建立小型猪Ⅱ度根分叉缺损模型的可行性

背景：牙槽骨缺损再生的前提是建立可有效评价牙周骨组织再生的实验性牙槽骨缺损动物模型,以往研究用于观察牙周组织病变的模型动物多选用狗,但操作难度大。目的：观察利用小型猪建立Ⅱ度根分叉缺损动物模型的可行性。方法：制备小型猪Ⅱ度根分叉缺损模型。将小型猪实验牙随机分为2组,模型组造模后不注射任何药物干预,对照组于造模后注射具有成骨作用的辛伐他汀凝胶。结果与结论：建模8周后大体、病理切片观察结果均显示模型组根分叉区空虚,对照组见新生牙槽骨长入。对照组可见较成熟的纤维组织以及增生的血管、大量成骨细胞、骨细胞,而模型组可见增生血管及少量成骨细胞。结果证实,以小型猪构建Ⅱ度根分叉缺损模型是可行的。     

辛伐他汀凝胶对Ⅱ度根分叉牙槽骨缺损再生的影响

背景：研究表明他汀类药物具有刺激骨新生的作用。目的：观察辛伐他汀/甲基纤维素凝胶对小型猪根分叉区牙槽骨缺损后骨再生的影响。方法：制备小型猪上下颌两侧第三、四前磨牙Ⅱ度根分叉牙槽骨缺损模型,随机分为5组：低、中、高浓度辛伐他汀/甲基纤维素凝胶组于人工根分叉缺损处分别注射0.01,0.03,0.044g/mL辛伐他汀/甲基纤维素凝胶50μL,对照组于人工根分叉缺损处注射甲基纤维素凝胶50μL,1次/周,连续8周;空白对照组不作任何处理。结果与结论：与对照组和空白对照组比较,低、中、高浓度辛伐他汀/甲基纤维素凝胶组根分叉区牙槽骨高度明显修复（P〈0.001）,新生牙槽骨几乎充满根分叉区,可见骨小梁成网状结构及成熟的哈佛氏系统,其中低浓度辛伐他汀/甲基纤维素凝胶组新生骨成熟度较中、高浓度辛伐他汀/甲基纤维素凝胶组高,且炎症细胞浸润较少。对照组与空白对照组未见明显新生骨,仅见少量新生骨。表明局部应用辛伐他汀/甲基纤维素凝胶可刺激根分叉区牙槽骨缺损后的骨再生,适宜剂量是0.01g/mL。     

引导骨组织再生技术结合碱性成纤维细胞生长因子和骨保护素修复犬牙槽骨缺损

背景:多种生长因子能有效促进牙周组织再生.目的:观察骨保护素和碱性成纤维细胞生长因子对牙槽骨骨缺损的修复作用.方法:在4只杂种犬下颌两侧的第3,4前磨牙根分叉区造牙槽骨缺损,每只犬的一侧为实验组,另一侧为对照组.实验组置胶原膜并于缺损部位牙龈注射携带骨保护素和碱性成纤维细胞生长因子基因的重组腺病毒,对照组仅注射重组腺病毒或不做处理.结果与结论:缺损修复4周后,实验组和对照组在X射线和组织学等方面差异不显著.12周后,实验组X射线可见骨缺损区新生骨量明显增加,组织学见新生牙槽骨已充满根分叉区,骨小梁致密;对照组X射线可见骨缺损区新生骨量增加,但未达到根分叉顶,组织学见骨缺损区有大量新生牙槽骨但未充满根分叉区.说明引导骨组织再生技术结合骨保护素和碱性成纤维细胞生长因子可促进犬牙槽骨缺损的修复.     

低强度脉冲超声波对Beagle犬Ⅱ度根分叉病变的辅助效应

背景:低强度脉冲超声波主要用于促进骨折愈合及提高新生骨组织密度,尚未见其对Ⅱ度根分叉病变组织学修复效应的报道。目的:观察低强度脉冲超声波对Ⅱ度根分叉病变的组织学修复效应。方法:5只Beagle犬各取2颗下颌第4前磨牙颊侧作为实验区,建立Ⅱ度根分叉病变模型,分别分为超声组和对照组并在颊侧缺损龈方根面制备切迹作为参照点,高糖饲养8周。超声组行根面平整术,术后1周行低强度脉冲超声波(90mW/cm21.5MHz,200μs,1kHz)处理20min/d,对照组行根面平整术和假处理。6周后取实验区域组织制备脱钙切片,苏木精伊红染色、Masson染色行根分叉区域组织测量分析。结果与结论:超声组根分叉区新生牙槽骨沿根面生长,根分叉区可见牙龈上皮;对照组根分叉区以结缔组织生长为主,可见大量牙龈上皮和少量新生骨组织。超声组新生牙槽骨胶原呈"红-蓝"相间,以红染为主;对照组呈现蓝染,即超声组的新生牙槽骨胶原较对照组成熟。超声组牙槽骨、牙骨质、牙周膜新生量均大于对照组(P<0.05)。提示90mW/cm2低强度脉冲超声波可促进根分叉病变新生牙槽骨胶原成熟和改建。     

引导骨组织再生技术结合碱性成纤维细胞生长因子和骨保护素修复犬牙槽骨缺损

背景：多种生长因子能有效促进牙周组织再生。目的：观察骨保护素和碱性成纤维细胞生长因子对牙槽骨骨缺损的修复作用。方法：在4只杂种犬下颌两侧的第3,4前磨牙根分叉区造牙槽骨缺损,每只犬的一侧为实验组,另一侧为对照组。实验组置胶原膜并于缺损部位牙龈注射携带骨保护素和碱性成纤维细胞生长因子基因的重组腺病毒,对照组仅注射重组腺病毒或不做处理。结果与结论：缺损修复4周后,实验组和对照组在X射线和组织学等方面差异不显著。12周后,实验组X射线可见骨缺损区新生骨量明显增加,组织学见新生牙槽骨已充满根分叉区,骨小梁致密;对照组X射线可见骨缺损区新生骨量增加,但未达到根分叉顶,组织学见骨缺损区有大量新生牙槽骨但未充满根分叉区。说明引导骨组织再生技术结合骨保护素和碱性成纤维细胞生长因子可促进犬牙槽骨缺损的修复。     

低强度脉冲超声波对Beagle犬Ⅱ度根分叉病变的辅助效应

背景：低强度脉冲超声波主要用于促进骨折愈合及提高新生骨组织密度,尚未见其对Ⅱ度根分叉病变组织学修复效应的报道。目的：观察低强度脉冲超声波对Ⅱ度根分叉病变的组织学修复效应。方法：5只Beagle犬各取2颗下颌第4前磨牙颊侧作为实验区,建立Ⅱ度根分叉病变模型,分别分为超声组和对照组并在颊侧缺损龈方根面制备切迹作为参照点,高糖饲养8周。超声组行根面平整术,术后1周行低强度脉冲超声波（90mW/cm21.5MHz,200μs,1kHz）处理20min/d,对照组行根面平整术和假处理。6周后取实验区域组织制备脱钙切片,苏木精伊红染色、Masson染色行根分叉区域组织测量分析。结果与结论：超声组根分叉区新生牙槽骨沿根面生长,根分叉区可见牙龈上皮;对照组根分叉区以结缔组织生长为主,可见大量牙龈上皮和少量新生骨组织。超声组新生牙槽骨胶原呈＂红-蓝＂相间,以红染为主;对照组呈现蓝染,即超声组的新生牙槽骨胶原较对照组成熟。超声组牙槽骨、牙骨质、牙周膜新生量均大于对照组（P〈0.05）。提示90mW/cm2低强度脉冲超声波可促进根分叉病变新生牙槽骨胶原成熟和改建。     

纳米羟基磷灰石复合基因转染生长因子修复牙槽骨缺损*

背景:研究发现成骨细胞可促进牙槽骨的形成,而血小板衍生生长因子A因子转染成骨细胞对于牙槽骨形成的作用尚不清楚.目的:将基因转染的血小板衍生生长因子A重组质粒与纳米羟基磷灰石复合移植到骨缺损处,观察其对骨缺损修复的影响.方法:将24只新西兰大白兔随机分成实验组与对照组,制作双侧下颌下缘10 mm×6 mm×4 mm骨质缺损,实验组植入血小板衍生生长因子A转染成骨细胞与纳米羟基磷灰石的复合材料,对照组单纯植入纳米羟基磷灰石.术后4,8,12周取材行大体标本、锥形束CT、组织学观察及扫描电镜观察.结果与结论:术后不同时间点,实验组缺损处新骨生成,成骨细胞、骨小梁、骨陷窝及新生血管修复情况,以及材料与牙槽骨连接处的骨结合均明显优于对照组(P <0.05).表明血小板衍生生长因子A转染成骨细胞与纳米羟基磷灰石复合生成的新型材料,有较好的生物相容性,可加速骨组织再生,促进骨组织缺损修复.     

胶原膜联合多孔磷酸三钙治疗Ⅱ～Ⅲ度根分叉的近期疗效

目的:观察胶原膜引导组织再生术联合多孔磷酸三钙治疗Ⅱ~Ⅲ度根分叉病变的近期临床疗效。方法:Ⅱ~Ⅲ度根分叉病变下颌第一磨牙22颗,其中12颗采用膜引导组织再生术(实验组),另10颗采用常规翻瓣术(对照组)。术后3个月、6个月观察两组牙周袋深度(PD)、根分叉水平探诊深度(PFD)和临床附着水平(AL)的变化。结果:两组PD、PFD分别与自身对照,两组间各项指标比较均有显著性差异(P<0.05);与治疗前比较,实验组AL有明显改善(P<0.05),而对照组无明显改善。结论:应用胶原膜引导组织再生术联合多孔磷酸三钙可获得良好的近期疗效。     

心肌及冠状动脉内移植骨髓单个核细胞对猪缺血心肌侧支血管的生成

背景:目前有研究表明,心肌内直接注射骨髓单个核细胞可以使心肌梗死瘢痕区血管新生,改善缺血心肌血供。目的:观察心肌内及冠状动脉内移植自体骨髓单个核细胞对猪急性心肌梗死后缺血心肌侧支血管生成的作用。方法:22只小型猪制备急性心肌梗死模型后分为4组:心肌内移植组造模后即刻在缺血心肌内注射自体骨髓单个核细胞悬液;心肌内对照组同样方法即刻心肌内注射Hank’s平衡盐溶液;冠状动脉内移植组在造模后1周,左冠状动脉内注射自体骨髓单个核细胞悬液;冠状动脉对照组在造模后1周,同样方法左冠状动脉内注射Hank’s平衡盐溶液。结果与结论:心肌内及冠状动脉内移植骨髓单个核细胞后1周,血清碱性成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子水平差异无显著性意义,但明显高于各自对照组(P<0.01);移植后4周,心肌内移植组与冠状动脉内移植组小血管密度差异无显著性意义,但明显高于各自对照组(P<0.01);左室舒张末压差异无显著性意义,但明显低于各组对照组(P<0.01)。提示心肌内及冠状动脉内移植骨髓单个核细胞均有助于促进猪缺血心肌血管新生及侧支循环形成。     

引导组织再生术后屏障膜留置时间与牙周组织再生量的关系

目的：观察引导组织再生术(guided tissue regeneration，GTR)后不同时期牙周组织的再生情况，以确定达到最大牙周组织再生量时屏障膜留置体内的合适时间。方法：将6只杂种狗的下颌双侧第二、三、四前磨牙制备慢性Ⅱ度根分叉病变模型，一侧进行GTR治疗，另一侧只进行翻瓣术治疗，分别于术后第4，6，8周进行形态学和组织学观察。结果：GTR治疗组牙周组织再生量明显多于对照组，且GTR治疗后6周牙周组织再生量明显高于GTR术后4周(P&;lt;0．01)，GTR治疗后第6周和8周之间差异无显著性意义。结论：GTR技术治疗Ⅱ度根分叉病变患牙时，为达到最大牙周组织再生量所需要屏障膜的作用时间至少要6周。     

富血小板纤维蛋白/异种冻干骨复合物修复骨缺损及骨整合的作用

背景：异种冻干骨具有很好的骨引导性及低抗原性,但骨诱导性相对较差;自体富血小板纤维蛋白具有很好的诱导成骨能力。目的：观察富血小板纤维蛋白/异种冻干骨复合物在修复种植体周骨缺损及骨整合过程中的作用。方法：取新西兰大白兔12只,于双侧下颌无牙区造极限骨缺损模型。在两侧缺损区的近中、远中端骨壁各植入1枚钛螺纹钉,使种植体临近缺损侧无骨支持,右侧缺损区填压入自体富血小板纤维蛋白/异种冻干骨复合物,作为实验组;左侧缺损区填入异种冻干骨,作为对照组。植入4,8,12周后取完整下颌骨标本进行大体形态观察、植体扭矩测试及组织学观察。结果与结论：植入4周时,实验组可见新生血管,成骨细胞数量多,呈单层紧密排列在新生骨小梁的表面;对照组可见炎性细胞浸润,纤维组织增多,新生血管稀疏,成骨细胞及新生骨数量较实验组少。植入8周时,实验组见大量新生血管,骨小梁密集,呈网状连接,部分已逐渐融合成岛状;对照组新生血管较实验组少,骨小梁纤细,散乱。植入12周时,实验组新生骨组织成熟,骨小梁钙化程度高,可见形成板状新骨;对照组骨小梁融合成片,趋向成熟,但成熟度不及实验组。实验组不同时间点种植体-骨结合强度高于对照组（P 〈0.05）。表明富血小板纤维蛋白/异种冻干骨复合物具有很好的骨修复与骨整合能力。     

转染血管内皮细胞生长因子骨髓间充质干细胞与牛松质骨支架复合组织工程骨的血管形成

背景：小块组织工程骨植入动物体内后,早期依靠组织液的渗透可获得营养,但大块组织工程骨的营养仅靠组织液的渗透是远远不够的,必须通过血管再生来获得。目的：观察转染血管内皮细胞生长因子表达载体骨髓间充质干细胞复合组织工程骨植入动物体内后的血管形成能力。方法：制作日本大耳白兔双侧尺骨中段骨缺损模型,左侧尺骨缺损植入转染血管内皮细胞生长因子表达载体的自体骨髓间充质干细胞复合脱钙脱脂去蛋白的牛松质骨支架组织工程骨为实验组,右侧尺骨缺损植入自体骨髓间充质干细胞复合脱钙脱脂去蛋白的牛松质骨支架组织工程骨为对照组。术后12周行X射线摄片观察、大体标本观察、苏木精-伊红染色和Masson染色组织切片观察、MiFas图像分析系统定量分析。结果与结论：实验组与对照组尺骨缺损处均有连续骨痂形成;组织切片经苏木精-伊红染色、Masson三色法染色及MiFas图像分析系统定量分析可见实验组和对照组均有大量的新生骨,但实验组新生血管明显多于对照组（P〈0.01）,且血管较粗大,而且与新生骨接近。说明将转染血管内皮细胞生长因子表达载体的骨髓间充质干细胞复合在组织工程骨上植入动物体内可明显促进新生血管的形成。     

以带蒂筋膜瓣包裹复合自体红骨髓构建非细胞型组织工程化骨修复兔桡骨缺损

背景:国外学者将红骨髓和生成因子复合即时植入用于促进骨折愈合已经获得满意效果.由于不需体外培养过程,只要在抽取红骨髓后与支架生成因子复合并立即植入,被称为"非细胞型组织工程化骨".目的:课题创新性提出以带蒂筋膜瓣包裹复合自体红骨髓方法构造非细胞型组织工程化骨修复骨缺损,并验证其优势性.设计、时间及地点:同体对照动物实验,于2007-12/2009-02在河北北方学院及附属医院实验中心完成.材料:四五月龄新西兰大白兔24只;取自体红骨髓与含骨形态发生蛋白的骨诱导活性材料混合成非细胞型组织工程骨.方法:将成年新西兰大白兔双侧桡骨造骨缺损模型,左侧为对照组,仅植入骨诱导活性材料复合物,右侧为带蒂筋膜瓣实验组,利用显微外科技术在骨缺损邻近制备一个带有无名血管蒂所属毛细血管网的筋膜瓣,使其包裹非细胞型组织工程骨并充填骨缺损.主要观察指标:于术后4,8,12,16周各取6只兔,进行X射线检查和吸光度比测量、大体观察和组织学检查、修复区内骨形态计量分析和交界区血管图像分析.结果:①X射线检查:16周,对照组骨缺损周边植入物初步形成骨干结构,骨皮质不连续,髓腔不通;实验组正常骨干结构形成,骨髓腔完全再通.②组织学观察:16周,对照组植入物内血管长入较少和发育较成熟的骨小梁,骨髓腔未通;实验组植入物已吸收降解,完全由新骨替代,成熟骨结构形成,骨髓腔再通.③修复区内骨形态计量分析:术后4,8,12,16周实验组的骨小粱的体积明显多于对照组(P＜0.05).④交界区血管图像分析:实验组各时间段单位面积内血管再生面积均大于对照组(P＜0.05).结论:带蒂筋膜瓣包裹复合自体红骨髓构建非细胞型组织工程化骨,具有膜诱导骨再生和血管化双重作用,对修复大段骨缺损是可行的,在缩短骨缺损修复时间,提高成骨的质和量有显著疗效.     

纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白复合物修复兔桡骨大段缺损及局部血管内皮细胞生长因子的表达

背景：研究发现,在小段骨缺损中植入骨或仿生骨组织,坏死组织逐渐被替换,移植骨中会长入有活性的血管肉芽组织,移植骨被吸收,新骨主动形成。但在大段骨缺损,这一过程发生较慢且不完全。目的：观察纳米级羟基磷灰石材料复合骨形态发生蛋白后大段骨缺损修复能力及诱导生成血管能力。方法：制作兔桡骨大段骨缺损模型,抽签随机分2组,选择一侧分别植入纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白、纳米级羟基磷灰石修复,均以另一侧为空白对照。植入后6个月行大体观察、X射线、组织形态学检查、组织切片碱性磷酸酶染色、成骨量分析、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率及阳性血管数检测。结果与结论：空白对照组基本无骨组织生成。纳米级羟基磷灰石植入后被新生骨组织分割成小块,材料原有结构破坏。纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白组较纳米级羟基磷灰石组残存材料更少,材料降解更为彻底。纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白组成骨量、血管内皮细胞生长因子表达及血管内皮细胞生长因子阳性血管数目均明显高于纳米级羟基磷灰石组（P〈0.001）,且血管内皮细胞生长因子表达与血管内皮细胞生长因子阳性血管数目成正比关系。说明纳米级羟基磷灰石与骨形态发生蛋白复合后,骨修复能力进一步增强,诱导血管生成能力明显提高。     

自体骨髓间充质干细胞移植密度与Beagle犬牙Ⅱ度根分叉病变组织修复的关系

背景:目前临床上II度根分叉病变区牙周组织的再生仍是一项难题.目的:比较不同密度自体骨髓间充质干细胞修复II度牙根分叉病变区牙周组织缺损的能力.设计:随机对照观察实验.单位:福建医科大学附属口腔医院实验室和福州总医院动物实验科.材料:实验于2005-07/2006-09在解放军南京军区福州总医院动物实验科和福建医科大学附属口腔医院实验室完成.6只1岁半雄性Beagle犬由解放军南京军区福州总医院动物实验科提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.实验中选用Bio-Gide胶原膜和BME-10X胶原膜.方法:在犬的下颌第2,3前磨牙和第1磨牙颊侧根分叉处制备慢性II度牙根分叉病变模型.从6只18月龄的Beagle犬抽取自体骨髓间充质干细胞.应用5×108 L-1,5×109 L-1,5×1010 L-1的骨髓间充质干细胞复合BME-10X胶原膜移植治疗牙根分叉病变,表面覆盖Bi0-Gide胶原膜,单纯Bi0-Gide胶原膜组为对照组.采用OLYPUS IX 71显微照相系统和OLYSIA BioAutoCell软件计算新生牙骨质长度的百分比和新生牙槽骨面积的百分比.主要观察指标:苏木精-伊红染色观察并测量牙周组织再生(新生牙骨质长度和新生牙槽骨面积的百分比)情况.结果:对照组的新生牙骨质长度和新生牙槽骨面积的百分比分别为:(51.5±5.6)%和(27.1±7.7)%;5×108 L-1骨髓间充质干细胞组为:(84.8±8.9)%和(30.6±7.7)%; 5×109 L-1骨髓间充质干细胞组为:(91.8±5.2)%和(68.3±11.4)%;5×1010 L-1骨髓间充质干细胞组为:(88.8±7.2)%和(78.5±12.7)%.细胞组的新生牙骨质量与对照组相比,差异有显著性意义(P < 0.01),但各细胞组间相互比较差异无显著性意义;5×109 L-1组和5×1010 L-1组的新生牙槽骨量与 5×108 L-1组和对照组相比差异有显著性 (P < 0.05),但前两组间和后两组间比较则差异无显著性意义.结论:骨髓间充质干细胞移植能促进牙根分叉病变区的牙周组织再生,其作用与细胞的接种密度有关.     

纳米双相陶瓷人工骨的成骨及降解

背景：烧结后的纳米羟基磷灰石结晶度很高,在体内很难降解;纳米β-磷酸三钙的降解速度太快,不利于体内生物组织在材料上附着,不利于引导成骨.目的：观察纳米羟基磷灰石/纳米β-磷酸三钙双相陶瓷人工骨的成骨及降解性能.方法：将36只青紫蓝兔随机分为实验组、对照组及空白组,制作左侧挠骨缺损模型,实验组与对照组分别植入纳米羟基磷灰石/纳米β-磷酸三钙双相陶瓷人工骨、纳米羟基磷灰石人工骨,空白组不植入任何材料.术后4,8,12周观察成骨和材料降解情况.结果与结论：①术后12周时 X 射线：实验组可见材料基本降解,连续性骨痂通过骨缺损部位.对照组材料未见明显降解,骨缺损处有骨痂修复.空白组骨缺损未见修复.②术后12周时组织学观察：实验组材料孔隙内以骨细胞和成骨细胞为主,有少量软骨细胞,出现散乱的骨松质,材料完全降解.对照组材料孔隙内以骨细胞为主,有少量成骨细胞和软骨细胞,材料未见明显降解.空白组可见纤维结缔组织及胶原纤维.③术后12周时扫描电镜观察：实验组材料降解,骨缺损部位被新生骨松质取代.对照组材料未见降解,骨缺损部位大都被新生骨松质取代.空白组无明显骨重建.表明纳米羟基磷灰石/纳米β-磷酸三钙双相陶瓷人工骨具有良好成骨能力及降解性能.