人浸润型淋巴瘤细胞培养方法的改进

人浸润型淋巴瘤(简称TIL)细胞,经过一定时间体外培养后,保留约25％的细胞,定期加入适宜的培养液进行繁殖。另将一定量的TIL细胞转移到大培养瓶内,加入培养液,定期分瓶繁殖,并补充入原培养瓶内的培养液或细胞以促进或激活其中的TIL细胞,混合后置于37℃5％CO_2培养箱中。原培养瓶中pH应小于7,细胞密度为1×10~6个/ml或以上。按上述方法培养的细胞上清液中含有白介素-2的重组体,TIL细胞至少可达2×10~(11)个。该方法使原一个周期的培养所需     

丹参注射液对肿瘤浸润淋巴细胞的体外扩增及抗肿瘤作用

目的观察丹参注射液对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的体外扩增及抗肿瘤免疫作用,为扩大该药的临床应用范围提供依据.方法从癌症患者恶性胸水中分离获取TIL和自体瘤细胞,观察丹参注射液对TIL体外长期存活、扩增及抗肿瘤作用的影响.结果(1)丹参注射液可使TIL体外长期存活(>17d).(2)丹参注射液可使TIL在10d内持续扩增并在11～15d保持较高水平.TIL在完全培养剂内则在1周内死亡.(3)扩增后的TIL在体内外的抗肿瘤活性均明显增强,作用类似IL2.结论丹参注射液可明显促进TIL的体外扩增及抗肿瘤作用,可作为TIL的中药促进剂来替代IL2.     

香菇多糖与IL-2合用对肺癌浸润淋巴细胞抗瘤活性的影响

目的探讨香菇多糖与IL-2合用对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)抗瘤活性的影响。方法将TIL分别置于含IL-2或IL-2加香菇多糖培养液中培养30d,观察TIL的扩增能力、抗瘤活性的变化。结果IL-2加香菇多糖培养的Til平均扩增倍数和抗瘤活性均明显高于IL-2培养的TIL。IL-2加香菇多糖培养的TIL对自体瘤细胞,K562和Raji细胞的最大杀伤活性分别为67.18±14.73％,71.25±15.86％和66.15±15.07％;而单纯IL-2培养的TIL对各种靶细胞的最大杀伤活性分别为43.81±12.17％,50.83±13.56％和45.41±13.76％。两组相比,差异显著(P＜0.05)。结论香菇多糖与IL-2合用具有促进TIL扩增,增强其抗瘤活性的作用。     

树突状细胞活化肝癌肿瘤浸润淋巴细胞抗瘤免疫的体外研究

目的　研究负载肿瘤抗原的树突状细胞 (DC)对原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)体外增殖和细胞毒作用的影响。方法　联合应用GM -CSF和IL - 4对原发性肝癌病人外周血分离的单核细胞进行体外诱导 ,加入自体癌细胞匀浆粗提物进行刺激 ,制备负载肿瘤抗原的DC后 ,与自体TIL在含有低浓度IL - 2的完全培养基中混合培养 ,计数TIL增殖数量 ,ELISA法检测培养上清中IFN -γ和TNF -α的含量 ,LDH法测定TIL对自体肝癌细胞、K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用 ,与单纯在含有低浓度IL - 2的完全培养基中培养的TIL进行比较。结果　TIL在含低浓度IL - 2的完全培养基中与负载肿瘤抗原的DC混合培养 ,较单纯在含低浓度IL - 2完全培养基中培养增殖效果明显 (P <0 .0 1) ;分泌IFN -γ和TNF -α的量明显提高 (P <0 .0 1) ;对自体肝癌细胞的细胞毒作用显著性增强 (P <0 .0 1) ;两组TIL对自体肝癌细胞的细胞毒作用明显高于对K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用 (P <0 .0 5 ) ,对K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论　负载肿瘤抗原的DC与TIL混合培养 ,可增强TIL的抗肿瘤活性 ,且具有促增殖作用。     

自体TIL治疗恶性胸(腹)腔积液的临床实验研究

目的:探索CD3单抗和IL-2联合诱导、活化的TIL治疗恶性胸(腹)腔积液的最佳培养时间和临床疗效。方法:抽取患者胸(腹)腔积液分离TIL,用含rIL-2、CD3单抗的1 640完全培养液培养、扩增4周以上,收获细胞局部注入治疗恶性胸腹腔积液,共15例。结果:TIL培养至30 d时扩增倍数最高、杀伤活力最强;治疗后完全缓解(CR):9例,占60%,部分缓解(PR):4例,占27%。总有效率87%。结论:TIL体外诱导、培养30 d,用于治疗恶性胸腹腔积液,效果明显,安全,无毒副作用。     

癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞的生物学特性研究

目的 :探讨癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)的生物学特性 ,以便更好地应用于临床。方法 :用低浓度白细胞介素 2 (IL - 2 )诱导培养癌性胸水TIL ,按常规法计数TIL细胞增殖量 ,采用流式细胞仪分析TIL细胞表型及MTT法检测其杀伤细胞活性。结果 :经低浓度IL - 2 (10 0IU/ml)诱导培养TIL 2 1d后 :TIL增殖倍数为2 130± 1140 ,大于 10 0 0倍占 72 %。CD3 无显著性变化 (P >0 .0 5 ) ,CD4 、CD8有显著性差异 (P <0 .0 1) ,而CD4 /CD8比值高达 3.5 3± 0 .82 ,并且在 2 1d时TIL具有较高的细胞毒性。结论 :癌性胸水TIL体外诱导培养3周时TIL具有较强的生物活性 ,此时进行胸水治疗可取得可靠的疗效。     

葡萄球菌肠毒素A脂质体激活肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤活性的实验研究

目的　研究葡萄球菌肠毒素 A(SEA)脂质体 (L- SEA)体外激活肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)抗肿瘤的活性。方法　从 5例原发性肝癌患者癌组织中分离培养 TIL,分别以 L- SEA、SEA和 IL- 2刺激后 ,观察 TIL 的增殖曲线 ,EL ISA法检测细胞因子的分泌 ,流式细胞仪检测细胞亚群的变化 ,MTT法检测 TIL 的肿瘤杀伤活性。结果　L- SEA、SEA及 IL- 2均能有效刺激 TIL 的增殖 ,最高增殖倍数分别为 4 2 .5、5 1、12 .5倍。除第 4 d L- SEA组 TIL 的IFN- γ水平低于游离 SEA组外 ,此两组的细胞因子分泌没有显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,且都高于 IL- 2组。 L- SEA刺激后 ,TIL 的 CD8+细胞亚群增殖更快 ,CD4 +细胞 / CD8+细胞出现倒置。经过 L- SEA培养后的 TIL 能有效杀伤Hep G- 2肿瘤细胞。结论　 L- SEA仍然具有游离 SEA的刺激 TIL 增殖、分泌细胞因子、杀伤肿瘤细胞的活性。     

IL-2激活的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性及其与LAK细胞活性的比较

肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)经白细胞介素2(IL-2)体外培养后具有很强的体内外抗肿瘤作用,且有一定的靶细胞特异性,其抗肿瘤效果强于淋巴因子激活的杀伤细胞即LAK细胞(P<0.01)。从瘤体中新鲜分离到的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性极低,经IL-2体外培养后,其杀伤活性逐渐增高,以培养至7～25d的杀伤活性最强,这与IL-2使TIL分泌3种抗癌淋巴因子包括IL-2、IFN-γ、淋巴毒素(LT)增加有关。体外培养25d后,TIL的抗肿瘤活性下降,实验表明这与培养过程中TIL的Lyt-2~+细胞(Tc)减少而L3T4~+细胞(T_H)增多有关。TIL经冻存复苏和IL-2体外培养后仍保持很强的抗肿瘤活性,冻存前后比较未见显著差异(P>0.05),这为间断地运用TIL治疗复发性、晚期肿瘤提供了一条可行的途径。     

白细胞介素12诱导肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的临床应用

目的 :对 IL -12 + IL -2培养的肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)与 IL-2诱导的 TIL作对照研究观察 TIL的特异性杀伤力、增殖能力、细胞因子的改变及临床疗效。方法 :将手术切除的原发性肝癌进行体外分离 ,分别用含 IL -2的培养液和含 IL-12 +IL-2的培养液培养 ,诱导 TIL的生长。培养 10～ 14天测定细胞杀伤率、细胞因子和增殖能力 ,待细胞扩增达 10 8～ 9· ml- 1 时进行回输 ,随访观察临床疗效。结果 :(1) IL-12 + IL -2组 TIL对自体肝癌细胞的细胞杀伤率比 IL -2组明显增高 (P<0 .0 1) ;(2 ) IL -12+ IL -2组 TIL比 IL-2组扩增能力明显增强 (P<0 .0 5 )。 (3 ) IL-12 + IL -2组较 IL-2组细胞因子γ干扰素 (IFN-γ)和肿瘤坏死因子 α(TNF-α)水平明显增高 (P<0 .0 5 )。 (4 ) TIL 回输后 IL-12 + IL-2组与 IL-2组 CD3+、CD4 +、CD8+均升高 ,以 CD3+、CD8+ 升高为主。与输注前比较差异均有显著性。 IL-12 + IL-2组与 IL-2组间比较 ,前者 CD3+ 、CD8+ 、CD56 + 上明显高于后者 ,差异显著 (P<0 .0 5 )。 (5 )患者的临床症状改善明显。 (6) IL-12 + IL-2组 1年、3年、5年生存率与 IL-2组 TIL回输肝癌患者对比差异均显著且复发率降低。结论 :白介素 12诱导肝癌 TIL可明显增强 TIL细胞的特异性细胞毒作用且增殖能     

TIL细胞治疗恶性胸(腹)腔积液的临床研究

目的探索CD3单抗和IL-2联合诱导、活化的TIL治疗恶性胸腹水的最佳培养时间和临床疗效.方法抽取患者胸腹水分离TIL,用含rIL-2、CD3单抗的1640完全培养液培养,扩增4周以上,收获细胞局部注入治疗恶性胸腹腔积液,共15例.结果TIL培养至30 d时扩增倍数最高、杀伤活力最强;治疗后完全缓解（CR）9例,占60%,部分缓解（PR）4例,占27%.总有效率87%.结论TIL体外诱导、培养30d,用于治疗恶性胸腹水,效果明显,安全,无毒副作用.     

Induction of antitumor activity and experimental expansion of human lung cancer-infiltrating lymphocytes.

In order to look for effector cells which are more efficient and less toxic than LAK cells induced from PBL for use in adoptive immunotherapy, we studied the antitumor activity and in vitro expansion of tumor infiltrating lymphocytes (TIL) from human lung cancers and compared their cytological properties with those of autologous PBL. The results showed: 1) Large numbers of TIL could be obtained from lung cancer tissue, approximately 1-5 x 10(8)/g tumor tissue, with an average TIL to tumor cell ratio of 2.3:1 (21 samples). 2) Fresh TIL were not cytotoxic against either NK-sensitive or -resistant tumor targets. After culturing for 6 to 8 d in the presence of rIL-2, TIL showed significant cytotoxicity and were able to kill autologous and allogeneic tumor targets and fresh solid tumor targets. 3) When maintained in the presence of rIL-2, TIL were able to continue proliferating and expanding for more than 2 mon, with expansion indices of 4-512. TIL stopped proliferating following the disappearance of autologous tumor cells in the culture. 4) Chronological studies revealed that the cytotoxicity appeared after 4 days in culture and reached a peak on the 14th day, and cultured TIL remained cytotoxic for at least 4 wk.     

用重组人白细胞介素2诱导人肺癌浸润淋巴细胞的LAK样活性

淋巴细胞浸润肿瘤组织的现象已被广泛注意,但对TIL的抗肿瘤作用进行研究只是近二三年才开始。这主要是由于基因工程技术的进步,使人们可以获得大量纯一的重组白细胞介素2(rIL-2),从而可进行TIL的活化,增殖,扩增的研究。我们用人rIL-2对     

Effects of "moxibustion serum" on proliferation and phenotypes of tumor infiltrating lymphocytes.

Tumor infiltrating lymphocytes (TIL) were cultured with "moxibustion serum" (MS), and the results were examined by flow cytometry. The results indicated that MS could enhance the proliferation of TIL, accelerate it to reach the exponential growth phase, and assist recombinant interleukin 2 (rIL-2) to enhance successively the percentage of CD3+ positive cells, maintain the number of CD4+ positive T cells, promote greatly the percentage of CD8+ positive T cells among TILs, and reverse the CD4+/CD8+ ratio. Such cooperative effects rely on relative specificity of acupoints. It is suggested that MS is beneficial to the growth of TIL both in the aspects of proliferation and phenotypes.     

Effects of "Moxibustion Serum" on Proliferation and Phenotypes of Tumor Infiltrating Lvmphocytes

Tumor infiltrating lymphocytes (TIL) were cultured with "moxibustion serum" (MS), and the results were examined by flow cytometry. The results indicated that MS could enhance the proliferation of TIL,accelerate it to reach the exponential growth phase, and assist recombinant interleukin 2 (rIL-2) to enhance successively the percentage of CD3+ positive cells, maintain the number of CD4+ positive T cells, promote greatly the percentage of CD8+ positive T cells among TILs, and reverse the CD4+/CD8+ ratio. Such cooperative effects rely on relative specificity of acupoints. It is suggested that MS is beneficial to the growth of TIL both in the aspects of proliferation and phenotypes.     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗ＣＤ３单克隆抗体辅以少量的基因重组人白细胞介素２和植物血凝素诱导外周血淋巴细胞，成功地研制出具有抗瘤活性的ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞。     

胃肠道肿瘤浸润淋巴细胞的表型与细胞毒活性

作者旨在分析胃肠道肿瘤ＴＩＬ的表型和细胞毒活性及其相关关系。实验发现，新鲜分离的ＴＩＬ杀伤活性较低，ＣＤ３＋、ＣＤ４＋；及ＣＤ８＋细胞比例较低；经ｒＩＬ—２刺激后，ＴＬＬ的细胞毒活性显著增强，尤其对自体瘤细胞显示特异性杀伤活性，各Ｔ细胞亚群比例明显上升。多因素相关分析表明，ＴＩＬ的细胞毒活性与其ＣＤ３＋细胞比例的相关关系具显著性意义（Ｐ＜０．０５），与ＣＤ８＋亚群比例的相关关系亦有显著性意义（Ｐ＜０．０５），而与ＣＤ４＋亚群比例的相关关系无显著意义。证实，ＴＩＬ细胞毒活性与其ＣＤ３＋和ＣＤ８＋细胞的比例密切相关。     

肝癌瘤苗激活的TIL在体外抗肿瘤活性的研究

目的：为了提高肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的抗瘤活性。方法：使用肝癌瘤苗来激活ＴＩＬ，观察其抗瘤活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养护增１０、２０、３０和４０ｄ的体外对自体肝癌细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增３０ｄ时为最高。结果：经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ具有更高的体外杀伤自体肝癌细胞的能力。     

肝癌瘤苗激活的TIL对K562细胞杀伤活性的研究

目的：为也提高ＴＩＬ的抗肿瘤细胞活性。方法；使用冷冻方法制成肝癌瘤苗。用于激活ＴＩＬ，观察基杀伤Ｋ５６２细胞活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养扩增１０天，２０天，３０天和４０天对Ｋ５６２细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增３０天时为最高。