人肾间质成纤维细胞体外增殖及胶原的合成

背景:肾间质成纤维细胞体外研究时间点的选取多在72h以内,但对于体外长时间动态观察培养过程中成纤维细胞增殖及胶原分泌规律少见报道。目的:观察人肾间质纤维化来源的成纤维细胞体外增殖及胶原蛋白合成的规律。方法:采用组织块培养法获取、纯化并鉴定肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞,选取第3代对数生长期细胞用于实验。MTT比色法及Masson三色染色结合图像分析法分别检测体外培养第1,3,5,7,9天细胞的吸光度值和成纤维细胞胶原蛋白染色阳性细胞的平均吸光度值。结果与结论:肾间质成纤维细胞体外生长曲线呈"S"形,体外培养第3～5天为细胞倍增时间,随培养时间延长,胶原蛋白由线状分布转变成片状分布,其中以第3～5天增长最快(P<0.05)。结果证实,肾间质成纤维细胞在体外培养第3～5天增殖能力和胶原合成活性最强。     

人肾间质成纤维细胞体外增殖及胶原的合成

背景：肾间质成纤维细胞体外研究时间点的选取多在72h以内,但对于体外长时间动态观察培养过程中成纤维细胞增殖及胶原分泌规律少见报道。目的：观察人肾间质纤维化来源的成纤维细胞体外增殖及胶原蛋白合成的规律。方法：采用组织块培养法获取、纯化并鉴定肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞,选取第3代对数生长期细胞用于实验。MTT比色法及Masson三色染色结合图像分析法分别检测体外培养第1,3,5,7,9天细胞的吸光度值和成纤维细胞胶原蛋白染色阳性细胞的平均吸光度值。结果与结论：肾间质成纤维细胞体外生长曲线呈＂S＂形,体外培养第3～5天为细胞倍增时间,随培养时间延长,胶原蛋白由线状分布转变成片状分布,其中以第3～5天增长最快（P〈0.05）。结果证实,肾间质成纤维细胞在体外培养第3～5天增殖能力和胶原合成活性最强。     

细胞周期素E表达与人肾间质纤维化成纤维细胞体外增殖的关系

目的:探讨细胞周期素E表达与人肾间质成纤维细胞体外增殖的关系。方法:实验于2004-06/2005-10在泸州医学院分子病理实验室和中心实验室完成。选取第3代对数生长期人肾间质成纤维细胞用于实验。采用组织块培养法获取人肾间质成纤维细胞并鉴定;用免疫细胞化学SABC法和图像分析技术检测体外培养第1,3,5,7,9天人肾间质成纤维细胞的细胞数量、细胞周期素E表达阳性的细胞数量以及阳性细胞的平均吸光度值。各时间点阳性细胞细胞周期素E平均吸光度值之间的两两比较采用q检验。结果:①体外培养1～9d,人肾间质成纤维细胞细胞总量逐渐增加,生长曲线呈“S”形,第3～5天细胞数量增长最迅速为对数生长期,第7～9天细胞数量增长最平缓。②细胞周期素E表达阳性细胞比率以第3,5天最高,随后阳性细胞的实际数量仍有所增加,而阳性比率开始缓慢降低。③细胞周期素E平均吸光度值随体外培养时间的延长呈现由弱变强再变弱的变化规律,平均吸光度于第5天最高,第7,9天细胞周期素E呈下降趋势。结论:细胞周期素E表达量增加与人肾间质成纤维细胞的体外增殖速度有密切关系,可能在肾间质纤维化形成过程中发挥重要作用。     

白色波特兰水门汀对人牙周膜成纤维细胞体外增殖的影响

目的探讨白色波特兰水门汀(white Portland cement,WPC)对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响,并与无机三氧化聚合物(mineral trioxide aggregate,MTA)进行比较。方法对数生长期人牙周膜成纤维细胞随机分为WPC组、MTA组和对照组,分别应用MTA浸提液、WPC浸提液、DMEM培养液进行培养,隔日换液,分别于培养24、48、96h应用酶标仪测定450nm波长处吸光度(optical density,OD)值,计算WPC组、MTA组相对增殖率及细胞毒性,并进行比较。结果培养24、48、96h,WPC组OD值为(0.886±0.021、1.019±0.058、1.281±0.059)、MTA组为(0.906±0.060、1.071±0.094、1.237±0.063),对照组为(0.845±0.030、1.015±0.037、1.202±0.057),两两比较差异均无统计学意义(P0.05);培养24、48、96h,WPC组人牙周膜成纤维细胞相对增殖率[(104.75±7.37)%、(100.00±18.89)%、(106.75±21.57)%]与MTA组[(107.25±7.41)%、(105.75±13.79)%、(103.00±18.67)%]比较差异均无统计学意义(P0.05),WPC、MTA对人牙周膜成纤维细胞毒性均为0~1级。结论 WPC、MTA对人牙周膜成纤维细胞增殖均无影响。     

中药骨碎补对人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞体外增殖的实验研究

目的探讨中药骨碎补对体外培养的人的牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块法外培养人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞,取第4、5代培养细胞随机分为实验组和对照组,实验组加不同浓度的骨碎补,对照组只加培养液。通过HE染色观察其对牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞的形态、结构及生长增殖的影响,通过MTT法和考马斯亮蓝法对实验组和对照组的细胞生长情况和总蛋白合成的检测。结果 1在10~1000μg/ml浓度范围内骨碎补对人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞均有促增殖作用(P0.05),尤以100μg/ml浓度最为明显(P0.01);2总蛋白测定结果显示在骨碎补浓度为10μg/ml时,对照组与其总蛋白含量差异无统计学意义(P0.05),实验组细胞总蛋白含量随骨碎补浓度增加高于对照组(P0.05),尤以500μg/ml骨碎补浓度组作用牙髓成纤维细胞最佳;而100μg/ml骨碎补浓度组作用牙龈、牙周膜成纤维细胞最显著。结论骨碎补在有效作用浓度范围内,其促增殖效应和总蛋白含量与骨碎补浓度呈剂量依赖关系,随着浓度的增加促增殖作用增强、总蛋白含量增加,浓度达到最大作用后,随着浓度增加作用反而呈现减弱趋势。     

乙酰半胱氨酸对人肺成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)对人肺成纤维细胞(HLF)增殖、凋亡和胶原合成的影响.方法 分离培养HLF,经不同浓度NAC(5、10、20、40 mmol/L)处理后,四氮甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期,RT-PCR检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化.结果 ①5、10、20、40 mmol/L的NAC对HLF细胞生长均有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.②5、10、20、40 mmol/L的NAC作用24 h后,细胞凋亡率分别为(34.38±5.80)%、(37.72±3.10)%、(44.05±4.52)%和(59.18±5.24)%,均明显高于对照组[(3.92±1.24)%],差异有统计学意义(P均<0.01).③10、20、40 mmol/L的NAC能够引起G0/G1期细胞比例明显升高,S期比例明显降低,差异有统计学意义(P均<0.01).④5、10、20及40 mmol/L的NAC处理组HLF Ⅰ型前胶原mRNA表达均明显低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 NAC可直接抑制成纤维细胞增殖、诱导其发生凋亡,并降低其胶原合成.     

干扰素α对人骨髓成纤维细胞体外生长的影响

目的　探讨IFN α对人骨髓成纤维细胞体外生长的影响。方法　分离、培养人骨髓成纤维细胞 ,并分别及联合加入血小板源生长因子 AB (Plateletderivedgrowthfactor ,PDGF AB)、转化生长因子β1(Transforminggrowthfactor β1,TGF β1)和IFN α2b ,用MTT方法和流式细胞仪分别检测各种条件下细胞的增殖情况和周期。结果　PDGF AB(1～ 5 0ng/ml)和TGF β1(0 .0 1～ 1ng/ml)在一定浓度范围内均刺激人骨髓成纤维细胞生长 ,PDGF AB的作用比TGF β1强 (P <0 .0 1)。IFN α2b对PDGF AB的促增殖作用存在部分抑制效应 (P <0 .0 1) ;IFN α2b联合TGF β1既能协同抑制骨髓纤维母细胞的生长 (P <0 .0 1) ,也能协同抑制PDGF AB对纤维母细胞的促增殖作用 (P <0 .0 1) ,且其作用位点在S期。结论　PDGF AB对人骨髓成纤维细胞的体外促生长作用能被IFN α2b和TGF β1协同抑制     

四种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响

目的:探讨吲哚美辛、雷公藤多甙、甲氨蝶呤、地塞米松4种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响,为类风湿性关节炎患者临床用药,改善其功能提供依据。方法:实验于2003-05/2004-02在的第一军医大学细胞生物实验室完成。类风湿性关节炎及正常滑膜组织,分别来源于第一军医大学南方医院脊柱骨病科和汕头市第二人民医院外二科因类风湿性关节炎而行全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的患者和无关节炎病史的创伤性截肢患者,用原酶消化法获得成纤维样滑膜细胞。用第2～4代细胞在接种12h后分别加入上述药物处理24h,在第5和第10天分别用四甲基偶氮唑盐法测定细胞增殖情况并统计分析。结果:雷公藤、甲氨蝶呤第5天对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制率分别为(46.14±4.20)%和(31.52±2.86)%,第10天分别(47.00±1.89)%和(46.73±3.83)%。消炎痛及地塞米松对成纤维样滑膜细胞增殖无明显抑制作用。这种抑制作用对于类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖尤为明显。雷公藤多甙比甲氨蝶呤对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制作用有更明显的时间依赖性。结论:雷公藤、甲氨蝶呤对于类风湿性关节炎的成纤维样滑膜细胞增殖有明显抑制作用,适当延长甲氨蝶呤用药间隔时间对于抑制滑膜组织过度增生及血管翳的形成效果可能相似。     

四种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响

目的：探讨吲哚美辛、雷公藤多甙、甲氨蝶呤、地塞米松4种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响，为类风湿性关节炎患者临床用药，改善其功能提供依据。方法：实验于2003—05／2004—02在的第一军医大学细胞生物实验室完成。类风湿性关节炎及正常滑膜组织，分别来源于第一军医大学南方医院脊柱骨病科和汕头市第二人民医院外二科因类风湿性关节炎而行全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的患者和无关节炎病史的创伤性截肢患者，用原酶消化法获得成纤维样滑膜细胞。用第2～4代细胞在接种12h后分别加入上述药物处理24h，在第5和第10天分别用四甲基偶氮唑盐法测定细胞增殖情况并统计分析。结果：雷公藤、甲氨蝶呤第5天对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制率分别为(46．14&;#177;4．20)％和(31．52&;#177;2．86)％，第10天分别(47．00&;#177;1．89)％和(46．73&;#177;3．83)％。消炎痛及地塞米松对成纤维样滑膜细胞增殖无明显抑制作用。这种抑制作用对于类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖尤为明显。雷公藤多甙比甲氨蝶呤对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制作用有更明显的时间依赖性。结论：雷公藤、甲氨蝶呤对于类风湿性关节炎的成纤维样滑膜细胞增殖有明显抑制作用，适当延长甲氨蝶呤用药间隔时间对于抑制滑膜组织过度增生及血管翳的形成效果可能相似。     

补体C5a 及受体对人肾间质成纤维细胞增殖的影响及机制研究

目的 探讨补体C5a 及受体(C5aR)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)增殖及纤维化相关因子表达的影响。方法 原代培养hRIFs 细胞,对细胞进行鉴定后,检测C5aR 表达情况;同用C5a和C5aR 拮抗剂分别对hRIFs 处理后检测细胞增殖、细胞外基质蛋白(fibronectin,Collagen-I)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况。结果 hRIFs 细胞vimentin 蛋白表达阳性,desmin 蛋白表达阴性,C5aR 表达于hRIFs细胞表面。MTS 实验结果显示:与对照组相比,C5a 纯品(浓度分别为10,15,20nmol/L)刺激后第2h,8h 的A 值差异无统计学意义 (P>0.05),刺激后第24h 的A 值(0.217±0.037 vs 0.613±0.016, 0.793±0.041, 0.887±0.039) 显著升高,差异有统计学意义(t=4.891,4.211,8.408,均P ＜ 0.05)。与C5a 纯品组相比,C5a 纯品+C5aR 拮抗剂组的A 值明显降低(0.887±0.039 vs 0.424±0.016),差异有统计学意义(t=8.657,P ＜ 0.05)。Western-Blot 结果显示,与对照组相比,补体C5a(20nmol/L)刺激后第24h,fibronectin(26 091±128 vs 15 400±105), Collagen-I(31 229±129 vs 24 823±136)以及TGF-β1(27 855±161 vs 20 326±152) 蛋白表达水平都有明显增加,差异具有统计学意义(t=4.891,5.820, 2.311,均P ＜ 0.05)。与C5a 纯品组相比,C5a 纯品+C5aR 拮抗剂组fibronectin(22 188±132 vs 26 091±128) ,Collagen-I(27181±113 vs 31 229±129) 以及TGF-β1(25 013±139 vs 27 855±161) 蛋白表达水平显著降低,差异具有统计学意义(t=2.349,1.618,3.774,均P ＜ 0.05)。结论 补体C5a-C5aR 相互作用可导致hRIFs 细胞增殖、促纤因子TGF-β1表达升高及细胞外基质蛋白生成增加,对肾间质纤维化具有重要意义。     

人肾间质成纤维细胞体外培养及染色体核型分析

目的:体外培养人肾间质成纤维细胞并进行染色体核型分析。方法:实验于2004-06/2005-10在泸州医学院分子病理实验室和中心实验室(国家中医管理局二级实验室)完成。①实验材料:取慢性梗阻性肾病患者手术切除的部分肾脏标本,患者知情同意。研究方案获伦理委员会批准。②实验方法:通过组织块培养法体外分离、纯化并鉴定人肾间质成纤维细胞。③实验评估:观察培养过程中细胞的形态变化、免疫细胞化学方法鉴定波形蛋白、结蛋白和角蛋白的表达及体外培养第2～5代细胞做染色体核型分析。结果:①培养细胞形态学变化:第2～5代细胞形态较为均一,呈长梭形,显微镜下可见1～2个核仁;细胞之间界限清晰,呈鱼群状或栅栏状排列。②免疫细胞化学鉴定结果:免疫细胞化学检测第2代细胞表达波形蛋白强阳性,角蛋白散在灶性个别细胞弱阳性,结蛋白呈阴性表达;第3～5代细胞均表达波形蛋白强阳性,结蛋白和角蛋白呈阴性表达。③核型鉴定结果:第2～5代人肾间质成纤维细胞内含有46条染色体,呈正常人体细胞二倍体核型。结论:经免疫细胞化学鉴定及核型鉴定,体外培养第3～5代人肾间质成纤维细胞不仅达到纯化而且遗传性状稳定。     

胚胎无瘢痕愈合的调控机制研究：（Ⅱ）胎儿皮肤成纤维细胞体外合成胶原的实验研究

目的 探讨胶原合成特征和合成类型在胚胎成纤维细胞的表达。方法 应用^3H-脯氨酸掺入法，Ⅰ、Ⅲ型前胶原放免测定法，观察分析胎儿，成人正常皮肤，增生性瘢痕3种不同来源成纤维细胞的胶原合成情况。结果 与成人比较，胎儿成纤维细胞有更为强大的胶原合成能力（P＜0．01），和较高的Ⅲ型胶原合成比率，（Ⅰ：Ⅲ胎儿组为67％：32％，成人正常皮肤组80％：19％，增生性瘢痕为75％：24％）。结论 胎儿创伤愈合没有明显瘢痕形成，并不能归因于胶原合成的缺如，而胎儿成纤维细胞合成Ⅲ型胶原能力增高可能是胚胎创伤无瘢痕修复的内在机制。     

胚胎无瘢痕愈合的调控机制研究:(Ⅱ)胎儿皮肤成纤维细胞体外合成胶原的实验研究

目的探讨胶原合成特征和合成类型在胚胎成纤维细胞的表达。方法应用3H-脯氨酸掺入法,Ⅰ、Ⅲ型前胶原放免测定法,观测分析胎儿,成人正常皮肤,增生性瘢痕3种不同来源成纤维细胞的胶原合成情况。结果与成人比较,胎儿成纤维细胞有更为强大的胶原合成能力(P<0.01),和较高的Ⅲ型胶原合成比率,(Ⅰ:Ⅲ胎儿组为67%:32%,成人正常皮肤组80%:19%,增生性瘢痕为75%:24%)。结论胎儿创伤愈合没有明显瘢痕形成,并不能归因于胶原合成的缺如,而胎儿成纤维细胞合成Ⅲ型胶原能力增高可能是胚胎创伤无瘢痕修复的内在机制。     

低氧促进大鼠骨骼肌成肌细胞体外增殖及重金属钴的作用

目的:观察低氧促进大鼠骨骼肌成肌细胞增殖的作用,并分析CoCl2对成肌细胞增殖的影响。方法:实验于2005-05/2006-07在解放军军事医学科学院基础医学研究所神经肌肉发育研究室完成。①低氧CO2温箱(Forma Scientific,美国);CoCl2(北京化工厂)。②选取4～5周龄Wistar雄性大鼠5只,脱颈处死无菌切取后腿肌群,剪除脂肪和筋膜,制备单细胞悬液。以连续贴壁法筛选大鼠骨骼肌成肌细胞,接种于96孔板进行单克隆培养。采用成肌细胞特异性标志抗原desmin免疫化学染色,鉴定成肌细胞标志蛋白——结蛋白的表达,弃去desmin阴性的细胞克隆,继续培养desmin阳性的细胞克隆,隔天换液1次,7d进行酶消化传代,获得大量扩增的细胞,并可冻存复苏,用于实验。③以1×107L-1接种于20个35mm培养皿中,接种细胞3h后,将培养皿随机数字表法分为5组:常氧对照组、轻度低氧组、中度低氧组、CoCl2组、轻度低氧 CoCl2组,4皿/组。常氧对照组置于体积分数为0.2的O2常规氧气环境中;轻、中度低氧组分别于低氧温箱中维持体积分数为0.1与0.03的O2低氧环境中;CoCl2组向培养皿中加入终浓度为15μmol/L的CoCl2;轻度低氧 CoCl2组向细胞培养皿中加入终浓度为15μmol/L的CoCl2后,放入体积分数为0.1的O2低氧温箱。低氧培养24,48,72h时,各组取出培养皿进行细胞消化离心,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,血球计数板计数法进行细胞计数。④以1×108L-1接种于8个60mm培养皿中,接种细胞3h后,将培养皿随机数字表法分为2组:常氧对照组、轻度低氧组,4皿/组。两组干预措施同细胞计数过程。低氧培养48h时,两组取出培养皿进行细胞消化离心,流式细胞仪检测细胞周期。结果:①骨骼肌成肌细胞的单克隆培养结果:成肌细胞可在体外存活6个月,增殖旺盛期约为3个月,可传代15次以上。单克隆培养2周后,可以由单个细胞长满96孔板中的1个孔,并不断扩增,最终可以得到细胞类型专一单克隆化的成肌细胞。②成肌细胞特异性标志抗原desmin鉴定结果:镜下不同视野desmin阳性率达100%,即培养的成肌细胞单克隆纯度达100%。③细胞计数结果:与常氧对照组比较,低氧培养24,48,72h时轻、中度低氧组均可明显促进大鼠骨骼肌成肌细胞体外增殖,且轻度低氧组作用尤为明显(t=4.98,P<0.001);CoCl2组无明显变化,但轻度低氧 CoCl2组细胞数量显著增加(t=4.62,P<0.001)。④细胞周期分布:与常氧对照组比较,低氧48h时轻度低氧组处于S期的细胞明显增多[(26.67±0.89)%,(65.43±0.23)%,t=2.36,P<0.01],且增殖指数亦显著上升(33.4%,67.1%,t=2.15,P<0.01)。结论:①轻中度低氧可以促进大鼠骨骼肌成肌细胞的增殖,为体外大量扩增细胞提供了新思路。②CoCl2对骨骼肌成肌细胞没有促增殖作用。     

槲皮素对人结肠癌细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的研究植物化学药物槲皮素对人结肠癌细胞的生长抑制作用和凋亡诱导效应。方法分别用不同浓度的槲皮素对人结肠癌细胞（Lovo细胞株）进行干预,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果与对照组相比,槲皮素对Lovo细胞具有显著的增殖抑制作用（P〈0.05）,细胞增殖抑制随浓度增加、时间延长逐渐降低,呈现量-效、时-效关系。槲皮素引起明显的细胞周期阻滞（P〈0.05）,将细胞周期阻滞在G2/M期。槲皮素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡（P〈0.05）。结论槲皮素对结肠癌Lovo具有增殖抑制效应及凋亡诱导效应,是一种具有发展潜力的抗结肠癌药物。     

卡维地洛抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的实验研究

【目的】探讨卡维地洛对的实验性大鼠（Wistar）心脏成纤维细胞（CFs）增殖及胶原合成的影响。【方法】以12周龄Wistar健康大鼠为研究对象。采用胰酶消化法培养CFs,采用改良的MTT比色法观察CFs的增殖状况,采用3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成功能,3H-脯氨酸（3H-Proline）掺入法测定胶原合成。【结果]CFsMTT吸光值随卡维地洛浓度增加和作用时间延长而减低,并呈浓度和时间依赖性;0．01～10．00μmol／L卡维地洛分别干预72h时,Wistar大鼠CFs 3H-TdR及3H-Proline掺入率均较空白对照组明显减低（分别P〈0．05,P〈0．01）。随着卡维地洛干预浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,呈浓度依赖性。【结论】卡维地洛可显著抑制CFs的DNA合成及细胞增殖,并进一步抑制胶原沉积及逆转左室肥厚。     

硒化壳聚糖对体外培养成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察硒化壳聚糖在成纤维细胞生长过程中的作用。方法:实验于2004-01/12在郧阳医学院附属太和医院完成。选取体外培养的第6代成纤维细胞,分为对照组和药物组。药物组浓度为25,50,100,200和400mg/L,分别加入由培养基稀释成的同等体积不同浓度的硒化壳聚糖,对照组加入等体积培养基。5×108L-1接种于24孔板,培养24h后,加入不同浓度硒化壳聚糖继续培养48h,收集细胞用于电镜观察;5×106L-1接种于96孔板,培养48h后,加入不同浓度的硒化壳聚糖,继续培养24h,分别加入3H-脱氧胸腺嘧啶核苷酸或3H-脯氨酸再作用24h,液闪计数仪测定每分钟计数值来反映细胞增殖及胶原合成的情况。结果:①对细胞增殖的影响:药物组与对照组比较,细胞核均有不同程度的增大,核浆增大,核仁变大,变多,扩张的内质网增多,细胞表面突起增加,线粒体更为丰富,更易见到聚集成团的糖原。②对DNA影响:400mg/L组3H-脱氧胸腺嘧啶核苷酸掺入量高于对照组犤(18658±356.42,10564±356.47)min-1,P<0.01犦;③对细胞胶原合成的影响:100mg/L组3H-脯氨酸掺入量高于对照组犤(2867±224.09,1762±186.22)min-1,P<0.01犦。结论:创面愈合过程中,硒化壳聚糖可促进皮肤成纤维细胞分裂增殖及胶原合成,促进创面愈合。具有量效关系。     

硒化壳聚糖对体外培养成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：观察硒化壳聚糖在成纤维细胞生长过程中的作用。 方法：实验于2004-01／12在郧阳医学院附属太和医院完成。选取体外培养的第6代成纤维细胞，分为对照组和药物组。药物组浓度为25，50，100，200和400mg／L，分别加入由培养基稀释成的同等体积不同浓度的硒化壳聚糖，对照组加入等体积培养基。5&;#215;10^8L^-1接种于24孔板，培养24h后，加入不同浓度硒化壳聚糖继续培养48h，收集细胞用于电镜观察；5&;#215;10^6L^-1接种于96孔板，培养48h后，加入不同浓度的硒化壳聚糖，继续培养24h，分别加入^3H-脱氧胸腺嘧啶核苷酸或^3H-脯氨酸再作用24h，液闪计数仪测定每分钟计数值来反映细胞增殖及胶原合成的情况。 结果：①对细胞增殖的影响：药物组与对照组比较，细胞核均有不同程度的增大，核浆增大，核仁变大，变多，扩张的内质网增多，细胞表面突起增加，线粒体更为丰富，更易见到聚集成团的糖原。②对DNA影响：400mg／L组^3H-脱氧胸腺嘧啶核苷酸掺入量高于对照组[（18658&;#177;356．42，10564&;#177;356．47）min^-1，P〈0．011；③对细胞胶原合成的影响：100mg／L组^3H-脯氨酸掺入量高于对照组[（2867&;#177;224．09，1762&;#177;186.22）min^-1．P〈0．01]。 结论：创面愈合过程中，硒化壳聚糖可促进皮肤成纤维细胞分裂增殖及胶原合成，促进创面愈合,具有量效关系。     

辛伐他汀对大鼠肾间质成纤维细胞增殖及α5整合素表达的影响

目的研究辛伐他汀对培养的大鼠肾间质成纤维细胞TGF-β1激活后细胞增殖及表面α5整合素表达的影响。方法不同浓度辛伐他汀加入到含有TGF-β1培养液培养的大鼠肾间质成纤维细胞,分别采用MTT法及细胞流式仪检测细胞的增殖,RT-PCR法检测大鼠肾间质成纤维细胞表面α5整合素的表达。结果辛伐他汀能抑制由TGF-β1所引起的大鼠肾间质成纤维细胞的增殖,阻止细胞由G1期进入S期。辛伐他汀能显著抑制TGF-β1对大鼠肾间质成纤维细胞表面α5整合素的表达促进作用,同时随着辛伐他汀浓度的增加,抑制作用明显增强。结论辛伐他汀能抑制由TGF-β1所引起的大鼠肾间质成纤维细胞的增殖及细胞表面α5整合素的表达。     

血竭提取物促进成纤维细胞增殖及胶原分泌

背景：血竭为传统医学中生肌方剂的主要成分,长期应用于临床治疗多种难愈性创面,具有确切的疗效,但血竭在创面愈合过程中对正常成纤维细胞分泌胶原的影响,目前未见报道。目的：观察血竭提取物对成纤维细胞增殖及胶原分泌的作用。方法：应用氯仿、乙酸乙酯、乙醇对血竭依次回流提取得到血竭提取液,用DMEM培养液稀释后培养成纤维细胞。将人正常皮肤来源成纤维细胞分别培养于血竭氯仿提取液（氯仿提取组）、血竭乙酸乙酯提取液（乙酸乙酯提取组）、血竭乙醇提取液（乙醇提取组）含1%二甲基亚砜DMEM（含1%二甲基亚砜DMEM组）和正常培养（对照组）条件下。MTT法检测不同血竭提取物在不同质量浓度（0.002,0.02,0.2,2,20 g/L）培养条件下,确定最适合成纤维细胞生长的血竭提取物,并检测在此条件下,成纤维细胞形态、生长曲线、细胞周期、分泌Ⅲ型前胶原水平的变化。结果与结论：血竭乙酸乙酯提取物在0.2-2 g/L范围内,可以促进正常人成纤维细胞增殖,在2 g/L浓度值时促进增殖作用最显著,因此2 g/L乙酸乙酯提取物为最适合成纤维细胞生长的一组血竭提取物。与对照组相比,2 g/L乙酸乙酯提取组成纤维细胞的细胞融合现象增多,细胞浓度增加,S期的细胞比例增加,减少Ⅲ型前胶原表达。提示血竭乙酸乙酯提取物既可促进创面愈合,又不致于过度增生形成病理性瘢痕。