三七总皂苷干预股骨头缺血性坏死兔成骨细胞护骨素基因的表达

背景：前期研究已明确三七总皂苷能抑制乙醇诱导的兔骨髓基质干细胞成脂分化。目的：进一步观察三七总皂苷对兔成骨细胞的增殖和分化以及骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响。方法：白酒灌胃4周制备新西兰兔股骨头缺血坏死模型,随机分为生理盐水组、复方骨肽组和三七总皂苷组。通过组织块培养法提取各组兔成骨细胞,检测细胞的分化,骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体基因表达情况,检测各目的基因杂交信号的强弱。结果与结论：三七总皂苷组兔碱性磷酸酶活性、钙结节计数及骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体的表达强度、骨保护素mRNA/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA均高于生理盐水组（P〈0.01）;与复方骨肽组效果接近。证实三七总皂苷能够促进兔成骨细胞的增殖和分化,并能提高成骨细胞的骨保护素mRNA的相对表达量而对其细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA有抑制作用。     

三七总皂苷干预股骨头缺血性坏死兔成骨细胞护骨素基因的表达

背景:前期研究已明确三七总皂苷能抑制乙醇诱导的兔骨髓基质干细胞成脂分化。目的:进一步观察三七总皂苷对兔成骨细胞的增殖和分化以及骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响。方法:白酒灌胃4周制备新西兰兔股骨头缺血坏死模型,随机分为生理盐水组、复方骨肽组和三七总皂苷组。通过组织块培养法提取各组兔成骨细胞,检测细胞的分化,骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体基因表达情况,检测各目的基因杂交信号的强弱。结果与结论:三七总皂苷组兔碱性磷酸酶活性、钙结节计数及骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体的表达强度、骨保护素mRNA/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA均高于生理盐水组(P<0.01);与复方骨肽组效果接近。证实三七总皂苷能够促进兔成骨细胞的增殖和分化,并能提高成骨细胞的骨保护素mRNA的相对表达量而对其细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA有抑制作用。     

三七总皂苷干预酒精性股骨头缺血坏死模型兔的超微结构

背景：前期研究已明确三七总皂苷能抑制乙醇诱导的兔骨髓基质干细胞成脂分化,证实三七总皂苷能够促进兔成骨细胞的增殖和分化,并能提高成骨细胞的骨保护素 mRNA 的相对表达量而对其细胞核因子 kB 受体活化因子配体 mRNA 有抑制作用。 目的：进一步观察三七总皂苷对兔酒精性股骨头缺血坏死超微结构的影响。 方法：白酒灌胃6周制备新西兰兔股骨头酒精性缺血坏死模型,造模成功的模型兔分别于股骨头局部注射生理盐水、复方骨肽及三七总皂苷,注射量为0.1 mL/kg,每周给药1次,连续治疗4周,通过透射电镜观察各组超微结构变化。 结果与结论：透射电镜显示,酒精性缺血坏死骨细胞线粒体肿胀,嵴结构模糊,粗面内质网上多聚核糖体脱颗粒,骨细胞内可见脂滴出现。与生理盐水组相比,三七总皂苷组骨细胞线粒体肿胀消退,可见到嵴结构,粗面内质网上多聚核糖体增多,脂滴数量明显减少。复方骨肽组超微结构形态改变与三七总皂苷组相似。三七组和复方骨肽组骨细胞超微结构形态变化明显好于生理盐水组（P〈0.05）。实验证实三七总皂苷可有效促进早期兔酒精性股骨头缺血性坏死骨细胞超微结构的修复。     

黄芪三仙汤干预成骨细胞护骨素及护骨素配体的表达

背景：长期临床研究表明黄芪三仙汤对骨质疏松症有一定的治疗作用,基础实验研究也表明黄芪三仙汤能改善实验动物的生物力学指标。在此基础上实验拟从细胞分子水平上探讨黄芪三仙汤对成骨细胞的相关作用。目的：观察黄芪三仙汤对体外培养成骨细胞护骨素、护骨素配体基因调节的作用,探讨黄芪三仙汤治疗骨质疏松的作用机制。方法：制备黄芪三仙汤和仙灵骨葆胶囊含药血清及空白血清,对体外培养新生SD大鼠成骨细胞进行干预,应用细胞形态观察、MTT、Westernblot分析法及蛋白浓度测定法,观察各含药血清对体外培养成骨细胞的增殖及成骨细胞护骨素、护骨素配体表达的影响。结果与结论：经药物干预后成骨细胞变为长梭形、条索状,融合成片,分界较为模糊,细胞生长较密集。黄芪三仙汤可明显促进成骨细胞护骨素蛋白浓度的提高（P〈0．01）,同时也提高了护骨素配体蛋白浓度（P〈0．01）,而护骨素,护骨素配体浓度比例水平明显升高（P〈0．01）。结果可见黄芪三仙汤可能是通过调节成骨细胞分化调控因子护骨素、护骨素配体的表达来调节成骨细胞的增长,从而实现其对骨质疏松症的治疗作用。     

纯钛表面阳极氧化增强成骨细胞生物活性及护骨素基因的表达

背景：纯钛阳极氧化改性后形成的纳米结构与骨组织具有良好的生物相容性。目的：观察纯钛表面纳米孔结构的形貌和物相构成,以及其对MC3T3-E1小鼠前成骨细胞增殖、黏附等生物学行为和促成骨基因护骨素表达的影响。方法：取纯钛片24份,其中12份仅进行机械抛光,作为对照组;另外12份进行机械抛光后,应用阳极氧化技术在纯钛表面制备纳米孔结构,作为实验组。将小鼠前成骨细胞MC3T3-E1分别接种于两组试件表面,接种7 d后扫描电镜下观察细胞形态,采用MTT法检测细胞增殖情况,绘制生长曲线;同时检测细胞促成骨基因护骨素的表达。结果与结论：阳极氧化后钛片表面形成规格统一的纳米孔结构,但是物相构成并未发生变化。与接种于对照组试件上的成骨细胞相比,实验组试件表面的细胞密度变大,覆盖金属的面积更多,呈现多边形结构,突触向周围移行,可见板状伪足向周围材料伸出;接种第7天时,实验组细胞数目约为对照组的1.4倍,同时纳米孔表面成骨细胞护骨素基因的表达高于对照组（P〈0.01）。结果表明阳极氧化后形成纳米孔结构的钛片更有利于成骨细胞的黏附、增殖和护骨素基因的表达,进而促进成骨细胞生长,具有良好的生物相容性。     

骨形态发生蛋白在股骨头缺血性坏死区的表达

目的:分析骨形态发生蛋白与股骨头缺血性坏死的关系,观察其在缺血性坏死区的表达。方法:实验于2003-01/2004-01在桂林医学院附属医院骨科完成。对20例股骨头缺血性坏死患者的股骨头进行取材,取材点分为A、B、C区。A区:股骨头缺血性坏死区中心;B区:股骨头缺血性坏死区边缘;C区:股骨头正常骨质区。并对标本区域进行组织学检查和免疫组织化学检查。结果:组织学检查A区为无序排列的坏死组织及死骨;B区主要以新生的小血管和部分新生骨为主;C区为排列有序的板层骨。免疫组织化学检查A区骨形态发生蛋白无阳性染色;B区血管内皮细胞骨形态发生蛋白染色阴性,邻近部分成骨细胞及少许软骨细胞出现细胞核黄染的阳性表现;C区正常骨细胞的细胞核骨形态发生蛋白染色基本为阴性。结论:在股骨头缺血性坏死的病理过程中,缺血因素存在及骨形态发生蛋白相对缺乏,导致股骨头逐渐坏死,新骨修复缓慢。     

骨形态发生蛋白在股骨头缺血性坏死区的表达

目的：分析骨形态发生蛋白与股骨头缺血性坏死的关系，观察其在缺血性坏死区的表达。 方法：实验于2003-01／2004-0l在桂林医学院附属医院骨科完成。对20例股骨头缺血性坏死患者的股骨头进行取材，取材点分为A、B、C区。A区：股骨头缺血性坏死区中心；B区：股骨头缺血性坏死区边缘；C区：股骨头正常骨质区。并对标本区域进行组织学检查和免疫组织化学检查。 结果：组织学检查A区为无序排列的坏死组织及死骨；B区主要以新生的小血管和部分新生骨为主；C区为排列有序的板层骨。免疫组织化学检查A区骨形态发生蛋白无阳性染色；B区血管内皮细胞骨形态发生蛋白染色阴性，邻近部分成骨细胞及少许软骨细胞出现细胞核黄染的阳性表现；C区正常骨细胞的细胞核骨形态发生蛋白染色基本为阴性。 结论：在股骨头缺血性坏死的病理过程中，缺血因素存在及骨形态发生蛋白相对缺乏，导致股骨头逐渐坏死，新骨修复缓慢。     

高压氧对兔早期激素性股骨头缺血性坏死骨修复的影响

目的：建立激素性股骨头缺血性坏死（SANFH）动物模型，然后采用高压氧（HBO）治疗，探讨HBO治疗早期SANFH的病理变化及作用机制。方法：健康成年日本大耳白兔60只，随机分为模型组（n=42）与对照组（n=18）,造模成功后，再将模型组分为HBO组（n=16）及其对照组（n=16）。观察模型组、HBO组及其各自对照组X线、MRI、光镜、透射电镜的变化。结果：①模型组第6周股骨头软骨下区骨小梁稀疏、变细，甚至骨小梁断裂，死骨形成。部分关节软骨区域性坏死。髓腔内造血组织减少，肥大脂肪细胞增多，后期脂肪细胞液化坏死,基质水肿出血。透射电镜观察到骨细胞坏死及成骨细胞凋亡现象。②HBO组第4—6周时不同程度的造血功能恢复,肥大脂肪细胞数目逐渐减少,部分骨小梁周围出现少量梭形或成排的成骨细胞,髓腔内纤维组织增生,在部分坏死的关节软骨下区髓腔内见活跃的纤维组织及成骨细胞增生：第8周时坏死骨小梁周围出现多核破骨细胞及较肥胖的成骨细胞。造血细胞增生明显、肥大脂肪细胞明显减少。透射电镜观察到成骨细胞、骨细胞、胶原纤维再生、修复的证据。结论：HBO治疗对早期SANFH有明显的骨修复作用。     

三七总皂苷、三七三醇皂苷治疗缺血性脑卒中的研究进展

缺血性脑卒中是常见的神经系统疾病,具有发病率高、死亡率高、致残率高等特点,因此缺血性脑卒中的防治成为社会和医学界关注的重要课题。现代医学研究认为脑缺血再灌注损伤是大多数缺血性脑血管疾病的主要病理生理过程。近年来,随着三七在临床的广泛应用,其抗缺血性脑损伤的作用引起了研究者的关注。     

高能震波对兔缺血性坏死股骨头血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察高能震波对缺血性坏死股骨头血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨高能震波治疗股骨头缺血性坏死的作用机制。方法:健康雄性新西兰白兔32只,3.0-4.0kg,平均3.1kg。联合应用甲基强的松龙和内毒素6周诱发双侧早期股骨头缺血性坏死的动物模型。所有实验兔左后腿作为治疗侧,采用能流密度0.26mJ/mm2,频率1Hz,冲击量为2000次的高能震波治疗,右后腿作为对照侧,不予治疗。分别于治疗后第1、2、4、8、12周各取6只动物处死,取股骨头标本行实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组化染色,检测VEGF的表达。结果:高能震波治疗显著增加了兔股骨头骨组织中VEGF mRNA的表达,治疗侧股骨头VEGF mRNA的表达在治疗后第1、2、4和8周显著高于对照侧,在治疗后第2周VEGF mRNA的表达最高。高能震波治疗后第4、8和12周,治疗侧股骨头VEGF平均染色面积百分比显著高于对照侧(P0.01,P0.01和P0.01)。高能震波治疗后第2、4、8和12周,治疗侧股骨头VEGF平均吸光度显著高于对照侧(P0.01,P0.01,P0.01和P0.01)。结论:高能震波治疗能有效促进缺血性坏死股骨头VEGF的表达,可能有助于增加股骨头的血管生成,加速股骨头坏死的修复。     

雌二醇与孕激素对人成骨细胞护骨素基因作用的比较

目的:研究比较17β-雌二醇(17β-E2)与孕激素对人成骨细胞护骨素(Osteoprotegerin,OPG)基因表达的调控作用。方法:人成骨细胞用17β-E2与孕酮(Progesterone,P)干预,采用Northern杂交检测OPGmR NA表达及ELISA检测OPG蛋白质表达。结果:17β-E2干预12～48h可促进人成骨细胞OPGmRNA表达,并呈剂量依赖性(P<0.05)。17β-E2促进人成骨细胞OPG蛋白质分泌也呈剂量依赖性(10-10ME2组为1.27±0.26ng/ml,10-9ME2组为2.34±0.35ng/ml,10-8ME2组为3.62±0.23ng/ml,与对照组0.64±0.14ng/ml相比,P<0.01)。其中,10-8M17β-E2干预12～48h促进OPG蛋白质分泌(12h组为1.30±0.30ng/ml,24h组为3.07±0.14ng/ml,48h组为3.50±0.33ng/ml,与对照组0.62±0.12ng/ml相比,P<0.01)。10-10～10-8M的P干预12～48h对成骨细胞OPGmRNA和蛋白质表达无影响(P>0.05)。结论:17β-E2促进人成骨细胞OPG基因表达,P对其无影响,表明雌激素与孕激素对骨代谢有不同的调节机理。     

雌二醇与孕激素对人成骨细胞护骨素基因作用的比较

背景: 护骨素是一种由成骨细胞表达的蛋白, 可抑制破骨细胞分化和活化。目的: 观察比较 17 β- 雌二醇与孕激素对人成骨细胞护骨素基因表达的调控作用。设计: 对比观察。单位: 中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所。材料: Ⅳ型胶原酶( Sigma 公司), 胎牛血清(Gibico 公司), MEM(Sigma公司), 骨钙素放射免疫法测定试剂盒(Dia2Sorin 公司)。方法: 实验于 2003- 01/2006- 03 在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所完成。采用正常人髂前上棘松质骨进行成骨细胞的提取和培养, 人成骨细胞用 17β- 雌二醇与孕酮干预, 采用 Northern 杂交检测护骨素mRNA 表达及酶联免疫吸附法检测护骨素蛋白质表达。主要观察指标: ①人成骨细胞鉴定。②Northern 杂交分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素 mRNA 表达的影响。③酶联免疫吸附分析17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素蛋白质分泌的影响。结果: ①人成骨细胞鉴定: 人成骨细胞分泌的碱性磷酸酶活性为(74.3±4.7) U/g; 培养上清液中骨钙素浓度为(3.84±0.39) μg/L。表明分离培养的人成骨细胞具有成骨细胞的特性。②Northern 杂交分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素 mRNA 表达的影响: 人成骨细胞对照组护骨素 mRNA 表达条带弱, 与对照组相比, 1×10-10, 1×10-9, 1×10-8 mol/L17β- 雌二醇干预组护骨素 mRNA 表达条带逐渐增强; 与 0 h 相比, 干预12, 24 及 48 h 护骨素 mRNA 表达逐渐增强; 孕酮对人成骨细胞护骨素mRNA表达无影响。③酶联免疫吸附分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素蛋白质分泌的影响: 与对照组比较, 1×10 -10, 1×10-9, 1×10-8 mol/L雌二醇组护骨素蛋白质分泌增加[(0.64 ±0.14), (1.27±0.26), (2.34±0.35),(3.62 ±0.23) μg/ L, P < 0.01]。与对照组相比, 1×10-8 mol/L 17β- 雌二醇干预 12, 24, 48 h, 护骨素蛋白质分泌增加[(0.62±0.12)比(1.30±0.30),(3.07±0.14), (3.50±0.33) μg/L, P < 0.01]。1×(10-10～10-8) mol/L 孕酮干预 12～48 h 对成骨细胞护骨素蛋白质表达无影响(P > 0.05)。结论:17β- 雌二醇促进人成骨细胞护骨素基因表达, 孕酮对其无影响,表明雌激素与孕激素对骨代谢有不同的调节机制。     

三相骨显像诊断股骨头缺血性坏死的探讨

股骨头缺血性坏死是东北地区常见病，发病率较高，笔者探讨了^99mTc-MDP三相骨显像对股骨头缺血性坏死的诊断价值，现将结果报告如下。     

股骨头骨缺血性坏死的影像学诊断和介入治疗

目的；阐述影像学对股骨头骨缺血性坏死早期诊断的意义和介入治疗的临床价值。材料和方法：８例经Ｘ线平片、ＣＴ和务管造影诊断；以扩血管、抗凝、溶栓等为原则行靶血管介入治疗。结果：全组临床症状即刻消失者６例，中７５％，显效者２５％。随 年无一复发。结论：ＣＴ中发现骨缺血性坏死的早期改变，且可作疗铲追随是的方法，介入治疗不失为一种安全、快速２、有效的手段。     

青壮年股骨头缺血性坏死早期护理干预现状

股骨头缺血性坏死（osteonecrosis of the femorai head,ONFH）是骨科领域中至今尚未解决的疑难问题之一,近年来由于道路交通的迅猛发展、激素药物的滥用、生活及饮食习惯的改变,ONFH的患病率呈上升趋势,年龄日趋年轻化,平均年龄为38岁[1].目前人工髋关节置换术虽然能在最快的时间内缓解患者的症状,但由于人工关节使用寿命的缺陷成为青壮年患者面临的问题.为了达到治愈或阻止延缓病情发展,最终避免或推迟行人工关节置换时间的目的,国内外学者对ONFH在病因及护理干预方面做了研究报道,现综述如下.     

唑来膦酸对大鼠成骨细胞护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA表达的影响

背景：唑来膦酸属于第3代双瞵酸盐类药物,在临床上被广泛应用于治疗骨吸收增加类疾病,其对破骨细胞的作用及影响已取得了共识,而对于成骨细胞的影响尚有争议。目的：观察唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA表达的影响。方法：体外培养新生24h内SD大鼠颅盖骨来源的成骨细胞,用10-5～10-9mol/L唑来膦酸进行干预,分别于干预后第3,5,7天采用MTT法来测吸光度值,以检测唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖的影响;硝基苯基质动力学法和RT-PCR在干预后72h,测量细胞碱性磷酸酶活性和护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果与结论：较高浓度（10-5mol/L）的唑来膦酸明显抑制成骨细胞增殖,10-7～10-9mol/L唑来膦酸不影响成骨细胞的分化。10-5～10-9mol/L唑来膦酸能使成骨细胞护骨素mRNA表达增加,肿瘤坏死因子αmRNA表达下降。说明唑来膦酸在低浓度时不影响成骨细胞的增殖及分化,其可通过调节成骨细胞护骨素、肿瘤坏死因子αmRNA的表达,来发挥其抗骨吸收的作用。     

唑来膦酸对大鼠成骨细胞护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA表达的影响

背景:唑来膦酸属于第3代双瞵酸盐类药物,在临床上被广泛应用于治疗骨吸收增加类疾病,其对破骨细胞的作用及影响已取得了共识,而对于成骨细胞的影响尚有争议。目的:观察唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA表达的影响。方法:体外培养新生24h内SD大鼠颅盖骨来源的成骨细胞,用10-5～10-9mol/L唑来膦酸进行干预,分别于干预后第3,5,7天采用MTT法来测吸光度值,以检测唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖的影响;硝基苯基质动力学法和RT-PCR在干预后72h,测量细胞碱性磷酸酶活性和护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果与结论:较高浓度(10-5mol/L)的唑来膦酸明显抑制成骨细胞增殖,10-7～10-9mol/L唑来膦酸不影响成骨细胞的分化。10-5～10-9mol/L唑来膦酸能使成骨细胞护骨素mRNA表达增加,肿瘤坏死因子αmRNA表达下降。说明唑来膦酸在低浓度时不影响成骨细胞的增殖及分化,其可通过调节成骨细胞护骨素、肿瘤坏死因子αmRNA的表达,来发挥其抗骨吸收的作用。     

骨内注射无水乙醇建立兔股骨头坏死模型

背景:目前还难以建立合适的早期股骨头坏死的动物模型。目的:建立一个简单、标准和可靠的股骨头坏死动物模型用于实验研究。方法:X射线透视下将新西兰兔右侧股骨头中心钻孔并注入无水乙醇,左侧不做处理做对照。经过2,4和6周麻醉下处死动物获取股骨头。结果与结论:大体及X射线观察显示,造模侧股骨头第2周关节软骨颜色变暗、骨质密度不均匀;第6周,关节面有轻微凹陷,骨质低密度影较前进一步增大。MRI显示,造模侧股骨头第2周,T1加权股骨头负重区显示线样或不规则低信号,T2加权呈高信号;第6周,股骨头变性,软骨下骨折,关节面塌陷,新月体形成。对照侧第2,4,6周股骨头结果均常。组织病理学观察显示,造模侧股骨头第2周后,骨细胞核固缩、变性坏死。结果证实,2周后兔股骨头均发生了部分坏死,股骨头坏死的完整的外观形态,大体循环和关节软骨与人类早期股骨头坏死是相似的,提示实验建立了良好的股骨头坏死动物模型。     

骨内注射无水乙醇建立兔股骨头坏死模型

背景：目前还难以建立合适的早期股骨头坏死的动物模型。目的：建立一个简单、标准和可靠的股骨头坏死动物模型用于实验研究。方法：X射线透视下将新西兰兔右侧股骨头中心钻孔并注入无水乙醇,左侧不做处理做对照。经过2,4和6周麻醉下处死动物获取股骨头。结果与结论：大体及X射线观察显示,造模侧股骨头第2周关节软骨颜色变暗、骨质密度不均匀;第6周,关节面有轻微凹陷,骨质低密度影较前进一步增大。MRI显示,造模侧股骨头第2周,T1加权股骨头负重区显示线样或不规则低信号,T2加权呈高信号;第6周,股骨头变性,软骨下骨折,关节面塌陷,新月体形成。对照侧第2,4,6周股骨头结果均常。组织病理学观察显示,造模侧股骨头第2周后,骨细胞核固缩、变性坏死。结果证实,2周后兔股骨头均发生了部分坏死,股骨头坏死的完整的外观形态,大体循环和关节软骨与人类早期股骨头坏死是相似的,提示实验建立了良好的股骨头坏死动物模型。