常山酮抑制乳腺癌脑转移的作用研究

目的探讨常山酮抑制乳腺癌脑转移的作用。方法本实验分为溶剂组及常山酮组,以人乳腺癌细胞MDAMB-231及BALB裸鼠为研究对象,首先通过体外实验,使用MTT法、划痕试验及Western blot观察各组MDA-MB-231增殖、迁移及bax、bcl-2、cleaved-caspase3等凋亡相关蛋白的表达情况;然后制备乳腺癌脑转移模型,通过神经功能评分及脑部HE染色观察各组脑转移情况。结果常山酮显著抑制了MDA-MB-231的增殖和迁移能力,增加了bax及cleaved-caspase3蛋白的表达水平,并减少了MDA-MB-231向脑部的定植。结论常山酮可能通过抑制细胞增殖及迁移、促进凋亡等机制抑制乳腺癌细胞脑转移。     

MicRNA-124可能通过PI3K/Akt通路调节缺血脑组织细胞凋亡

目的探讨脑缺血环境下对micRNA-124表达的影响。方法采用Western blot、荧光定量PCR技术检测脑缺血后缺血皮质区不同时间点bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1、micRNA-124蛋白或基因的表达水平。结果缺血脑组织细胞micRNA-124基因表达量与调控细胞凋亡指标bax、bcl-2、caspase-3增高一致;bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1活化片段蛋白表达量逐渐升高,在随后观察的时点内持续处于高表达状态(P0.01)。结论 micRNA-124可能参与缺氧致脑组织细胞凋亡的过程,其机制可能是通过PI3K/Akt通路,激活或抑制bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1其中一个或是多个基因调节缺氧脑组织细胞凋亡。     

间歇性高糖对胰岛β细胞生长及细胞周期进程的影响☆

背景：间歇性高糖可阻滞胰岛β细胞生长,增加β细胞的凋亡,但具体作用机制尚不清。 目的：观察间歇性高糖对大鼠胰岛素细胞增殖、凋亡及对细胞周期进程的影响。 方法：实验对大鼠胰岛素细胞进行培养,分为正常糖对照组,恒定性高糖组和间歇性高糖组,分别含葡萄糖5.5,30,30和5.5 mmol/L间歇换液。采用细胞计数试剂盒检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期,Annexin-V/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡,应用Western blot检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1的表达水平。 结果与结论：与正常糖对照组相比,恒定性高糖组及间歇性高糖组均明显抑制大鼠胰岛素细胞细胞的生长(P < 0.01),增加大鼠胰岛素细胞的凋亡(P < 0.01),明显抑制细胞周期进程,使大鼠胰岛素细胞的细胞周期更多滞留在G0/G1期(P < 0.01),能显著减弱细胞周期调控蛋白Cyclin D1的表达(P < 0.01)。与恒定性高糖组相比,间歇性高糖以上各指标作用均更显著(P < 0.01)。结果证实,间歇性高糖能够抑制大鼠胰岛素细胞的生长,增殖和诱导凋亡,其机制可能是通过降低Cyclin D1的活性,使细胞阻滞在G0/G1期,抑制细胞周期进程,从而减弱细胞的增殖活性。     

白黎芦醇对垂体腺瘤GH3细胞的抑制作用

目的 探讨选择性雌激素受体调节剂白黎芦醇对垂体腺瘤GH3细胞中电压依赖性K^ 电流(IK(V))和细胞增殖的影响。方法 不同浓度白黎芦醇作用GH3细胞，应用MTT比色法测定细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期分布，运用全细胞膜片钳技术记录和分析白黎芦醇对GH3细胞中IK(V)的作用。结果 白黎芦醇作用GH3细胞3d后，以浓度效应关系抑制GH3细胞增殖，并使细胞增殖周期中G0／G1期阻滞，S期和G2／M期百分率降低。全细胞膜片钳结果显示，白黎芦醇以浓度和时间效应抑制IK(V)。结论 白黎芦醇抑制GH3细胞增殖可能是通过阻断电压依赖性K^ 通道起作用。提示可应用选择性抗雌激素药物治疗垂体腺瘤。     

siRNA沉默USP22基因对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨小干扰RNA(si RNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific protease 22,USP22)对胶质瘤细胞增殖的影响和作用机制。方法合成USP22 si RNA及阴性对照si RNA(control si RNA),用脂质体Lipofectamine 2000转染至人胶质瘤U87和U251细胞,分别设为实验组和阴性对照组。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测两组胶质瘤细胞USP22 mRNA和蛋白表达水平的变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测USP22 si RNA对两组胶质瘤细胞的增殖抑制率。流式细胞术定量检测USP22 si RNA对胶质瘤细胞凋亡及细胞周期分布的影响。Western blot检测胶质瘤细胞凋亡蛋白和周期调控蛋白的表达。结果与阴性对照组比较,实验组胶质瘤细胞中USP22 mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),细胞增殖明显受到抑制(P0.05),凋亡率明显上升(P0.05),细胞周期中G2/M期的细胞比例明显增高(P0.05)。Western blot结果显示:细胞凋亡蛋白Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9表达明显下降(P0.05);细胞周期蛋白CDK1、CDK2、Cyclin B1表达水平明显下降(P0.05),Cyclin D1表达水平无明显变化(P0.05)。结论 USP22基因在胶质瘤细胞的增殖中发挥重要作用,其机制可能为调节细胞凋亡和细胞周期。     

miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响

目的 研究miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物(miR-451 mimics)转染胶质瘤细胞以上调miR-451的表达,real-time PCR检测转染后miR-451的表达,Western印迹法检测目标蛋白表达,应用流式细胞术、MTT法评价细胞生长和增殖的生物学特征变化.结果 转染miR-451 mimics后,real-time PCR检测提示miR-451表达升高,Western blot结果显示癌基因C-myc表达下降＞63.6%,细胞周期正向调节因子CDK2、CDK4、Cyclin D1和Cyclin E表达下降;细胞周期分析表明miR-451 mimics组进入G0/G1期的细胞数较对照组增多达17.4%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示miR-451 mimics组细胞生长受抑.结论 miR-451可以抑制人脑胶质瘤细胞生长和增殖能力,具有抑瘤作用.     

FoxM1抑制剂硫链丝菌素对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨FoxM1抑制剂硫链丝菌素对髓母细胞瘤Daoy细胞株增殖及凋亡的影响. 方法 体外常规培养髓母细胞瘤Daoy细胞株,CCK-8法检测0、1、1.5、2、3、5μmol/L硫链丝菌素作用24、48、72 h后细胞存活率的变化;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法分别检测0、1、1.5、2μmol/L硫链丝菌素作用48 h后细胞FxoMl mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达. 结果 CCK-8检测显示不同浓度硫链丝菌素作用后Doay细胞存活率下降,且呈浓度和时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).24、48、72 h的IC50分别为(2.1±0.15)、(1.69±0.11)、(1.39±0.1)μmol/L; RT-PCR和免疫印迹实验显示,与0 μmol/L硫链丝菌素组比较,1、1.5、2μmol/L硫链丝菌素组细胞FoxMl mRNA及蛋白水平下降,G2/M期细胞细胞比例和凋亡率升高,凋亡蛋白bax表达增加,抗凋亡蛋白bcl-2表达减少,且均呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 FoxM1抑制剂硫链丝菌素可明显抑制Daoy细胞增殖,可能与阻滞细胞周期于G2/M期、改变bcl-2/bax表达诱发凋亡有关.     

雌激素受体拮抗剂对垂体腺瘤GH3细胞增殖、凋亡、催乳素分泌及雌激素受体蛋白表达的影响

目的 通过检测雌激素受体拮抗剂对垂体腺瘤GH3细胞增殖、凋亡、催乳素(PRL)分泌及雌激素受体蛋白表达的影响,探讨雌激素在垂体催乳素腺瘤发生、发展中的作用机制.方法 对去激素培养条件及加入外源性E2培养条件下的GH3细胞采用不同方法进行检测:应用MTT 法检测OHTam与ICI对GH3细胞增殖的影响;ELISA法检测对GH3细胞PRL分泌的影响;流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western blot检测对GH3细胞ERα、ERβ表达的影响.结果 E2对GH3细胞增殖有显著的生长刺激作用,低浓度E2(10-12mol/L)即显著高于去激素培养组;OHTam与ICI对GH3细胞增殖有抑制作用,当给药浓度达到10 -6mol/L时,增殖指数分别为0.62和0.47,呈剂量依赖性;OHTam与ICI可抑制E2对GH3细胞的生长刺激作用;以上结果与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).E2可促进GH3细胞的PRL的分泌,随着E2浓度的增高,PRL的分泌增加;OHTam与ICI可抑制GH3细胞PRL的分泌,并且能够抑制E2的促进作用.OHTam与ICI能够诱导GH3细胞凋亡,以早期凋亡为主.GH3细胞有ERα与ERβ的表达,E2可上调ERβ的表达水平,ICI可下调ERα的表达水平,而OHTam对ERα与ERβ的表达水平无显著影响.结论 雌激素受体拮抗剂是通过抑制细胞增殖、PRL分泌及抗雌激素而发挥抑瘤作用,而ICI的作用还与下调ERα的表达有关.     

曲格列酮减少CyclinD1的表达抑制体外培养GH3细胞增殖的实验研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖激活受体-γ(PPAR-γ)高亲和力配体-噻唑烷二酮类药物曲格列酮对大鼠垂体腺瘤GH3细胞系增殖的影响.并初步探讨其作用机制. 方法 不同浓度的曲格列酮作用于GH3细胞,用MTT法检测各组GH3细胞生长情况,用流式细胞技术检测各组GH3细胞周期的变化,用半定量RT-PCR方法 检测各组GH3细胞CyclinD1基因mRNA的表达.结果 曲格列酮干预GH3细胞72 h后.以浓度效应关系抑制GH3细胞增殖,并使GH3细胞明显被阻滞于G1/S检测点,CyclinD1 mRNA表达明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 曲格列酮能明显抑制大鼠垂体腺瘤细胞的增殖,其分子机制可能是其与PPAR-γ结合后导致CyclinD1 mRNA表达减少,从而抑制了细胞增殖,促进肿瘤细胞死亡.     

Mdm2反义脱氧寡核苷酸抗胶质瘤的机理研究

目的探讨Mdm2反义寡核苷酸(ASODNs)对U251人胶质瘤细胞株的抗肿瘤作用。方法以Lipofectamine介导的Mdm2 ASODNs转染U251细胞,用RT-PCR检测Mdm2 mRNA的改变,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测野生型p53(wild type p53,wtp53)的表达,研究其抗肿瘤作用。结果Mdm2 ASODNs以不同浓度转染U251细胞后,Mdm2表达减少,细胞增殖抑制程度升高,细胞周期分析显示S期细胞下降,TUNEL法染色观察到明显的凋亡细胞。Western blot检测野生型p53的表达增加。结论Mdm2 ASODNs可提高野生型p53的表达,从而抑制U251细胞增殖,引起细胞周期停滞和诱导凋亡,该作用具有浓度依赖性。     

过表达钙整合素结合蛋白CIB诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 观察CIB基因对人胶质瘤SHG44细胞体外生长和细胞凋亡的影响.方法 构建重组质粒pcDNA3-CIB,转染人胶质瘤细胞株SHG44,MTT观察各组细胞的体外生长情况,流式细胞术(FCM)测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞数量,Western-blot检测CIB转染后凋亡相关蛋白的表达变化.结果 RT-PCR、Western印迹显示pcDNA3-CIB转染组CIB的mRNA及CIB蛋白表达水平明显高于对照组;与对照组细胞相比,转染CIB的SHG44-CIB组细胞牛长明显减缓(P＜0.01),SHG44-CIB组细胞G_1、S期细胞减少,G_2期细胞增多,凋亡细胞增加至19.2%;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax表达上调.结论 CIB在体外明显抑制SHG44细胞的生长并诱导其发生凋亡,CIB诱导的凋亡可能与Bcl-2及Bax表达的变化相关.     

壳寡糖对Hela细胞cyclin D1、bcl-xl和bcl-2 mRNA表达的影响

背景：研究表明壳寡糖具有抗肿瘤作用,但壳寡糖对cyclin D1、bcl-2和bcl-xl影响机制尚不清楚。 目的：观察壳寡糖抑制Hela细胞生长的作用,以及对细胞内cyclin D1、bcl-xl和 bcl-2 mRNA表达的影响。 方法：壳寡糖(0.1,0.5,1,2,5 g/L)刺激Hela细胞后,CCK8实验检测其对细胞生长的影响;运用实时荧光定量PCR方法在分子水平检测cyclin D1、bcl-xl和 bcl-2 mRNA在细胞中的表达情况。 结果与结论：壳寡糖可抑制Hela细胞的生长;随着壳寡糖的质量浓度由0.1 g/L增加至2 g/L,壳寡糖抑制cyclin D1,bcl-2,bcl-xl基因表达的作用也逐渐增强,在2 g/L时作用最强,但质量浓度过高时(5 g/L)抑制作用反而有所减弱。结果表明壳寡糖的抗肿瘤作用可能通过两方面进行：一方面壳寡糖可以抑制与细胞周期有关的cyclin D1 mRNA表达以抑制肿瘤细胞的增殖;另一方面壳寡糖可以抑制抗凋亡蛋白Bcl-2 和bcl-xl mRNA的表达以促进肿瘤细胞的凋亡;且对前者的作用强于后者。 关键词：荧光定量PCR;壳寡糖;Hela细胞;细胞周期蛋白 D1;bcl-xl;bcl-2 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.03.012     

Antiproliferative action of neomycin is associated with inhibition of cyclin D1 activation in glioma cells

The progression of mammalian cells through G1 phase of the cell cycle is governed by the D-type cyclins (D1, D2, D3). These proteins are induced at the beginning of the G1 phase and associate with serine/threonine cyclin-dependent kinases to form holoenzymes. Overexpression of cyclin D1 in human cancers as well as in several cancer cell lines has been reported. Here, we employed mitotic selection to synchronize the C6 glioma cell cycle at the start of the G1 phase and assessed the effects of neomycin on cyclin D1 protein detection by immunocytochemical analysis. Cyclin D1 activation as well as cell proliferation were already significantly reduced after 3 h of incubation of the cells with neomycin. These findings suggested that the antiproliferative effects of neomycin in gliomas could be mediated by inhibition of the expression of cyclin D1 gene and support further consideration of therapeutic use of neomycin in a Phase I clinical study for patients with recurrent glioblastoma.     

益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞 增殖及凋亡相关基因表达的影响******★

背景：益气解毒中药复方在体外能通过下调端粒酶的活性抑制细胞生长和诱导细胞凋亡，还可能通过抑制细胞内重要的核转录因子、细胞分裂增殖、细胞周期、DNA修复和诱导细胞凋亡、促进坏死等信号通路，从而抑制细胞增殖和诱导细胞死亡。 目的：实验拟观察益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及凋亡相关基因bax、bcl-2、增殖细胞核抗原和p53mt基因表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-01/2007-12在湖南中医药大学中西医结合学院基础研究室和中医五官重点学科实验室完成。 材料：G4代8月龄TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因阳性小鼠和阴性小鼠各24只，体质量（25.4±2.3）kg，用于制备鼻咽和鼻腔癌前病变模型；益气解毒颗粒方药液为自制。 方法：48只小鼠随机分为4组，转基因阳性中药组和转基因阴性中药组小鼠灌胃益气解毒颗粒方药液，给药剂量为12.91 g/(kg? d)；转基因阳性生理盐水组和转基因阴性生理盐水组小鼠灌等体积生理盐水。 主要观察指标：苏木精-伊红染色观察鼻腔和鼻咽黏膜病理组织学变化，免疫组织化学染色法检测其bax、bcl-2、增殖细胞核抗原和p53mt基因表达水平。 结果：纳入转基因阳性小鼠和阴性小鼠各24只，转基因阳性生理盐水组和转基因阴性生理盐水组于实验结束前各死亡1只， 转基因阴性中药组死亡1只，转基因阳性中药组死亡2只小鼠，共43只小鼠进入结果分析。①转基因阴性生理盐水组、转基因阴性中药组小鼠的鼻腔/鼻咽黏膜组织均无明显病变；转基因阳性中药组有1只小鼠表现中度非典型性增生，转基因阳性生理盐水组有10只小鼠鼻腔和/或鼻咽黏膜上皮细胞呈现中度或中度以上非典型增生或灶性鳞状化生。转基因阴性生理盐水组、转基因阴性中药组、转基因阳性中药组和转基因阳性生理盐水组小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变率分别为0、0、10%和90.9%，差异具有显著性意义（P < 0.01）。②与转基因阳性生理盐水组相比，其他各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞中p53mt、bcl-2和增殖细胞核抗原表达水平均下降（P < 0.01），bax表达水平显著增高，bcl-2/bax比值降低（P < 0.01）。 结论：益气解毒方中药可有效抑制或逆转TgN(p53mt-LMP1)/HT阳性小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮的癌前病变表型，其作用机制之一可能通过下调p53mt基因和增殖细胞核抗原的表达，降低bcl-2/bax比值，使细胞增殖和凋亡速度达到平衡，进而促使鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞正常增长。     

Potassium-induced apoptosis in rat cerebellar granule cells involves cell-cycle blockade at the G1/S transition

The role of regulators controlling the G1/S transition of the cell cycle was analyzed during neuronal apoptosis in post-mitotic cerebellar granule cells in an attempt to identify common mechanisms of control with transformed cells. Cyclin D1 and its associated kinase activity CDK4 (cyclin-dependent kinase 4) are major regulators of the G1/S transition. Whereas cyclin D1 is the regulatory subunit of the complex, CDK4 represents the catalytic domain that, once activated, will phosphorylate downstream targets such as the retinoblastoma protein, allowing cell-cycle progression. Apoptosis was induced in rat cerebellar granule cells by depleting potassium in presence of serum. Western-blot analyses were performed and protein kinase activities were measured. As apoptosis proceeded, loss in cell viability was coincident with a significant increase in cyclin D1 protein levels, whereas CDK4 expression remained essentially constant. Synchronized to cyclin D1 accumulation, cyclin-dependent kinase inhibitor p27Kip1 drastically dropped to 20% normal values. Cyclin D1/CDK4-dependent kinase activity increased early during apoptosis, reaching a maximum at 9-12 h and decreasing to very low levels by 48 h. Cyclin E, a major downstream target of cyclin D1, decreased concomitantly to the reduction in cyclin D1/CDK4-dependent kinase activity. We suggest that neuronal apoptosis takes place through functional alteration of proteins involved in the control of the G1/S transition of the cell cycle. Thus, apoptosis in post-mitotic neurons could result from a failed attempt to re-enter cell cycle in response to extracellular conditions affecting cell viability and it could involve mechanisms similar to those that promote proliferation in transformed cells.     

骨骼肌细胞线粒体通透性转换孔及bcl-2和bax mRNA表达与运动

背景：运动影响骨骼肌细胞的凋亡,而线粒体途径是介导细胞凋亡的一个重要途径。 目的：研究运动对大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔、凋亡调控基因bcl-2和bax表达的影响。 方法：将24只成年雄性SD大鼠随机分为3组：对照组正常饲养,6周游泳训练组进行6周的游泳训练,每周6次,一次性游泳力竭组于第6周进行一次力竭性游泳运动。应用紫外分光光度仪检测各组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔的开放情况,应用RT-PCR测定大鼠骨骼肌bcl-2和bax mRNA的表达。 结果与结论：与对照组比较,6周游泳训练组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔的开放程度变化不明显,bcl-2 mRNA的表达显著增加,bax mRNA的表达显著减少,bcl-2/bax mRNA比值显著增大(P < 0.01)。与对照组比较,一次性游泳力竭组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔开放程度明显增加(P < 0.01),bcl-2 mRNA的表达显著减少,bax mRNA的表达显著增加,bcl-2/bax mRNA比值显著减小(P < 0.01)。说明运动训练可通过改变线粒体通透性转换孔的开放、调节bcl-2/bax表达,调控骨骼肌细胞凋亡。     

氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖及周期素D1的表达

背景：氧化型低密度脂蛋白可通过Ras/Raf/丝裂原活化蛋白激酶激酶/丝裂原活化蛋白激酶途径诱导血管平滑肌细胞增殖及细胞周期蛋白的表达。 目的：观察胞外信号调节激酶是否参与了氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞周期推进以及周期素D1的表达。 设计、时间及地点：对照观察细胞学实验,于2008-02/10在广州医学院完成。 材料：人血浆低密度脂蛋白来自健康志愿者血清。SD大鼠由广州医学院实验动物中心提供。 方法：采用超速离心法分离人低密度脂蛋白进行氧化修饰及鉴定。以酶消化法培养大鼠血管平滑肌细胞,采用免疫组织化学染色法鉴定。 主要观察指标：在静止的血管平滑肌细胞中加入MEK1/2选择性抑制剂10 μmol/L PD98059和/或50 mg/L氧化型低密度脂蛋白,以CCK-8和细胞计数法测定细胞增殖,流式细胞术观察细胞周期,蛋白印迹检测周期素D1蛋白表达及胞外信号调节激酶的活性。 结果：CCK-8和细胞计数法显示,氧化型低密度脂蛋白能明显诱导血管平滑肌细胞增殖,PD98059抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖,并且呈时间依赖性。流式细胞术分析表明,经氧化型低密度脂蛋白处理24 h后,血管平滑肌细胞从G0/G1期进入S期,S期细胞百分比明显增高(P < 0.01),加入PD98059处理24 h后,血管平滑肌细胞由G0/G1期向S期的推进受到抑制。蛋白印迹结果显示,氧化型低密度脂蛋白能明显诱导周期素D1蛋白表达及胞外信号调节激酶的磷酸化,PD98059抑制氧化型低密度脂蛋所诱导的周期素D1蛋白表达以及胞外信号调节激酶的磷酸化。 结论：氧化型低密度脂蛋白能诱导血管平滑肌细胞增殖,促进细胞由G0/G1期向S期转换以及周期素D1表达,其作用部分是由胞外信号调节激酶所介导。     

Cyclopamine对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其机制

目的探讨Shh信号途径的抑制剂cyclopamine对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其分子生物学机制。方法以不同浓度的cyclopamine处理SK-N-SH细胞不同时间,在相差倒置显微镜下观察药物作用后的该细胞形态学变化。用四甲基偶氮唑盐（MTT）分析法检测各组SK-N-SH细胞的增殖情况,流式细胞仪检测不同浓度cyclopamine作用后对细胞周期的影响,Westernblot检测药物作用前后细胞周期蛋白D1、P16和P21蛋白表达的变化。结果cyclopamine各处理组SK-N-SH细胞形态学有所不同。MTT法检测结果显示,cyclopamine对SK-N-SH细胞增殖的抑制是浓度依赖性和时间依赖性的（P〈0.05）。流式细胞仪检测发现随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞百分比明显增加（P〈0.05）,而S期细胞百分比明显降低（P〈0.05）。Westernblot检测结果显示,随着药物浓度的增加,SK-N-SH细胞中细胞周期蛋白D1表达逐渐降低,P16和P21表达逐渐增高（P〈0.05）。结论cyclopamine抑制SK-N-SH细胞生长,阻滞细胞从G1期向S期转化,其机制可能与调控细胞周期蛋白表达有关。cyclopamine可能成为未来治疗神经母细胞瘤的药物之一。     

补阳还五汤和依达拉奉联用对小鼠急性脑缺血损伤后脑保护机制的研究

目的探讨补阳还五汤和依达拉奉联用对急性脑缺血损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响,探讨其可能的脑保护机制。方法将60只小鼠随机分假手术组、模型组、补阳还五汤组、依达拉奉组以及补阳还五汤+依达拉奉组,每组12只。采用改良线栓法制作小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,给予补阳还五汤及依达拉奉药物干预。分别于再灌注后1d和7d,采用TUNEL法观察小鼠脑皮质缺血区神经细胞凋亡率,采用免疫组化方法观察小鼠脑皮质缺血区B淋巴细胞瘤2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的阳性细胞数。结果与假手术组比较,模型组小鼠脑皮质缺血区凋亡指数升高(P0.01),且bcl-2、bax和caspase-3表达的阳性细胞亦均升高(P0.01);经补阳还五汤和(或)依达拉奉干预后,各药物组小鼠脑组织的凋亡指数及bax和caspase-3阳性细胞均较模型组下降(P0.01),而脑组织bcl-2阳性细胞均较模型组增加(P0.01),且补阳还五汤+依达拉奉联合用药组较单一用药组改变明显(P0.05)。结论补阳还五汤与依达拉奉联用能抑制脑缺血再灌注损伤后脑细胞中促凋亡蛋白bax、caspase-3的表达;促进具有神经元保护作用的bcl-2蛋白的表达,从而抑制神经细胞凋亡,协同发挥脑保护作用。