二十碳五烯酸对三种肝癌细胞系作用的实验研究

目的 探讨二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA)对3种肝癌细胞系作用。方法 EPA作用于HepG2（携带有野生型p53基因）、Huh7（携带有突变型p53基因）和Hep3B(p53基因缺失）这3种肝癌细胞系,通过细胞计数、DNA电泳、流式细胞技术和末端转移酶标记技术等来检测EPA对这3种细胞系的作用和可能的机制。结果 EPA主要是通过诱导HepG2肝癌细胞系的细胞凋亡来抑制其生长,而且这种抑制作用呈现出时间和剂量依赖的关系。而且同时发现EPA对于Huh7和Hep3B这两种肝癌细胞系无明显抑制作用。结论 细胞凋亡的诱导可能是EPA抑制HepG2肝癌细胞系生长的主要机制。而且p53基因可能参与EPA诱导HepG2细胞系细胞凋亡的过程。     

芸香诱导K562细胞凋亡机制探讨

目的:研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中Caspase-3基因的表达.方法:体外培养白血病K562细胞,生长曲线观察芸香对K562细胞的细胞抑制作用,MTT法观察芸香的细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR观察Caspase-3的表达,CaspACETM分析系统检测Caspase-3酶活性.结果:芸香浓度为2×10-5mol/L、4×10-5mol/L、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制;不同浓度quercetin处理K562细胞48 h 后,IC50为4×10-5mol/L;Hoechst 33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香处理后细胞发现G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;以Caspase-3 基因和内参照β-actin序列设计引物,PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到约300 bp 条带;CaspACETM分析系统检测Caspase-3酶活性明显升高(P＜0.05).结论:芸香诱导白血病细胞Caspase-3基因表达,细胞发生凋亡,caspase-3途径诱导凋亡是芸香作用机制之一.     

姜黄素对肝癌HepG2细胞和肝脏正常细胞L-02细胞的生长抑制作用及其机制

目的 观察姜黄素对肝癌HepG2细胞和肝脏正常L-02细胞的生长抑制作用,探讨其抗肿瘤的作用和机制.方法 贴壁法培养HepG2细胞和L-02细胞,噻唑蓝(MTT)比色法分析姜黄素对细胞生长的抑制率,流式细胞仪(FACS)检测细胞周期及凋亡,免疫细胞化学及Western blot技术检测半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9、死亡受体5(DR5)、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)和bax蛋白的表达.结果 姜黄素在100 mg/L浓度下,对HepG2细胞生长抑制率可达84％,凋亡率为25.89％,而诱导正常L-02细胞的凋亡率为10.10％,阻滞HepG2细胞周期于G1期,此过程中Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8被激活,DR5蛋白表达上升,bcl-2/bax蛋白表达比率下降.结论 姜黄素能够选择性杀伤HepG2细胞,并通过内源性和外源性两条通路促其凋亡.     

NF-κB、Caspase-3在腺苷诱导人HepG2细胞凋亡中的作用

目的 研究NF-κB、Caspase-3在腺苷(ADO)体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用.方法 将不同浓度的ADO(0.1～5 mmol/L)作用于HepG2细胞,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖的时间效应和剂量效应.2.0 mmol/L ADO单用或联合NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC,100 μmol/L)作用HepG2细胞12 h、24 h,采用Hoechst 33342荧光染色法及流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡及细胞周期,Western blot技术检测NF-κB蛋白表达;荧光比色法测定Caspase-3酶活性.结果 ADO对HepG2细胞生长具有显著抑制作用,并呈一定的量效和时效关系.药物作用24 h、48 h的IC50分别为2.52 mmol/L和1.89 mmol/L.ADO单独处理HepG2细胞12 h和24 h或联合PDTC处理后,细胞凋亡率分别为8.30%、22.32%;20.18%、30.89%,均显著高于对照组(0.81%,P<0.001);ADO作用HepG2细胞后荧光显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变,FCM分析药物处理组显示典型特征性的亚二倍体凋亡峰(sub-G1),细胞生长周期阻滞于G0/G1期;同时伴有Caspase-3活性显著升高(P<0.05).ADO处理后显著增加了NF-κB蛋白表达(P<0.05);PDTC有效抑制了NF-κB表达,同时增加了 Caspase-3活性及ADO的细胞毒作用(P<0.05).结论 ADO诱导了HepG2细胞凋亡并活化Caspase-3.抑制NF-κB活性可通过Caspase-3途径增强ADO的细胞毒作用.     

西罗莫司诱导人肝癌细胞株BEL-7402凋亡及其机制

目的探讨西罗莫司（SRL）在体外诱导人肝癌细胞株BEL-7402的凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的SRL（5、10、20、30、40和50nmol／L）作用于体外培养的人肝癌细胞株BEL-7402，应用流式细胞仪检测培养24、48和72h时的细胞凋亡情况；Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化；Western Blot法观察BEL-7402细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bcl-xl和Bax基因的表达变化；采用Caspase-3试剂盒检测Caspase-3酶的活性；JCl染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψbm）。结果SRL可诱导BEL-7402细胞凋亡，并与药物浓度和作用时间呈正相关。SRL作用BEL-7402细胞后48h，在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征，凋亡过程中线粒体膜电位下降及Caspase-3酶原蛋白激活，伴有Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论SRL能使抗凋亡蛋白Bcl-2、gcl-xl表达降低，促凋亡蛋白Bax表达上调，线粒体膜电位下降，激活Caspase-3酶原蛋白，从而诱导细胞凋亡。     

TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的本研究旨在明确TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-8的关系。方法通过50％CCl4腹腔注射，用8周时间诱发BALB／c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGF-β1(5ng／ml)诱导凋亡，利用1．5％的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带，应用DNA荧光染料Hoechst 33342对正常肝细胞进行染色，并在荧光显微镜下观察比较Caspase-3和Caspase-8在TGF-β1诱导的凋亡中的作用。结果胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为95．2％。正常肝细胞予以TGF-β1处理后，应用1．5％的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF-β1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现，其凋亡率明显高于未处理组，分别为58．76％和18．03％，两组具有明显的差别。但凋亡可以被Caspase-3和Caspase-8抑制剂阻止。结论硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF-β1诱导的凋亡，提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF-β1通过Caspase-3和Caspase-8的活化诱导鼠肝细细胞产生凋亡。     

含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白对肝癌细胞抑制作用

目的 观察含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽模体的白细胞介素(IL)-24突变体蛋白(RGD-IL-24)对肝癌细胞的抑制作用.方法 肝癌HepG2细胞分别加入各10μl的RGD-IL-24(8 mg/L)、IL-24(8 mg/L)和磷酸盐缓冲液(PBS),噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞生长抑制作用;DAPI染色检测HepG2细胞凋亡;免疫印迹法检测HepG2细胞bax、bcl-2及Caspase-3蛋白表达;黏附实验检测与HepG2细胞的靶向黏附.结果 RGD-IL-24、IL-24治疗4 d后HepG2细胞存活率分别为(0.219±0.015)、(0.397±0.009),与对照组(0.823±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24、IL-24治疗组细胞凋亡率分别为(0.631±0.027)、(0.472±0.031),与对照组(0.082±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24抑制HepG2细胞生长、诱导凋亡效果均比IL-24显著增强(P<0.05).与IL-24治疗组比较,RGD-IL-24治疗组HepG2细胞促凋亡蛋白bax增加、抗凋亡蛋白bcl-2减少、活化Caspase-3蛋白量增加.黏附实验证实RGD-IL-24与HepG2细胞的靶向结合作用增强.结论 含RGD肽模体的IL-24蛋白能通过与肝癌HepG2细胞的靶向结合增强其凋亡诱导作用.     

甲硫氨酸条件性缺乏增加瑞戈非尼对肝癌细胞药物敏感性的研究

目的 探索甲硫氨酸（Met）缺乏对人肝癌（HCC）细胞系HepG2和Huh7的生长影响和甲硫氨酸限制作用是否协同瑞戈非尼抑制肿瘤生长。方法 CCK8实验检测瑞戈非尼分别在正常培养基和甲硫氨酸缺乏的培养基的IC50;凋亡实验、周期实验检测瑞戈非尼在不同培养基条件下对两种肝癌细胞株的凋亡诱导情况和对细胞周期影响;克隆形成实验评估细胞增殖情况;JC-1荧光探针实验检测细胞线粒体膜电位变化;脂质体过氧化实验检测胞内脂质过氧化反应。结果 甲硫氨酸缺乏可降低瑞戈非尼在人肝癌细胞株HepG2和Huh7的IC50值;甲硫氨酸缺乏协同瑞戈非尼抑制肿瘤增殖、诱导凋亡、降低线粒体膜电位;而在细胞周期方面对HepG2影响无显著差异;瑞戈非尼和甲硫氨酸限制均可增加HepG2细胞膜脂质过氧化水平,但并无协同作用。结论 甲硫氨酸限制和瑞戈非尼在抑制细胞增殖、诱导凋亡等方面起到协同作用;为临床减少瑞戈非尼用药剂量和增加药物敏感性、改善患者生活质量提供体外实验的理论依据。     

自噬的特异性抑制对肝癌细胞凋亡的调控及其相关机制

目的:研究自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对奥沙利铂(oxaliplatin,OX)诱导的肝癌细胞系HepG2存活率的影响,并探讨其机制。方法:MDC与DAPI双重染色后,采用荧光显微镜对自噬进行定性观察;以CCK8检测3-MA抑制剂自噬前后,经OX诱导的HepG2细胞存活率;并用RT-PCR检测自噬特异性基因LC3表达的变化,以Western印迹法分别检测自噬特异性蛋白LC3及凋亡活化蛋白Caspase-3的变化。结果:OX可诱导肝癌细胞HepG2产生自噬,且自噬在基因及蛋白水平的表达均增加;3-MA与OX联合作用可明显增强HepG2细胞的凋亡。结论:OX诱导肝癌细胞系HepG2凋亡的过程中自噬起到保护性作用;抑制自噬可明显增强OX诱导的HepG2细胞凋亡。3-MA可能为提高肝癌对化疗敏感性提供新思路。     

ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌细胞生长抑制的作用及机制

目的 探讨ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌细胞生长增殖的抑制作用及机制.方法 采用MTT法、生长曲线和PCNA免疫组织化学法观察ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌细胞HepG2生长增殖的影响,并用荧光染色、透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 DHA和EPA分别在15～75μg/mL浓度范围内呈剂量-时间依赖性方式抑制HepG2细胞的生长增殖.DHA和EPA(45μg/mL)作用48 h后,荧光染色与透射电镜可见部分HepG2细胞呈典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测:与对照组比较,DHA和EPA分别在浓度45 μg/mL和60μg/mL作用48 h后,细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).结论 ω-3多不饱和脂肪酸能显著抑制肝癌细胞生长,并诱导其凋亡.     

Effective component from verbena officinalis L.inhibits proliferation and induces apoptosis of human choriocarcinoma JAR cells

<正> Objective:To examine the action of the effective component,4'-methylether-scutellarein,from Verbena officinalis L.(VOL)on the proliferation and apoptosis of human choriocarcinomaJAR cells.Methods:Cell proliferation was measured by MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-di-phenyl tetrasodium bromide,MTT]assay and the incorporation of tritiated thymidine(~3H-TdR).Apoptosis of cell was evaluated by flow cytometry(FCM)and the characteristic apoptoticDNA ladder by agarose gel electrophoresis,and the morphological changes of apoptotic JAR cellswere observed under fluorescence microscopy and electron microscopy(EM).Expressions of ap-optosis proteins,poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)and caspase-3,-8,and -9 were deter-mined with Western blot.Results:The effective component from VOL inhibited the proliferation of JAR cells in a dose-and time-dependent manner.The treated cell cycle was arrested in S phase and an apoptotic peakwas found in S phase using FCM analysis.A typical DNA ladder appeared in the treatment groupwhen analyzed by agarose gel electrophoresis.Using fluorescence microscopy,the percentage ofapoptotic cell was 0.9%,6%,and 14% after treatments of 10,20,and 40 mg·L~(-1) of the effec-tive component,respectively,for 48 h.Typical apoptotic changes,such as condensed chromatinand presence of apoptotic bodies,were observed under EM.Treatment with effective componentfor 48 h and 72 h also induced protein expression of PARP and caspase-3,-8,and -9 as seen byWestern blot.Conclusions:The effective component from VOL inhibits cell proliferation and induces apop-tosis in human choriocarcinoma JAR cells.     

水飞蓟素诱导高转移表型肺癌细胞系(Anip973)细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨水飞蓟素诱导高转移表型肺癌细胞系Anip973细胞凋亡的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜和电子显微镜等形态学检测、流式细胞仪(FCM)技术检测、DNA Ladder分析、PARP的表达分析以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达活性分析.结果 水飞蓟素对人高转移表型肺癌细胞系Anip973细胞的增殖有显著抑制作用.随着浓度的增加,倒置显微镜下可见细胞数目减少,胞体变小、变圆,到高浓度时出现较多的死亡细胞.扫描电镜观察发现,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征.流式细胞仪检测显示G1期细胞比例增多,S期细胞明显减少,G2期细胞略有减少,并出现明显的凋亡峰.水飞蓟素作用后的Anip973细胞出现明显的DNA Lad-der和PARP降解增加等凋亡特征.凋亡相关蛋白Bax表达增加、caspase-3和caspase-9酶活性增加,而Bd-2表达降低.结论 水飞蓟素可以在体外抑制人肺腺癌细胞Anip973的增殖作用,并通过激活线粒体依赖的caspase凋亡通路,诱导其凋亡.     

MG-132对肝癌细胞BEL7402凋亡及超微结构影响的实验研究

目的:探讨泛素-蛋白酶体通路阻断剂MG-132对肝癌细胞BEL7402细胞凋亡和超微结构的影响。方法:以5和10μmol／L MG-132分别处理人肝癌BEL7402细胞24和48h,用流式细胞术检测细胞凋亡;DNA片段分析进一步证实凋亡存在,Western印迹检测Bax蛋白表达,比色法测Caspase-3活性变化,用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:随着MG-132浓度的增加和处理时间延长,细胞凋亡率增加;细胞DNA抽提电泳发现特征性凋亡梯状条带;Bax蛋白表达增加;Caspase-3活化;电镜观察到典型凋亡细胞,线粒体等细胞器的形态变化与MG-132浓度和作用时间有关。结论:蛋白酶体抑制剂MG-132可诱导肝癌细胞BEL7402凋亡;线粒体损伤、Bax蛋白上调、Caspase-3激活可能在MG-132 诱导BEL7402细胞凋亡起重要作用。     

三氧化二砷对原发性肝癌的作用及其机理研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞系BEL-7402的影响及其作用机理,并观察不同应用途径对原发性肝癌患者的治疗效果。方法 观察As2O3作用后肝癌细胞的形态学改变、并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况,应用逆转录聚合酶链式反应和荧光分光光度计检测半胱氨酸蛋白酶-3的变化情况。观察其对裸鼠移植瘤生长抑制的效果。并分别通过静脉滴注和动脉持续灌注观察其对原发性肝癌患者的治疗效果。结果 不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,发生作用后细胞生长明显受抑制,有明显的凋亡特征性改变;流式细胞仪分析存在G2／M期阻滞,在G1峰前出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。随着As2O3作用时间的延长,半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA无明显变化,而半胱氨酸蛋白酶-3蛋白质的活性逐渐增高。不同浓度的As2O3对于裸鼠肝癌移植模型有明显的抑制生长作用。对28例患者的静脉输注治疗可明显改善患者的生存质量,并且具有毒副作用小的特点。43例动脉灌注治疗患者中,30例肿瘤体积缩小或不变,有效率为69．8％,19例甲胎蛋白下降或降至正常。结论 As2O3可明显抑制肝癌细胞的生长,其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡;凋亡的可能机理是通过半胱氨酸蛋白酶-3起作用,作用位点是在酶的前体水平;应用As2O3连续区域化疗对原发性肝癌有很好的治疗效果。     

Involvement of mitochondrial pathway in Taxol-induced apoptosis of human T24 bladder cancer cells

We examined a human urothelial cancer T24 cell line, which was exposed to clinically achievable concentrations of Taxol and detected the lethal effect of Taxol as measured by a cytotoxic dose-response curve. Marked nuclear condensation and the fragmentation of chromatin were observed by DAPI stain, DNA ladder formation, and flow cytometry at an LC(90)concentration of 0.8 microg/ml Taxol, which also induced a G2/M arrest. In response to Taxol-treatment, caspase-9 activity increased at 8 h, and both caspase-2 and -3 activities were increased twofold relative to control cultures at 16 h. Moreover, treatment with the broad-spectrum caspase inhibitor (z-VAD-fmk) or the caspase-9 specific inhibitor (z-LEHD-fmk) effectively protected T24 cells against Taxol-triggered apoptosis. Furthermore, the phosphorylation of Bcl-2 and Bcl-X(L) proteins in Taxol treated cells was detected at 8 h. In contrast, Taxol had no effect on the levels of Fas and FasL proteins and neither antagonistic, anti-Fas antibody affected Taxol-induced apoptosis. These results suggest that, following the phosphorylation of Bcl-2 and Bcl-X(L)proteins, Taxol-induced apoptosis is induced through the mitochondria-dependent pathway in T24 cells.     

细胞色素C在氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的:检测细胞色素C在氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用，分析细胞色素C在线粒体和胞浆中的分布及其与caspase-9活化的关系。方法:用1×10-2mol/L的5-FU处理HepG2细胞，分别作用2,4,8,16,24h，用荧光检测试剂盒检测HepG2细胞凋亡过程中细胞色素C分布变化;Western-blot检测caspase-9的活化和细胞色素C在胞浆及线粒体中的分布。结果:氟尿嘧啶处理肝癌细胞4h后，caspase-9活性开始升高，于16h后达到高峰，与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。Western-blot分析发现caspase-9被蛋白酶水解切断后形成10kD片段;细胞色素C在胞浆中的分布从4h后逐渐增加，16h最明显，而其在线粒体中的分布却正相反;细胞色素C的分布改变和caspase-9的活化基本同步。结论:在氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡过程中caspase-9被活化，并伴有细胞色素C自线粒体中释放到胞浆，提示细胞色素C可能在Caspase-9的活化和肝癌细胞凋亡中起重要作用。     

中药复方鹿角胶丸通过PI3-K/AKT信号通路调节破骨细胞凋亡

目的探索中药复方鹿角胶丸促进破骨细胞凋亡机制的实验研究。方法 RAW264.7细胞培养并传代,RANKL+MCSF诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化;MTS检测不同浓度的鹿角胶丸对破骨细胞增殖活性影响;倒置相差显微镜观察鹿角胶丸对破骨细胞形态学的影响;流式细胞仪检测鹿角胶丸及加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002后对破骨细胞凋亡的影响;Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3,Cleaved-Caspase-3、p-AKT、T-AKT的蛋白表达情况,以及检测加入LY294002后对凋亡通路蛋白的影响。结果 MTS显示各个浓度的鹿角胶丸(LJJW高、中、低)均能抑制破骨细胞的增殖活性,其中以LJJW(中浓度)作用24 h后具有明显的增殖活性抑制作用。加入鹿角胶丸后,破骨细胞透光度下降,凋亡的细胞皱缩,漂浮于培养基中。流式细胞仪检测结果显示鹿角胶丸促进破骨细胞凋亡,预处理LY294002后,鹿角胶丸的促破骨细胞凋亡作用受到抑制。免疫印迹结果显示,鹿角胶丸促进线粒体Bax表达,抑制Bcl-2的表达,同时促进Caspase-3的裂解。鹿角胶丸促进AKT磷酸化,加入LY294002后AKT的磷酸化受到抑制,预处理LY294002后鹿角胶丸的促AKT磷酸化作用被抑制。结论中药复方鹿角胶丸通过PI3K/AKT通路促进破骨细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞增殖、凋亡及其相关蛋白的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖、凋亡及其相关蛋白的影响。 方法 用5 μg/L的TGF-β1作用于NRK-49F。不同浓度（0~5 μmol/L）MG-132预处理NRK-49F细胞后,MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;DNA凝胶电泳法观察细胞的凋亡情况;Western印迹检测p53、p27、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的变化。 结果 TGF-β1（5 μg/L）可促进NRK-49F细胞增殖,而MG-132（0.25~5 μmol/L）呈剂量依赖性地抑制这种效应,使细胞生长停滞在G1期。TGF-β1（5 μg/L）单独不能诱导NRK-49F的凋亡（3.880%±0.365%比4.723%±1.582%）,而MG-132（0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、2.50 μmol/L）预处理可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡（调亡率分别为8.8％、18.7％、22.8％、31.3％、37.7％、38.9％）。MG-132（2.5 μmol/L）+TGF-β1组及 MG-132（2.5 μmol/L）组在DNA电泳中呈典型的梯状条带现象。Western印迹结果显示,MG-132可剂量依赖性地激活TGF-β1诱导的细胞周期及凋亡相关蛋白p53蛋白表达,促进caspase-3的活性片段产生,Bcl-2表达下调,并能使Bax和p21表达上调,但对p27没有明显的影响。 结论 MG-132可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖,并促其凋亡。该作用可能与MG-132对细胞周期及凋亡相关蛋白p53、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关,提示泛素蛋白酶体抑制剂可能成为将来防治肾间质纤维化的一个潜在的治疗手段。     

Emodin induces apoptosis in human prostate cancer cell LNCaP

AIM: To elucidate effects and mechanisms of emodin in prostate cancer cells. METHODS: Viability of emodin-treated LNCaP cells and PC-3 cells was measured by MTT assay. Following emodin treatments, DNA fragmentation was assayed by agarose gel electrophoresis. Apoptosis rate and the expression of Fas and FasL were assayed by flow cytometric analysis. The mRNA expression levels of androgen receptor (AR), prostate-specific antigen (PSA), p53, p21, Bcl-2, Bax, caspase-3, -8, -9 and Fas were detected by RT-PCR, and the protein expression levels of AR, p53 and p21 were detected by Western blot analysis. RESULTS: In contrast to PC-3, emodin caused a marked increase in apoptosis and a decrease in cell proliferation in LNCaP cells. The expression of AR and PSA was decreased and the expression of p53 and p21 was increased as the emodin concentrations were increased. In the same time, emodin induced apoptosis of LNCaP cells through the upregulation of caspase-3 and -9, as well as the increase of Bax /Bcl-2 ratio. However, it did not involve modulation of Fas or caspase-8 protein expression. CONCLUSION: In prostate cancer cell line, LNCaP, emodin inhibites the proliferation by AR and p53-p21 pathways, and induces apoptosis via the mitochondrial pathway.     

白花蛇舌草对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响及其机制

目的 观察白花蛇舌草在体外对胶质瘤U87细胞株增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 用不同浓度的白花蛇舌草含药培养基(0、5、10、15、20ml/L)处理U87细胞不同时间(24、72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对U87细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测对照组与实验组细胞的凋亡差异,免疫印迹法检测U87细胞中半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达水平的改变.结果 经白花蛇舌草5、10、15、20ml/L处理后,U87细胞增殖受到明显抑制,呈显著的剂量依赖性;经白花蛇舌草(5、10 ml/L)处理后U87细胞的凋亡率分别增加到(5.22±0.29)%、(8.38±0.65)%,明显高于对照组的(3.09±0.05)%(P＜0.01);白花蛇舌草可明显上调U87细胞中Caspase-3的蛋白表达,且呈浓度依赖性.讨论白花蛇舌草对胶质瘤U87细胞生长的抑制作用可能通过上调Caspase-3基因的表达从而诱导细胞凋亡实现.