利用特异性寡核苷酸探针检测非IgA系膜增殖性肾炎H…

本文报道利用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术及特异性寡核苷酸（ＳＳＯ）探针检测了１００例原发性非ＩｇＡ系膜增殖性肾炎（Ｎｏｎ－ＩｇＡ ＭｓＰＧＮ）患者ＨＬＡ－ＤＲ等位基因频率，并与２５５例中国北方汉族正常人进行了比较，发现ＨＬＡ－ＤＲ１２（５）等位基因频率在Ｎｏｎ－ＩｇＡ ＭｓＰＧＮ患者明显高于正常人（２７．０ｖｓ７．８，Ｐｃ＜０．０１）。并从免疫遗传学角度对ＨＬＡ车Ｎｏｎ－ＩｇＡ，ＭｓＰＧＮ的关联进行     

细胞间粘附分子—1在非IgA系膜增殖性肾小球肾炎病变中表…

应用免疫组化方法及计算机图象分析系统，检测了非ＩｇＡ系膜增殖性肾小球肾炎患者肾组织病变过程中细胞间粘附分子－１的变化。结果显示：Ｐ在系膜细胞增殖的肾小球内细胞间粘附分子－１含量增加，并随病变进展明显增加，且与系膜细胞增殖程度显著正相关。     

细胞间粘附分子－1在非IgA系膜增殖性肾小球肾炎病变中表达的定量分析

应用免疫组化方法及计算机图象分析系统，检测了非ＩｇＡ系膜增殖性肾小球肾炎患者肾组织病变过程中细胞间粘附分子－１的变化。结果显示：在系膜细胞增殖的肾小球内细胞间粘附分子－１含量增加，并随病变进展明显增加，且与系膜细胞增殖程度显著正相关。     

中国南京地区汉族人HLA－DR4DNA的快速分型

应用ＡＲＭＳ（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｒｎｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ）方法对南京地区１００例汉族健康人ＨＬＡ－ＤＲ４进行基因分型，结果表明，本地区汉族人ＨＬＡ－ＤＲ４基因纯合子占６％，杂合子占１５％，非ＤＲ４占７９％。本法较ＰＣＲ／ＳＳＯ法简单、快速，结果可靠，可用于ＨＬＡ配型。检测结果为ＨＬＡ相关联疾病及人类学的研究提供了参考依据。     

抗胸腺细胞血清法诱发大鼠系膜增殖性肾炎模型

为了研究系膜增殖性肾炎的发病机理,国内外学者已建立了由抗Ｔｈｙ－１抗体诱发的大鼠系膜增殖性肾炎模型［１,２］。但是,该类模型均以系膜溶解为主要病理改变,肾小球系膜细胞（ｍｅｓａｎｇｉｕｍｃｅｌ,ＭＣ）增殖较轻,而且是一个“自限性的增殖模型”。另外,抗...     

用PCR指纹图作HLA－DR快速配型的研究

ＰＣＲ指纹图技术选用通用型引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ基因第二外显子，其产物在ＰＡＧＥ电泳中显示特定的“卫星”条带。可用于个体间作ＨＬＡ－ＤＲ的基因水平交叉配型，确定供受体间ＤＲＢ基因的相容性。采用ＨＬＡ纯合的Ｂ淋巴细胞系，分析单倍型上ＤＲＢＩ、ＤＲＢ３等基因异同时指纹图格局的变化，并通过１５对细胞间组合和比较，证实经ＤＮＡ交叉配合后的指纹图格局能十分敏感地反映个体间ＤＲ基因间的差异。在此基础上进一步对１７对随机个体作ＰＣＲ指纹图及交叉配型分析，表明这一技术在判别供受体间ＤＲ基因匹配性上十分有效，并有简单、快速、准确等优点。     

用PCR指纹图作HLA－DR快速配型的研究

ＰＣＲ指纹图技术选用通用型引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ基因第二外显子，其产物在ＰＡＧＥ电泳中显示特定的“卫星”条带。可用于个体间作ＨＬＡ－ＤＲ的基因水平交叉配型，确定供受体间ＤＲＢ基因的相容性。采用ＨＬＡ纯合的Ｂ淋巴细胞系，分析单倍型上ＤＲＢＩ、ＤＲＢ３等基因异同时指纹图格局的变化，并通过１５对细胞间组合和比较，证实经ＤＮＡ交叉配合后的指纹图格局能十分敏感地反映个体间ＤＲ基因间的差异。在此基础上进一步对１７对随机个体作ＰＣＲ指纹图及交叉配型分析，表明这一技术在判别供受体间ＤＲ基因匹配性上十分有效，并有简单、快速、准确等优点。     

关于我国HLA－DR、DQ位点抗原多态性血清学研究的分析

就国内外１４家实验室的１５组（包括作者自己）ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ位点多态性的血清学研究，进行了评析，旨在对今后的发展提出其自己的建议。我国ＨＬＡ研究界的当务之急是团结合作，筛选研制出中国自己成套的Ⅱ类抗原分型血清。     

非IgA系膜增生性肾炎的患者的重复妊娠

原发性肾小球肾炎与妊娠的相互关系目前尚有争议。本文报道重复妊娠对非 Ig A系膜增生性肾炎患者母体及胎儿的影响。资料与方法　回顾 1985 .5月～ 1997.12月间 17例Mes GN重复妊娠患者的资料。系膜增生性肾炎根据患者肾穿刺活检标本光镜、免疫荧光及电镜确诊 ,均除外继发性系统性疾病伴发的 Mes GN及 Ig A肾病。结果　 17例患者共怀孕 135次 ,平均每例 7.9次 (3～ 13次 )。 5 0次妊娠出现在 Mes GN诊断前 ,85次出现在 Mes GN诊断后。Mes GN诊断后病例组有 14次妊娠 (16 .4 % )过程中出现先兆子痫 ,均发生在妊娠后期。 4例患者生产 …     

中国胰岛素依赖性糖尿病病人（HLA－DR9）的HLA－DQB1基因顺序分析

用血清学方法研究显示中国人胰岛素依赖性糖尿病（ＩＤＤＭ）与ＨＬＡ－ＤＲ９相关。鉴于白种人中的研究显示ＩＤＤＭ与ＨＬＡ－ＤＱβ链第５７位氨基酸相关，Ａｓｐ－５７对ＩＤＤＭ呈抗性，ｎｏｎ－Ａｓｐ与ＩＤＤＭ易感性相关。我们用ＰＣＲ技术扩增了中国人中血清学ＤＲ９纯合的ＩＤＤＭ患者和正常对照的ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因第二外显子并测定了核苷酸顺序，结果未发现ＩＤＤＭ特异ＨＬＡ－ＤＱＢ１等位基因，但发现ＩＤＤＭ病人ＨＬＡ－ＤＱＢ１５７位均为天冬氨酸。表明中国ＩＤＤＭ患者中的ＨＬＡ－ＤＱＢ１５７位天冬氨酸不一定具有保护个体抵抗ＩＤＤＭ的足够能力。ＩＤＤＭ易感性可能涉及多个基因位点的变化，另外还可能与其它遗传因素及环境因素有关。     

聚合酶链反应检测多发性骨髓瘤骨髓细胞IgH基因重排

从常规保存的骨髓涂片抽提ＤＮＡ为模板，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测多发性骨髓瘤（ＭＭ）与反应性浆细胞增多症（ＲＰ）ＩｇＨ基因重排方式。结果３６例ＭＭ中有２９例呈单克隆ＩｇＨ基因重排，８例ＲＰ均呈多克隆重排。表明该方法有助于鉴别ＭＭ与ＲＰ，结合临床其他资料，可作为临床上ＭＭ早期诊断及不典型ＭＭ诊断的手段，具有临床应用价值。     

用PCR组建巨细胞病毒抗原决定簇基因的表达克隆

巨细胞病毒感染的血清学诊断方法是目前临床诊断中应用最广泛的方法之一。但由于缺少高效价、高纯度和高特异性的抗原，使各种血清学方法在其敏感性和特异性方面均不能令人满意。文献报道，通过分子生物学得到的或化学合成的单一病毒蛋白或部分成份可作为血清学诊断的良好抗原。本文报道用聚合酶链反应扩增了巨细胞病毒主要磷蛋白ｐＰＵＬ３２的一个强抗原决定簇基因，并同时在扩增产物的两端引入了相应的限制性内切酶识别位点序列，经与表达载体连接后转入相应的细菌中，得到了能够表达此抗原决定簇的克隆，其表达的融合蛋白在免疫转印检测中与人巨细胞病毒阳性血清有强特异性反应。     

DNA TYPING FOR HLA-DPB1-ALLELES IN GERMAN PATIENTS WITH SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS USING THE POLYMERASE CHAIN REACTION AND DIG-ddUTP-LABELLED OLIGONUCLEOTIDE PROBES

Genomic DNA of 178 German Caucasian patients with systemic lupus erythematosus are studied for HLA-DP locus by using PCR and DIG-ddUTP-labelled oligonucleotide probes. A significant increase of DPB1*0101 is observed in SLE patients compared with healthy controls (χ < ² < = 15.27, p.c. <0.004). DPB1*0501 and *0901 are also slightly increased (χ²= 5.85, P < 0.05, p.c. = NS; χ²= 5.64, P < 0.05, p.c. = NS). There is no significant difference in frequency of DP alleles between male and female patients. Since a linkage disequilibrium between HLA-B, DR and DP loci is found in our SLE patients, an analysis is performed assessing the relative importance of these HLA-markers to SLE. The results show that the increase of DPB1*0101 in SLE patients is associated with the HLA-B8, DR3 haplotype and it suggests a more important role for HLA-B8, DR3 or genes within this haplotype than for DPB1*0101 in the genetic predisposition for SLE.     

用PCR法分析中国汉族群体D17S30位点遗传多态性

用聚合酶链式反应对中国汉族群体１２２名无关个体Ｄ１７Ｓ３０位点扩增片段长度多态性进行分析研究，发现１０个等位基因，片段大小为１６８－７９８ｂｐ，基因频率为０．００８２－０．２５８２，杂合性为７８％。５５种可能基因型中发现了２７种，对基因型的观察值和期望值进行Ｘ＾２检验，符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｂｅｒｇ平衡定律。     

应用PCR技术检测恙螨体内恙虫病立克次体动态和经卵传递的研究

本文应用聚合酶链反应技术检测恙虫病立克次体实验感染的恙螨体内立克次体的动态变化，通过人工腹腔接种而感染的恙螨成虫，恙虫病立克次体至少能在其体内生存３６０天和经卵传递４代；通过未食幼虫叮咬病小鼠而感染的恙螨，经饱蚴、若蛹、若虫、成蛹和成虫阶段，恙虫病立克次体检测均呈阳性，至少能在成虫期体内生存２７０天和经卵传递１代。     

VJ REARRANGEMENTS OF THE TCRγ LOCUS IN PERIPHERAL T-CELL LYMPHOMAS: ANALYSIS BY POLYMERASE CHAIN REACTION AND DENATURING GRADIENT GEL ELECTROPHORESIS

Using Southern blotting for the diagnosis of clonality in peripheral T-cell lymphomas (PTCLs), analysis of the T-cell receptor (TCR) γ gene rearrangement was shown to be more informative than that of the TCR β gene rearrangement. In order to amplify every VJγ rearrangement, a polymerase chain reaction (PCR) procedure using newly designed GC-clamp primers has been developed. All primers can be mixed in a single multiplex PCR. PCR products are analysed by denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE), providing tumour-specific imprints inasmuch as the procedure characterizes N sequence polymorphism at the VJ junctions. In a series of 30 PTCL cases, the PCR procedure demonstrated 27 cases to be clonally rearranged and failed in three cases. PCR was more accurate than Southern blotting, showing 47 rearranged γ alleles, four of which were undetectable on the Southern blot. When lymphomas were studied at different sites and at relapse, the DGGE pattern remained unchanged. In PTCL, the proposed PCR is helpful for the diagnosis and staging of the disease and should improve the follow-up monitoring. The undetectability of clonal rearrangements in a few cases is discussed in the light of concepts of lymphomagenesis and T-cell differentiation.     

5-HT受体亚型mRNAs在大鼠三叉神经节和脊髓背根节的表达——PCR法研究

根据 5- HT受体 13种亚型互补 DNA序列合成相应的特异性引物 ,用 PCR方法对各种 5- HT受体亚型在大鼠三叉神经节及脊髓背根节的表达进行了观察。结果显示 :三叉神经节表达 5- HT1A、5- HT1B、5- HT1D、5- HT2 A、5- HT3、5- HT4 和 5- HT7亚型。背根节表达的 5- HT受体亚型与三叉神经节者相同 ,但这些亚型的电泳条带密度在两种神经节存在着差异。三叉节的 5- HT1D和 5- HT3电泳条带密度最高 ,5- HT1A和 5- HT4 次之 ,5- HT1B、5- HT2 A和 5- HT7较弱 ;背根节的 5- HT3和 5- HT1D电泳条带密度最强 ,5- HT1B和 5- HT2 A次之 ,而 5-HT1A、5- HT4 和 5- HT7则较弱。将各亚型的 PCR阳性产物进一步克隆至 p CR 载体进行序列测定 ,结果表明这些 PCR产物的 DNA序列与已知的各亚型的序列一致。本研究的结果对进一步探讨 5- HT受体在外周感觉信息传递过程中的作用具有一定的意义     

用mRNA差异显示法寻找人绒毛膜上皮癌与孕早期绒毛组织间的差异基因

目的　寻找人绒毛膜上皮癌 (JAR)与孕早期绒毛组织间的差异基因。　方法　采用 m RNA差异显示法 (m RNA differential display PCR,DD- PCR) ,即分别提取正常孕早期绒毛及绒毛膜上皮癌的总 RNA ,在oligod T1 5 作用下分别合成相应的 c DNA ,并以其为模板利用试剂盒中的 2 0对引物组合和α- 32 Pd ATP,Taq酶等进行PCR,将两者的 PCR产物在 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶 (PAG)上电泳 ,放射自显影后寻找两者间的差异片段 ,回收差异片段进行二次 PCR,对二次 PCR产物先采用反杂交法初步筛选后再用 Northern Blot鉴定。　结果　从 PAG上切下 32条差异条带 ,经反杂交初步筛选出 11个阳性片段 ,对 11个阳性片段分别做 Northern Blot鉴定 ,其中 1个片段(T2 6 )的基因长度约 1.2 kb,其在绒毛膜上皮癌中的表达远高于正常绒毛组织。　结论　 T2 6基因片段可能是绒癌相关基因     

NGF／GDNF基因修饰神经干细胞植入AD模型鼠脑内的存活、分化及表达

目的 观察NGF／GDNF基因修饰神经干细胞（NGF－NSC和GDNF－NSC）在AD模型鼠脑内的存活、分化及基因产物的表达。方法 将BrdU标记的NGF－NSC和GDNF－NSC单独和联合移植入穹窿海巴伞切断的大鼠侧脑室内。移植后3周,用免疫组织化学方法对脑切片进行BrdU、Nestin、GFAP、NF、NGF及GDNF单标或双标染色。结果 脑室内见到大量BrdU阳性细胞。部分移植细胞向脑实质迁移,在切口周围、穹窿海马伞、海马、胼胝体、隔区、室管膜下区及血管壁旁均可见到BrdU阳性细胞。在皮质和切口周围可见较多的BrdU＋GFAP双标细胞;在海马内可见较多的BrdU NF双标细胞;在脑室内,两者均可见到。在脑室、皮质和海马等处均检测出BrdU＋NGF和BrdU＋GDNF免疫双标阳性细胞。结论 NGF／GDFN基因修饰NSC能在宿主脑内较好地存活,并能分化成神经元和星形胶质细胞,而且能分别表达外源基因产物NGF和GDNF。     

人类免疫球蛋白同种异型G3m（16）因子在中国人群中的分布

应用单克隆抗体酶联免疫吸附抑制试验，对我国３个民族８个群体２１０４份血样进行了免疫球蛋白同种异型Ｇ３ｍ（１６）因子检测。将所获数据及其他学者报道的数据一同进行了多元相关和多元回归分析。结果显示中国人Ｇ３ｍ（１６）基因频率呈沿海拔和纬度变化的浙变群，每一地理人群的Ｇ３ｍ（１６）基因频率受到海拔高度和纬度的综合影响，建立了可预测中国人群Ｇ３ｍ（１６）基因频率的多元回归方程。