七白膏方剂中药提取物对离体人黑素细胞的作用

目的:评价七白膏方剂中的药物对离体培养人黑素细胞的作用.方法:建立体外人表皮黑素细胞模型.醇提法提取各种中药活性成分.以熊果苷为实验对照,检测各种中药提取液对于离体培养人黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的干预作用.结果:低浓度白芷对黑素细胞增殖呈抑制作用(P＜0.05),但高浓度时略呈激活作用.其它中药对黑素细胞增殖和酪氨酸酶活性有抑制作用.不同中药提取液对于黑素合成抑制作用不同.结论:各种中药提取液可影响黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成,从而干预体外人黑素细胞的代谢.     

山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞的作用

目的比较山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞增殖、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响,为探索色素沉着性皮肤病的发病机制以及筛选新的治疗药物提供理论依据。方法以不同浓度(1～100μmol/L)山柰素与熊果苷干预体外培养的人正常黑素细胞,比较两者对黑素细胞的黑素含量、细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响。结果对于黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的抑制作用,山柰素在各个浓度均优于熊果苷,差异有统计学意义(P<0.05),山柰素对细胞增殖抑制率无明显影响,而熊果苷在各浓度对细胞增殖抑制作用显著,且随其浓度增加,抑制率逐渐增强。结论山柰素对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的抑制作用强于熊果苷,并对黑素细胞的增殖及形态无明显的负面影响,是一种有良好应用前景的酪氨酸酶抑制剂。     

窄谱中波紫外线对体外培养黑素细胞增殖及代谢影响研究

目的探讨窄谱中波紫外线(Narrow band ultraviolet B,NB-UVB)对体外培养黑素细胞增殖及黑素代谢的影响。方法不同剂量的NB-UVB作用于体外培养纯的黑素细胞,细胞增殖与活性测定试剂盒(Cell counting kit-8,CCK-8)测定黑素细胞增殖的影响;多巴氧化方法测定酪氨酸酶活性,Na OH裂解法测定黑素含量。结果 NB-UVB对体外培养黑素细胞的增殖有明显抑制作用,且有剂量依赖效应;而对黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有不同程度的促进作用。结论 NB-UVB对黑素细胞的增殖具有抑制作用,而对其功能有促进作用。     

白细胞介素4对体外培养人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐比色(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定不同浓度IL-4对黑素细胞增殖的影响,氢氧压钠(NaOH)裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果 IL-4对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论 IL-4对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用IL-4治疗色素性疾病提供了实验依据。     

迷迭香酸对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素生成的影响。方法取对数生长期的人表皮黑素细胞,分别加入不同浓度的迷迭香酸进行实验。MTT法测定体外培养的人黑素细胞活力,NaOH裂解法测定黑素含量,体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性。结果与对照组相比,10～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞活力无明显影响,而100μmol/L迷迭香酸抑制黑素细胞活力(P0.01);10～80μmol/L迷迭香酸呈浓度依赖性促进黑素细胞黑素合成;10～80μmol/L迷迭香酸对蘑菇酪氨酸酶活性无明显影响(P0.05);20～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞酪氨酸酶活性有促进作用(P0.01)。结论迷迭香酸具有促进人表皮黑素细胞黑素生成的作用。     

阿魏酸对黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨阿魏酸对体外培养的正常人表皮黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响.方法 以不同浓度的阿魏酸干预体外培养的正常人表皮黑素细胞,用MTS法分别检测培养24、48、72 h后黑素细胞的增殖活性.用NaOH裂解法检测培养72 h后黑素细胞的黑素合成.用多巴氧化反应法测定培养72 h后黑素细胞酪氨酸酶活性.用Western印迹法测定培养72 h黑素细胞c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平.结果 与对照组相比,0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸在作用24、48、72 h后,抑制黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（均P＜ 0.05）,其中1 mg/ml阿魏酸作用72 h抑制黑素细胞活性最高.0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸均能显著影响黑素合成和酪氨酸酶活性,并可降低黑素细胞中c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 阿魏酸可抑制培养的人表皮黑素细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶活性,并可下调黑素细胞c-kit蛋白及ERK蛋白的表达.     

蒺藜防白丸对体外培养黑素细胞生物学特性的影响

目的研究蒺藜防白丸对黑素细胞(melanocytes,MC)的形态、增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法采用倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定蒺藜防白丸对黑素细胞增殖的影响,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素含量。结果随着蒺藜防白丸浓度的升高,黑素细胞树突变粗短,且数量减少;低浓度(0.001~0.5mg/mL)的蒺藜防白丸对黑素细胞增殖影响不显著(P0.05),高浓度时(1mg/mL和5mg/mL)抑制作用明显(P0.05);低浓度的蒺藜防白丸可以提高酪氨酸酶活性,其中0.05mg/mL时酪氨酸酶活性最高(P0.05),然而当蒺藜防白丸浓度继续增大,则会对酪氨酸酶活性产生抑制作用;蒺藜防白丸对黑素细胞黑素合成也有类似的影响。结论蒺藜防白丸高浓度时抑制黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成;低浓度时促进酪氨酸酶活性及黑素合成。     

中药单体芍药甙促进黑素合成的机制研究

目的:确定芍药甙(paeoniflorin)对促进黑素合成的作用.方法:MTT法测定芍药甙对黑素细胞增殖影响,多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成, 定量定时RT-PCR和蛋白印迹法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达.结果:100 μg/mL芍药甙对细胞的生长有抑制作用;5～10 μg/mL浓度可促进促黑素细胞的增殖;芍药甙增强酪氨酸酶的活性,增加黑素合成;上调TYR,TRP-1 mRNA表达.结论:芍药甙可促进黑素细胞增殖,通过上调酪氨酸酶的活性促进黑素合成.     

内皮素-1对培养的黑素细胞生物学特性的影响

目的:探讨内皮素-1对体外培养的正常人黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法:采用不含佛波醇酯和霍乱毒素的培养液培养黑素细胞,倒置显微镜观察细胞形态,分别用CCK-8法、多巴氧化法和NaOH法测定细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量.结果:内皮素-1可促进黑素细胞的树突形成,可上调酪氨酸酶活性,增加黑素合成,均在10 nM 时最显著.1～100 nM的内皮素-1可明显刺激细胞增殖,随时间延长效应更明显.结论:一定浓度的内皮素-1具有促进培养的人黑素细胞树突形成、增殖、上调酪氨酸酶活性和增加黑素生成的作用.     

热处理对体外培养正常人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理对体外培养的正常人黑素细胞的增殖活性、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响。方法 无菌操作获取正常人包皮环切术后的包皮,按照皮肤表皮细胞培养法获取黑素细胞,利用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系,采用Masson-Fontana染色法对培养细胞进行鉴定,确定细胞种系,噻唑蓝（MTT）比色法测定不同温度条件（39、41、42、43、45 ℃）处理对黑素细胞活力的影响并选择最佳的温度条件,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,比色法测定黑素含量,并将实验组与对照组结果进行比较。结果 体外培养的正常人黑素细胞在5个不同的温度条件作用后,以42 ℃作用后的细胞增殖活性最佳。酪氨酸酶活性和黑素含量测定结果显示,42 ℃每天1 h连续干预3 d后,体外培养的正常人黑素细胞的酪氨酸酶活性增长率为36.4%,黑素合成增长率为78%,均明显高于对照组（P值均 < 0.01）。结论 热处理可以增强体外培养的人黑素细胞的增殖活性,促进其黑素合成,并且可提高其酪氨酸酶的活性。     

芍药苷对黑素细胞生物活性的影响

目的:检测芍药苷对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法:建立正常人表皮黑素细胞培养体系,加入不同浓度(5~640μg/mL)芍药苷并作用一定时间后,采用MTT法、体外氧化DOPA反应法、NaOH法等分别测定黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量的变化。结果:40~160μg/mL芍药苷呈剂量依赖性抑制黑素细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);5-20μg/mL芍药苷对酪氨酸酶活性呈剂量依赖性促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);10-20μg/mL芍药苷对黑素细胞黑素合成起促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷在较高浓度范围内(40~160μg/mL)对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖有剂量依赖性抑制作用;在较低浓度范围内(10-20μg/mL)对其黑素合成有促进作用。     

甲氧沙林对培养人表皮黑素细胞黑素合成的影响及信号转导的研究

目的：观察甲氧沙林(8-甲氧补骨脂素，8-MOP)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响，并初步探讨8-MOP诱导表皮黑素细胞分化的信号转导途径。方法：采用4种浓度(10～500μmol／L）的8-MOP作用于体外培养的人表皮黑素细胞，观察不同浓度、不同时间8-MOP对黑素细胞的形态、增殖、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响，并用放射免疫法测定8-MOP对细胞内环磷腺苷酸(cAMP)含量的影响。结果：100μmol／L 8-MOP作用黑素细胞120h能显著促进酪氨酸酶的活性，提高黑素细胞的黑素含量，8-MOP抑制黑素细胞增殖和提高细胞内cAMP的水平呈浓度依赖性。结论：8-MOP在体外能直接刺激表皮黑素细胞的黑素合成，上述变化可能通过cAMP依赖的蛋白激酶(PK)A信号通路发挥作用。     

甘草提取物对人黑素细胞黑素合成的影响

目的: 评价甘草提取物对人原代黑素细胞酪氨酸酶及黑素合成的影响.方法:选择2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 mg/L6个浓度的甘草作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,分别测定细胞增殖活性、酪氨酸酶活性和黑素含量,western blot方法检测甘草作用后黑素细胞中酪氨酸酶蛋白的表达.结果: 甘草显著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性.结论: 甘草通过下调酪氨酸酶的表达抑制黑素合成和酪氨酸酶活性.     

两味中药单体对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的: 探讨蛇床子素、黄芩苷对体外培养人黑素细胞及其与角质形成细胞共培养体系中酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法: 培养人表皮黑素细胞及黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用MTT法、多巴氧化法及NaOH法测定蛇床子素、黄芩苷对黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.以补骨脂素作为对照.结果: 蛇床子素、黄芩苷均可促进酪氨酸酶活性及增加黑素合成,但对共培养体系中黑素细胞的作用强于体外纯黑素细胞的作用(P<0.05);在对酪氨酸酶活性的影响中,黄芩苷的作用强于蛇床子素,其差异具有显著性(P<0.05);在对黑素合成的作用上,蛇床子素强于黄芩苷(P<0.05).结论:蛇床子素、黄芩苷对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成均有较强的促进作用,且对共培养体系的作用强于对纯黑素细胞的作用.     

姜黄素对正常人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的研究姜黄素对体外培养的正常人表皮黑素细胞黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定姜黄素对人表皮黑素细胞的活力的影响,体外氧化DOPA反应方法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素生成量。结果姜黄素在浓度小于或等于10μmol/L时无明显细胞毒性。姜黄素在浓度大于或等于2.5μmol/L时呈剂量依赖性抑制酪氨酸酶活性,减少黑素生成,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素抑制培养的人表皮黑素细胞的黑素生成,可能具有开发成为美白产品的前景。     

橙皮苷对人黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响

目的:观察橙皮苷对人原代黑素细胞酪氨酸酶及黑素合成的影响,探讨其作用机制.方法:选择50、100、200、300、400、500 和600 mg/L 7 个浓度的橙皮苷作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,分别测定细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量.结果:橙皮苷显著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性.结论:橙皮苷可抑制黑素合成和酪氨酸酶活性.     

中药滋补肝肾方对人黑素细胞株黑素合成的影响

目的通过中药滋补肝肾方对人黑素细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量影响的研究,探讨本方治疗白癜风的作用机制.方法采用4-甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定本方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法测定中药对黑素含量的影响.结果滋补肝肾方对体外培养的人黑素细胞具有促进细胞增殖、提高黑素含量和酪氨酸酶活性作用.结论本方能促进黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗白癜风的作用机理之一.     

欧前胡素抑制人表皮黑素细胞黑素生成

目的：评价欧前胡素对培养人表皮黑素细胞黑素生成的作用。方法：体外分离、纯化培养人表皮黑素细胞。随机分为空白组、熊果苷组和欧前胡素组（12．5μM,25μM和50μM）,作用48h,观察黑素细胞形态．检测黑素细胞活力、酪氨酸酶活性和黑素含量,免疫荧光显微镜观察欧前胡素对黑素细胞酪氨酸酶的影响。结果：不同浓度（0、12．5μM、25μM和50μM）欧前胡素作用于黑素细胞48h后,细胞活力分别为100％、107．8％、87．5％和59．7％。低浓度欧前胡素不影响黑素细胞形态,高浓度（50μM）对黑素细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量有抑制作用,呈剂量依赖性。欧前胡素对酪氨酸酶蛋白在细胞内定位未见明显影响,但酪氨酸酶荧光强度降低。结论：欧前胡素抑制体外培养人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性而降低黑素生成。     

芪白合剂对黑素细胞作用的研究

目的：研究芪白合剂对黑素细胞的影响，探讨其治疗白癜风的药理作用。方法：将兔含药血清加入传代培养的正常人黑素细胞，用MTT法、多巴氧化法及NaOH法测定含药血清对黑素细胞的增殖、酪氨酸酶的活性及黑素合成的影响。结果：未灭活组含药血清可以促进黑素细胞增殖，上调酪氨酸酶活性以及增加黑素合成，效果较灭活组显著。结论：芪白合剂直接作用于黑素细胞，促进黑素细胞增殖，上调酪氨酸酶的活性，增加黑素合成，可用于白癜风的治疗。     

女贞子对培养的黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的影响

目的 研究女贞子单体酪醇和齐墩果酸对人黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法 采用MTT法测定细胞增殖情况,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,半定量RT-PCR检测药物对黑素细胞酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达的影响。结果 加入酪醇72h后,各组黑素细胞的酪氨酸酶活性和合成黑素能力明显增强,且呈浓度依赖性;酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达量分别比空白对照增加39.10%和99.26%;齐墩果酸也能明显激活酪氨酸酶(P<0.01),促进黑素合成(P<0.05),并使黑素细胞酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1mRNA表达量分别比加入无水乙醇的对照增加31.88%和17.73%。结论 酪醇和齐墩果酸可能通过上调酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA的表达而增强正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性:两者可能是女贞子中影响黑素细胞生物学活性的主要成分。