乙型肝炎病毒X蛋白对小鼠足细胞补体调节蛋白CD59和Crry表达的影响

目的 乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)所引起的膜性肾病与原发膜性肾病有所区别,其肾组织中攻膜复合物(C5b-9)阳性率显著低于原发膜性肾病,说明在乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(HBV-MN)中补体的活动受到某种抑制,产生这种差异的机制尚不清楚.本研究旨在探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是否影响足细胞补体调节蛋白CD59和Crry表达,从而抑制补体活化.方法 培养的小鼠足细胞分为腺病毒载体乙型肝炎病毒X基因(Ad-HBx)转染组(Ad-X组)、空白足细胞组(B组)和腺病毒空载体转染组(Ad组),P38、PI-3K、ERK1/2通路抑制剂(SB203580,LY294002,U0126)及二甲基亚砜(DMSO)干预组分别标记为SB组、LY组、U0126组和DMSO组.RT-PCR和流式细胞术检测Ad-HBx转染对CD59和Crry基因和蛋白的表达,MTT法检测其对补体激活的影响;观察P38、PI-3K、ERK1/2通路抑制剂及DMSO对足细胞CD59和Crry表达的影响.结果 B组、Ad组和Ad-X组CD59表达率分别为(17.71±3.81)%、(18.29±3.36)%和(45.7±9.01)%;B组、Ad组和Ad-X组Crry蛋白表达率分别为(18.00±2.31)%、(21.78±2.01)%和(47.45±9.95)%,Ad-X组CD59和Crry蛋白表达率显著高于B组和Ad组(P值均＜0.005);Ad-X组CD59和Crry mRNA光密度明显强于B组和Ad组;SB组、LY组、U0126组和DMSO组CD59表达率分别为(17.35±1.24)%,(46.19±9.77)%,(43.03±6.83)%和(40.04±6.39)%;Crry蛋白表达率分别为(18.14±3.56)%,(31.95±1.68)%,(31.95±1.69)%和(37.14±3.92)%,与Ad-X组比较,SB组CD59和Crry蛋白表达率明显降低(P值均＜0.05),MTT法提示在各个血清稀释点上,Ad-X组细胞裂解抑制率均明显高于B组和Ad组(P值均＜0.05).结论 HBx可能通过活化P38MAPK通路上调小鼠足细胞CD59和Crry蛋白和基因的表达,抑制补体介导的足细胞裂解,这可能导致HBV在足细胞潜伏感染,不易被清除,从而在HBV-GN发生中发挥作用.     

电点燃致癎大鼠海马TNF-α mRNA表达和细胞凋亡观察

目的测定杏仁基底外侧核电点燃癫癎大鼠海马TNF-α mRNA表达和细胞凋亡情况,探讨TNF-α/TNF-R1介导的死亡信号途经在癫癎中的作用.方法建立大鼠杏仁核点燃癫癎模型,采用半定量RT-PCR法检测电点燃大鼠海马组织的TNF-α mRNA表达,用原位末端标记法(TUNEL)检测该部位细胞凋亡变化.结果电点燃大鼠海马TNF-α mRNA表达升高,点燃大鼠海马细胞凋亡明显增多.结论在电点燃癫癎大鼠模型中,TNF-α可能参与了点燃过程,海马细胞凋亡增加,这些与癫癎发作密切相关.     

干扰素α对乙型肝炎病毒X蛋白诱导小鼠足细胞系凋亡的影响及分子机制研究

目的 观察干扰素α（INF-α）对乙型肝炎病毒X （HBx）蛋白诱导的小鼠足细胞系（MPC5）凋亡的影响及其分子机制。方法 以携带HBx基因的pEX质粒转染MPC5细胞,采用逆转录PCR检测不同时间点HBx mRNA表达水平。将MPC5细胞分为对照组：正常条件下培养的MPC5细胞;INF-α组：正常MPC5细胞与INF-α共培养;HBx组：HBx诱导的MPC5细胞;HBx+INF-α组：HBx诱导的MPC5细胞与INF-α共培养。不同实验条件下干预48 h后,采用流式细胞术检测各组MPC5细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测足细胞裂孔隔膜相关蛋白（nephrin、CD2AP、synaptopodin）和细胞骨架相关蛋白（TRPC6）的mRNA及其蛋白的表达。结果 pEX-HBx转染MPC5细胞后48 h HBx mRNA表达最高（P < 0.05）。HBx组MPC5细胞凋亡率显著高于对照组、INF-α组和HBx+INF-α组（P < 0.05）。与对照组和INF-α组相比,HBx组nephrin、synaptopodin、CD2AP mRNA及其蛋白的表达水平明显降低,TRPC6 mRNA及其蛋白的表达水平明显增高（P < 0.05）。与HBx组相比,HBx+INF-α组nephrin、synaptopodin、CD2AP mRNA及其蛋白的表达水平明显增高,TRPC6 mRNA及其蛋白的表达水平明显降低（P < 0.05）。结论 INF-α可抑制HBx诱导的MPC5细胞凋亡,其机制可能与INF-α可调节HBx诱导的足细胞裂孔隔膜相关蛋白（CD2AP、nephrin、synaptopodin）和细胞骨架相关蛋白（TRPC6）的异常表达恢复正常有关。     

病毒性心肌炎患儿血清巨噬细胞移动抑制因子、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β表达及其意义

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、TNF-α、IL-1β在病毒性心肌炎(VM)患儿血清中表达的意义.方法 收集衡阳市中心医院和南华大学第一附属医院收治的30例急性期和20例恢复期VM患儿及30例健康儿童血清,采用ELISA测定其血清MIF、TNF-α、IL-1β水平,采用日立7180型全自动生化分析仪检测磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB),并与30例健康儿童作对照.结果 VM急性期患儿血清MIF[(136.7±32.2) ng/L]、TNF-α[(247.6±48.2) ng/L]、IL-1β[(19.7±4.4) ng/L]及CK-MB[(34.2±9.7) U/L]水平均明显高于恢复期及健康对照组,有显著性差异(F=17.2,21.4,13.5,14.1 Pa＜0.01),且血清MIF、TNF-α、LI-1β及CK-MB水平随病情加重而增高,MIF与CK-MB,TNF-α与CK-MB、IL-1β与CK-MB均呈正相关(r=0.68,0.82,0.73 Pa＜0.05);VM恢复期MIF[(41.8±8.2) ng/L]、TNF-α[(67.5±12.1) ng/L]、IL-1β[(6.4±1.2) ng/L]及CK-MB[(12.6±4.1) U/L]水平与健康对照组比较,无显著性差异(Pa＞0.05),且MIF、TNF-α、IL-1β与CK-MB无相关性(Pa＞0.05).结论 VM患儿存在细胞免疫功能紊乱,MIF、TNF-α、IL-1β可能参与VM发病过程,并可作为病情判断及疗效的观察指标之一.     

载体介导的RNA干扰技术对人类髓系白血病HL-60细胞端粒酶反转录酶基因、蛋白表达和凋亡的影响

目的 探讨由载体介导的靶向端粒酶反转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)技术对白血病HL-60细胞hTERT基因、蛋白表达及细胞凋亡的影响.方法用已经构建好的表达针对hTERT基因siRNA的质粒载体经转染试剂RNAi-Mate转染HL-60细胞;以转染后24 h、72 h、120 h细胞作为实验组,以空质粒、转染试剂及空白组作对照,采用反转录-PCR(RT-PCR)检测细胞hTERT基因mRNA表达,Western blot检测细胞hTERT蛋白表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡.结果转染后24 h、72 h、120 h实验组HL-60细胞hTERT基因mRNA相对表达水平分别为0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06,质粒组、转染试剂组、空白对照组分别为0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19;24 h、72 h、120 h实验组蛋白相对表达水平分别为0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08,质粒组、转染试剂组、空白对照组分别为0.75±0.11、0.76±0.15、0.73±0.14;24 h、72 h、120 h实验组,质粒组,转染试剂组,空白对照组凋亡率分别为(11.95±3.61)%、(14.61±2.97)%、(12.82±3.01)%、(4.25±2.16)%、(5.09±1.97)%、(3.76±1.84)%.24 h、72 h、120 h实验组hTERT mRNA、蛋白表达水平均低于各对照组(Pa＜0.05),细胞凋亡率高于各对照组(Pa＜0.05),hTERT mRNA、蛋白表达水平、细胞凋亡率实验组组间比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05);质粒组、转染试剂组hTERT mRNA、蛋白表达水平、细胞凋亡率与空白对照组比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术能在体外抑制HL-60细胞hTERT基因和蛋白的表达,增加细胞凋亡.     

胆红素对早产儿NOD样受体2介导的炎症信号通路的影响北大核心CSCD

目的探讨胆红素对早产儿NOD样受体2（NOD2）介导的炎症信号通路的影响。方法收集2016年4月至2017年1月苏州大学附属儿童医院新生儿科收治的15例早产儿外周血各2 mL,分离外周血单个核细胞,平均分为6组,分别为空白对照组（A组）、胞壁酰二肽（MDP）对照组（B组）、102 μmol/L胆红素组（C组）、102 μmol/L胆红素＋MDP组（D组）、153 μmol/L胆红素＋MDP组（E组）、255 μmol/L胆红素＋MDP组（F组）。A组、B组加入缓冲液,C组、D组、E组、F组分别加入102 μmol/L、102 μmol/L、153 μmol/L、255 μmol/L胆红素溶液孵育1 h,弃上清,A组、C组加入培养基液,B组、D组、E组、F组加入等量MDP激动剂刺激细胞24 h,分别收集细胞和上清液,实时定量-聚合酶链反应测定细胞中NOD2 mRNA的表达量,酶联免疫吸附法测上清液中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达水平。结果经MDP激动剂和102 μmol/L、153 μmol/L、255 μmol/L的胆红素刺激后,NOD2 mRNA的表达量（7.16±3.08、6.19±1.99、7.02±4.04、6.84±1.81）与空白对照组（7.46±3.70）比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。经MDP激动剂刺激后,B组IL-6表达水平（5.13±2.36）较空白对照组（3.84±1.44）明显上升,差异有统计学意义（P〈0.05）;2组TNF-α水平比较差异无统计学意义（4.85±2.47比4.04±2.26,P〉0.05）。经102 μmol/L的胆红素刺激后,IL-6、TNF-α表达水平与空白对照组比较差异均无统计学意义（3.26±1.06比3.84±1.44、3.45±1.84比4.04±2.26,均P〉0.05）;经153 μmol/L、255 μmol/L胆红素刺激后,IL-6、TNF-α表达水平（IL-6：2.58±1.33、2.16±0.94;TNF-α：2.32±1.49、2.42±1.42）较空白对照组（3.84±1.44、4.04±2.26）明显降低,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论胆红素对NOD2无明显抑制作用,低浓度胆红素对IL-6、TNF-α无明显抑制作用,但高浓度胆红素抑制炎性因子IL-6、TNF-α的分泌,高胆红素可能通过抑制单核细胞表面NOD2介导的炎症信号通路传导来抑制机体抗感染免疫应答能力。     

肿瘤坏死因子-α对人脂肪细胞STEAP4蛋白膜转位的影响及其机制

目的 探讨肿瘤坏死因子-α (TNF-α)对人脂肪细胞STEAP4蛋白膜转位的影响,并分析其可能的机制.方法 应用1-甲基3-异丁基黄嘌呤(MIX)、地塞米松、胰岛素、罗格列酮方案诱导人前体脂肪细胞分化,以人重组TNF-α或加用细胞外信号调节蛋白激酶( ERK)抑制剂PD-98059干预人成熟脂肪细胞24 h,采用Western blot技术检测细胞膜蛋白与总蛋白中STEAP4蛋白的表达.结果TNF-α干预能显著促进人成熟脂肪细胞中STEAP4蛋白向细胞膜转位;ERK抑制剂PD-98059联合TNF-α与单独应用TNF-α诱导人成熟脂肪细胞的细胞膜蛋白和总蛋白中STEAP4蛋白的表达水平比较均无显著差异.结论 TNF-α干预显著促进人成熟脂肪细胞中STEAP4蛋白的膜转位,初步排除丝裂原活化蛋白激酶信号途径参与这一调控机制.     

妊娠期肝内胆汁淤积对新生儿肝功能和肿瘤坏死因子-α的影响

目的 探讨母亲妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)对新生儿肝功能和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 选择2009年3月至2010年8月在我院行剖宫产的ICP产妇所生的足月新生儿60例为观察组,因骨盆狭窄、臀位等行剖宫产的足月新生儿60例为对照组,分别测定并比较两组脐动脉血清胆汁酸(TBA)、pH值、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和TNF-α水平.结果 观察组脐动脉血清TBA、ALT、AST、LDH、TNF-α均明显高于对照组[TBA:(11.9±1.8)μmol/L比(5.0±0.8)μmol/L,ALT:(232.6±17.9)U/L比(104.9±19.0)U/L,AST:(175.4±12.7)比(91.3±7.8)U/L,LDH:(417.7±10.5)IU/L比(233.1±15.6)IU/L,TNF-α:(11.1±1.5)ng/ml比(6.9±1.7)ng/ml,P均<0.05],pH值低于对照组[(7.22±0.10)比(7.25±0.03),P<0.05].结论 母亲ICP可能引起新生儿肝功能异常和TNF-α分泌增加.     

细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059对脓毒症新生大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨脓毒症新生大鼠脑组织炎性细胞因子TNF-α的表达水平及细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059对其表达的影响。方法行盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症新生大鼠模型。将74只10日龄新生大鼠随机分为对照组(6只)、CLP组(34只)和PD98059组(34只)。CLP组只采用CLP措施,PD98059组新生大鼠于CLP处理前0.5 h腹腔内注射入PD98059,0.3mg·kg-1。于CLP处理后2 h、4 h、6 h、8 h,CLP组和PD98059组各取6只新生大鼠处死,取出脑组织,采用酶联免疫吸附试剂盒检测脑组织TNF-α蛋白的表达,反转录PCR检测其mRNA表达。结果对照组新生大鼠脑组织仅微量表达TNF-αmRNA及TNF-α蛋白。CLP组新生大鼠脑组织TNF-αmRNA及其蛋白的表达量于CLP处理后2 h开始升高,6 h达高峰,8 h下降,均明显高于对照组(P<0.001、0.05)。PD98059组各个时间点TNF-αmRNA及其蛋白的表达量均明显低于CLP组(Pa<0.001、0.05)。实验10 d,CLP组和PD98059组未处死的20只新生大鼠共有10只大鼠死亡。其中CLP组8只死亡,死亡率为80%(8/10);PD98059组死亡2只,死亡率为20%(2/10)。2组间死亡率比较差异有统计学意义(P=0.023)。结论新生大鼠脓毒症早期,脑组织中炎性细胞因子TNF-α表达上调,而ERK抑制剂PD98059可下调其表达,缓解脑损伤,降低其死亡率。     

转录因子T-bet和GATA-3对婴幼儿喘息性支气管炎的免疫调控作用

目的探讨转录因子T-bet和GATA-3对小儿喘息性支气管炎的免疫调控作用。方法对32例喘息性支气管炎(喘支组)和30例正常儿童(对照组)抽取抗凝静脉血5 mL,Ficoll分离外周血淋巴细胞,以终质量浓度为100 mg/L的植物血凝素(PHA)刺激48 h,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测淋巴细胞T-bet、GATA-3的mRNA表达水平。结果喘支组淋巴细胞培养上清液IFN-γ水平[(528±164)ng/L]低于对照组[(870±203)ng/L](P<0.05),而IL-4水平[(106±29)ng/L]明显高于对照组[(47±15)ng/L](P<0.01);喘支组和对照组淋巴细胞T-bet mRNA水平分别为(0.11±0.03)(、0.17±0.03),GATA-3 mRNA分别为(0.54±0.09)、(0.41±0.07),提示喘支组T-bet mRNA表达较对照组减少(P<0.05),而GATA-3 mRNA明显高于对照组(P<0.01);喘支组IFN-γ水平与T-bet mRNA表达I、L-4与GATA-3 mRNA表达均呈正相关(r=0.57,0.60 P均<0.01);IFN-γ与IL-4水平、T-bet mRNA与GATA-3 mRNA表达均呈负相关(r=-0.38,-0.46 P均<0.05)。结论1.喘支组患儿淋巴细胞合成IL-4水平增高,IFN-γ减少,存在以Th2细胞过度分化为特征的T辅助细胞分化失衡。2.喘支组患儿T细胞分化失衡受到核转录因子T-bet和GATA-3的调控,T-bet表达减少可能是一重要因素。     

TSG-6基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化及TNF-α对其调节作用的研究

目的观察3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中TSG-6基因mRNA表达水平的变化,探讨TNF-α对成熟脂肪细胞中TSG-6基因表达水平的调节作用.方法体外培养3T3-L1脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的基础上,应用重组TNF-α干预分化成熟的脂肪细胞,采用RT-PCR技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间脂肪细胞中TSG-6基因的表达水平.结果 (1)随脂肪细胞逐渐分化成熟,TSG-6 基因mRNA表达水平逐渐升高.TSG-6 基因表达水平除在细胞分化第0～2天、第3～5天、第4～6天和第7～10天各时段内差异无显著意义(P>0.05)外,其余各时段之间表达水平,差异均有显著意义(P＜0.05);(2)不同浓度重组TNF-α(0.1～10.0 ng/ml)均能显著抑制成熟脂肪细胞中TSG-6基因mRNA的表达,除外TNF-α浓度1.0 ng/ml时6～24 h时段,其抑制作用呈现随TNF-α浓度增加和刺激时间延长而明显增强的总体趋势.TNF-α浓度为0.1 ng/ml时,TSG-6基因表达水平6 h内下降33.73%,12 h内下降97.39%;TNF-α浓度为1.0 ng/ml时,TSG-6基因表达水平6 h内下降78.68%,并持续至24 h;TNF-α浓度达10.0 ng/ml时,TSG-6基因表达水平2 h内即下降96.27%,TSG-6基因的表达几乎被完全抑制.结论 (1)TSG-6基因可能参与脂肪细胞分化及脂质形成过程;(2)TNF-α对脂肪细胞中TSG-6基因表达具有抑制作用,其抑制效应总体趋势上呈现剂量反应性特征.     

三氧化二砷通过毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶通路上调KG1a细胞UL16结合蛋白1的表达

目的观察三氧化二砷(ATO)对急性髓系白血病细胞KG1a细胞表面NKG2D配体UL16结合蛋白1(ULBP1)表达的影响,探讨其调节ULBP1表达的分子机制。方法常规体外培养KG1a细胞,采用细胞增殖/毒性检测试剂(CCK8)检测不同浓度ATO对KG1a细胞的增殖抑制率;应用实时荧光定量反转录(RT)-PCR方法检测KG1a细胞ULBP1 mRNA表达的影响;流式细胞术检测ATO对KG1a细胞表面ULBP1蛋白表达的影响。加入毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶(ATM/ATR)抑制剂咖啡因,观察其是否影响ATO对KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达。采用Western blot法观察ATO对KG1a细胞中CHK1、CHK2蛋白及其磷酸化表达的影响。结果不同浓度(1、2、3、4、5μmol/L)ATO均可抑制KG1a细胞的增殖,呈浓度依赖性,其对KG1a细胞的半数抑制浓度(IC50值)为2.7μmol/L。荧光定量RT-PCR法检测结果示ATO可使KG1a细胞ULBP1 mRNA的相对表达水平升高,ATO在浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,与未加药组比较,ULBP1 mRNA相对表达水平分别升高至(1.86±0.30)倍、(3.02±0.71)倍、(3.16±0.75)倍、(4.80±0.70)倍、(3.70±0.89)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05);与未加药组相比,当ATO浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。咖啡因预先处理KG1a细胞2 h再联合ATO共同孵育KG1a细胞24 h,ULBP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。在咖啡因浓度为8 mmol/L时,ULBP1 mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(9.55±0.38)倍降为(6.36±0.93)倍,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果发现,当咖啡因浓度分别为2、4、8 mmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.50±0.08)倍分别降为(2.17±0.07)倍、(2.02±0.06)倍、(1.75±0.06)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CHK1和CHK2蛋白相对表达水平均随ATO浓度的升高而降低,而CHK1和CHK2磷酸化蛋白的相对表达水平均随ATO浓度的升高而升高。结论ATO诱导上调KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达,ATM/ATR-CHK1/CHK2通路可能参与这一过程。     

哮喘患儿CD4+T细胞增殖及活化诱导凋亡机制研究

目的 通过体外细胞增殖及活化诱导细胞凋亡试验探讨小儿哮喘免疫炎症及Th细胞过度活化的相关机制.方法 哮喘组患儿21例,年龄(9.6±23)岁;正常对照组20例,年龄(9.7±1.9)岁.流式液相多重蛋白定量技术检测Th1/Th2/Th17细胞因子;磁珠分离CD4+T细胞,PHA结合anti-CD3体外刺激后分析其增殖能力及活化后凋亡情况;最后以相对定量PCR测定凋亡及增殖相关蛋白Fas、FasL、Bcl-2的mRNA表达情况.结果 哮喘组患儿血清细胞因子水平较正常对照组显著增高[IL-4:(2451±1.052)ng/Lvs(1.796±0.615)ng/L,P=0.018;IL-10:(1.920±0.813)ng/Lvs(1.390±0.162)ng/L,P=0.006;TNF:(5.112±5.842)ng/Lvs(1.506±0.551)ng/L,P=0.009];哮喘组CD4+T细胞增殖能力显著强于正常对照组[OD450:(0.498±0.052)vs(0.274±-0.032),P＜0.001],而活化诱导后细胞凋亡率则显著低于正常对照组[(35.62±0.05)％vs(65.28±3.85)％,P＜0.001];哮喘组患儿CD4+T细胞Fas mRNA表达较正常对照组显著降低,而Bcl-2表达则显著高于正常对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.001),FasL表达差异无统计学意义(p＞0.05).结论 哮喘患儿CD4+T细胞Fas表达降低及Bcl-2表达升高在一定程度上抑制了Th细胞活化后凋亡并且促进其增殖,而凋亡抑制及细胞增殖可能导致了哮喘患儿Th细胞过度活化和炎性浸润加剧.     

二十碳五烯酸对E.coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1 mRNA的影响

目的探讨二十碳五烯酸(EPA)对黏附侵袭性大肠杆菌(AIEC)LF82感染后肠上皮细胞(Caco-2)紧密连接蛋白(ZO-1)表达的影响。方法用Caco-2细胞株建立体外肠上皮细胞紧密连接模型,分为EPA处理组,EPA 0、25、50、100、200μmol/L干预96 h;以及EPA(EPA 0、25、50、100、200μmol/L)+E.coli LF82联合处理组,在不同浓度EPA干预96 h的基础上,予E.coli LF82分别干预0 h、6 h、12 h。通过细胞形态学观察,MTT法测定细胞生长曲线,以及细胞膜两侧碱性磷酸酶(ALP)活性检测对Caco-2细胞模型进行评价。流式细胞术检测不同浓度EPA对Caco-2细胞凋亡的影响。RT-q PCR检测EPA和/或E.coli LF82作用于Caco-2细胞后ZO-1 m RNA的表达情况。酶联免疫吸附法检测Caco-2细胞上清中TNF-α的变化。结果 EPA25、50μmol/L处理后,Caco-2细胞存活率均高于0浓度组,且增高呈浓度依赖性(P0.05);EPA100、200μmol/L处理组的细胞存活率下降呈浓度依赖性,均低于0浓度组(P0.05)。EPA浓度为100、200μmol/L时,细胞凋亡率较0浓度组增加(P0.05)。单独E.coli LF82干预Caco-2细胞6 h、12 h后,ZO-1 m RNA表达随处理时间延长而减少,均低于未处理组(P0.05)。EPA 25、50μmol/L干预联合E.coli LF82处理6 h或12 h,Caco-2细胞的ZO-1 m RNA表达随EPA浓度增加而增加,均高于E.coli LF82单独处理组(P0.05)。单独E.coli LF82处理6 h、12 h组的TNF-α分泌随干预时间延长而增加,均高于未处理组(P0.05)。EPA25、50μmol/L联合LF82处理6 h或12 h,细胞上清液中TNF-α分泌量随EPA浓度的增加而减少,均少于单独LF82处理组(P0.05)。结论 EPA能有效预防E.coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接的破坏,抑制炎症因子的分泌,对肠黏膜屏障有一定的保护作用。     

心肌损伤患儿E-选择素、白细胞介素-6及肿瘤坏死因子-α检测的临床价值

目的 评价心肌损伤患儿E-选择素、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)检测的临床价值.方法 检测62例心肌损伤患儿(心肌损伤组)和62例同期无心肌损伤的患儿(对照组)的E-选择素、IL-6和TNF-α表达水平,使用ROC曲线分析E-选择素、IL-6和TNF-α在心肌损伤中患儿的诊断价值.结果 心肌损伤组和对照组患儿E-选择素分别为(45.16±5.34)μg/L、(15.37 ±4.65) μg/L,两组间差异有统计学意义(P ＜0.001);IL-6分别为(21.31±5.28) ng/L、(17.09 ±4.62) ng/L,TNF-α分别为(27.22±8.56) ng/L、(21.46±8.08) ng/L,两组间差异均无统计学意义(P均＞0.05).ROC曲线分析显示E-选择素诊断心肌损伤的曲线下面积为0.945,95％ CI为0.899～0.991,敏感性、特异性、约登指数分别为0.801、0.999和0.800,诊断界值为29.93 μg/L.结论 E-选择素可作为心肌损伤的诊断参考指标之一,具有较高的诊断价值.IL-6及TNF-α对心肌损伤的诊断价值有限.     

嘌呤霉素损伤小鼠肾小球足细胞系中足细胞α-辅肌动蛋白4的表达与分布

目的 观察嘌呤霉素(PAN)对足细胞α-辅肌动蛋白4(α-actin-4)mRNA表达和分布的影响,探讨α-actin-4与足细胞损伤的关系.方法 将体外培养肾小球足细胞系(MPC5)随机分为实验组与对照组.实验组采用PAN刺激(剂量为50 mg/L),分别于8h、24 h和48 h观察细胞形态,提取总RNA和细胞免疫组织化学观察α-actin-4的分布.对照组用100 mL/L FBS的RPMI 1640培养液培养.应用Image J图像软件处理细胞图像,计算2组随机选择的30个细胞在上述3个时间点200倍镜下的细胞相对面积,实时定量荧光聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光法检测α-actin-4 mRNA表达和分布变化.结果 对照组足细胞生长情况良好,胞体呈不规则星形,与增殖状态足细胞比较,细胞体和细胞核均显著增大,自胞体伸出树枝样突起,相邻细胞间足突相互连接.实验组细胞胞体缩小,足突回缩、消失,细胞间失去相互连接.2组间0-actin-4 mRNA各时间点表达比较,8h差异无统计学意义(P＞0.05),24 h、48 h差异有统计学意义(P均＜0.01),实验组在24 h、48 h后α-actin-4 mRNA表达升高.对照组α-actin-4在胞质内呈细丝状均匀分布,在足突中呈放射状分布;8h后在实验组α-actin-4压力丝纤维变短,排列紊乱,PAN刺激24 h后细胞质中α-actin-4分布明显减少,刺激48 h后出现细胞质分布缺失.结论 α-actin-4表达分布的异常与PAN损伤足细胞的时间呈正相关,α-actin-4是足细胞损伤机制中的一个重要分子.     

大黄治疗婴儿肝炎综合征的作用机制

目的探讨大黄治疗婴儿肝炎综合征(IHS)的机制。方法采用全自动生化分析仪检测52例IHS患儿及18例非IHS择期手术前婴儿(对照组)血清总胆红素(TB)、结合胆红素(DB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆汁酸(TBA)水平,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血清及胆汁IL-6、TNF-α水平,硫代巴比妥酸比色法(TBA法)和黄嘌呤氧化酶法分别检测其血清及胆汁丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果大黄治疗后IHS患儿血清TB、DB、ALT、γ-GT、TBA分别为(58.7±20.9)μmol/L、(36.7±13.1)μmol/L、(56.8±22.1)U/L、(83.2±22.7)IU/L、(88.6±31.5)μmol/L,均较治疗前显著降低(Pa<0.05),血清及胆汁IL-6、TNF-α、MDA分别为(20.71±7.93)ng/L、(246.74±83.15)ng/L、(2.60±0.85)μmol/L、(81.96±17.05)ng/L、(627.91±193.37)ng/L、(6.32±2.05)μmol/L,均较治疗前降低(Pa<0.05),SOD与治疗前比较均升高[分别为(107.2±22.7)μU/L、(169.8±57.1)μU/LPa<0.05]。结论IL-6、TNF-α、MDA、SOD参与了IHS的病理过程,大黄通过降低血清及胆汁中IL-6、TNF-α、MDA水平,提高SOD水平而起到退黄护肝的作用。     

肾上腺素对内毒素致大鼠肠道损害的保护作用

目的 探讨肾上腺素对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)所致大鼠肠道损害的保护作用及其作用机制.方法 50只SD大鼠随机分为5组(每组10只):对照组:大鼠静脉输注0.9％生理盐水24 ml/(kg·h);LPS组:大鼠静脉注射LPS 6m/kg后,静脉输注生理盐水2.4 ml/(kg·h);低、中和高剂量肾上腺素组:大鼠静脉注射LPS 6 mg/kg后,分别静脉输注肾上腺素0.12 μg/(kg·min)、0.3μg/(kg·min)和0.6μg(kg· min).在LPS注射前、注射后2h和注射后6h3个时点取血,检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-10水平,并在24h观察肠道的组织病理学变化.结果 LPS组大鼠在LPS注射后2h血清TNF-α浓度为(1164±145) ng/L,IL-1β浓度为(521±68)ng/L,IL-10浓度为(303±20) ng/L,较对照组均明显升高(P＜0.05).病理结果显示,LPS组小肠黏膜充血、水肿、出血及炎症细胞浸润,上皮细胞坏死、脱落.高剂量肾上腺素组2h血清TNF-α浓度为(576±105) ng/L,2h和6h的IL-10浓度分别为(424±29) ng/L和(24.5±14) ng/L,与LPS组相比血清TNF-α水平明显降低(P＜0.05)且IL-10水平明显升高(P＜0.05),但IL-1β水平无明显变化(P＞0.05).高剂量肾上腺素组大鼠肠道病理损伤明显减轻.中、低剂量肾上腺素组各时间点血清细胞因子水平与LPS组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),未见肠道病理损害减轻.结论 肾上腺素可以通过抗炎作用减轻LPS素诱导的肠道损害.     

TNF-α与细胞凋亡基因产物Fas、FasL蛋白在儿童再生障碍性贫血的表达研究

目的探讨TNF-α和Fas/FasL系统的表达与再生障碍性贫血(ziplastic anemia,AA)的关系。方法采用ELISA方法检测AA患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度,采用流式细胞术测定骨髓CD3+4细胞Fas、FasL的表达率。结果AA患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度和CD3+4细胞Fas、FasL的表达率明显高于对照组(P<0.05),但重型AA(SAA)组与慢性型AA(CAA)组之间无差别。各型AA患者TNF-α浓度与CD3+4Fas+表达率呈正相关(r=0.542P=0.011)。结论TNF-α和Fas/FasL系统介导的凋亡参与了AA患者骨髓造血干细胞的凋亡过程。结果导致造血干细胞减少,骨髓造血功能衰竭。     

反复热性惊厥大鼠海马白细胞介素-6 和肿瘤坏死因子-α水平的变化

目的探讨反复热性惊厥(FS)大鼠海马IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。方法将43只SD大鼠随机分为正常对照组(n=10,NC组)、高热对照组(n=12,HC组)和热性惊厥组(n=21,FS组)。分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和逆转录酶多聚链反应(RT-PCR)检测大鼠海马IL-6和TNF-α水平及IL-6 mRNA、TNF-αmRNA水平。结果1.FS与HC组大鼠海马IL-6水平[分别为(53.21±8.32)ng/mg、(56.37±2.84)ng/mg]明显高于NC组[(44.55±4.11)ng/mg](P<0.01,0.05),FS与HC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠海马IL-6 mRNA水平间比较差异无统计学意义(Pa>0.05)。2.各组大鼠海马TNF-αmRNA及其蛋白水平比较均无统计学意义(Pa>0.05)。结论反复FS对大鼠海马IL-6和TNF-α表达无明显影响,IL-6和TNF-α可能不参与FS相关脑损伤的产生过程。