Bioactivation of Polycyclic Aromatic Hydrocarbon Carcinogens within the vascular Wall: Implications for Human Atherogenesis

Atherogenesis is a complex pathogenetic process involving a variety of structural and functional deficits within the arterial wall that culminate in the formation of fibrous atherosclerotic plaques. Cigarette smoking is potentially the most remediable contributor to cardiovascular mortality and morbidity. Among the 4000 plus chemicals present in tobacco and tobacco smoke, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) have been firmly implicated in the etiology of atherosclerosis in experimental model systems. However, the molecular mechanisms responsible for PAH-induced vascular injury are not well understood. In this review, we have focused on the mechanisms of bioactivation of PAHs in the vas-culature, and the possible role(s) of cytochrome P4501A and 1B enzymes in the formation of PAH-DNA adducts within the vessel wall, a phenomenon that may contribute to the development of atherosclerotic plaques in humans.     

HLA-G和IL-10在非小细胞肺癌组织中的表达

摘要 目的：探讨HLA-G和IL-10在非小细胞肺癌组织中的表达状况及与各因素的关系。方法：以经手术切除的38例非小细胞肺癌组织标本为病例组,12例正常肺组织为对照组,通过免疫组化的方法检测两组标本的HLA-G和IL-10蛋白的表达水平,并对两者进行相关分析。结果：38例非小细胞肺癌组织标本中有28例（74%）HLA-G表达阳性,有30例（79%）IL-10表达阳性。 HLA-G的表达水平与肺癌的TNM分期呈正相关（rs=0.443 , P<0.01 ）。IL-10的表达水平与各临床病理因素无关。正常肺组织中无HLA-G和IL-10的表达。28例HLA-G阳性的肺癌组织中有25例（93%）IL-10阳性,两者呈正相关（rs=0.424 , P<0.01）。结论：HLA-G和IL-10在肿瘤中相互作用形成了一个自分泌的恶性循环,而它破坏宿主的免疫功能最终使得肿瘤逃脱宿主免疫监视。     

携带凋亡素基因的重组腺病毒对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299凋亡的影响

目的:研究携带凋亡素基因VP3的重组腺病毒载体Adxsi-GFP-VP3对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299的凋亡的影响。方法:取对数生长期SK-MES-1、NCI-H1299细胞,各分为重组腺病毒(Adxsi-GFP-VP3)组、空病毒(Adxsi-GFP)组和细胞对照(磷酸盐缓冲液)组,依次记为A、B、C组。采用逆转录-聚合酶链反应和Western blot法检测A、B组细胞转染48、72 h的VP3 mRNA和Apoptin表达情况,透射电镜观察A组细胞转染72 h的超微结构变化。采用MTT法检测3组细胞转染24、48、72、96 h的细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞转染后24、48、72 h的凋亡率及细胞周期变化。结果:与B组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞转染48 h后有VP3 mRNA表达,转染72 h后有Apoptin表达。A组转染72 h后SK-MES-1、NCI-H1299细胞均出现细胞凋亡的超微结构改变。与B、C组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞增殖活性降低、细胞凋亡率增加,且与转染时间呈正相关;转染72 h S期的SK-MES-1、NCI-H1299细胞比例降低、G2/M期细胞比例增加。以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Adxsi-GFP-VP3能有效诱导SK-MES-1、NCI-H1299细胞凋亡。     

Developing Risk-Based Target Concentrations for Carcinogenic Polycyclic Aromatic Hydrocarbon Compounds Assuming Human Consumption of Aquatic Biota

As part of the remediation process at a former creosote-handling facility in Washington, target groundwater concentrations were developed as goals for the planned cleanup efforts. Considering state regulatory requirements and site-specific conditions, these concentrations were established to protect surface water in the lake adjacent to the site. These risk-based values were calculated assuming that chemicals will (1) be transported in groundwater, (2) discharge into the lake, and (3) be taken up by aquatic organisms that may be consumed by humans. Among the primary chemicals driving remediation decisions at this site are carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbon (cPAH) compounds, which have limited environmental mobility and are metabolized by many types of potentially edible aquatic organisms. This work included assessing the validity for cPAH compounds of the required default regulatory assumptions and deriving alternative risk-based concentrations. These analyses focused on factors that would modify the generic assumption regarding bioconcentration of cPAH compounds in aquatic biota and influence bioavailability of cPAH compounds to humans consuming the biota. Modifications based on these factors and the use of toxicity equivalency factors resulted in alternative risk-based concentrations for individual cPAH compounds that ranged from approximately 7 to 700 times greater than the default value of 0.03 w g/L.     

茵陈素对肺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :探讨茵陈素对肺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法 :应用光镜、四氮甲唑蓝 (MTT)方法和流式细胞术分析茵陈素对肺癌细胞形态学、生长和细胞周期的变化。结果 :茵陈素能抑制肺癌细胞的增殖 ,呈剂量依赖性 ,以160μg/ml抑制作用最明显 ,抑制率达52 4 %。80μg/ml时 ,S期和G2/M期细胞比例开始下降 ,细胞被阻滞于G0/G1 期 ,不能进入S期及G2/M期 ,增殖指数明显下降。结论 :茵陈素在体外对肺癌细胞具有抑制作用 ,通过抑制DNA合成 ,将细胞阻滞于G0/G1 期来抑制细胞增殖。     

Influence of Oxygen Partial Pressure on Human and Mouse Myeloid Cell Line Characteristics

Mouse and human cells have been reported to have different thiolcharacteristics (J. M. Messina and D. A. Lawrence, 1992, Int.J. Immunopharmacol. 14,1221–1234). In addition, when cellsare undergoing active growth, they usually have an increasedthiol content. In an attempt to determine whether a mouse anda human cell line with similar characteristics can be inducedto change their phenotype simply by being cultured at a loweroxygen partial pressure (pO₂), the human KG-1 and mouse M1 myeloidcell lines were cultured at 5 and 20% oxygen. It is importantto note that 5% O₂ is close to the physiological pO₂, whereasthe percentage of O₂ usually employed for most in vitro methodsis atmospheric pO₂. After long-term culturing at 5% (L celllines) versus 20% O₂ (H cell lines), the thiol content of theoriginal (H) cell lines significantly changed. The amount oftotal and surface thiols was lower in both L cell lines, butonly significantly different on the M1 lines, whereas the glutathionecontent was significantly lower in the L cell lines of KG-1and M1. The mouse lines showed the greatest sensitivity to pO₂changes; however, the mouse cell lines were not more sensitiveto hydrogen peroxide than the human cell lines even though theypossess significantly less total thiols and glutathione. Interestingly,cell lines maintained at lower pO₂ (physiological pO₂) weremore sensitive to hydrogen peroxide than their parental counterpartsthat were maintained at atmospheric oxygen levels.     

小细胞肺癌细胞系H446肿瘤细胞球培养方法的优化

目的:探讨优化体外培养小细胞肺癌细胞株H446肿瘤细胞球的方法。方法:利用干细胞无血清培养技术,观察H446细胞在下述不同培养条件下肿瘤细胞球的生长情况,并接种于超低吸附及非超低吸附培养板,调整细胞密度至1×104/mL、1×105/mL、1×106/mL和1×107/mL,采用针头吹打法和移液器吹打法将肿瘤细胞球制成单细胞悬液用以进一步传代。结果:(1)超低吸附培养板第2天形成明显肿瘤细胞球,非超低吸附培养板第10天出现肿瘤细胞球。(2)1×106/mL组每个高倍视野下约有7个肿瘤细胞球,每个细胞球约由几十个甚至上百个细胞组成。(3)针头吹打法传代后肿瘤细胞球活性和增殖能力明显优于移液器吹打法。结论:选择超低吸附培养板、1×106/mL密度接种和针头吹打法可有效分离肿瘤细胞球。     

杨梅酮对人肺腺癌A549细胞凋亡和细胞周期的影响

目的检测杨梅酮对体外人肺腺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期的影响。方法采用流式细胞仪分别检测各组的细胞早期凋亡率和细胞周期百分率。结果杨梅酮能显著增加A549细胞早期凋亡率和G0/G1期的细胞比例,并且细胞凋亡率与杨梅酮浓度具有较好的量效关系。结论杨梅酮能显著增加体外人肺腺癌细胞A549细胞早期凋亡率,并可使A549细胞周期阻滞在G0/G1期。     

Rad51蛋白在人肺鳞癌中的表达意义

目的:探讨DNA修复基因Rad51蛋白表达与肺鳞癌临床病理特征的关系.方法:采用二步法(非生物素)检测系统结合组织芯片技术检测60例肺鳞癌和15例癌旁肺组织中Rad51的蛋白表达.结果:在肺鳞癌组织中Rad51蛋白阳性表达率为33.33%(20/60),显著高于癌旁肺组织(P<0.05),但Rad51蛋白阳性表达率与肺...     

人类非小细胞肺癌血管生成研究

目的研究人类非小细胞肺癌中的血管生成。方法应用免疫组织化学(S-P法)检测了80例非小细胞肺癌组织标本和40例肺良性病变组织中CD34的表达水平,计算MVD值。结果①非小细胞肺癌组织中MVD值(41.90±7.33)显著大于肺良性病变组织(12.26±3.37)(P<0.05);②非小细胞肺癌组织中MVD值大小与肺癌组织学类型,是否有淋巴结转移及患者P-TNM分期存在相关性(P<0.05)。结论血管生成是非小细胞肺癌侵袭转移的分子基础。     

槲皮素对人肺腺癌NCI-H1395细胞凋亡的影响

目的:研究槲皮素对人肺腺癌NCI-H1395细胞凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测0~200μmol/L槲皮素作用12、24、48 h对NCI-H1395细胞增殖的影响;应用Hochest33258染色法和流式细胞仪检测0、20、50、100μmol/L槲皮素作用24 h对NCI-H1395细胞凋亡的影响;检测100μmol/L槲皮素对经半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)、Caspase-9、Caspase-3抑制剂处理后NCI-H1395细胞凋亡的影响。结果:槲皮素可抑制NCI-H1395细胞的增殖,且与浓度和时间呈正相关。20、50、100μmol/L槲皮素可诱导NCI-H1395细胞凋亡,凋亡率分别为(18.6±4.1)%、(39.1±4.5)%、(58.2±3.5)%。抑制Caspase-8、Caspase-3激活可明显降低槲皮素对细胞的抑制作用(P<0.05)。结论:槲皮素可抑制NCI-H1395细胞增殖,诱导其凋亡,其作用可能与凋亡外源通路Caspase-8和Caspase-3的激活有关。     

黄芩素联合紫杉醇对人肺癌细胞的生长抑制作用

目的 探讨黄芩素联合紫杉醇对人肺癌细胞株QG-56的影响。方法 以不同浓度的黄芩素、紫杉醇分别组成单药组和联合用药组,另设不加药的空白对照组,分别作用于QG-56细胞24,48,72和96 h,观察细胞数量和形态的变化,MTT法检测各组对QG-56细胞的增殖抑制作用,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率的改变。结果 不同浓度的各实验组作用后细胞数量明显减少、形态不规则,部分细胞核固缩和胞质减少,而对照组细胞生长状态良好。黄芩素、紫杉醇单用与联用均能抑制QG-56细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,联用组细胞抑制率较单药组明显增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。黄芩素、紫杉醇单用与联用均能诱导QG-56细胞凋亡,联合组更为明显（P〈0.05）。结论 黄芩素可显著抑制人肺癌细胞株QG-56细胞生长,并能有效增强紫杉醇对人肺癌QG-56细胞的增殖抑制作用;两者具有协同作用。     

L-氨基酸氧化酶对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨L-氨基酸氧化酶(LAAO)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,为临床上寻找新的肺癌治疗方法提供参考。方法:将A549细胞制成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,根据LAAO干预浓度的不同,将其分为4组:2.41、4.82、9.64、19.28mg·mL-1干预组,各组均干预24、48、72h。镜下观察各组细胞形态学改变,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,另设立阴性对照组进行比较。结果:LAAO对A549细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05),凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05)。结论:LAAO可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。     

二氢丹参酮对人肺癌GLC-82细胞的抑制作用及其机制研究

目的:研究二氢丹参酮(DTS)对人肺癌GLC-82细胞的抑制作用及其作用机制。方法:以质量浓度为0(空白对照)、5、10、20、40、80、100μg/ml的DTS作用细胞24、48 h后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测17.85μg/ml DTS作用12、24、48 h后细胞的凋亡情况,计算凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,DTS组细胞的增殖受到抑制,作用24、48 h后最大细胞抑制率分别为54.48%、64.95%,IC50分别为62.36、33.94μg/ml;DTS可诱导细胞的凋亡且与作用时间呈正相关,凋亡率为5.6%~29.6%;Western blot检测结果表明,DTS能下调细胞中Bcl-2蛋白的表达、上调Caspase-3蛋白的表达(P<0.01或P<0.05)。结论:DTS对人肺腺癌GLC-82细胞有较强的抑制作用,并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达、上调Caspase-3蛋白的表达有关。     

川芎嗪对依托泊苷诱导小细胞肺癌细胞凋亡增敏作用的评判

目的:观察低浓度(10μg/ml)的中药钙拮抗剂川芎提取物川芎嗪(tetrame thylpyrazine,TMP)与化疗药物依托泊苷(etoposide,VP-16)合用对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞的影响。方法:用MTT法观察药物对体外培养的人小细胞肺癌H446细胞存活率的影响;用吖啶橙/溴乙啶双荧光染色法检测凋亡细胞,采用流式细胞术分析药物对H446细胞周期的影响。结果:TMP和VP-16合用与单用VP-16相比细胞存活率明显下降,VP-16的浓度在0.1、1、10、100μg/ml时,细胞存活率分别为(93.85±2.51)%、(91.90±2.10)%、(66.64±3.73)%和(8.21±1.84)%。VP-16与低浓度的TMP联用后,上述浓度细胞存活率分别降为(90.80±1.20)%、(78.96±1.94)%、(51.48±2.52)%和(2.56±1.44)%,其合并指数为0.85,增效倍数为4.32。双荧光染色法证实TMP可增强VP-16的凋亡诱导作用;细胞周期分析表明低浓度TMP对细胞周期无明显影响,VP-16半数抑制浓度使细胞生长停滞在S期,抑制细胞有丝分裂及DNA合成,两者合用主要表现为VP-16的作用。结论:低浓度的TMP与VP-16合用可增加对小细胞肺癌细胞的诱导凋亡作用。     

紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用48h后的细胞周期和凋亡率;Western Blot检测的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制A549细胞增殖呈时效和量效关系;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后可见凋亡细胞;紫杉醇作用48h后药物组G2～M期细胞百分比均高于对照组(均P<0.01),药物组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01),且凋亡率随药物浓度增加而增加;Western Blot显示,不同浓度紫杉醇作用于A549细胞48h,Bax的表达随药物浓度增加而增加,Bcl-2的表达随药物浓度增加而减低。结论:紫杉醇能抑制肺腺癌A549细胞株的增殖,其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G2～M期和通过上调Bax、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的,并且紫杉醇抑制A549细胞增殖和诱导凋亡作用随药物浓度增加而增加。     

环氧化酶-2抑制药对肺癌细胞和骨肉瘤细胞生长的抑制作用

目的观察选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制药塞来昔布、罗非昔布对人骨肉瘤细胞株（HOS-8603）、肺癌细胞株（A-549）的作用以及罗非昔布、塞来昔布对两种细胞抑制效应的比较。方法MTT法测定体外培养的细胞株HOS-8603、A-549对不同浓度的罗非昔布和塞来昔布的敏感性，流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响及凋亡。结果塞来昔布、罗非昔布均可明显抑制HOS 8603、A-549细胞的生长（P＜0.05），抑制效应呈现浓度依赖型和时间依赖型。HOS-8603和A-549细胞分裂阻滞在G2/M期，出现凋亡峰，塞来昔布对HOS 8603的作用强于罗非昔布。结论COX-2抑制药塞来昔布尼罗非昔布对骨肉瘤细胞、肺癌细胞的生长有抑制作用，有望成为抗肿瘤新药。     

非小细胞肺癌中AKT活化及与抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2表达的关系

目的：探讨AKT的功能活化状态P-AKT及抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及相关性。方法I应用免疫组化的方法，检测80例NSCLC组织及35例非肿瘤性肺组织标本中p-AKT、Survivin、Bcl-2的表达，并与临床病理因素进行相关性分析。结果：p-AKT、Survivin、Bcl-2在NSCLC中高表达，阳性率分别为78．8％、61．3％、50．0％，显著高于在非肿瘤性肺组织中阳性表达0、0、11．4％（P〈0．05）。p-AKT、Bcl-2在不同年龄、性别、TNM分期、组织分化组以及有无淋巴结转移组均高表达，组间对比差异无统计学意义（P〉0．05）。Survivin表达与TNM分期、组织的分化程度有关（P〈0．05）。P-AKT阳性表达与Survivin、Bcl-2呈正相关；Survivin与Bcl-2二者也呈正相关。结论：在NSCLC中存在AKT的活化，Survivin、Bcl-2的高表达可能与AKT的活化有关。在NSCLC中可能存在p-AKT对Survivin、Bcl-2的正向调控。     

Human MCAF Gene Transfer Enhances the Metastatic Capacity of a Mouse Cachectic Adenocarcinoma Cell Line in Vivo

Purpose. To evaluate the effect of monocyte chemotactic and activating factor (MCAF/MCP-1/JE) on tumor progression and metastasis. Methods. Cachexia-inducing adenocarcinoma cells (cell line colon 26, clone 20) were transfected with either a control plasmid or MCAF expression vector. Spontaneous lung metastases were determined in mouse. Results. The production of MCAF reached 0.4 ng/ml in vitro when transfectant cells were cultured at a cell density of 5 × 10⁴ cells/ml for 3 days. Transfection of MCAF expression vector did not affect the growth rate in vitro. Also, after MCAF-transfection, the size of tumors after intra-footpad inoculation was similar to that of the parental cells. When the primary tumors were resected on the 10th day after inoculation, the incidence of spontaneous lung metastasis was less than 20% in both cells. The number of endothelial cells in the primary tumor rapidly increased from the 10th to the 14th day after inoculation, as revealed by immunohistochemical staining. In accordance with enhanced angiogenesis, the incidence rates of spontaneous metastasis increased when the primary tumors were resected on the 14th day after inoculation. Moreover, the spontaneous lung metastases were augmented in the animals injected with MCAF-transfectants compared to those injected with parental cells with a concomitant increase of angiogenesis. Conclusions. These results suggest that MCAF may augment the metastatic potential by modulating tumor associated angiogenesis.     

粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响

目的:研究粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响。方法:采用细胞黏附试验观察粉防己碱对A549细胞黏附作用的影响;通过细胞迁移试验检测粉防己碱对A549细胞迁移能力的影响;通过血管生成拟态试验观察粉防己碱对A549细胞体外类血管生成的作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测粉防己碱对A549细胞血管生成拟态相关基因表达的影响。结果:5、10、20μmol/L粉防己碱作用A549细胞30 min后,细胞的黏附作用受到抑制,并与浓度呈正相关;与对照比较,5、10、20μmol/L粉防己碱处理A549细胞12、24 h后,A549细胞迁移数减少,A549细胞管腔形成数明显减少,管腔长度明显缩短;A549细胞以粉防己碱处理后,血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达减弱。结论:粉防己碱可抑制A549细胞黏附、细胞迁移和血管生成拟态,其机制可能与抑制血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达有关。