过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型的改变

背景：近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用,但对于引起血管外膜成纤维细胞表型转化的机制尚不十分清楚。 目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变,同时检测对Ⅰ胶原蛋白表达的作用。 设计、时间及地点：随机分组设计,对比观察,于2007-07/2008-10在上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室完成。 材料：鼠龄2个月的健康雄性SD大鼠,体质量约120 g,用于体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;转化生长因子β1由美国GenWay Biotech公司提供;罗格列酮粉剂为北京高盟化工有限公司产品。 方法：实验分为3组：转化生长因子β1诱导组：以不同质量浓度的转化生长因子β1(3,5,10,15 μg/L)诱导成纤维细胞48 h;罗格列酮干预组：用不同浓度的PPAR-γ激动剂罗格列酮(5,10,30,50 μmol/L)干预成纤维细胞45 min后,加入转化生长因子β1 10 μg/L共同培养48 h;对照组：不添加任何干预措施。 主要观察指标：①免疫组织化学α-平滑肌肌动蛋白检测不同浓度转化生长因子β1、罗格列酮干预后成纤维细胞的表型改变。②蛋白免疫印迹检测成纤维细胞中平滑肌α2肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白的表达。 结果：不同质量浓度转化生长因子β1诱导成纤维细胞48 h后,与对照组相比,5 μg/L转化生长因子β1可明显刺激成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达,10 μg/L转化生长因子β1刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达最明显(P < 0.05),随后转化生长因子β1再增加至15 μg/L,与10 μg/L转化生长因子β1浓度组相比,其刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达不再增加(P > 0.05)。不同浓度罗格列酮干预10 μg/L转化生长因子β1诱导的成纤维细胞48 h后,与对照组相比,30 μmol/L可明显抑制成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达(P < 0.05)。 结论：PPAR-γ激动剂罗格列酮能抑制转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对二氧化硅致成纤维细胞纤维连接蛋白表达的影响

背景: 过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1致矽肺肺间质纤维化作用的影响及机制尚不明确,罕见报道。 目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1致矽肺肺纤维化作用的影响。 方法：200 mg/L SiO2刺激SD大鼠肺泡巨噬细胞培养上清液作用于中国仓鼠肺成纤维细胞株(CHL)建立矽肺纤维化的体外细胞模型。RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对转化生长因子β1诱导CHL的纤维连接蛋白mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导CHL的纤维连接蛋白表达的影响。 结果与结论：①转化生长因子β1 mRNA表达呈一定范围内的剂量(0~5 μg/L)和时间(0~24 h)依赖效应。②过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体及激动剂降低了纤维连接蛋白mRNA和蛋白的表达。结果提示过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂可以抑制转化生长因子β1诱导的SiO2致肺成纤维细胞纤维连接蛋白合成,具有抗SiO2所致肺间质纤维化的潜在作用。     

小鼠气管异位移植后模拟肺移植慢性排斥反应模型的建立*☆

目的：闭塞性细支气管炎是引起肺移植后移植物功能异常的主要并发症，原位肺移植动物模型技术难度高且费时，限制了其在闭塞性细支气管炎研究中的应用。通过小鼠的气管异位移植来建立模拟肺移植慢性排斥反应模型，以期为国内的闭塞性细支气管炎研究提供一种新的模型选择。 方法：①实验材料及分组：实验于2007-07/08在上海市肺科医院动物实验室完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。实验组采用10只C57BL/6小鼠为供体，10只BALB/c小鼠为受体；对照组10只供体、10只受体均采用BALB/c小鼠。②实验方法：取供体小鼠的气管、左右主支气管连续气道作为供体，两端结扎后异位移植到受体小鼠背部皮下。③实验评估：移植28 d后获取移植气管标本，石蜡包埋，行苏木精-伊红染色观察移植气管病理变化；比较两组小鼠的移植气管闭塞性细支气管炎发生率。 结果：20例模型动物全部存活，无感染。①模型动物手术时间（12±2）min。②苏木精-伊红染色病理切片示实验组小鼠移植气管管腔闭塞，慢性炎细胞浸润广泛，气管上皮完全脱落，纤维组织增生明显，呈现闭塞性细支气管炎表现；对照组小鼠移植气管的组织形态未见明显异常。③实验组小鼠移植气管闭塞性细支气管炎发生率高于对照组（P=0.000）。 结论：小鼠气管异位移植后模拟肺移植慢性排斥反应模型作为研究闭塞性细支气管炎的动物模型具有诸多优点。     

骨髓间充质干细胞诱导心脏成纤维细胞向肌纤维母细胞转化：不同时期心肌梗死区域的最佳微环境**☆

背景：骨髓间充质干细胞移植能够有效改善心肌梗死后的心功能,其作用机制可能与移植部位大量肌纤维母细胞的聚集有关,但至今仍缺少证据来证实聚集的肌纤维母细胞是由骨髓间充质干细胞还是由成纤维细胞转化而来？ 目的：观察不同时期心肌梗死微环境对大鼠骨髓间充质干细胞诱导心脏成纤维细胞向肌纤维母细胞转化的影响。 方法：将培养组分为3组：大鼠骨髓间充质干细胞、心脏成纤维细胞单培养组,以及两种细胞共培养组,加入心肌梗死后不同时期心肌匀浆干预7~28 d,并设立不加心肌匀浆的空白对照组,运用免疫细胞化学染色方法,检测不同干预组间平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及成纤维细胞转化为肌纤维母细胞数量间的差异。 结果与结论：加用心肌梗死第14天梗死周边区域心肌匀浆干预的共培养组,检测到心脏成纤维细胞转化为肌纤维母细胞的阳性率最高。提示心肌梗死后微环境下,骨髓间充质干细胞能诱导诱导心脏成纤维细胞转化为肌纤维母细胞,而心肌梗死后14 d的心肌梗死微环境是骨髓间充质干细胞诱导心脏成纤维细胞转化为肌纤维母细胞的最佳微环境。     

内皮素1在肺移植后闭塞性细支气管炎中的效应

肺移植后移植物的存活受限于闭塞性细支气管炎的出现。近年来的研究发现，内皮素1在闭塞性细支气管炎的发生发展中起到了一个较为重要的作用，内皮素1具有促炎症反应和促成纤维细胞增殖的作用。而非选择性的内皮素1受体拮抗剂波生坦则能够减弱内皮素的作用，明显减弱气道的闭塞。波生坦主要是通过抑制平滑肌细胞的增殖和明显减少免疫反应性细胞白细胞介素1β和白细胞介素2的数量而起作用的。文章通过相关方面文献的检索，总结了内皮素1在肺移植后闭塞性细支气管炎中的作用，并进一步观察波生坦在治疗闭塞性细支气管炎过程中所发挥作用。 关键词：内皮素；波生坦；闭塞性细支气管炎     

脑胶质瘤miR-9、PPARγ表达水平及临床意义

目的 探讨脑胶质瘤miR-9、过氧化物体增殖剂活化受体γ（PPARγ）表达水平及临床意义。方法 收集2013年2月至2015年2月脑胶质瘤手术标本76例,选取同期因颅脑损伤手术减压留取正常脑组织39例作为对照,采用实时荧光定量PCR检测miR-9、PPARγ mRNA表达水平,采用免疫组织化学方法检测PPARγ 蛋白表达水平。结果 脑胶质瘤组织miR-9 mRNA表达水平明显高于正常脑组织（P<0.05）,而PPARγ mRNA及蛋白表达水平均明显低于正常脑组织（P<0.05）。高级别胶质瘤miR-9 mRNA表达阳性率（92.31%,36/39）明显高于低级别胶质瘤（62.16%,23/37;P<0.05）,而PPARγ mRNA表达阳性率（48.72,19/39）明显低于低级别胶质瘤（75.68%,28/37;P<0.05）。脑胶质瘤组织miR-9与PPARγ表达呈明显负相关（r=-0.573, P<0.05）。miR-9高表达、PPARγ低表达是脑胶质瘤术后2年生存率的独立危险因素。结论 脑胶质瘤组织miR-9呈高表达,PPARγ呈低表达,二者呈明显负相关,且与脑胶质瘤病人生存率密切相关。     

姜黄素激活B淀粉样蛋白的产生：过氧化物酶增殖体激活受体-a激活徐径实现

背景：姜黄素能够降低阿尔茨海默病脑内淀粉样蛋白的生成,也能够抑制小胶质细胞的活性,但是具体的机制不清。 目的：本课题旨在研究姜黄素处理体外培养的神经细胞后BACE1、PPARγ 及Aβ40和Aβ42的变化,探讨其抑制β样淀粉蛋白作用的可能机制,为治疗AD提供新的方法的理论依据。 设计、时间等：本实验采用平行对照设计,并于2008年9月-2009年11月在重庆医科大学神经科学研究中心完成。 材料：人类神经母细胞瘤细胞株SHSY5Y来自重庆医科大学病理生理学教研室,质粒由加拿大哥伦比亚大学宋伟宏教授惠赠。药物姜黄素和GW9662购自Sigma公司。脂质体购自美国invitrogen公司。逆转录酶购自日本Takara。抗体 PPARγ (sc-7196) 和 BACE1(sc-10748)购自Santa Cruz公司。二抗来自北京中山金桥生物技术公司。PVDF膜和ECL发光试剂盒购自美国伯乐公司。 方法：通过LipofectaminTM 2000将质粒APPswe与BACE1-mychis瞬时共转染入SHSY5Y细胞。然后用姜黄素和GW9662分浓度组与时间组处理细胞 主要的测量方法：通过RT-PCR测定BACE1及PPARγ的mRNA水平。通过Western Blotting检测BACE1及PPARγ的蛋白表达。通过ELISA检测γ-分泌酶的主要水解产物Aβ40和Aβ42的水平变化。 结果：RT-PCR及Western Blotting结果显示转染细胞经姜黄素处理后BACE1的mRNA及蛋白表达水平显著减少,呈浓度和时间依赖性 (P<0.05);而经姜黄素处理后PPARγ的mRNA及蛋白表达水平增加,也呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。ELISA结果显示Aβ40和Aβ42的产生随处理浓度及时间的增加显著降低(P<0.05)。上述的作用均可以被GW9662抑制。 结论：姜黄素可显著抑制体外培养的神经元中Aβ40和Aβ42的产生,且该作用与其激活PPARγ和抑制BACE1密切相关。     

姜黄素激活B淀粉样蛋白的产生：过氧化物酶增殖体激活受体-a激活徐径实现

背景：姜黄素能够降低阿尔茨海默病脑内淀粉样蛋白的生成,也能够抑制小胶质细胞的活性,但是具体的机制不清。 目的：本课题旨在研究姜黄素处理体外培养的神经细胞后BACE1、PPARγ 及Aβ40和Aβ42的变化,探讨其抑制β样淀粉蛋白作用的可能机制,为治疗AD提供新的方法的理论依据。 设计、时间等：本实验采用平行对照设计,并于2008年9月-2009年11月在重庆医科大学神经科学研究中心完成。 材料：人类神经母细胞瘤细胞株SHSY5Y来自重庆医科大学病理生理学教研室,质粒由加拿大哥伦比亚大学宋伟宏教授惠赠。药物姜黄素和GW9662购自Sigma公司。脂质体购自美国invitrogen公司。逆转录酶购自日本Takara。抗体 PPARγ (sc-7196) 和 BACE1(sc-10748)购自Santa Cruz公司。二抗来自北京中山金桥生物技术公司。PVDF膜和ECL发光试剂盒购自美国伯乐公司。 方法：通过LipofectaminTM 2000将质粒APPswe与BACE1-mychis瞬时共转染入SHSY5Y细胞。然后用姜黄素和GW9662分浓度组与时间组处理细胞 主要的测量方法：通过RT-PCR测定BACE1及PPARγ的mRNA水平。通过Western Blotting检测BACE1及PPARγ的蛋白表达。通过ELISA检测γ-分泌酶的主要水解产物Aβ40和Aβ42的水平变化。 结果：RT-PCR及Western Blotting结果显示转染细胞经姜黄素处理后BACE1的mRNA及蛋白表达水平显著减少,呈浓度和时间依赖性 (P<0.05);而经姜黄素处理后PPARγ的mRNA及蛋白表达水平增加,也呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。ELISA结果显示Aβ40和Aβ42的产生随处理浓度及时间的增加显著降低(P<0.05)。上述的作用均可以被GW9662抑制。 结论：姜黄素可显著抑制体外培养的神经元中Aβ40和Aβ42的产生,且该作用与其激活PPARγ和抑制BACE1密切相关。     

肌纤维母细胞及在肿瘤间质中激活的纤维母细胞

背景：肌纤维母细胞从1971年被发现以来一直是一个充满争议的课题,近年的研究认识到,该细胞在肿瘤的发生、发展过程中可能起着重要作用。 目的：阐述肌纤维母细胞的生物学特征,以及肿瘤间质纤维母细胞在肿瘤的生长、侵袭方面的作用。 方法：由第一作者检索万方数据库及Pubmed数据库中1990-01/2010-01与肌纤维母细胞相关的文献,在标题和摘要中以“肌纤维母细胞;肿瘤;转化生长因子;侵袭性”或“myofibroblast;tumor;TGF-β;aggressiveness”为检索词进行检索。选择内容与肌纤维母细胞及肿瘤间质纤维母细胞相关的文章,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到116篇文献,根据纳入标准选择41篇文章进行综述。 结果与结论：肌纤维母细胞具有平滑肌和纤维母细胞的特征,肿瘤间质肌纤维母细胞是癌细胞衍生的细胞因子调控成纤维细胞转化而来,通过直接刺激癌细胞的增殖和生存来促进肿瘤生长,并通过水解细胞基质和刺激肿瘤细胞运动来发生侵袭。肌纤维母细胞的出现有助于肿瘤的早期诊断及探索肿瘤治疗的新途径。     

肾间质纤维化动物模型中整合素连接激酶及相关因子的表达

背景：在各种原因引起的进展性慢性肾脏病中,均可见到肾间质纤维化现象,其病变程度与慢性肾脏病的预后甚为密切,并可作为预测肾功能恶化的一个十分准确的指标。 目的：探讨整合素连接激酶、转化生长因子β1及α-平滑肌肌动蛋白与肾间质纤维化中的关系。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,2007-03/2008-01在新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室完成。 材料：成年雄性SD大鼠72只,体质量(200±12) g。 方法：72只大鼠随机分为假手术组、模型组和正常对照组,每组24只。模型组大鼠建立肾间质纤维化模型,术后1,3,7,14 d麻醉后处死各组大鼠,取梗阻侧肾做苏木精-伊红、PAS及Masson染色。 主要观察指标：以免疫组织化学方法检测整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达;反转录-聚合酶链反应检测整合素连接激酶的mRNA表达。 结果：整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1在正常肾组织中表达量极少,但随间质病变的加重,表达量明显增加,与正常组织比差异有非常显著性意义（P < 0.001）。 其与间质纤维化程度呈正相关（r=0.841,0.892,0.854,P < 0.001）,在间质中的表达量也成正相关。 结论: 整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1 随着间质病变程度的加重而明显增加,说明与肾间质纤维化的形成有密切关系。