少突胶质细胞对PC12细胞GAP-43表达的影响

目的 研究少突胶质细胞与神经元相互作用时神经元GAP－43的表达。方法 用分离培养的少突胶质细胞及其细胞碎片分别作用于培养的PC12细胞,于不同作用时相点在观察PC12细胞突起变化的同时检测PC12细胞内GAP－43mRNA的表达。结果 对照组PC12细胞GAP－43mRNA有较高的表达,在给予少突胶质细胞处理后早期,其表达水平即显著降低（P＜0．05）,一直到处理12h,其表达水平仍无明显的回复。结论 少突胶质细胞可能通过产生抑制性物质抑制神经元GAP－43的表达进而抑制中枢神经系统的损伤轴突的再生。     

少突胶质细胞与神经元相互作用时神经元细胞内钙离子浓度的变化

目的 研究少突胶质细胞与神经元相互作用时神经元细胞内钙离子浓度的变化。方法 用分离培养的少突胶质细胞及其细胞碎片分别作用于培养的PC12细胞,于小同时相点在观察PC12细胞突起变化,同时检测PC12细胞内钙离子浓度。结果 对照组有少量^45Ca通过细胞膜流入PC12细胞内,当少突胶质细胞及其细胞碎片加入后很快就出现细胞内钙显著增高,但在加入4h后,少突胶质细胞及其碎片处理后其细胞内钙较处理10min有显著下降,但即使在处理后12h仍与正常对照组有显著性差异（P＜0.05）。钙通道阻滞剂尼莫通对少突胶质细胞引起的细胞内钙增加无明显的抑制作用,且尼莫通亦不能阻止少突胶质细胞引起的PC12细胞突起回缩及塌陷。结论 少突胶质细胞作用于PC12细胞时引起的PC12细胞内钙离子浓度的增加可能与突起的塌陷有关。     

大鼠中枢神经系统大胶质细胞对神经元轴突生长影响的离体实验观察

目的:研究中枢神经系统两种大胶质细胞,星形胶质细胞及少突胶质细胞,对神经元轴突生长的影响.方法:取胚胎14 d大鼠大脑皮质进行神经元与胶质细胞联合与分离培养,并培养嗜铬细胞瘤(Pheochromocytoma,PC12)细胞.分别取两种胶质细胞培养上清液、胶质细胞及用蒸馏水破碎的两种胶质细胞碎片加入培养的PC12细胞中.结果:两种培养细胞上清液、星形细胞及其碎片的加入对PC12细胞均无明显影响,但当少突胶质细胞及其细胞碎片加入到PC12细胞后在10 min内即出现明显的突起萎陷及回缩.另外,在联合培养中,少突胶质细胞附近的神经元不见明显的突起生长,且偶有神经元突起在遇到星形胶质细胞时不能继续延长,但无回缩现象.结论:少突胶质细胞的膜上存在着抑制神经元轴突生长的物质,这种物质不分泌到细胞外,并不依赖于该细胞的存活状态,而星形胶质细胞对神经元的突起生长具有机械性阻挡作用.     

星形胶质细胞对PC12细胞的分化及突触素和生长相关蛋白43表达的影响

目的：体外观察星形胶质细胞对PC12细胞向神经元分化的作用，以及对PC12细胞突触素和生长相关蛋白43（GAP-43）表达的影响，探讨星形胶质细胞促进非神经元细胞形成神经突触的可能性。方法：采用PC12细胞与新生大鼠皮层组织来源的星形胶质细胞共同孵育，分为共育组和对照组，应用免疫荧光技术检测星形胶质细胞对PC12细胞分化、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、突触素和GAP-43表达的影响。结果：共育组培养4d，大部分PC12细胞已具备神经元形态，PC12有突细胞／总细胞数目比率、突起长度和突触数目明显高于对照组（P〈0．01）；NSE、突触素和GAP-43免疫荧光染色强阳性的PC12细胞明显增多，与对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）。结论：提示星形胶质细胞有助于促进非神经元细胞形成神经突触。     

谷氨酸转运体在体外培养大鼠皮质星形胶质细胞机械性损伤中的表达变化

【目的】研究机械性损伤后星形胶质细胞内谷氨酸转运体的表达变化，并探讨其在细胞损伤过程中可能的作用机理。【方法】采用免疫组化方法对培养的细胞进行鉴定，流式细胞术和Western Blotting定量谷氨酸转运体蛋白的表达改变。【结果】流式细胞术结果表明，机械性划伤12h和24h后，谷氨酸转运体（EAATl）蛋白表达均较对照组显著增加（P〈0．05），而损伤12h和24h组组间无显著差异（P〉0．05）；Western blotting显示，对照组、机械性划伤12h和24h组谷氨酸转运体（EAATl）蛋白表达吸光度（A）相对值为：0．21、0．44和0．46。与对照组比较，损伤后12h和24h星形胶质细胞EAATl的蛋白表达均明显升高（P〈0．05），损伤两组间表达无显著性差异（P〉0．05）。【结论】机械性损伤可导致星形胶质细胞内EAATl的表达明显升高，提示其可能在脑损伤的发生发展以及修复过程中起到了一定的作用。     

加味温胆汤对脑缺血再灌注损伤大鼠酪氨酸蛋白激酶2与信号转导子和转录激活子3蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的：探讨加味温胆汤对脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）与信号转导子和转录激活子3（STAT3）蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法选用健康雄性SD大鼠120只,随机分为4组,每组30只。正常对照组无任何干预;假手术组仅切开颈部皮肤,暴露左侧颈总动脉;脑缺血再灌注模型组、加味温胆汤治疗组均采用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型,然后分别给予蒸馏水灌胃和加味温胆汤灌胃。分别于缺血再灌注后3、12、24、48、72 h对各组大鼠进行神经功能ZeaLonga评分并检测脑组织 JAK2、STAT3蛋白表达及神经细胞凋亡情况。结果（1）正常对照组及假手术组大鼠无神经功能缺损表现;脑缺血再灌注模型组、加味温胆汤治疗组大鼠均出现神经功能缺损,ZeaLonga评分均高于正常对照组及假手术组（P＜0．05）。（2）与正常对照组、假手术组大鼠相比,各时间点脑缺血再灌注模型组、温胆汤加味治疗组大鼠磷酸化JAK2、磷酸化STAT3灰度值明显降低（P＜0．05）,缺血再灌注后24 h温胆汤加味治疗组磷酸化JAK2、磷酸化STAT3灰度值表达高于脑缺血再灌注模型组（P＜0．05）。（3）与正常对照组及假手术组大鼠比较,各时间点脑缺血再灌注模型组、加味温胆汤治疗组大鼠脑细胞凋亡率明显升高（P＜0．05）,而缺血再灌注后24 h加味温胆汤治疗组大鼠脑细胞凋亡率低于脑缺血再灌注模型组（P＜0．05）。结论脑缺血再灌注引发JAK2、STAT3通路激活加重神经细胞损伤和凋亡,加味温胆汤可通过抑制JAK 2S／TAT3通路活化减少神经细胞凋亡,从而减轻CIRI。     

米诺环素对PC12细胞缺氧缺糖损伤后神经突生长的影响

目的：探讨米诺环素对大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）缺氧缺糖（OGD）损伤后细胞存活率及神经突生长的影响。方法分别缺氧缺糖2、4、6h及8h建立PC12细胞OGD损伤模型,将细胞分为正常对照组,OGD组和不同浓度的（0．1、1．0μM和10．0μM）米诺环素治疗组,在缺氧缺糖／复氧24h后,用CCK‐8法检测细胞存活率,免疫荧光法标记MAP‐2并在荧光显微镜下观察神经突的生长,Westernblot法检测各组GAP‐43蛋白的表达水平。结果与OGD组比较,米诺环素能显著提OGD后PC12细胞的存活率［（46．1±2．9）％vs．（77．0±2．5）％,P＜0．01］,促进PC12细胞OGD损伤后神经突的生长,同时上调轴突再生蛋白GAP‐43的表达［（0．34±0．04）vs．（2．11±0．10）,P＜0．01］。结论米诺环素能减轻OGD损伤所致PC12细胞的死亡,并促进细胞神经突的生长。     

JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活致多巴胺能神经元变性

目的 探讨JAK2-STAT3途径与凝血酶诱导多巴胺能神经元变性作用的关系.方法 20 U/ml凝血酶或AG490(10 μmol/L)预处理 凝血酶(20 U/ml)处理原代培养的小胶质细胞或中脑腹侧混合培养体系,用Western blot检测小胶质细胞P-JAK1、P-JAK2、JAK2、STAT3、P-STAT3的表达;免疫荧光观察多巴胺能神经元的变性;Western blot、RT-PCR及激光共聚焦观察iNOS的表达.结果 凝血酶处理小胶质细胞2 h后诱导JAK2、STAT3的磷酸化,2 h和4 h分别增加小胶质细胞iNOS的转录和表达,并且24 h诱导中脑培养体系多巴胺能神经元变性.而AG490预处理显著地减少对应凝血酶处理组小胶质细胞JAK2和STAT3的磷酸化,抑制iNOS的表达,并且缓解多巴胺能神经元的变性.结论 JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活,导致多巴胺能神经元变性.     

缺氧对PC12细胞HIF-1/JAK2/NF-κB信号级联的影响

目的 研究缺氧对PC12细胞HIF-1/JAK2/NF-κB信号级联的影响.方法 制备缺氧细胞模型,采用EMSA、半定量RT-PCR技术和Western blot法检测JAK2、HIF-1α、HIF-1β基因mRNA和蛋白表达水平以及NF-κB活性.结果 PC12细胞JAK2、HIF-1α、HIF-1β mRNA和蛋白在缺氧后表达增强,6h达到高峰,显著高于正常对照组;PC12细胞核内NF-κB活性在缺氧后6h达到高峰,12h下降.加入JAK2抑制剂AG490后缺氧6h NF-κB活性明显降低.结论 缺氧能增强JAK2、HIF-1α、HIF-1β的表达.HIF-1能激活JAK2,对缺氧受损脑组织有保护作用.     

银杏内酯诱导的缺血耐受及相关机制探讨

目的 研究银杏内酯（Gin）预处理诱导PC12细胞对缺血的耐受及相关机制。方法将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12株细胞随机分成对照组、缺血9h组、缺血预处理（IP）1.5h＋缺血9h组和银杏内酯预处理＋缺血9h组,用噻唑蓝比色分析、细胞形态学观察、Western印迹法以及凝胶电泳迁移实验等方法比较银杏内酯预处理对PC12细胞缺血模型的影响。结果在PC12细胞缺血模型中,9h缺血可明显降低PC12细胞活力,细胞存活率为（49．3±2．8）％。而银杏内酯24h预处理能显著提高9h缺血细胞的存活率（65．9±2．8）％（P〈0．01）;细胞形态学显示银杏内酯预处理后再缺血处理9h,可明显减轻缺血9h所致的细胞损害,较多细胞保留突起,突起网络依然存在,胞体完好。与对照组比,银杏内酯预处理能明显增加缺氧诱导因子-1d（HIF-1d）蛋白表达（P〈0．01）;银杏内酯预处理诱导表达的HIF-1具有生物学活性,它能与DNA结合,并激活下游基因促红细胞生成素（EPO）蛋白表达（P〈0．01）。结论银杏内酯预处理可以诱导PC12细胞对缺血的耐受,其诱导耐受的作用可能与银杏内酯预处理诱导PC12细胞HIF-1α稳定表达、提高HIF-1与DNA结合活性以及增加其下游基因EPO蛋白表达有关。     

低剂量脂多糖诱导PC12细胞中Nrf2的表达及其抗ROS作用的实验研究

目的 研究低剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的PC12细胞中核因子E2相关因子2 (nuclear factor-erythroid 2-related factor-2 ,Nrf2)的表达及其抗活性氧(reactive oxygen species,ROS)的作用.方法 分别以浓度为0 ...     

低氧刺激复合培养的平滑肌细胞表达Janus激酶

目的：研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中Janus激酶（JAK）基因表达的作用。方法：鼠肺微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞复合培养，采用半定量RT－PCR技术检测常氧组、低氧2、6、12h组的JAK1、JAK2和JAK3基因的表达水平，并对PCR产物进行测序。结果：低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞中JAK1、JAK2、JAK3 mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，与正常组比较均有明显差别。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组。RT－PCR产物直接测序证实扩增产物片断与Genebank中相应序列相同。结论：低氧增强复合培养的肺动脉平滑肌细胞中JAK基因的表达，而JAK基因在低氧所致的肺动脉收缩和低氧肺动脉高压的信号转导中可能发挥重要作用。     

加味四逆散及拆方对肝星状细胞JAK2-STAT3信号通路的影响

目的:观察复方加味四逆散及拆方的药物血清对肝星状细胞(HSC-T6)JAK2-STAT3信号通路的影响。方法:用加味四逆散及拆方煎剂给正常Wistar大鼠灌胃7天,制备含药血清;培养肝星状细胞;用100ng/mL的瘦素刺激HSC-T6使其增殖;应用蛋白印迹试验检测各组药物血清对增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白的表达水平。结果:加味四逆散作用6h后,JAK2、STAT3蛋白的表达水平开始降低,且JAK2降低较为明显,24h STAT3降低最为明显。加味四逆散各拆方组作用12h后,STAT3蛋白水平降低,且存在差异。结论:(1)加味四逆散全方及拆方均有降低增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白的表达。(2)加味四逆散全方阻断JAK2-STAT3通路信号转导的作用显著优于拆方的效果,综合运用比拆方有更好疗效。     

人参多糖对人白血病细胞株K562细胞信号转导的调控

目的：研究人参多糖（GPS）对人红白血病细胞株（K562）信号转导的调控.方法：采用细胞体外培养技术,免疫细胞化学、Western Blot检测GPS诱导后K562细胞蛋白酪氨酸激酶JAK2、核因子NF-κBp65和信号传导及转录激活因子5（STAT5）的表达,免疫沉淀法检测GPS对K562细胞JAK2磷酸化的影响,RT-PCR技术检测GPS诱导后K562细胞c-myc,p53表达的变化.结果：免疫细胞化学和WesternBlot检测GPS诱导后K562细胞,JAK2蛋白表达明显增强,随着剂量的加大、时间的延长更加明显[（12.33±2.05）vs（88.18±13.57）];NF-κBp65[（79.48±9.56）vs（6.98±1.45）]和STAT5[（71.56±16.28）vs（10.23±2.16）]蛋白表达明显减弱;GPS（40mg/L）作用K562细胞6d后,加入GM-CSF继续刺激5～10min,JAK2酪氨酸磷酸化增强,而刺激20min后JAK2酪氨酸磷酸化明显减弱.GPS（40mg/L）诱导K562细胞3,6d后,c-myc mRNA明显减弱[（196±12）vs（136±11）],而p53mRNA无明显变化[（202±16）vs（181±16）].结论：GPS激活了酪氨酸蛋白激酶JAK2,促进其磷酸化,同时抑制STAT5,NF-κB信号转导途径,下调原癌基因c-myc表达,促进K562细胞凋亡与分化.     

肌苷对脑缺血再灌注后COX-2表达的调节作用

目的 研究肌苷对大鼠脑缺血再灌注后COX-2mRNA及其蛋白表达影响,探讨其神经保护作用机制。方法 应用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注动物模型,肌苷组缺血再灌注前腹腔注射肌苷（100mg/kg）,假手术组和对照组同步注射相同剂量生理盐水。原位杂交法和免疫组织化学法检测大鼠脑缺血再灌注后COX-2 mRNA及蛋白的表达。结果 对照组皮质和纹状体区COX-2 mRNA表达于脑缺血再灌注6h开始增强,12h达高峰,持续1～3d,然后逐渐降低,至14d仍高于再灌注2h水平,同一时间点皮质区高于纹状体区。肌苷组COX-2 mRNA表达于脑缺血再灌注2h～14d较对照组显著减低（t=5．50～11．66,P〈0．01）。对照组皮质和纹状体区COX-2蛋白表达的变化趋势与COX-2 mRNA相似,但其高峰出现在24h,较COX-2 mRNA略延迟,且持续时间短,至7d已降至再灌注2h水平,同一时间点皮质区高于纹状体区。肌苷组COX-2表达于脑缺血再灌注2h～14d较对照组显著减低（t=3．27～18．14,P〈0．01）。结论 肌苷对脑缺血的保护作用可能是通过下调COX-2 mRNA及蛋白表达而实现的。     

大鼠局灶-局灶缺血预处理后脑组织c-fos的表达及神经细胞凋亡测定

目的:探讨脑缺血预处理后脑组织原癌基因c-fos的表达及其对神经细胞凋亡的影响.方法:90只大鼠随机等分为假手术组(A组)、假预处理缺血组(B组)和预处理缺血组(C组)3组.采用Longa法建立局灶脑缺血(MCAO模型,短暂性脑缺血20 min作为预处理(PC,PC)后24 h给予永久性MCAO(PMCAO.各组大鼠均于第2次手术12 h(n=25)或24 h(n=5)后用红四氯氮唑(TTC)染色观察脑梗死的体积,采用流式细胞仪检测大鼠前脑皮质细胞凋亡率,采用原位杂交和免疫组织化学方法对脑缺血再灌注后前脑皮质c-fos mRNA和蛋白进行检测.结果:C组PMCAO后12 h、24 h脑梗死体积较B组减小(P＜0.05);C组前脑皮质c-fos mRNA的表达高于A、B组(P＜0.05或0.01,c-fos)蛋白的表达高于A组(P＜0.01、低于B组(P＜0.05), 而凋亡细胞百分率较B组下降(P＜0.01).结论:脑缺血预处理可诱导c-fos mRNA和蛋白的表达,并抑制缺血诱导的神经细胞凋亡.     

吗啡对PC12细胞嘌呤核苷酸代谢相关酶基因表达的影响

目的：研究吗啡对神经细胞模型PC12嘌呤核苷酸补救合成酶与分解代谢关键酶基因表达的影响。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测暴露于吗啡不同时间的PC12细胞次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）、腺苷激酶（AK）和腺苷脱氨酶（AD A）mRNA的表达水平。结果：与相应时段对照组相比，PC12细胞暴露于吗啡12及24 h时，HGPRT mRNA水平均明显增高(P<0.05)，作用48 h时HGPRT mRNA水平显著降低(P<0.05)，72 h后HGPRT mRNA水平再次升高(P<0.05)；吗啡处理的PC12细胞于12和24 h时，AK mRNA水平均明显降低(P<0.05)，作用48 h时AK mRNA水平升高(P<0.05)，72 h后AK mRNA水平恢复正常；ADA mRNA水平均表现为轻度降低，12 h差异有显著性(P<0.05)。结论：吗啡影响神经细胞嘌呤核 苷酸代谢，使细胞内腺苷酸及腺苷水平增高，这可能是吗啡依赖和耐受形成的机理之一 。