Toll样受体介导的信号通路与感染性角膜病

Toll样受体（TLR）是一类跨膜受体，最初在果蝇体内发现，至今已在哺乳动物和人类细胞上发现11种TLR，分别识别细菌、病毒、真菌等致病微生物的病原相关分子结构，并经过下游信号转导通路启动先天免疫，可能也在自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用。已经报告角膜上皮细胞表达功能性的TLR4和TLR5，分别识别绿脓杆菌的脂多糖和鞭毛蛋白。了解TLR信号转导通路将为感染性角膜病的治疗提供很多特异性的新靶点。     

Toll样受体介导的信号通路及其与眼部感染性疾病的关系

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是一天然模板识别受体家族,能识别固有性模板,其介导的信号转导通路在对抗外来病原体的天然免疫应答中起重要作用。越来越多的研究已经发现人眼角膜细胞、巩膜、结膜、葡萄膜、视网膜、虹膜内皮细胞、睫状体等都能表达TLRs,而且与眼部的免疫和炎症反应密切相关。我们就TLRs的信号转导方式及其和眼部感染性疾病关系做一综述。     

Toll样受体对角膜免疫调节的研究进展

Toll样受体(TLRs)是先天性免疫的病原模式识别受体,在病原体的识别、获得性免疫反应的调节、信号转导等方面起重要作用.随着对感染性角膜炎和角膜移植术后急性、慢性排斥反应发生机制研究的深入,TLRs在角膜免疫应答中的诱导和调控作用日益受到研究者的关注.目前对TLRs激活细菌性角膜疾病、真菌性角膜疾病、病毒性角膜疾病、角膜移植后植片排斥反应等炎症过程中的免疫信号通路已有较多研究,对TLRs及其信号系统表达的调控有助于减轻或阻止上述炎症反应过程.就TLRs、TLRs信号转导途径及其对角膜炎症反应的免疫调控机制进行综述,探讨其关键作用及可能的治疗靶点.     

Toll样受体在眼科的研究现状

Toll样受体是自身免疫的关键受体，它参与宿主对致病微生物的识别和防御等感染免疫过程，也与人体的获得性免疫密切相关，是目前免疫学研究的重点和热点。眼球作为感染性和免疫性疾病的好发部位，在感染免疫和获得性免疫方面与全身摹他器官有相似之处，但是其独特的解剖特点，例如血房水屏障、血视网膜屏障、角膜的无血管化等，使其免疫学特点的特异性也非常明显。就Toll样受体的特点以及在眼科的研究现状进行综述。     

不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的影响

目的 研究不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4表达的影响.方法 原代培养C57小鼠角膜上皮细胞,随机分为对照组(无肽聚糖刺激)及按照肽聚糖刺激浓度分为10 mg·L-1组、30 mg·L-1组、80 mg·L-1组(作用时间均为12 h);按照肽聚糖刺激时间分为12 h组、24 h组、36 h组(作用浓度均为30mg·L-1),应用实时荧光定量PCR与流式细胞术检测各组TLR2、TLR4 mRNA和蛋白的表达量.结果 与对照组(1.00±0.14、1.00±0..01)相比,10 mg·L-1组(4.35±0.46、3.53±0.50)、30 mg· L-1组(8.06±0.72、5.31±0.34)、80 mg· L-1组(2.93±0.46、2.23±0.04)的TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,12h组(2.94±0.46、2.23±0.50) TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与对照组相比,各浓度组和12 h组角膜上皮细胞TLR2、TLR4蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 肽聚糖可以刺激小鼠角膜上皮细胞TLR2、TLR4 mRNA和蛋白表达增加,提示感染性角膜炎的发生、发展可能与角膜上皮细胞TLR2、TLR4识别病原体并参与炎症反应有关.     

Toll样受体信号通路和糖尿病视网膜病变的关系

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是导致失明的主要疾病之一,其发病机制尚未完全阐明.Toll样受体(Toll-like recetors,TLRs)是机体免疫系统识别、感知细菌、病毒等病原体入侵的重要分子,在机体免疫防御功能中发挥着重要作用.众多的研究提示糖尿病发病与免疫系统的激活密切相关,TLRs的激活在DR的发生发展中起着重要的作用.现就Toll样受体信号通路与糖尿病视网膜病变的关系作一综述,为DR的防治提供新的治疗手段和思路.     

Toll样受体-4及其介导的信号转导与急性前葡萄膜炎

急性前葡萄膜炎是最常见的葡萄膜炎,其发病机制尚不明确。近年来研究认为,G阴性细菌感染启动、Toll样受体-4介导的信号转导在急性前葡萄膜炎的发病机制中发挥重要作用。本文对目前脂多糖-Toll样受体-4信号转导通路及通过对该通路干预来调控炎症的相关研究进展进行综述,以期为前葡萄膜炎的治疗提供新的思路。     

细菌脂多糖及糖皮质激素对角膜上皮细胞Toll样受体表达的影响

目的 通过研究细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人角膜上皮细胞系(hunman corneal epithelial cell line,HCEC)中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)的表达和功能的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的作用.方法 通过RT.PCR及实时PCR检测角膜上皮细胞中TLR mRNA的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS(1μg·L-1、10μg·L-1、100μg·L-1)共培养,检测TLR的表达;以及在此基础上,选择在10 μg·L-1 LPS刺激的细胞培养液中分别加入氢化可的松(1×103μg·L-1、10×103μg·L-1、100×103μg·L-1)进行干预,并检测TLR mRNA的表达;再采用酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中IL-6、IL-8的释放;并通过免疫荧光组织化学检测TLR蛋白的表达.结果 TLR1-TLR10 mRNA在HCEC中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、YLR6高表达.LPS能增加细胞TLR mRNA的表达,且当LPS为10μg·L-1时,TLR mRNA的表达量最高,同时IL-6、IL-8的释放也相应增加.加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增高,HCEC中TLR mRNA的表达也随之增加,此时IL-6的释放减少,IL-8的释放增加.免疫荧光组织化学也显示了3种浓度激素干预下HCEC的TLR2蛋白、TLR4蛋白在胞内均有表达,且强度不同,趋势与分子水平的表达一致.结论 LPS能改变角膜上皮细胞TLR mRNA的表达,提示上皮细胞表达的TLR与角膜抵御细菌的固有免疫密切相关;糖皮质激素可以调控LPS刺激的HCEC中TLR的表达,即轻度促进LPS刺激的HCEC中TLR的表达,在细菌侵袭角膜的早期,糖皮质激素可能具有一定的免疲促进作用.     

角膜基质细胞Toll样受体4对茄病镰刀菌炎性反应的实验研究

目的 检测茄病镰刀菌刺激小鼠角膜基质细胞后Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的表达分布状况,探讨TLR4与炎性因子分泌的关系.方法 对小鼠角膜基质细胞进行原代培养和鉴定;制备茄病镰刀菌液;MTT法观察菌液刺激对角膜基质细胞生长作用的影响;免疫组化、RT-PCR测定刺激后不同时间点角膜基质细胞TLR4的表达;ELISA检测封闭TLR4对菌液诱导的角膜基质细胞分泌TNF-α、IL-8的影响.结果 采用消化法1～2 d培养出小鼠角膜基质细胞,抗波形蛋白免疫荧光染色阳性;菌液刺激48h后,MTT法显示刺激组较对照组OD值明显下降;正常角膜基质细胞TLR4在蛋白及mRNA水平呈弱表达,刺激6h可达到高峰,12h开始逐渐降低;菌液可上调角膜基质细胞TNF-α、IL-8的释放,刺激3h、6h、12 h的TNF-α、IL-8的浓度与TLR4 mRNA的表达呈明显的正相关(P＜0.05);预先封闭TLR4,可明显降低TNF-αt、IL-8的释放.各时间组间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 角膜可能通过TLR4识别真菌感染,TLR4在角膜对真菌的免疫炎性防御反应中起到重要作用.     

Toll样受体在眼部各组织中的表达及其作用

Toll样受体是新近发现的一类广泛存在于植物、昆虫和哺乳动物体内的与跨膜信号转导有关的受体，在进化上具有高度保守性。研究揭示了其在机体免疫特别是抗感染免疫中有重要作用。越来越多的研究已经发现人眼角膜细胞、巩膜、结膜、葡萄膜、视网膜、虹膜内皮细胞、睫状体等都能表达Toll样受体，而且与眼部的免疫和炎症反应密切相关。Toll样受体的发现为深入研究眼部感染性疾病的发病机制及临床治疗开辟了更为广阔前景。     

Toll样受体与眼部炎性疾病

Toll样受体是一类存在于哺乳动物细胞的跨膜受体,它可以识别病原微生物保守的病原相关分子模式,参与细胞信号传导及免疫反应,在抗感染中发挥重要作用.本文就Toll样受体家族成员的结构特点、其识别病原微生物参与信号传导及宿主免疫的功能及其与眼部疾病的联系进行综述,为深入研究眼部感染性及免疫性疾病的发病机制提供帮助,为这些疾病的治疗提供新的思路和手段.     

重视和规范我国感染性角膜病的药物治疗

感染性角膜炎仍是世界性的常见致盲眼病，中国作为发展中国家，特别是在许多农村地区，感染性角膜病的发病率仍较高。近年随着广谱抗生素和糖皮质激素在临床的广泛应用，导致角膜感染性病原体谱以及对各种药物的敏感性与以往相比有显著变迁，同时随着基础研究和药物学的进展，许多新观点和新药物引入临床。在加强和规范我国感染性角膜病的诊治方面应注意：加强流行病学研究和回顾性研究；重视病原体实验室诊断；规范使用眼用抗生素；注意药物的角结膜毒性。     

细菌脂多糖及糖皮质激素对角膜基质成纤维细胞Toll样受体表达的影响

目的 通过研究细菌脂多糖（LPS）对人角膜基质成纤维细胞（HCF）Toll样受体（TLR）表达的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控作用,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的可能作用.方法 选取人供体角膜细胞,对其进行分离、培养和鉴定,通过RT-PCR及quantitative Real-time PCR检测角膜基质成纤维细胞中TLR在mRNA水平的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS（1、10、100 ng/ml）共培养,检测TLR的表达.在此基础上,选择在10 ng/ml LPS的细胞培养液中加入糖皮质激素氢化可的松（1、10、100 μg/ml）进行干预,并通过Real-time PCR检测此种情况下HCF中TLR的表达.再通过免疫荧光组化来检测TLR2、TLR4在蛋白水平的表达.各组数据的差异性采用Student t检验和非参数秩和检验,Real-time PCR的倍数间的比较采用非参数统计.结果 TLR1-10 mRNA在HCF中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8、TLR10呈高表达.LPS能增加HCF中TLR mRNA的表达,且当LPS为10 ng/ml时,TLR的表达量最高.加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增加,HCF中TLR mRNA的表达却随激素浓度的增高而下降.免疫荧光组化结果显示,在10 ng/ml LPS刺激、10 ng/ml LPS＋10 μg/ml氢化可的松共同刺激以及正常条件培养3种情况下,TLR2、TLR4在HCF内均有表达,且强度不同,趋势与分子水平的表达一致.结论 TLR1～10 mRNA在HCF中均有表达.LPS能改变角膜基质成纤维细胞TLR mRNA的表达,提示该细胞表达的TLR与角膜抵御细菌的固有免疫密切相关;糖皮质激素可以调控LPS刺激的HCF TLR的表达,即对LPS刺激的HCF TLR的表达表现出抑制;提示当细菌的侵袭突破角膜上皮到达基质时,糖皮质激素起到了免疫抑制的作用.     

糖皮质激素在感染性角膜病治疗中的应用

感染性角膜炎是引起角膜盲的主要原因之一,治疗以抗感染为主,而糖皮质激素的使用指征仍存在争议。在不同类型病原体感染角膜炎中,选择合适的使用时机,才能使糖皮质激素获得较好的抗炎效果,同时减少其副作用的发生。在细菌性角膜炎的治疗中,建议在抗生素有效治疗48小时后使用糖皮质激素,以减少角膜瘢痕的形成。对于病毒性角膜炎,糖皮质激素使用范围仍是基质炎型和内皮炎型;糖皮质激素极易导致真菌性角膜炎加重,仅在确认真菌感染完全控制之后方可使用;有关棘阿米巴感染性角膜炎治疗中糖皮质激素的治疗作用,虽然获得了基础研究上的进展,但是使用的时机上尚未达成共识。（国际眼科纵览,2022, 46：45-50）     

人角膜上皮细胞Toll样受体介导的炎性细胞因子的表达

目的探讨人角膜上皮组织和细胞系(THCE)对Toll样受体(TLR)2和TLR4的表达及后者介导THCE对烟曲霉菌(AF)抗原炎性反应的影响。方法用免疫印迹(Western blot)和免疫细胞化学方法检测人角膜上皮组织和细胞系THCE的TLR2和TLR4蛋白质表达与分布;采用自制的AF菌丝体片段(5×106／ml)和培养上清提取物(牛血清白蛋白当量浓度为10μg／ml)抗原,刺激培养的THCE细胞,于刺激1、2、4及8 h收集培养上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测白细胞介素(IL)8和肿瘤坏死因子(TNF)α的水平。于刺激后30 min、1及2 h收集细胞,Western blot检测IκBα的表达变化以评价核转录因子κB的活化;采用抗体封闭实验分析封闭TLR2和TLR4对THCE细胞表达IL-8和TNF-α的影响。结果Western blot和免疫细胞化学结果显示人角膜上皮组织和THCE细胞均表达TLR2和TLR4蛋白质;AF菌丝体或培养上清抗原刺激THCE细胞后,培养上清液中IL-8和TNF-α于1 h后开始升高,至8 h分别达到(64．71±5．15)pg／ml和(32．46±3．28)pg／ml(菌丝体刺激组)及(94．94±11．92)pg／ml和(48．70±3．32)pg／ml(上清刺激组),分别为对照组THCE细胞培养上清中IL-8和TNF-α浓度的3．0倍和2．5倍及4．5倍和3．5倍(均P<0．01);同时Western blot检测AF菌丝体和AF上清刺激30 min后THCE细胞的IκBα表达(平均灰度值)分别由对照组的51．57±5．58和49．23±3．49下降为10．31±1．30和8．15±2．37(均P<0．01),2 h后恢复至对照组水平。在AF菌丝体刺激组,单纯封闭TLR2或TLR4部分抑制THCE细胞IL-8和TNF-α的分泌(均P<0．05),同时封闭两种受体则明显抑制了IL-8和TNF-α分泌(均P<0．01);AF上清抗原刺激组,单纯封闭TLR4和联合封闭两个受体均可明显抑制IL-8和TNF-α的分泌(均P<0．01),而单纯封闭TLR2未明显抑制二者的分泌(均P>0．05)。结论AF可能经过TLR-NF-κB信号转导通路诱导人角膜上皮细胞表达IL-B和TNF-α等炎性细胞因子。TLR2和TLR4可能介导人眼角膜上皮细胞对AF菌丝体的识别,而对AF上清抗原的识别则可能主要由TLR4介导。     

深低温保存角膜穿透性移植治疗重症感染性角膜病的观察

目的 探讨深低温保存角膜穿透性角膜移植治疗重症感染性角膜病的疗效。方法 对3例(3只眼)重症感染性角膜病患者采用深低温保存的角膜进行穿透性角膜移植术。结果 3例术后植片透明，无排斥反应发生，亦无感染复发等。结论 对于重症感染性角膜病患者，急诊应用深低温保存角膜行穿透性角膜移植术，是保存眼球的较好治疗方法。     

Toll样受体在干眼发病机制中的研究进展

最近研究显示眼表引发免疫炎症反应的部分原因是眼表存在一类称为Toll样受体（TLRs）的蛋白家族。TLRs在眼部的表达受到感染和各种炎症环境的影响,例如单疱病毒、细菌、真菌性角膜炎,变态反应性结膜炎和干眼综合征。TLRs信号通路对抗原递呈细胞和T细胞介导的免疫炎症反应的激活起重要作用。近些年随着眼科学的发展,对TLRs在干眼发病机制方面的研究逐渐增多,现就TLRs的结构与配体,TLRs的信号转导路径,TLRs在眼表中的表达位置及表达模式,以及与干眼的相关性作一综述。     

Toll样受体-4在葡萄膜炎中的表达和作用

Toll样受体-4(TLR4)作为内毒素的识别受体在固有免疫与适应性免疫之间的桥梁作用越来越受到重视.葡萄膜炎发病中TLR4的作用不断被证实:TLR4基因突变的C3H/HeJ小鼠不能诱导出葡萄膜炎;正常人眼葡萄膜中有TLR4表达而且是有功能的;葡萄膜炎患者外周血中单核细胞TLR4功能下降.本文对TLR4在葡萄膜炎发病中的信号传导通路的进展及其在抗感染中的作用进行了综述.     

感染性角膜病病原学诊断中存在的问题及对策

感染性角膜病是我国角膜病致盲的首位因素,准确的病原学诊断是对其合理治疗的关键.随着认识的提高和各项检验及检查技术的发展,感染性角膜病的病原学诊断水平也在提高,但仍存在诸多科学问题尚待解决.本文就我国感染性角膜病的病原学诊断存在的科学问题进行分析,并提出相应的建设性策略.     

Toll样受体和免疫性疾病

近年来,一组跨膜信号传递受体蛋白--Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)的发现,使人们重新关注天然免疫系统在免疫应答中的重要性,进一步推动了对特异性免疫机制的深入了解.本文介绍TLRs在免疫系统中的地位及其在免疫性疾病发病中的作用.