同种异体肢体移植中他克莫司的应用剂量

背景：他克莫司应用于同种异体肝移植的免疫耐受已多见报道。目的：探索他克莫司在异体肢体移植时的最佳应用剂量。方法：建立同种异体肢体移植大鼠模型,移植造模后设立给予不同他克莫司剂量的0.5,1,2mg/（kg·d）组及对照组,对大鼠进行大体观察、组织学、淋巴细胞亚群测定。结果与结论：移植后出现排斥反应的时间分别是对照组（3.43±0.79）d、0.5mg/（kg·d）组（5.68±0.97）d、1mg/（kg？d）组（9.13±1.17）d、2mg/（kg？d）组（9.61±2.38）d,排斥反应的病理分级4组分别为（2.61±0.38）,（1.57±0.43）,（0.85±0.24）,（0.71±0.19）级。移植后各给药组CD4＋、CD8＋检测值均明显下降,CD4/CD8比值轻度增加或在正常值范围内;对照组CD4＋、CD8＋无明显变化,CD4/CD8比值明显增加。提示,他克莫司的应用剂量在1mg/（kg·d）时就能达到理想的抑制免疫排斥反应,提高用量后意义不大。     

昆明山海棠抑制大鼠同种异体肢体移植排斥反应的研究

目的探讨昆明山海棠对大鼠同种异体肢体移植抗排斥反应的影响。方法 9只Wistar大鼠为供者,18只SD大鼠为受者,通过手术方法建立同种异体肢体移植动物模型后随机分为观察组和对照组各9只。对照组大鼠采用生理盐水10 mL/(kg·d)灌胃,1次/d;观察组大鼠给予昆明山海棠片400 mg/(kg·d)+生理盐水2 mL灌胃,1次/d。观察术后2组移植肢体发生排斥反应的时间、存活时间,并行移植肢体组织病理学检查;采用TUNEL法检测2组移植组织的凋亡情况,并计算凋亡指数;应用流式细胞仪检测2组大鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+细胞及CD4~+/CD8~+比值。结果对照组移植肢体发生排斥反应时间[(4.83±1.80)d]早于观察组[(8.38±1.19)d](P0.05),移植肢体存活时间[(9.38±2.23)d]短于观察组[(13.94±1.48)d](P0.05),移植肢体细胞凋亡指数(33.83±3.38)和排斥反应分级(2.33±0.57)高于观察组(25.33±5.65、0.66±0.57)(P0.05);术后第7天,对照组外周血CD4~+细胞百分率[(49.95±7.14)%]及CD4~+/CD8~+比值(2.19±0.31)均高于观察组[(22.96±5.97)%、0.93±0.24](P0.05)。结论昆明山海棠可减轻同种异体肢体移植动物模型发生排斥反应,可作为肢体移植术后的一种新型抗排斥反应的免疫抑制剂或辅助药物。     

大鼠小肠移植早期应用趋化因子受体拮抗剂抑制移植物急性排斥反应

背景:排斥反应的发生是导致小肠移植失败的主要原因,趋化因子RANTES及其受体介导的细胞免疫在急性排斥反应中具有重要作用。目的:观察小肠移植术后早期应用趋化因子受体拮抗剂Met-RANTES对排斥反应的免疫抑制作用及其与他克莫司的协同效应。设计:随机化完全区组设计,观察对照动物实验。单位:解放军第四五一医院普通外科、解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室及解放军第四军医大学基础部电子显微镜中心。材料:实验于2003-09/2005-03在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成。以96只SD大鼠为供者,96只Wistar大鼠为受者,施行异基因节段性异位小肠移植。方法:移植后的大鼠以随机化完全区组设计分为4组(n=24):对照组、Met-RANTES组(200μg/d)、他克莫司组(0.5mg/(kg·d))及Met-RANTES 他克莫司组(Met-RANTES200μg/d 他克莫司0.5mg/(kg·d))。后3组均于移植术后腹腔注射给药,共7d;对照组移植前后不作任何处理。术后观察移植大鼠的一般状况、存活时间以及免疫细胞浸润情况,并于移植术后3,5,7d分别取各组大鼠移植肠标本(n=6)进行组织病理学检查,采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜技术对移植肠RANTES和CD4 ,CD8 ,CD25 T淋巴细胞的表达进行连续定量测定。每组剩余6只大鼠作存活时间观察,观察期限为5周。主要观察指标:①各组大鼠移植术后存活时间。②各组大鼠移植肠的病理改变。③各组大鼠移植肠RANTES及T淋巴细胞亚群的表达。结果:移植术后96只Wistar受体大鼠全部进入结果分析。①Met-RANTES组、他克莫司组和Met-RANTES 他克莫司组大鼠平均存活时间显著长于对照组(P<0.01);Met-RANTES 他克莫司组大鼠存活时间最长,与Met-RANTES组、他克莫司组差异均有显著性意义(P<0.01)。②对照组全部死于急性排斥反应及感染,组织病理学检查显示移植后第3,5,7天分别符合轻、中、重度排斥反应。Met-RANTES组、他克莫司组和Met-RANTES 他克莫司组病理学检查无明显排斥反应征象。③对照组大鼠的移植肠RANTES表达在术后各时段均显著高于其他3组(P<0.01),其动态变化与急性排斥反应的进程成正相关;Met-RANTES组和Met-RANTES 他克莫司组大鼠移植肠RANTES、CD4 、CD8 和CD25 T细胞的表达均低于对照组(P<0.01)。结论:Met-RANTES能明显抑制小肠移植急性排斥反应,有效保护移植肠功能,显著延长移植物的存活时间,并可增强小剂量(0.5mg/(kg·d))他克莫司的免疫抑制作用。     

Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植排斥反应中的作用

背景:有实验表明CXCR3拮抗剂Genistein可减轻胰腺移植大鼠的急性排斥反应。目的:观察Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植抗排斥反应中的作用。方法:以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立胰腺移植模型,随机分成5组:对照组(未进行药物治疗)、大剂量他克莫司组、小剂量他克莫司组、Genistein组、Genistein+小剂量他克莫司组。术后第7天行病理学,肝肾功能,血清中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞、干扰素γ、白细胞介素2浓度检测。结果与结论:与对照组、小剂量他克莫司组、Genistein组比较,Genistein+小剂量他克莫司组移植胰腺组织损伤减轻,淋巴细胞浸润减少,急性排斥反应减轻,血清CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞明显减少,干扰素γ、白细胞介素2水平降低(P<0.05);并且避免了大剂量他克莫司对肝肾功能的损害。说明Genistein联合小剂量他克莫司能有效减轻胰腺移植急性排斥反应而不增加肝肾毒性。     

他克莫司对二乙基亚硝胺诱导肝细胞癌模型大鼠原位肝移植术后急性排斥反应的实验研究

目的观察他克莫司对二乙基亚硝胺诱导同种肝细胞癌模型大鼠原位肝移植术后急性排斥反应的影响。方法雄性Lewis大鼠66只,选取其中16只设为空白对照组,再选取其中50只大鼠为受体。采用二乙基亚硝胺灌胃诱导受体大鼠肝癌模型,成模后用改良双袖套法将40只正常供体DA大鼠肝脏移植于受体。术后随机分为模型对照组和他克莫司组。术后他克莫司组用他克莫司1.0 mg(kg·d)混悬液灌胃,空白对照组和模型对照组按1.0 mg/(kg·d)灌生理盐水。采用酶联免疫法(ELISA)于2周和4周检测肝组织白介素-2(IL-2)、IL-4、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及转化生长因子β1(TGF-β1);流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群T细胞(Treg)、CD4~+T细胞和CD8~+T细胞占T淋巴细胞的比率。结果与空白对照组比较,模型对照组在2周和4周IL-2、IL-4、IL-12、IFN-γ、TGF-β1、TNF-α、CD4~+T%、CD8~+T%均明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,他克莫司组在2周和4周IL-2、IL-4、IL-12、IFN-γ、TGF-β1、TNF-α、CD4~+T%、CD8~+T%均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);且他克莫司组2周时与模型对照组比较各指标明显降低(P0.05);4周时与同组治疗2周比较各指标明显降低(P0.05)。结论他克莫司可降低二乙基亚硝胺诱导肝细胞癌模型大鼠原位肝移植术后急性排斥反应,具有明显的免疫抑制作用。     

亲属活体供肾移植后低剂量钙调蛋白酶抑制剂的应用

背景:亲属活体肾移植供、受者移植前准备充分,供肾热、冷缺血时间较短,HLA 配型的组织相容性好,移植后排斥反应发生率低,为亲属活体供肾肾移植后采用低剂量免疫抑制剂方案提供了可能性.目的:探讨亲属活体供肾移植后低剂量钙调蛋白酶抑制剂的安全性和有效性.方法:选取2006-01/2008-06 在南京医科大学第一附属医院肾移植中心行亲属活体供肾移植的受者38 例,移植后常规使用环孢素A/他克莫司+吗替麦考酚酯+泼尼松的三联免疫抑制方案.将38 例患者随机分为两组:CNI 常规剂量组(n=18),移植后初始药物剂量为环孢素A 6 mg/(kg·d)或他克莫司0.12 mg/(kg·d);CNI 低剂量组(n=20),术后初始药物剂量为环孢素A 4 mg/(kg·d)或他克莫司0.08 mg/(kg·d);两组吗替麦考酚酯和泼尼松使用剂量相同.移植后密切随访,比较两组患者移植后不同时期的肾功能以及急性排斥反应、肺部感染、肝功能损害、肾毒性等并发症的发生情况.结果与结论:随访12 个月,CNI 常规剂量组重度肺部感染死亡1 例,CNI 低剂量组无死亡病例.两组移植肾功能及急性排斥反应发生率比较差异均无显著性意义(P ＞ 0.05);CNI 低剂量组肝功能损害、钙调蛋白酶抑制剂肾毒性发生率显著低于CNI 常规剂量组(P ＜ 0.05).此外,采用低剂量钙调蛋白酶抑制剂免疫抑制方案明显减轻了亲属肾移植患者的经济负担.说明亲属活体供肾移植后采用低剂量钙调蛋白酶抑制剂的免疫抑制剂方案安全、有效.     

肝移植受体免疫耐受的诱导及CD4^＋CD25^＋T细胞的重要作用

背景:解决肝移植排斥反应的惟一方法是诱导免疫耐受,而环孢素A对诱导鼠肝移植免疫耐受及T细胞都存在一定影响,可为各种免疫抑制剂的合理使用提供依据.目的:探讨环孢素A诱导肝移植后免疫耐受的可行性及方法,分析CD4+CD25+调节性T细胞在诱导耐受中的作用.设计、时间及地点:随机分组,动物实验观察,2007-01/2008-04在中山大学医学实验动物中心和深圳市第三人民医院肝病研究所完成.材料:健康LEW大鼠66只,BN大鼠78只,CD4、CD25抗体和Foxp3抗体(克隆号PCH101)由美国eBioscience公司生产,环孢素A针剂由北京诺华制药提供.方法:根据用药情况建立6组肝移植模型:同基因对照组:BN大鼠进行同种异体肝移植,移植后不用药.急性排斥组:LEW大鼠作为供体,BN大鼠作为受体,移植后不用药.环孢素A小、中、大剂量组:LEW大鼠作为供体,BN大鼠作为受体,移植后分别给予环孢素A1.0,1.5,2.0 mg/(kg·d),疗程均为5 d.环孢素A中剂量延期组:LEW大鼠作为供体,BN大鼠作为受体,移植后给予环孢素A1.5 mg/(kg·d),疗程7 d.除急性排斥组和环孢素A小剂量组各24只外,其他6只/组.主要观察指标:观察各组大鼠移植后生存时间及外周血变化,并检测急性排斥组和组肝、环孢素A小剂量组脾组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg的含量.结果:同基因对照组存活时间>100 d,而不发生排斥反应.环孢素A小、中、大剂量组存活时间分别为(51.5±2.4),(53.6±3.6).(23.2±2.1)d,环孢素A中剂量延期组和急性排斥组分别为(57.8±7.2),(20.6±3.2)d,除同基因对照组外,各组间差异均有统计性意义(F=114.82,P<0.01).各组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例无明显差别及增加(P>0.05).环孢素A小剂量组肝组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg的含量明显增加,且高于急性排斥组(P<0.05).结论:小剂量环孢素A可以诱导免疫耐受,大剂量环孢素A突然停药会导致加速性排斥.CD4+CD25+Foxp3+Treg能促进移植肝受体的免疫耐受,但其增加只存在于移植的肝内,外周血、脾脏未见增加.     

Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植排斥反应中的作用

背景：有实验表明CXCR3拮抗剂Genistein可减轻胰腺移植大鼠的急性排斥反应。目的：观察Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植抗排斥反应中的作用。方法：以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立胰腺移植模型,随机分成5组：对照组（未进行药物治疗）、大剂量他克莫司组、小剂量他克莫司组、Genistein组、Genistein＋小剂量他克莫司组。术后第7天行病理学,肝肾功能,血清中CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞、干扰素γ、白细胞介素2浓度检测。结果与结论：与对照组、小剂量他克莫司组、Genistein组比较,Genistein＋小剂量他克莫司组移植胰腺组织损伤减轻,淋巴细胞浸润减少,急性排斥反应减轻,血清CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞明显减少,干扰素γ、白细胞介素2水平降低（P〈0.05）;并且避免了大剂量他克莫司对肝肾功能的损害。说明Genistein联合小剂量他克莫司能有效减轻胰腺移植急性排斥反应而不增加肝肾毒性。     

自制旋转持续静脉输液装置在大鼠同种异体小肠移植排斥模型构建中的应用

背景:构建大鼠小肠移植模型是研究小肠移植排斥反应的重要基础,实验中对动物无法进行长期持续的静脉输液成为延误实验顺利开展的最大障碍.目的:将自制旋转持续静脉输液装置与大鼠异位小肠移植模型相结合,验证输液装置的可靠性和动物模型的稳定性.设计、时间及地点:随机区组,对照观察实验.于2008-03/06在解放军第四军医大学西京医院消化病研究所全军医学重点实验室完成.材料:选用健康雄性近交系F344/NCrl BR大鼠48只为供体.LEW/Cd大鼠48只为受体,建立同种异体节段性异位小肠移植模型.方法:将移植后的大鼠以随机化完全区组设计分为3组(n=16):对照组、输液组和他克莫司治疗组.对照组大鼠仅行小肠移植,移植前后不做持续静脉输液.输液组大鼠给予持续输注肠外营养液.他克其司治疗组持续输注肠外营养液+静脉注射他克莫司0.5 mg/(kg·d).主要观察指标:移植后观察移植大鼠的一般状况和存活时间,并于移植后3,5,7 d分别取各组大鼠移植肠标本(n=3)进行组织病理学检查,每组剩余的大鼠作存活时间观察,观察期限为5周.结果:对照组大鼠甲均存活时间为(5.4±1.7)d,手术成功率56.3%.采用旋转输液装置的输液组和他克莫司治疗组大鼠手术成功率为90.6%,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01).输液组大鼠平均存活(7.2±2.8)d,最终全部死于急性排斥反应.他克莫司治疗组剩余大鼠的输液时间>30 d,存活时间超过5周,与对照组和输液组比较,差异有统计学意义(P<0.05).对照组和输液组大鼠术后3,5.7 d移植肠组织病理学检查分别符合轻、中、重度排斥反应.他克莫司治疗组大鼠术后3,5,7 d朱见明显排斥反应征象.结论:旋转持续静脉输液装置制作简单,固定安全可靠,能成功地为研究大鼠连续输液30 d以上,与异位小肠移植模型联合应用,能建立稳定可靠的排斥反应模型.     

趋化因子受体拮抗剂对大鼠小肠移植的影响

背景:排斥反应的发生是导致小肠移植失败的主要原因,趋化因子及其受体介导的细胞免疫在急性排斥反应中具有重要作用,以趋化因子受体为靶位的治疗方案,可能为临床小肠移植的免疫治疗提供借鉴.目的:观察趋化因子RANTES(Met-RANTES)对同种异体大鼠异位小肠移植术后移植物的存活时间和组织病理学改变的影响,以及与小剂量他克莫司的协同效应.设计、时间及地点:随机数字表法区组,对照观察实验,于2003-09/2005-03在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成.材料:健康成年雄性大鼠180只,90只SD大鼠作为供体,90只Wistar大鼠作为受体,施行异位节段性小肠移植.方法:小肠移植后,大鼠随机分为3组,30只/组:对照组,只做异位小肠移植,不给予任何药物治疗,Met-RANTES治疗组:移植后0～7 d,腹腔注射Met-RANTES200 μg/d;Met-RANTES联合小剂量他克莫司治疗组:移植后0～7 d,腹腔注射Met-RANTES 200 μg/d+肌肉注射他克莫司0.5 mg/(kg·d).主要观察指标:观察移植大鼠的一般状况和存活时间,并于移植后第1,3,5,7天每组各处死6只大鼠,切取移植肠标本进行组织病理学检查和组间比较.结果:移植后的90只受体大鼠全部进入结果分析.对照组大鼠存活时间中位数为7.2 d(1.5),全部死于急性排斥反应及感染.组织病理学检查显示移植后第3,5,7天分别符合轻、中、重度排斥反应.Met-RANTES治疗组大鼠存活时间中位数为19.2 d(16.4),与对照组相比存活时间明显延长(P<0.01).Met-RANTES+小剂量他克莫司治疗组大鼠存活时间中位数为30.9 d(9.0),与前两组有显著差异(P<0.01).Met-RANTES治疗组和Met-RANTES+小剂量他克莫司治疗组大鼠组织病理学检查无明显排斥反应征象,可长期存活.结论:Met-RANTES能明显抑制小肠移植急性排斥反应,有效保护移植肠功能,显著延长移植物的存活时间,并可增强小剂量他克莫司的免疫抑制作用.     

Survival of cardiac allograft in highly sensitized and nonsensitized rats treated with FK506.

The effect of FK506 was studied in sensitized and nonsensitized recipients using a rat cardiac allograft model. Heart grafts from Male ACI rats were heterotopically transplanted to Male LEW rats. The sensitized rat models were established by using donor type blood, admixed with immunoadjuvant (Adjuvant Complete Freund), seven days prior to transplantation. FK506 was administrated from day 0 to day 14 posttransplantation. The results showed that FK506 could prolong allograft survival in both sensitized and nonsensitized rat recipients in a dose-dependent manner, although, the dose required in sensitized recipients was higher than in nonsensitized recipients. The minimal effective dose of FK506 was 0.32 mg/kg/day in sensitized recipients and 0.1 mg/kg/day in nonsensitized recipients.     

Pharmacokinetics of intra-arterial delivery of tacrolimus to vascularly isolated rabbit forelimb.

A vascularly isolated rabbit forelimb model simulating conditions of composite tissue allografting was used to determine the regional pharmacokinetic advantage achievable in extremity tissue components during i.a. tacrolimus (FK506) administration. FK506 was infused continuously via osmotic minipump into the right brachial artery of New Zealand rabbits at 0.05, 0.1, and 0.2 mg/kg/day. On day 6, FK506 concentrations were measured in aortic whole blood, heart, lung, liver, kidney, spleen, and fat, as well as in skin, muscle, bone, and bone marrow samples from both right and left forelimbs. The relative tissue concentrations of FK506 in descending order were [spleen approximately lung approximately kidney] > [heart approximately skin approximately muscle] > [fat approximately bone marrow] > [liver approximately bone approximately blood]. In marked contrast to previous results with i.a. cyclosporin A infusion, only a minimal regional advantage of local FK506 delivery (mean right/left concentration ratios 1.0-1.4) was obtained in all forearm tissues over the dose range studied. For each limb tissue, left-sided FK506 concentrations significantly correlated with systemic blood levels, and the left-sided tissue-to-whole-blood concentration ratio did not vary significantly with dose. We conclude that FK506 is pharmacokinetically inferior to cyclosporin A for continuous i.a. administration to the vascularly isolated rabbit forelimb, and hypothesize that this difference is the result of differences in the distribution of each drug within whole blood. Our findings suggest that, despite its demonstrated efficacy in experimental and clinical transplantation, FK506 would not be an appropriate immunosuppressant to deliver via the i.a. route for prevention of limb allograft rejection.     

他克莫司和环孢素A对肾移植后患者炎性细胞因子和血脂的影响

背景:环孢素A与他克莫司是肾移植后临床广泛应用的免疫抑制剂。目的:观察他克莫司和环孢素A对肾移植后炎性细胞因子和血脂的影响。方法:选择首次接受同种异体肾移植后患者112例,随机分为环孢素A组和他克莫司组,移植后分别给予环孢素A+吗替麦考酚酯+糖皮质激素三联疗法与他克莫司+吗替麦考酚酯+糖皮质激素三联疗法。结果与结论:他克莫司组的1年人/肾存活率、治疗逆转率高于环孢素A组(P<0.05),急性排斥反应发生率低于环孢素A组(P<0.05);移植后1个月及1年的血清白细胞介素2,6,8和血糖水平高于移植前(P<0.05),低于环孢素A组(P<0.05),血清白细胞介素4,10低于移植前(P<0.05),高于环孢素A组(P<0.05);移植后1个月的血清总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇高于移植前(P<0.05),但低于环孢素A组(P<0.05);移植后1年的血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇低于环孢素A组(P<0.05)。说明他克莫司可通过抑制肾移植后炎性细胞因子释放,改善糖脂代谢等途径降低患者的排斥反应,提高肾移植的存活率。     

他克莫司处理供者树突状细胞在诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受中的作用(英文)

背景:诱导供者特异性免疫耐受被认为是最终克服器官移植后排斥反应的有效途径,近年来关于未成熟树突状细胞在诱导免疫耐受中的重要作用日益受到关注。目的:观察他克莫司处理的供者未成熟树突状细胞对大鼠同种异体心脏移植免疫耐受的影响,分析未成熟树突状细胞诱导免疫耐受的作用途径。设计:随机对照动物实验。材料:实验于2006-04/2006-12在青岛大学医学院附属医院动物实验中心完成。以45只Wistar大鼠为供体,45只SD大鼠为受体,行颈部心脏移植45例次。按随机数字表法分为3组,每组15例次,进行不同的预处理。方法:对照组、未经他克莫司处理组及他克莫司处理组移植前7d分别经尾静脉注射生理盐水、供者未成熟树突状细胞和他克莫司处理的未成熟树突状细胞。分别测定移植后SD大鼠与Wistar大鼠及第3品系Lewis大鼠的单向混合淋巴细胞反应。主要观察指标:各组受体大鼠移植心脏存活时间、心肌病理及血清白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10、γ-干扰素含量变化。结果:①未经他克莫司处理组大鼠的移植心脏存活时间较对照组明显延长(P<0.01),他克莫司处理组大鼠的移植心脏存活时间进一步延长(P<0.05)。②混合淋巴细胞培养结果显示为供者特异性。③各组大鼠血清白细胞介素2、γ-干扰素、白细胞介素4、白细胞介素10含量差异具有显著性意义(P<0.01)。代表Th1的白细胞介素2、γ-干扰素水平明显降低,代表Th2的白细胞介素4、白细胞介素10水平明显增高。结论:未成熟树突状细胞能够诱导同种异体大鼠心脏移植免疫耐受;他克莫司处理的未成熟树突状细胞能够加强这种免疫耐受,且这种耐受是供者特异性的。其可能主要通过调节T细胞免疫应答类型(Th1至Th2的免疫偏移)、诱导调节性T细胞和诱导T细胞失能等途径来参与免疫耐受的形成。     

联合应用免疫抑制剂治疗大鼠急性脊髓损伤效果观察

目的探讨联合应用免疫抑制剂他克莫司(FK506)和FTY720对大鼠急性脊髓损伤的神经保护作用。方法采用Allen′s打击法制备大鼠脊髓损伤模型,84只大鼠分成4组:FK506+FTY720联合治疗组(A组)、FK506治疗组(B组),脊髓损伤组(C组)和正常对照组(D组)。A组通过尾静脉注射0.3 mg/kg FK506,并予鼻饲0.3 mg/kg FTY720,B组通过尾静脉注射0.5 mg/kg FK506,C组注射生理盐水。伤后6 h、24 h和48 h取伤段脊髓行HE染色分析和Tunel凋亡分析;伤后第1、3和7天行体感诱发电位(SEP)检测;伤后第1、3、7和14天行BBB评分和斜板试验评分。结果联合治疗组和FK506治疗组伤后各个时间取材点的脊髓损伤出血坏死区均轻于损伤组,在第6、24和48小时时间点脊髓Tunel神经细胞凋亡检测明显轻于损伤组,有显著差异性(P<0.05),但2组之间比较无显著差异性(P>0.05)。联合治疗组和FK506治疗组伤后各时间点SEP、BBB评分和斜板试验评分均优于损伤组,有显著性差异(P<0.05),但是2组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠急性脊髓损伤早期联合应用FK506和FTY720具有良好的保护神经功能和促进神经功能恢复的作用。     

大鼠小肠移植排斥反应期移植肠RANTES的表达

背景:同种异体移植排斥反应是影响移植物功能和存活的最大障碍,小肠移植排斥反应的诊断与治疗尤为困难.目的:探讨移植肠RANTES的表达在小肠移植急性排斥反应中的意义,以及他克莫司对它的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2003-09/2005-03在解放军第四五一医院普通外科、解放军第四军医大学附属西京医院胃肠外科实验室、解放军第四军医大学基础部电子显微镜中心为大专院校的实验室完成.材料:选用健康成年雄性SD和Wistar大鼠各72只.以SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,施行异位小肠移植.方法:实施大鼠异位小肠移植,按照不同品系的组合将移植大鼠分为4组(n=18):非手术对照组,Wistar大鼠作为正常对照,不实施小肠移植;同基因移植组,将Wistar大鼠的小肠移植给同品系的Wistar大鼠;异基因移植未治疗组,将SD大鼠的小肠移植给Wistar大鼠,移植后不给予免疫抑制剂治疗;异基因移植他克莫司治疗组,将SD大鼠的小肠移植给Wistar大鼠,移植后0～7 d肌肉注射他克莫司,1 mg/(kg·d).移植后3,5,7 d每组各处死6只大鼠,切墩移植肠标本进行组织病理学检查,并采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜技术对移植肠RANTES的表达进行连续定量测定.主要观察指标:①各组大鼠移植肠的组织病理学改变.②不同时间点移植物内RANTES阳性细胞的表达变化.③他克莫司对异基因移植大鼠移植肠RANTES表达的抑制作用.结果:72只受体大鼠均进入结果分析.异基因移植末治疗组大鼠后3,5,7 d移植肠符合轻、中、重度急性排斥反应的病理学诊断标准;他克莫司治疗组大鼠和同基因移植对照组大鼠在观察期内未发现明显排斥反应征象.异基因移植未治疗组大鼠的移植肠RANTES表达在术后均显著高于其他3组(P<0.01),其动态变化与急性排斥反应的进程呈正相关;他克莫司治疗组大鼠移植肠RANTES的表达明显低于未治疗组(P<0.01).结论:RANTES阳性细胞在小肠移植急性排斥反应中发挥了重要作用,动态检测移植肠RANTES的表达变化,可能成为小肠移植急性排斥反应有效的诊断指标之一.     

FK506对大鼠脑液压伤后血浆一氧化氮合酶、一氧化氮、内皮素和脑组织兴奋性氨基酸水平的影响

目的：分析创伤性脑损伤(TBI）后FK506对血浆一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和脑组织兴奋性氨基酸(EAA)水平的影响。方法：雄性SD大鼠采用液压损伤法制备脑损伤模型，随机分为损伤组、治疗组和对照组。治疗组于伤后5min开始每6h腹腔注射1次FK506，连续4次。伤后30min、6h、24h测量血浆NO、NOS、ET和伤灶脑组织的EAA水平。结果：与对照组相比，治疗组NOS活性与NO，EAA水平显著降低，ET水平几乎没有变化。结论：按照本实验设计，FK506能抑制伤后NO升高，减少EAA释放，对TBI后继发性脑损伤有较大应用价值。