PRK术后转化生长因子β1mRNA表达的实验研究

目的：探讨准分子激光角膜切削术（PRK）后转化生长因子β1（TGF－β1）在角膜伤口愈合和解膜雾状混浊发病机制中的作用。方法：将24只新西兰大白兔（24只眼）随机分为正常组（n＝4）和手术组(n=20)。手术组每只左眼行PRK术，术中采用准分子激光器，角膜中央激光去上皮，然后按－10.00D近视进行切削，分别于术后第7d,14d,28d和3月于裂隙灯下观察记录角膜haze的变化并处死动物，将角膜组织制成石蜡切片，应用原位杂交技术检测角膜缲TGF－β1mRNA的表达。结果：①从术后第7d开始，术眼均不同程度地发生了角膜haze，严重者可达3级，haze高峰约在术后第28d。②正常角膜上皮中TGF－β1mRNA有低水平表达，PRK术后第7d,14d和28d，角膜上皮TGF－β1mRNA表达明显增高。术后3月已开始降低；正常组角膜基质中未检测出TGF－β1mRNA，术后第7d,14,和28d，角膜基质中TGF－β1mRNA表达明显增高，术后3月已开始降低。结论：TGF－β1可能参与了PRK术后的伤口愈合，它可能通过促进角膜基质细胞的增殖和细胞外基质的合成而促进角膜haze的发生。     

PRK术后转化生长因子β1 mRNA表达的实验研究

目的 :探讨准分子激光角膜切削术 (PRK)后转化生长因子β1(TGF β1)在角膜伤口愈合和角膜雾状混浊发病机制中的作用。方法 :将 2 4只新西兰大白兔 (2 4只眼 )随机分为正常组 (n =4 )和手术组 (n =2 0 )。手术组每只左眼行PRK术 ,术中采用准分子激光器 ,角膜中央激光去上皮 ,然后按 10 .0 0D近视进行切削 ,分别于术后第 7d ,14d ,2 8d和 3月于裂隙灯下观察记录角膜haze的变化并处死动物 ,将角膜组织制成石蜡切片 ,应用原位杂交技术检测角膜组织中TGF β1mRNA的表达。结果 :①从术后第 7d开始 ,术眼均不同程度地发生了角膜haze ,严重者可达 3级 ,haze高峰约在术后第 2 8d。②正常角膜上皮中TGF β1mRNA有低水平表达 ,PRK术后第 7d ,14d和 2 8d ,角膜上皮TGF β1mRNA表达明显增高 ,术后 3月已开始降低 ;正常组角膜基质中未检测出TGF β1mRNA ,术后第 7d ,14d和 2 8d ,角膜基质中TGF β1mRNA表达明显增高 ,术后 3月己开始降低。结论 :TGF β1可能参与了PRK术后的伤口愈合 ,它可能通过促进角膜基质细胞的增殖和细胞外基质的合成而促进角膜haze的发生。     

激光角膜切除后EGF及其受体的表达

目的研究haze形成的机理,检测激光角膜光学切除术(photorefractive keratectomy, PRK)后角膜上皮和基质表达EGF和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)mRNA的变化. 方法"新西兰白兔20只,随机分成4组,其中15只施行PRK.于术后1、2、3月用裂隙灯显微镜观察haze形成情况,并用原位核酸分子杂交方法,检测角膜上皮和基质EGF、EGFR mRNA的表达. 结果正常角膜上皮层有EGF、EGFR mRNA表达;基质中有EGDFR mRNA表达.PRK后角膜组织表达EGF、EGFR mRNA增加,术后1、2月表达最明显.EGF、EGFR mRNA表达强弱与haze的形成密切相关. 结论 EGF、EGFR参与PRK后伤口愈合过程,且调节着haze的形成和发展.     

PRK术后房水中TGF-β1含量与haze的相关性

目的探讨兔眼准分子激光角膜切削术(photorefractkeratectomy,PRK)术后3个月房水中TGF-β1含量的动态变化及其与角膜上皮下混浊(haze)形成的关系.方法52只新西兰白兔,取4只兔(8眼)作术前对照;另48只兔(96眼)平均分两组,行PRK术,即切削深度为100μm组和150μm组,消融直径5.6mm.于术后3、7、21d及1、2、3个月抽取房水并同时记录haze分级,ELISA法测定房水中TGF-β1含量.结果PRK术后两种切削深度的兔眼角膜上皮均于5～7d愈合;haze均自术后2周开始形成,术后2个月时达到高峰,3个月时明显下降.但150μm切削组术后3个月时,haze仍较100μm组明显,伴有房水中TGF-β1含量的相应改变;150μm切削组在术后7d和3个月时,haze和TGF-β1含量均明显高于100μm切削组.结论PRK术后TGF-β1影响haze的形成并具有一种剂量依赖的关系,而且与切削深度相关.     

PRK术后房水中TGF-β1含量与haze的相关性

目的 探讨兔眼准分子激光角膜切削术（photorefractkeratectomy,PRK）术后3个月房水中TGF-β1含量的动态变化及其与角膜上皮下混浊（haze)形成的关系。方法 52只新西兰白兔，取4只兔（8眼）作术前对照；另48只兔（96眼）平均分两组，行PRK术，即切削深度为100μm组和150μm组，消融直径5.6mm。于术后3、7、21d及1、2、3个月抽取房水并同时记录haze分级，ELISA法测定房水中TGF-β1含量。 结果 PRK术后两种切消浓度的兔眼角膜上皮均于5-7d愈合；haze均自术后2周开始形成，术后2个月时达到高峰，3个月时明显下降。但150μm切削组术后3个月时，haze仍较100μm组明显，伴有房水中TGF-β1含量的相应改变；150μm切削组在术后7d和3个月时，haze和TGF-β1含量均明显高于100μm切削组。结论 PRK术后TGF-β1影响haze的形成并具有一种剂量依赖的关系，而且与切削深度相关。     

家兔PRK术后角膜创面的免疫组织化学研究

目的 评价实验室家兔不同屈光度PRK术后角膜创面愈合的过程。方法 应用SVSAPEX PLUS型（Summit Technology Inc.USA)准分子激光治疗系统对6只家兔双眼进行PRK术,随机分为FLM点眼组和CM点眼组,每组3只家兔,分别于术后3d、30d、100d两组随机选取1只家兔,猝死摘除双眼球,取其角膜。OCT包埋后冰冻切片,用于免疫组化研究,检测Ⅲ-C和FN。结果 所有家兔角膜上皮均在PRK术后第3天愈合,术后15d 开始出现不同程度的角膜haze,30-60d的最明显,术后100d,除1只家兔角膜haze为1级外,余家兔角膜haze为0级。CM组Ⅲ－C和FN的表达较FLM组明显;左眼（－8．00D）Ⅲ-C和FN的表达较右眼（－4．00D）明显。结论 PRK术后100d角膜组织结构基本正常,但仍有组织薄弱处和特殊性改变。角膜基质层切削深度可能是影响PRK术后haze发生的一个因素。     

丝裂霉素C对兔角膜准分子激光切削术后角膜愈合、角膜上皮下混浊及转化生长因子β2表达的影响

目的探讨丝裂霉素C（MMC）对兔角膜准分子激光切削术（PRK）后角膜愈合、角膜上皮下混浊及转化生长因子β2（TGF-β2）表达的影响。方法24只健康新西兰白兔（48眼）分两组行PRK手术,术后将浸有n02％MMC的滤纸片放置在右眼角膜中央切削区（MMC组）,将浸有平衡盐水（BSS）的滤纸片放置在左眼角膜中央切削区（BSS组）2min后用150ml BSS冲洗。同时设立正常对照组。观察角膜上皮愈合情况、角膜浅基质层角膜细胞数量和形态变化及角膜上皮下混浊;免疫组化检测正常对照组及手术组（MMC组和BSS组）术后1d、1周、4周和12周TGF-β2表达情况并作分析。结果MMC组角膜上皮愈合时间为（3．0±Q69）d,对照BSS组为（3．0±0．71）d,两组差异无统计学意义（P〉0.05）;术后MMC组浅基质层内角膜细胞明显减少,两组差异有统计学意义（P〈0．05）;BSS组角膜上皮下混浊明显重于MMC组,两组差异有统计学意义（P〈0.05）;术后各时段BSS组TGF—β2表达多于MMC组。结论MMC不会延长角膜上皮的修复时间,并减轻术后角膜上皮下的混浊;MMC减轻术后角膜上皮下混浊形成可能部分与其调节TGF—β2的表达有关。     

兔LASEK与PRK术后角膜Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原检测及意义

目的　用Westernblot法比较准分子激光上皮下角膜磨镶术(LASEK)与准分子激光角膜切削术(PRK)术后角 膜Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原的动态变化情况。方法　52只新西兰白兔分为8组,每只兔右眼行LASEK,左眼行PRK。术后1、7 d、1、3、4、5、6个月观察haze情况,处死动物取角膜行Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原的动态变化过程的Westernblot检测。结果　经 Westernblot检测发现LASEK组术后角膜基质中Ⅰ、Ⅲ型胶原开始增生的时间早于PRK组,表达的强度与PRK组有显著差 异;两组的Ⅴ、Ⅵ型胶原动态变化曲线相似,达到表达高峰的时间一致,PRK组Ⅴ、Ⅵ型胶原的表达均明显高于LASEK组, 术后6个月时LASEK组表达显著弱于PRK组。结论　PRK手术后角膜基质中Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原的表达强度、达到高峰 及恢复正常的时间与LASEK相比存在显著差异,表明PRK术后基质内有胶原的过量沉积,可能是临床PRK术后haze严重 及屈光回退的组织学基础。     

五种生长因子mRNA在兔角膜中的表达

目的　了解EGF、TGF-α、bFGF、TGF-β1和PDGF在兔角膜上皮和基质中的表达情况,探讨其在角膜伤口愈合中的作用。方法 应用原位核酸分子杂交方法检测兔角膜上皮和基质中EGF、TGF-α、bFGF、TGF-β1和PDGF mRNA的表达。 结果 EGF、TGF-α和PDGF mRNA仅在正常角膜上皮细胞层表达,基质中未见表达;bFGF和TGF-β1mRNA在正常角膜上皮和基质中均有表达。 结论 角膜能合成和分泌EGF、TGF-α、bFGF、TGF-β1和PDGF,且共同调节着角膜伤口的愈合。     

准分子激光屈光性角膜切削术后兔眼角膜组织蛋白多糖的变化

目的：动态观察准分子激光屈光性角膜切削术(photorefractive kemtecmy,PRK)后角膜组织蛋白多糖(protoglycan,PG)的变化,并探讨其与角膜雾状混浊(haze)的关系。方法：16只兔(32眼)进行PRK手术建立动物模型,矫正度数-9．00D。术后裂隙灯显微镜对各组角膜的haze分级,并取不同时间点角膜组织,应用超微结构组织化学方法观察PG的变化。结果：异常PG主要沉积在角膜的前部基质;haze在术后3周明显,随着时间的推移逐渐减轻。haze愈明显,PG改变亦明显。结论：PRK术后切削区角膜基质浅层PG的异常改变与角膜haze的形成密切相关。