雷公藤内酯醇对人Th17细胞分化的调节作用

目的:研究雷公藤内酯醇对体外培养的人Th17细胞分化的调节作用.方法:在体外将不同浓度雷公藤内酯醇作用于人外周血单一核细胞、纯化的CD4+T细胞和CD4+CD45RA-记忆性T细胞,采用MTT法检测淋巴细胞增殖,流式细胞术分析单个细胞内表达IL-17和IFN-γ的频数,ELISA法测定细胞分泌IL-17和IFN-γ的水平.结果:雷公藤内酯醇以剂量依赖的方式抑制淋巴细胞增殖、细胞内IL-17的表达频数和细胞产生IL-17的水平.此外,雷公藤内酯醇对细胞内IFN-γ的表达和产生也有抑制作用.结论:雷公藤内酯醇可抑制人TH17细胞的分化,这可能是雷公藤内酯醇免疫抑制和抗炎作用的机制之一.     

雷公藤氯内酯醇对人外周血淋巴细胞内钙离子浓度的影响

雷公藤氯内酯醇(Tripcholorlide,T_4)是雷公藤有效活性成分之一,具有很强的免疫抑制及抗生育活性,其相关效价较雷公藤多甙强100～200倍。近年来,有关雷公藤免疫抑制机制的研究取得了不少进展。许多研究证实,T_4可抑制 T 淋巴细胞 IL-2、IL-1、IL-6、TNFa、rFN 等多种细胞因子 mRNA 表达与蛋白合成,并抑制淋巴细胞增生及抗体产生。但是,关于 T_4作用的细胞内机制尚不清楚。一些研究发现有丝分裂原激活 T淋巴细胞的过程有赖于胞内钙信号系统参与,因此,本研究以Fura-2荧光法观察不同浓度 T_4对 T 淋巴细胞内钙离子浓度的影响,以探讨 T_4作用的细胞内机制。     

雷公藤内酯醇抑制RANTES和MIP-1α对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞趋化作用的研究

探讨雷公藤内酯醇对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞与RANTES和MIP - 1α趋化反应的影响。建立大鼠佐剂性关节炎模型 ,应用雷公藤内酯醇 (0 .2～ 0 .4mg/kg ,ip)后 ,分离大鼠外周血T淋巴细胞 ,观察RANTES和MIP - 1α对T淋巴细胞趋化反应的影响 ,检测病变关节肿胀度 ,观察病变关节组织的炎症病理变化。雷公藤内酯醇在 0 .2～ 0 .4mg/kg范围内 ,能明显减轻佐剂性关节炎病变关节肿胀度 ,减轻病变组织的炎症反应程度 ,显著抑制RANTES和MIP - 1α对T淋巴细胞的趋化作用。指出 ,雷公藤内酯醇能明显抑制RANTES和MIP - 1α对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞趋化作用。     

雷公藤内酯醇抑制RANTES和MIP—1α对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞趋化作用的研究

探讨雷公藤内酯醇对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞与RANTES和MIP－1α趋化反应的影响，建立大鼠佐剂性关节模型，应用雷公藤内酯醇（0．2－0．4mg/kg,ip)后，分离大鼠外周血T淋巴细胞，观察EANTES和MIP－1α对T淋巴细胞趋化反应的影响，检测病变关节肿胀度，观察病变关节组织的炎症病理变化，雷公藤内酯醇在0．2－0．4mg/kg范围内，能明显减轻佐剂性关节炎病变关节肿胀度，减轻为组织的炎症反应程度，显著抑制RANTES和MIP－1α对T淋巴细胞的趋化作用，指出，雷公藤内酯醇能明显抑制RANTES和MIP－1α对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞趋化作用。     

雷公藤内酯醇对急性重症胰腺炎大鼠全身炎症反应肺损伤的影响

目的:明确雷公藤内酯醇对急性重症胰腺炎(SAP)大鼠全身炎症反应肺损伤的作用机制。方法:采用牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法复制SAP肺损伤模型。动态观察注射术后10h各组大鼠血清淀粉酶、TNF-α肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)在血清中的水平,胰、肺组织NF-kB活化表达水平情况及术后24h大鼠的死亡率;HE染色观察胰腺及肺病理损伤。结果:与假手术组比较,模型组血清淀粉酶、TNF-α与IL-6蛋白表达升高、且胰腺和肺组织中NF-kB活性显著升高;与模型组比较,雷公藤内酯醇治疗组上述指标均明显降低,胰腺及肺组织损伤减轻,差异均有统计学意义(P0.05);术后24h雷公藤内酯醇治疗组大鼠死亡率低于模型组(P0.05)。结论:雷公藤内酯醇可能是通过抑制NF-κB活性表达、下调TNF-α、IL-6等炎症因子表达抑制全身炎症反应(SAS),从而对SAP有治疗作用,对SAP肺损伤更有一定保护作用,降低SAP大鼠死亡率。     

雷公藤内酯醇联合多西紫杉醇对PC-3/MDR细胞耐药的体外逆转作用

目的研究雷公藤内酯醇联合多西紫杉醇对人前列腺癌PC-3/多药耐药(MDR)细胞耐药的体外逆转作用。方法将对数生长期的PC-3、PC-3/MDR细胞随机分为阴性对照组、多西紫杉醇组、雷公藤内酯醇组、多西紫杉醇-雷公藤内酯醇组(1∶1、1∶2、1∶3),MTT法测定各组细胞生长抑制率,HPLC法检测各组细胞对多西紫杉醇的摄取,试剂盒法测定给药组细胞P-gp表达和P-gp ATP酶活性,RT-PCR法考察雷公藤内酯醇干预对PC-3/MDR细胞MDR1 mRNA表达影响。结果不同浓度雷公藤内酯醇联合多西紫杉醇与PC-3、PC-3/MDR细胞孵育后,IC50值均显著降低,其中3倍量前者对后者的耐药逆转指数为9. 75。联合用药组细胞所摄取的多西紫杉醇量显著高于多西紫杉醇组,并呈雷公藤内酯醇剂量依赖性。此外,高浓度雷公藤内酯醇对MDR1 mRNA表达有明显抑制作用。结论雷公藤内酯醇可通过抑制P-gp表达、激活P-gp ATP酶活性、抑制MDR1 mRNA表达等多重机制,促使多西紫杉醇在体外逆转前列腺肿瘤PC-3/MDR细胞耐药。     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞周期及P21wap1/cip1和P27kip1表达的影响

目的观察雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和周期的影响,探讨细胞周期调控蛋白P21wap1/cip1和P27kip1在其中的作用和意义。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测雷公藤内酯醇对RPMI 8226细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,半定量RT-PCR和Western blotting法检测RPMI 8226细胞中P21wap1/cip1、P27kip1 mRNA和蛋白表达。结果 雷公藤内酯醇能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,雷公藤内酯醇作用48 h的IC50值为(71.18±2.01)nmol/L。雷公藤内酯醇还可以诱导RP-MI 8226细胞周期阻滞于G0/G1期,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少。经雷公藤内酯醇干预后周期调节蛋白P21wap1/cip1和P27kip1的mRNA和蛋白表达水平明显上调。结论雷公藤内酯醇可以抑制RPMI 8226细胞增殖,该抑制作用是通过调控P21wap1/cip1和P27kip1的表达,从而阻止细胞周期G0/G1期过渡实现的。     

雷公藤内酯醇对佐剂性关节炎大鼠关节组织MCP-1表达变化的影响

类风湿性关节炎是临床上的常见病及多发病,若得不到及时诊治,其致残率极高。雷公藤内酯醇是雷公藤主要成分之一,其药理活性最高,在临床上用于治疗类风湿性关节炎,近期疗效很高。笔者以往的研究表明[1]雷公藤内酯醇可抑制MCP-1对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞的趋化作用。但雷公藤内酯醇对佐剂性关节炎大鼠关节组织细胞MCP-1表达变化的影响如何,尚未见文献报道。本研究旨在建立大鼠佐剂性关节炎模型基础上,通过应用不同剂量的雷公藤内酯醇,观察其对佐剂性关节炎病变组织细胞趋化因子MCP-1表达变化的影响,探讨雷公藤内酯醇治疗类风湿性…     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞周期及P21wapl/cipl和P27kipl表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和周期的影响,探讨细胞周期调控蛋白P21wapl/cipl和P27kipl在其中的作用和意义.方法 采用MTT比色法和流式细胞术检测雷公藤内酯醇对RPMI 8226细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,半定量RT-PCR和Western blotting法检测RPMI 8226细胞中P21wapl/cipl、P27kipl mRNA和蛋白表达.结果 雷公藤内酯醇能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,雷公藤内酯醇作用48 h的IC50值为(71.18士2.01)nmol/L.雷公藤内酯醇还可以诱导RP-MI 8226细胞周期阻滞于G0/G1期,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少.经雷公藤内酯醇干预后周期调节蛋白P21wapl/cipl和P27kipl的mRNA和蛋白表达水平明显上调.结论 雷公藤内酯醇可以抑制RPMI 8226细胞增殖,该抑制作用是通过调控P21wapl/cipl和P27kipl的表达,从而阻止细胞周期G0/G1期过渡实现的.     

雷公藤内酯醇对非霍奇金淋巴瘤基质细胞衍生因子-1及其特异性受体生物学轴效应的影响

目的研究雷公藤内酯醇对非霍奇金淋巴瘤（non—Hodgkin lymphoma，NHL）细胞系Raji增殖的抑制作用，并探讨雷公藤内酯醇体外抑制NHL肿瘤细胞通过淋巴结转移的作用及其分子机制。方法采用MTT法测定雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖的影响；采用RT—PCR方法检测雷公藤内酯醇对NHL淋巴结基质细胞中基质细胞衍生因子-1α（SDF—1α）表达的影响；采用流式细胞术检测雷公藤内酯醇作用前后NHL淋巴结瘤细胞CXCR4受体表达水平的变化；采用Transwell微孔隔离室迁移实验观察雷公藤内酯醇对NHL淋巴结瘤细胞体外迁移的影响。结果MTT法表明低剂量雷公藤内酯醇（6．25～25nmol／L）即可以时间和剂量依赖方式明显抑制Raji细胞的生长；其作用24、36、48、60、72h的IC50值分别为43．06、25．08、7．32、2．66、0．58nmol／L。RT—PCR结果显示雷公藤内酯醇能抑制NHL淋巴结基质细胞SDF-1α的表达，其中较低剂量组（12．5nmol／L）与对照组相比有一定的降低，但差异无显著性（P〉0．05），而较高剂量组（25、50nmol／L）则可明显抑制SDF-1α的表达（P〈0．05），并具有量效关系。流式细胞术分析结果发现经不同浓度雷公藤内酯醇处理后，NHL淋巴结瘤细胞CXCR4表达率与对照组相比逐渐下降（P〈0．01），此抑制效应呈剂量依赖性。Transwell趋化活性分析显示雷公藤内酯醇既能抑制重组人SDF-1α对NHL淋巴结瘤细胞的趋化作用，也能阻断NHL淋巴结基质细胞对瘤细胞的体外迁移，且雷公藤内酯醇对趋化作用的抑制具有剂量依赖关系。结论雷公藤内酯醇具有抗淋巴瘤细胞增殖的效应，并能阻断NHL淋巴结瘤细胞通过淋巴结的转移。其抗肿瘤机制及其抗细胞增殖作用与对NHLSDF-1／CXCR4生物学轴的抑制效应有关。     

雷公藤甲素对GSDME依赖性肝癌细胞焦亡的影响

目的:探究雷公藤甲素对肝癌细胞Bel-7402焦亡的影响及其分子机制。方法:体外培养肝癌细胞Bel-7402,CCK-8检测不同浓度的雷公藤甲素(2.5、5.0、10.0μg/mL)对肝癌细胞活力影响;PI/DAPI染色观察细胞焦亡形态变化;ELISA试剂盒检测IL-1β和IL-18释放量;Western blotting检测Caspase-3、GSDME、IL-1β和IL-18表达;转染GSDME siRNA 24 h后PI/DAPI染色检测细胞焦亡形态变化。结果:CCK-8检测发现,随着雷公藤甲素浓度增加,Bel-7402细胞活力明显降低(P<0.01);给予雷公藤甲素(10.0μg/mL)能够明显促进细胞焦亡,升高细胞上清液中IL-1β和IL-18含量,促进Caspase-3、GSDME-N、IL-1β和IL-18表达(P<0.05或P<0.01);siGSDME能够明显抑制细胞焦亡形态变化,降低细胞焦亡数目。结论:雷公藤甲素能够促进GSDME依赖性细胞焦亡,抑制肝癌细胞增殖。     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的调节作用

目的 研究雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的影响,探讨其表观遗传调控作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖活性:Annexin V-FITC/PI双标法流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR法检测U266细胞组蛋白赖氨酸去甲基化酶1 (LSDI) mRNA、组蛋白去甲基化酶(JMJD2B)mRNA表达的变化;激光共聚焦显微技术观察LSDI亚细胞定位情况及蛋白量的变化;Western blotting法检测在雷公藤内酯醇干预下LSD1和JMJD2B蛋白表达的变化.结果 雷公藤内酯醇以剂量、时间相关方式抑制U266细胞增殖,与细胞培养24 h的IC50为153.2 nmol/L;以剂量相关方式诱导U266细胞凋亡,雷公藤内酯醇80 nmol/L作用U266细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡形态学改变,总凋亡率达32.9％.;以剂量相关方式抑制JMJD2B蛋白的表达,同时促进LSD1蛋白表达.结论 雷公藤内酯醇在抑制U266细胞增殖、诱导其凋亡的同时,明显改变LSD1、JMJD2B的表达,其诱导U266细胞凋亡和抗肿瘤效应可能与其调节LSD1、JMJD2B表达有关.     

雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

目的:研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL-2及IFN-γmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA的表达的影响.结果:TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL-2及IFN-γmRNA的表达.结论:TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一.     

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+梓醇3 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+三七总皂苷12 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+草酸铵1.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+青藤碱0.75 mg·L~(-1)组。流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P0.05)。而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显。结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡。而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

核因子кB对支气管哮喘大鼠淋巴细胞增殖和凋亡的调节作用及雷公藤甲素对其影响

目的 探讨核因子κB(NF—κB)是否参与支气管哮喘淋巴细胞增殖和凋亡的调节过程以及雷公藤甲素对哮喘淋巴细胞增殖和凋亡的调控作用是否通过NF—κB发挥。方法 分别给予哮喘大鼠模型NF—κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和免疫抑制剂地塞米松及雷公藤甲素干预,进行病理检查、气道反应性测定,采用免疫荧光法检测肺组织和脾淋巴细胞NF—κB P65的表达,免疫组织化学法测定脾淋巴细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、流式细胞术检测脾淋巴细胞凋亡,电泳迁移率改变试验测定NF—κB活性。结果 哮喘气道及脾淋巴细胞NF—κB的核表达量和活性均明显高于正常对照(均P<0.05);哮喘脾淋巴细胞的增殖率明显高于正常对照(P<0．05)。而凋亡率明显低于正常对照(P<0．05);NF—κB抑制剂PDTC的应用可使哮喘异常上调的NF-κB核表达量及活性下降,脾淋巴细胞增殖减少、凋亡增多：且NF—κB活性与脾淋巴细胞的增殖率呈显著正相关(r=0．89,P<0．05),而与其凋亡率呈显著负相关(r=0．54,P<0．05)。在体应用雷公藤甲素后,哮喘气道及脾淋巴细胞NF—KB的核表达量及活性、脾淋巴细胞的增殖率均明显下降(均P<0．05),而凋亡率明显增加(P<0．05),同时气道炎性细胞的浸润及气道高反应性亦明显减轻(均P<0．05),且气道嗜酸粒细胞的数量及气道的反应性与NF—κB活性呈显著正相关(r分别为0．79和0．68,P<0．05);雷公藤甲素的作用与地塞米松差异无显著性(P>0．05)。结论 (1)NF—KB通过促进淋巴细胞增殖并抑制其凋亡而参与哮喘炎症反应及气道高反应性的形成;(2)雷公藤甲素通过抑制NF—κB进而抑制淋巴细胞增殖,从而发挥抗哮喘气道炎症的作用,它抑制NF—κB的分子机制是否与糖皮质激素类似有待进一步研究。     

雷公藤甲素对类风湿关节炎滑膜新生血管中血管内皮生长因子、白细胞介素-6抑制机理的探讨

目的:了解雷公藤甲素对类风湿关节炎中血管内皮生长因子、白细胞介素-6的影响,探讨雷公藤对类风湿关节炎患者滑膜新生血管的抑制机理.方法:应用免疫组化技术检测血管内皮生长因子、白细胞介素-6在AA大鼠踝关节滑膜组织中的表达,并观察了雷公藤对其的影响.结果:雷公藤组可见少量的血管内皮生长因子阳性细胞,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).大鼠滑膜关节腔滑液中白细胞介素-6水平检测中,实验显示对照组滑膜组织中白细胞介素-6的水平明显高于空白组和雷公藤组(P＜0.01).结论:雷公藤甲素能降低滑膜组织血管内皮生长因子、白细胞介素-6的表达水平,抑制血管生成.     

雷公藤甲素抗卵巢癌的研究进展

雷公藤甲素是从雷公藤中提取的环氧化二萜内酯化合物,对卵巢癌体外培养细胞及体内实体瘤均有显著的抑制作用,并可有效抑制耐顺铂卵巢癌细胞的生长。综合近年来国内外对雷公藤甲素抗卵巢癌的最新研究结果,对雷公藤甲素抗卵巢癌的作用及其诱导卵巢癌细胞凋亡、干预细胞周期、抑制癌细胞转移等方面的机制进行综述。     

雷公藤甲素抗类风湿性关节炎机制研究进展

对雷公藤甲素治疗类风湿性关节炎（RA）的分子机制研究进行了综述。雷公藤甲素具有免疫抑制、抗炎反应、诱导细胞凋亡、抑制血管增生、保护软骨以及基因调控等多方面的作用,是一种有良好应用前景的新型免疫抑制剂。