视网膜脱离视细胞凋亡及其抗凋亡治疗研究进展

视网膜脱离是主要的致盲眼病之一,其发生机制纷繁复杂.目前研究认为光感受器等视细胞的凋亡在视网膜脱离预后中起重要作用.视网膜脱离视细胞凋亡的机制逐步被阐明,相关的光感受器细胞抗凋亡治疗研究也逐渐成为治疗视网膜脱离的热点.光感受器细胞的抗凋亡治疗结合现代视网膜脱离手术将是未来治疗视网膜脱离的理想模式.     

依托咪酯通过PKC/NF-κB信号通路增加成年大鼠视神经损伤后RGC存活

目的　探讨依托咪酯对成年大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌ,ＲＧＣ）的保护作用及其机制。方法　应用大鼠视神经眶内段切断模型,荧光金逆行标记存活ＲＧＣ;腹腔注射依托咪酯或玻璃体内注射蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉ-ｎａｓｅＣ,ＰＫＣ）抑制剂Ｇ６９７６干预,应用ＰｅｐＴａｇ非同位素ＰＫＣ检测试剂盒检测视网膜ＰＫＣ活性,应用免疫印迹法分析视网膜核转录因子-κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ,ＮＦ-κＢ）水平。结果　依托咪酯显著增加大鼠视神经损伤后７ｄＲＧＣ存活数量（Ｐ＜０．０５）,而且显著降低视网膜ＰＫＣ活性和ＮＦ-κＢ水平（均为Ｐ＜０．０５）。Ｇ６９７６同样显著增加大鼠视神经损伤后７ｄＲＧＣ存活数量（Ｐ＜０．０５）,联合应用依托咪酯和Ｇ６９７６,其存活ＲＧＣ数量与单纯应用依托咪酯差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）;Ｇ６９７６显著降低视网膜ＮＦ-κＢ水平（Ｐ＜０．０５）。结论　依托咪酯可显著增加大鼠视神经损伤后ＲＧＣ存活数量,其机制可能与抑制ＰＫＣ／ＮＦ-κＢ信号通路有关。     

全氟丙烷气体长期滞留玻璃体腔对视网膜影响的观察

目的评价全氟丙烷（Ｃ３Ｆ８）长期滞留玻璃体腔对视网膜影响和诱发视网膜细胞凋亡的可能性。方法１３只兔眼进行玻璃体切除和纯Ｃ３Ｆ８注射,通过不同次数再注气,保持玻璃体腔气体８０％以上;应用光学显微镜和ＴＵＮＥＬ技术进行视网膜组织学检查,同时记录暗适应ＥＲＧ。结果１０只注气眼大气泡滞留时间分别是１５,３０,４５和６０天;手术前后ＥＲＧ记录无差异;除６０天１组的视网膜节细胞层有很少数凋亡细胞外,其它时间里无凋亡细胞发现,视网膜结构正常。结论玻璃体切除术后重复注入Ｃ３Ｆ８以长期保持大体积气泡推压视网膜,对视网膜功能和组织不产生有意义影响。     

神经生长因子对视网膜脱离视细胞保护作用的实验研究

目的 探讨神经生长因子(NGF)对视网膜脱离(RD)视细胞损伤的保护作用。方法 选用健康青紫蓝兔36只随机分为正常对照组、NGF治疗组和生理盐水(NS)模型组，实验组右眼RD模型制作后，NGF治疗组每天结膜下注射NGF0．1mL(1mg／mL)2次；NS模型组每天结膜下注射NS0．1mL，2次；实验动物于3d、14d后处死，取眼球壁做光镜、电镜检查。结果 光镜、电镜检查NGF治疗组内外节损害较轻、视细胞数较多、外核层较厚、视网膜结构和层次排列较好。NGF治疗组视网膜外核层凋亡细胞计数少于NS模型组。视网膜脱离后14d外核层厚度NGF治疗组厚于NS模型组；NGF治疗组视网膜外核层细胞计数多于NS模型组。结论 结膜下注射NGF对视网膜脱离后视细胞损伤有一定的保护作用。     

小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡

目的 研究小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡情况。 方法 将成年C57Bl/6J小鼠36只分为2组：实验组小鼠18只左眼视网膜下注射1.4%透明质酸钠造成视网膜脱离，对照组小鼠18只左眼仅作巩膜穿刺。分别于手术后1、3、7和28 d摘除眼球，视网膜切片进行组织化学、免疫荧光染色，共聚焦显微镜检查。抗视锥和抗视杆细胞的抗体分别标记视锥和视杆细胞，dUTP缺口末段标记法(TUNEL)标记凋亡细胞。通过计数存活和凋亡的视锥和视杆细胞来定量光感受器细胞的凋亡和细胞丢失。 结果 凋亡细胞只存在于脱离部分视网膜的外核层，凋亡细胞在视网膜脱离后1 d即可检测得到，3 d时达到高峰，7 d后陡然减少。视网膜脱离后视杆和视锥细胞的死亡呈现同样的时程。 结论 凋亡是视网膜脱离后光感受器细胞死亡的主要病理改变。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 124-127)     

生长因子与视网膜神经节细胞

视网膜神经节细胞（ＲＧＣｓ）是青光眼的主要损伤细胞，ＲＧＣｓ的死亡常导致视功能发生不可逆性损害。新近研究的某些生长因子能促进ＲＧＣｓ的存活和轴突再生。本文着重介绍了神经生长因子（ＮＧＦ）、脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经营养蛋白－３（ＮＴ－３）、ＮＴ－４／５、睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）、成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）及靶源性生长因子等对ＲＧＣｓ的作用，为ＲＧＣｓ的实验研究和临床研究提供基础     

生长因子与视网膜神经节细胞

视网膜神经节细胞（ＲＧＣｓ）是青光眼的主要损伤细胞，ＲＧＣｓ的死亡常导致视功能发生不可逆性损害。新近研究的某些生长因子能促进ＲＧＣｓ的存活和轴突再生。本文着重介绍了神经生长因子（ＮＧＦ）、脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经营养蛋白－３（ＮＴ－３）、ＮＴ－４／５、睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）、成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）及靶源性生长因子等对ＲＧＣｓ的作用，为ＲＧＣｓ的实验研究和临床研究提供基础。     

青光眼视网膜神经节细胞凋亡的实验研究

目的 研究兔的实验性青光眼视网膜神经节细胞的死亡是否有凋亡参与。方法 前房注入固定的红细胞悬液使免眼压升高,分别在术后７,１４,２１,２８天处死动物,取视网膜组织,ＴＵＮＥＬ标记染色,电镜观察。结果 电镜下可见视网膜神经节细胞死亡特征为典型的凋亡早期特征－核浓染。免疫组ＴＵＮＥＬ法实验组发现神经节细胞凋亡,而正常对照组没有发现。结论 实验性青光眼的视网膜神经节细胞死亡有凋亡参与。这为通过调探凋亡而治疗青光眼的视网膜视神经损伤提供可能。     

遗传性视网膜变性视细胞凋亡与p53基因表达

目的 研究遗传性视网膜变性视细胞凋亡的基因调控。方法 对出生后第１３－６０天的遗传性神经网膜变性动物模型（ＲＣＳ）大鼠视网膜,进行末端脱氧核糖核苷酸连接酶介导 ｄＵＴＰ末端标记（ＴＵＮＥＬ）凋恨细胞检测、ｐ５３蛋白免疫组织化学染色、ｐ５３ｍＲＮＡ原位杂交和ＲＴ－ＰＣＲ。结果 ＲＣＳ大鼠视网膜视细胞自生后第２５天出现凋亡,第３０－３５天达高峰;视细胞凋亡初期,妈隆后第２８－３０天,视细胞内Ｐ５３蛋白     

血小板源生长因子和转化生长因子—β1及其受体在视网？…

目的 观察及评估血小板源生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｒ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）和转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＴＧＦ－β１）及其相应受体在视风原分布特征及临床意义。方法对９例孔源性视网脱离患者行玻璃体切除术同时获得２５声视网膜表面膜的分布特征及临床意义。方法 对９例孔源性视网膜脱离中层得行玻璃体切除术同时获得２５块视网膜表面膜     

实验性视网膜脱离时神经生长因子对视网膜的保护作用

目的　研究神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)在实验性视网膜脱离 (retinaldetachment,RD)时对视网膜神经细胞的保护作用。方法　 31只Spregue Dawley(SD)大鼠 (6 2只眼 )视网膜下注射透明质酸钠建立RD模型 ,分为 4个组 :NGF实验组 (2 1只眼 )、实验对照组 (2 1只眼 )、病理对照组 (14只眼 )和正常对照组 (6只眼 )。 2 1只SD大鼠右眼玻璃体腔内注射NGF 5 μl(浓度为 1g/L ,1次 / 4d) ,作为NGF实验组 ,左眼注射空白载体作为实验对照组 ,不用药物的 7只SD大鼠 (14只眼 )作为病理对照组。分别在建立RD模型后 12h ,1、2、4、8、16及 32d行光镜和电镜检查 ,进行形态学和细胞数目比较。结果　RD发生后NGF实验组和实验对照组视网膜可见光感受器细胞内、外节缺失、内外核层排列紊乱、神经细胞和神经纤维层水肿变性。实验对照组和病理对照组在镜下表现无明显差异 ,NGF实验组、实验对照组与病理对照组视网膜在RD后 1d镜下即产生明显差异 ,病变程度明显轻于病理对照组和实验对照组 ,以光感受器细胞的内、外节改变最为明显。当RD复位后 ,NGF实验组视网膜组织和细胞结构明显优于病理对照组和实验对照组。细胞计数结果显示 ,随着RD时间延长 ,视网膜细胞核数进行性下降 ,即使视网膜复位 ,各组细胞数仍少于正常对照     

视网膜脱离后光感受器细胞死亡机制及潜在治疗策略

视网膜脱离(RD)是临床上常见的致盲眼病之一,患者术后视功能恢复不理想.近年来研究表明,光感受器细胞死亡是导致RD后视功能损伤的主要原因,其发生机制复杂,涉及半胱氨酸蛋白酶依赖性的经典凋亡途径、内质网应激等非半胱氨酸蛋白酶依赖性凋亡途径以及坏死性凋亡、自噬等多种信号通路及其相互作用.阐明RD光感受器细胞的死亡机制,并在此基础上采取联合抑制多条死亡通路、干预上游靶点和加强内源性保护等策略有助于保护光感受器细胞,最终改善RD患者的视功能.本文综述了近年来RD光感受器细胞死亡机制的研究进展,探讨了可能存在的干预靶点以及未来潜在的治疗策略.     

Pharmacokinetics of conjunctivally applied nerve growth factor in the retina and optic nerve of adult rats

PURPOSE: Nerve growth factor (NGF) has been shown to inhibit retinal ganglion cell (RGC) degeneration when injected intraocularly in animal models of ocular hypertension, optic nerve transaction, and ischemia. The present study sought to establish the bioavailability of topical NGF to the retina and optic nerve in rats. METHODS: Autoradiography was performed to evaluate whether exogenous (125)I-labeled NGF reaches the retina and optic nerve when applied topically to the rat conjunctiva. To quantify NGF levels, a highly specific immunoenzymatic test (ELISA) was performed on the retina, optic nerve, lens, sclera and serum of rats at different time points after administration of NGF (1-500 microg/mL). The physiological activity of topically applied NGF was evaluated by determining retinal brain-derived neurotrophic factor (BDNF) protein and mRNA levels by ELISA and RT-PCR, respectively. RESULTS: After topical conjunctival administration of NGF, high levels were detected in ocular tissues, including the retina and optic nerve, showing a peak increase 6 hours after administration at a concentration of 200 mug/mL. NGF treatment was associated with an increase in BDNF protein and mRNA levels in rat retina. CONCLUSIONS: These data demonstrate the bioavailability of NGF to the retina and optic nerve in rats when administered topically. These findings justify investigating the clinical effects of topical NGF therapy for treatment of posterior segment diseases.     

Gene therapy for detached retina by adeno-associated virus vector expressing glial cell line-derived neurotrophic factor

PURPOSE: To examine the protective effect of glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) on retinal detachment (RD)-induced photoreceptor damage by using gene delivery. METHODS: Gene delivery to photoreceptors was achieved by subretinal injection of recombinant adeno-associated virus expressing GDNF (rAAV-GDNF) in the right eyes and AAV expressing Escherichia coli LacZ (rAAV-LacZ) in the left eyes of Lewis rats. RD in bilateral eyes was induced with subretinal injection of high-density vitreous substitute in the temporal retina 3 weeks after gene delivery. The synthesis and accumulation of GDNF within the retina was monitored 3 weeks after RD by immunohistochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), respectively. The rescue of photoreceptors was evaluated by monitoring the preservation of the thickness of photoreceptor outer segment (OS) and outer nuclear layer (ONL). Apoptosis in the photoreceptors was studied using the TdT-dUTP terminal nick-end labeling (TUNEL) method 2 days after RD. Müller cell activity was checked using the immunohistochemistry with glial fibrillary acidic protein (GFAP) antibody 28 days after RD. RESULTS: Gene delivery was demonstrated by immunohistochemical study. The results of ELISA confirmed that high levels of neurotrophic factors were produced in retinas. Photoreceptor OS degeneration and the gradual shortening of the ONL were noted after RD in all the eyes. However, rAAV-GDNF-treated eyes retained longer OS than rAAV-LacZ-treated eyes 7 (P = 0.012) and 28 days (P = 0.008) after RD. ONL was also longer in rAAV-GDNF-treated eyes than in rAAV-LacZ-treated eyes 7 (P = 0.012) and 28 days (P = 0.008) after RD. GDNF-treated eyes had statistically less apoptotic cells than control eyes in photoreceptor layer (P = 0.043). Subretinal proliferation of Müller cells was suppressed in the GDNF-treated group, indicating less scar formation. CONCLUSIONS: GDNF is a potential factor that can protect photoreceptors from degeneration. In addition to preserving the OS and ONL structures, GDNF may exert its protective action by preventing the apoptosis of photoreceptors after RD. GDNF gene therapy may be a valuable adjuvant to current treatments in certain complicated forms of RD.     

实验性视网膜脱离时神经生长因子对视网膜细胞凋亡的干预作用

目的 研究神经生长因子（NGF）在实验性视网膜脱离（RD）时对视网膜细胞凋亡的干预作用。 方法 27只大鼠左、右眼分别被分为实验对照组和NGF组。视网膜下注射透明质酸钠建立RD动模型后，取右眼在玻璃体腔内注射1μg/μl NGF，共5μl，作为NGF组；左眼注射磷酸盐缓冲液（PBS）5μl，作为实验对照组。注射方法为每4天注射1次，直至观察期结束。两组在建立模型后1.5、3、6、12h、1 、2、4、8、16、32d分别取眼球。另设立正常对照组2只大鼠，不作任何处理，在实验观察结束时取眼球。采用原位末端标记法(TUNEL)和透射电子显微镜观察视网膜细胞凋亡情况,并进行细胞计数和统计学检验。 结果 RD早期就有细胞凋亡的发生。视网膜各层细胞均可见凋亡细胞，内、外核层分布最多。凋亡细胞数随脱离时间延长而增加（P<0.01）。NGF组的凋亡细胞数比实验对照组少（P<0.01）。 结论 实验性RD中，玻璃体腔内给予外源性NGF能抑制视网膜细胞凋亡的发生。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 333-335)     

兔眼视网膜脱离后玻璃体内谷氨酸变化及毒性

目的　研究视网膜脱离 (RD)后玻璃体内谷氨酸 (G1u)含量改变及对视网膜的神经毒性。方法　兔眼玻璃体内注射透明质酸酶 ( 10U/mL)造成一眼RD ,另眼作对照。RD后不同时间抽取玻璃体液用高压液相色谱法检测Glu含量 ,并作视网膜电镜观察。结果　RD后 8h～ 7d ,Glu含量增加 ,与对照眼比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,以后逐渐下降 ,至 14d与对照眼差异无显著性 (P >0 0 5 )。电镜观察显示 ,RD后 8h～ld ,视网膜水肿严重 ,4～ 7d视网膜各层细胞均出现变性坏死 ,外核层最严重 ,14～ 2 8d则以光感受器丢失及胶质细胞增生为主。结论　RD后玻璃体内Glu明显增多 ,并对视网膜尤其是光感受器产生损伤作用。     

Retardation of photoreceptor degeneration in the detached retina of rd1 mouse

PURPOSE: To study the neuroprotective effect of experimental retinal detachment (RD) on photoreceptor degeneration in rd1 mice. METHODS: RD was produced in the eyes of rd1 mice at postnatal day (P) 9. These eyes were collected and compared to controls without RD. The effects of RD on retinal degeneration were evaluated by histochemical staining of nuclei in the outer nuclear layer (ONL), rod and cone photoreceptors, and retinal vessels at P30 in retinal sections and flatmounts. Apoptotic photoreceptors were detected by TdT-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) at P15. Mice with or without RD were also reared in darkness and evaluated immunohistochemically at P30. RESULTS: The numbers of rhodopsin-positive (rod), peanut agglutinin-positive (cone), and diamino-2-phenyl-indol-stained (rod-plus-cone) cells in the ONL were increased by 2.0-fold, 1.3-fold, and 1.2-fold, respectively, in the rd1 eyes with RD compared to those without RD at P30. In the detached retina, the cone photoreceptor inner/outer segment structures and the deep retinal vessels surrounding the inner nuclear layer and the ONL, but not the ganglion cell layer, were preserved. At P15, TUNEL-positive cell numbers in the ONL were significantly reduced in the eyes with RD. Light exposure had no effect on photoreceptor degeneration in the eyes with or without RD. CONCLUSIONS: RD mediates the preservation of cone and rod photoreceptors in the ONL and surrounding vascular structures by reducing the rate of apoptosis of photoreceptors in rd1 mice. Light deprivation does not appear to be one of the mechanisms of photoreceptor protection in the detached retinas in these mice.     

视网膜中神经生长因子及其受体作用研究新进展

神经生长因子对神经系统发育过程中的生长、生存及成熟神经系统的维持都是必不可少的。但也有相反的报道 ,NGF可通过神经营养素低亲和型受体 p75 NTR诱导细胞凋亡的发生。我们综述了NGF这两方面的内容 ,着重介绍神经生长因子及其受体在视网膜的分布和作用以及p75 NTR介导细胞凋亡的机制。     

兔视网膜脱离后出现神经感觉层细胞凋亡

目的:研究实验性视网膜脱离(retinal detachment,RD)及脱离复位后神经感觉层细胞凋亡情况,探讨RD后视功能损害的机制为临床治疗提供理论基础。方法:健康成年无眼部疾病青紫兰兔40只,采用计算机随机数字表法分为RD后1,3h;1,3,7,14,28d组及正常对照组,共8组,每组5只,选取右眼为致伤眼,视网膜下注射透明质酸钠建立RD模型;分别于建立模型后按时获取兔眼标本,以TUNEL法观察视网膜神经感觉层细胞的凋亡情况。结果:视网膜脱离复位后存在着神经感觉层细胞凋亡现象,正常对照组、14d和28d组几乎不见凋亡细胞,脱离后1,3h;3,7d组在视网膜各细胞层均出现较多的、具有凋亡形态学与生化改变特征的凋亡细胞,其中在3d组视网膜感觉层细胞凋亡细胞数量达到高峰。视网膜神经感觉层凋亡细胞数目在1,3h;3,7d组之间两两比较均有显著性差异(P<0.01);1,3h;3,7d组与正常对照组、1h;1,28d组之间两两比较均有显著性差异(P<0.01);正常对照组、1h;14,28d组之间两两比较无显著性差异。结论:RD复位后,神经感觉层细胞发生凋亡。