC activity of cancer tissue or adenoma tissue was significantly higher than that of the others. Among colorectal cancer patients, ODC activity in cancer tissue was correlated with T factors, lymph node metastasis and stages. Patients with tumors that had high ODC activity (> or =350 pmol CO2/h/mg protein) showed a poor 10-year survival rate. These results suggest that ODC activity may be a useful marker for patients' prognosis after surgery.     

鸟氨酸脱羧酶基因沉默对子宫内膜癌细胞Ishikawa的影响

目的利用RNA干扰技术,观察鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase,ODC）基因在子宫内膜癌Ishikawa细胞的沉默效应及对Ishikawa细胞增殖周期的影响。方法设计合成以鸟氨酸脱羧酶基因为靶向目标的siRNA序列质粒,利用脂质体介导的方法将质粒转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,实验分三组：Ishikawa组,pSUPER-EGFP组,pSUPER-EGFP-ODC组。用Real-time PCR和Western blot检测ODC的表达情况。采用MTT和流式细胞术来检测ODC基因沉默对Ishikawa细胞生长的影响。结果 Real-time PCR和Western显示pSUPER-EGFP-ODC组细胞ODC mRNA和蛋白质表达水平明显下降。MTT示pSUPER-EGFP-ODC能显著抑制Ishikawa细胞的增殖活性,与Ishikawa相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。流式细胞术结果示pSUPER-EGFP-ODC能显著阻滞Ishikawa细胞于G0/G1期,S期细胞数相应减少,并诱导细胞凋亡,与Ishikawa相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论转染靶向ODC基因的siRNA序列质粒能够下调ODC基因的表达,抑制人子宫内膜癌细胞Ishikawa在体外的增殖,阻滞Ishikawa细胞于G0/G1期并诱导细胞凋亡。     

No association between Helicobacter pylori seropositivity and ornithine decarboxylase (ODC) A317G polymorphism, and no modification by NAD(P)H:qinone oxidoreductase 1 (NQO1) C609T

Our previous epidemiologic study reported that NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1 (NQO1) 609C/C with full enzyme activity was a high risk genotype for Helicobacter pylori (H. pylori) seropositivity. Since NQO1 stabilizes ornithine decarboxylase (ODC), which attenuates the innate immune response through elevated polyamines, ODC functional polymorphisms may also influence H. pylori seropositivity. This study aimed to examine the association with ODC A317G polymorphism, as well as the modification by NQO1 C609T. The two polymorphisms were determined by polymerase chain reaction with confronting two-pair primers (PCR-CTPP) among 465 health checkup examinees in Nagoya. The ODC A317G genotype frequency was 35.9% for A/A, 49.3% for A/G, and 14.8% for G/G. The sex-age-adjusted odds ratio (OR) of the ODC gene for H. pylori seropositivity was not significant (OR = 1.09 for G/A and OR = 1.02 for G/G, relative to A/A). Among subjects with any NQO1 genotype, no association was observed between the ODC ploymorphism and H. pylori seropositivity. Results of the present study did not support the hypothesis that the different genetic traits in the ODC-polyamine pathway are associated with susceptibility to persistent H. pylori infection. The higher frequency of the ODC 317A allele in the Japanese population than that in the Caucasian population is firstly reported. The genetic traits through the ODC-polyamine pathway will be further investigated.     

健脾益气中药的小肠隐窝细胞药理靶点探讨

综述近年来开展IEC-6小肠隐窝细胞药理研究的成果。研究工作以隐窝细胞生理学研究进展作为基础,建立IEC-6细胞药理实验模型,开展健脾益气中药的肠上皮干细胞药理研究。实验采用噻唑蓝比色法(MTT)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、高效液相色谱、免疫荧光标记等方法,观察健脾益气中药对IEC-6细胞增殖、迁移及分化的影响并观察其对绒毛蛋白、二价金属转运蛋白、白细胞介素6(IL-6)和鸟氨酸脱羧酶(ODC)的表达及对ODC活性及腐胺含量的影响,结果表明党参、白术、黄芪、甘草化学提取组分通过调节细胞内ODC活性和多胺生成,对IEC-6细胞增殖、迁移、分化、吸收功能起到促进或抑制作用。提示小肠隐窝细胞是健脾益气中药的主要药理作用靶点。     

ODC反义寡核苷酸对K562细胞凋亡及分化和相关基因表达的影响

目的：观察鸟氨酸脱羧酶反义寡核苷酸（ＯＤＣａｓＯＤＮ）引起鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）表达及活性的抑制对人红白血病Ｋ５６２细胞生长、凋亡的影响,为探索抑制多胺生物合成的抗癌新途径提供实验依据。方法：采用硫代修饰的ＯＤＣａｓＯＤＮ处理细胞,观察生长曲线,及用Ｇｉｅｍｓａ染色观察形态变化,ＲＮＡ斑点杂交检测基因表达,放射微量法测定ＯＤＣ活性。结果：ＯＤＣａｓＯＤＮ能抑制Ｋ５６２细胞生长、诱导凋亡,并证明了该细胞的ＯＤＣ、Ｂｃｌ２表达下降及ＯＤＣ活性受到抑制。结论：ＯＤＣａｓＯＤＮ能下调ＯＤＣ表达、降低其酶活性,引起ｂｃｌ２基因表达抑制,导致Ｋ５６２细胞生长抑制及凋亡诱导。     

THE AUTOCRINE REGULATORY EFFECT OF VASOACTVE INTESTINAL PEPTIDE ON THE GROWTH OF HUMAN PANCREATIC CARCINOMA CELLS

ＴＨＥＡＵＴＯＣＲＩＮＥＲＥＧＵＬＡＴＯＲＹＥＦＦＥＣＴＯＦＶＡＳＯＡＣＴＶＥＩＮＴＥＳＴＩＮＡＬＰＥＰＴＩＤＥＯＮＴＨＥＧＲＯＷＴＨＯＦＨＵＭＡＮＰＡＮＣＲＥＡＴＩＣＣＡＲＣＩＮＯＭＡＣＥＬＬＳ￥ＣｈｅｎＹｕａｎｆａｎｇ陈元方，ＣｈｅｎＱｉａｎ陈潜...     

前列腺非雄激素依赖启动子介导的双反义腺病毒的制备及组织特异性检测

目的  制备前列腺非雄激素依赖启动子（PSES）介导的鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义腺病毒。方法  构建pShuttle-Basic-PSES AdoMetDC-ODC-PolyA穿梭载体,并与载体pAdPL进行体外重组,包装成重组腺病毒。将重组腺病毒转染至前列腺癌、直肠癌等癌细胞中,噻唑兰比色（MTT）法观察其对细胞增殖的影响,Western Blot检测重组腺病毒对细胞中ODC和AdoMetDC表达的抑制作用。结果  成功构建了前列腺特异的ODC和AdoMetDC双反义RNA表达载体,并包装制备出能特异的在前列腺细胞中表达产生ODC和AdoMetDC反义RNA的重组腺病毒。该重组腺病毒具有前列腺组织特异性。结论  构建的前列腺非雄激素依赖启动子介导的ODC、AdoMetDC双反义腺病毒具有组织特异性。     

过表达ODC抑制氧化应激诱导大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的构建过表达鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因慢病毒载体,并研究其对氧化应激诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠ODC基因pHIV-ODC过表达质粒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其侵染效率;包装慢病毒并侵染H9C2心肌细胞;72 h后观察其侵染效率,RT-PCR法检测细胞ODC mRNA的表达,利用CCK-8、Hochest33258染色检测ODC对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果酶切及测序鉴定ODC序列正确插入慢病毒过表达载体。侵染H9C2细胞72 h后ODC mRNA水平较阴性慢病毒感染组显著升高。过表达ODC能抑制H2O2诱导的细胞活力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论成功构建的过表达ODC慢病毒,上调H9C2细胞中ODC的表达,过表达ODC能显著抑制氧化应激诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

表皮生长因子对人绒毛膜促性腺激素分泌的影响及其受体在滋养层细胞中的表达

目的：探讨表皮生长因子（EGF）,表皮生长因子受体（EGFR）在胚胎发育过程中的作用。方法：应用免疫组织化学的方法对滋养层细胞EGFR表达进行定位,定量分析,同时观察不同浓度的EGF对体外培养绒毛组织分泌人绒毛膜促性腺激素（HCG）的影响。结果：EGFR在不同孕期滋养层细胞表达的强度不同,其中孕早期较妊娠中期,晚期表达强,平均A值高,而在孕早期不同阶段EGFR的表达也有差异,妊娠4－6周,7－9周滋养层细胞表达低于10－12周,EGF具有促进体外培养的绒毛组织分泌HCG的功能,且随浓度增加而分泌功能增强,当EGF浓度为100ng／ml时,HCG的分泌量达到峰值,EGF浓度达到200ng/ml时,HCG的分泌量不再增加。结论：EGFR在不同孕期滋养层细胞表达的强度不同,与妊娠期间孕妇体内HCG的浓度变化具有一致性;EGF在一定范围内具有促进滋养细胞分泌HCG的功能,由于EGFR在滋养层细胞上表达的数量是一定的,当EGF饱和了EGFR所有结合位点HCG分泌不再增加,所以EGF,EGFR可能是通过影响滋养层细胞HCG的分泌来调节胚胎的发育。