小鼠白念珠菌系统性感染中白介素 4 表达的研究

目的了解白介素4（IL－4）在白念珠菌系统性感染中所起的作用。方法建立健康小鼠及地塞米松诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染模型,用酶联免疫吸附试验（ELISA）及逆转录－聚合酶链反应分别检测脾内IL－4及mRNA水平,用平皿稀释法检测肾内菌落形成单位（CFU）,并记录平均生存时间。结果健康鼠致死量感染后3d、7d脾中IL－4蛋白水平分别为(124.8±24.1)pg/g、(262.8±21.8)pg/g(P<0.01),肾内带菌量分别为（21.25±6.13）×102CFU、（57.52±10.41）×102CFU（P<0101）;免疫抑制鼠组感染后3d、7d脾中IL-4蛋白水平分别为（85.3±18.8）pg/g、（140.7±37.2）pg/g（P<0.05）,肾内带菌量分别为（12.00±2.80）×102CFU、（68.75±13.81）×102CFU（P<0.01）。上述两组感染后3d、7d脾中mRNA水平表达趋势与其IL-4蛋白水平个似。致死量组平均生存时间16d,免疫抑制鼠组平均生存时间12.4d。结论IL-4可能参与实验性小鼠白念珠菌系统性感染的发病。     

重组白介素18抗小鼠系统性白念珠菌感染的研究

目的 探讨重组白介素18在抗小鼠系统性白念珠菌感染中的作用。方法 建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染动物模型，设置对照组（单纯白念珠菌感染组）与处理组（白念珠菌感染前注射重组白介素18）。用平皿稀释法检测肾脏、脾脏组织菌落形成单位（cfu）数目；制作肾、脾脏组织病理学标本，评估其病理学分级；并通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测脾脏干扰素γ分泌水平。结果 感染后2，3，7天，处理组肾脏cfu分别为4.996 ± 0.063，4.765 ± 0.188，3.985 ± 0.133，对照组肾脏cfu分别为5.786 ± 0.110，6.097 ± 0.079，5.996 ± 0.082，处理组显著低于对照组（P < 0.01）；脾脏组织cfu值也低于对照组，但两组差异无统计学意义（P > 0.05）。肾脏组织病理学评分处理组低于对照组，处理组较对照组感染程度减轻，差异有统计学意义（P < 0.05）；脾脏组织病理学评分处理组也低于对照组，但差异无统计学意义（P > 0.05）。同时检测脾脏干扰素γ分泌水平，感染后2，3，7天，处理组分别为73.529 ± 6.070，92.181 ± 7.820，108.564 ± 9.802 pg/mL，对照组分别为40.511 ± 4.456，59.414 ± 5.041，64.455 ± 5.272 pg/mL，处理组明显高于对照组，差异具有统计学意义（P < 0.01）。结论 重组白介素18在小鼠系统性白念珠菌感染中具有保护作用。     

小鼠系统性白念珠菌感染脾γ-干扰素水平测定

目的通过测定脾脏γ-干扰素含量在小鼠系统性白念珠菌感染不同时期水平,推测其在系统性白念珠菌感染过程中所起的作用。方法建立健康小鼠及环磷酰胺诱导的免疫抑制鼠系统性感染模型,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测出脾脏γ-干扰素含量,用平皿系列稀释法检测肾内菌落形成单位(CFU),并记录平均生存时间。结果白念珠菌感染组小鼠脾脏γ-干扰素均在感染后7天达最高峰;其中亚致死量感染组(B组)γ-干扰素含量高于亚致死量白念珠菌感染及免疫抑制剂组(A组)(P<0.05),A组高于免疫抑制组(C组)(P<0.05);B组肾脏菌落计数明显低于A组(P<0.01),肾脏菌落计数与γ-干扰素水平呈明显负相关(P<0.01)。结论小鼠白念珠菌感染早期γ-干扰素是升高的,推测其有限制真菌生长、繁殖、增强机体抗白念珠菌作用。     

系统性白念珠菌感染小鼠IL-12和IL-23的表达

目的了解系统性白念珠菌感染小鼠IL-12和IL-23的表达特征,探讨IL-23在抗白念珠菌系统感染中的作用,并重新认识和评价IL-12的作用。方法通过尾静脉接种白念珠菌建立小鼠白念珠菌系统感染模型,观察小鼠肾脏的病理变化,RT-PCR法检测小鼠肾脏IL-23及IL-12mRNA的相对表达水平,平皿稀释法检测肾脏内菌落形成单位(CFU)。结果IL-12mRNA表达水平在初次感染后第1、3天明显升高(P<0.05),感染后第7天基本正常。IL-23mRNA水平在初次感染后的第1天无明显改变(P>0.05),感染后第3、7天明显升高(P<0.05),而再次感染中其mRNA始终呈现高表达(P<0.05)。结论IL-12和IL-23均参与I型免疫反应,有效抵御白念珠菌系统感染,IL-12可能在炎症反应的早期发挥重要作用,而IL-23可能在炎症反应的后期发挥重要作用。     

抗白介素10单克隆抗体抗小鼠系统性白念珠菌感染的研究

目的 探讨抗白介素10单克隆抗体在抗系统性白念珠菌感染中的作用。方法 建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染动物模型,设置对照组(单纯白念珠菌感染组)与处理组(白念珠菌感染同时注射抗白介素10单克隆抗体)。用平皿稀释法检测肾脏,脾脏组织菌落形成单位(cfu)数目;制作肝、肾、脾脏组织病理学标本,评估其病理学分级;并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脾脏干扰素γ分泌水平。结果 感染后2d、3d、7d,处理组肾脏cfu值明显低于对照组(P<0.05);脾脏组织cfu值也低于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。肾脏组织病理学评分处理组低于对照组,处理组较对照组感染程度减轻,差异有显著性(P<0.01);脾脏组织病理学评分处理组也低于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。同时检测脾脏干扰素γ分泌水平处理组明显高于对照组,具有统计学意义。结论 抗白介素10单克隆抗体在小鼠系统性白念珠菌感染中具有治疗作用。     

抗原致敏树突状细胞抗小鼠白念珠菌系统感染的实验研究

目的研究不同形态白念珠菌致敏的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)对免疫抑制小鼠白念珠菌系统感染的免疫保护作用及所对应的细胞因子改变。方法孢子相和菌丝相白念珠菌在体外分别致敏小鼠骨髓来源的DC(BM-DC),测定混合培养上清IL-12水平;尾静脉回输免疫抑制小鼠体内后,ELISA法测定各组小鼠脾IFN-γ及IL-4水平,并检测肾携菌量。结果DC孢子致敏组上清IL-12水平(380.2±104.13)pg/mL明显高于DC菌丝致敏组和对照组(P<0.05);而DC菌丝致敏组(74.79±23.47)pg/mL与单纯DC培养组上清IL-12水平(19.71±9.21)pg/mL差异无统计学意义(P>0.05)。孢子致敏DC、菌丝致敏DC分别过继免疫小鼠后,前者脾脏IFN-γ水平(269.43±17.34)pg/g明显高于其他组(P<0.05),IL-4水平(6.23±0.37)pg/g则明显低于其他对照组(P<0.05);荷菌一周后孢子致敏DC回输组小鼠肾携菌量(3.58±2.32)×102CFUs与健康小鼠荷菌组比较无统计学意义(P>0.05);其他各组间肾携菌量比较则有统计学意义(P<0.05)。结论尾静脉回输白念珠菌孢子体外致敏的小鼠骨髓来源DC可有效诱导免疫抑制小鼠抗白念珠菌保护性免疫。     

系统性尖端赛多孢子菌感染小鼠IL-12表达的研究

建立小鼠系统性尖端赛多孢子菌感染模型,用酶联免疫吸附试验(ELISA)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测脾内IL-12蛋白质及mRNA水平,用平皿系列稀释法检测肾内菌落形成单位(CFU),并记录平均生存时间(MST)。结果,脾内IL-12蛋白质含量:致死量组均低于正常组;亚致死量组均高于正常组,且第7天显著高于第3天;地塞米松免疫抑制组均高于正常组。此外,免疫抑制组均低于相应时间亚致死量组。脾中IL-12mRNA表达水平与蛋白质水平基本一致。致死量组及免疫抑制组肾内均有大量菌生长,亚致死量组肾内菌量少。致死量感染组平均生存时间为13.6天,免疫抑制组为14.2天,对照组和亚致死量组均超过45天。结果示健康鼠大量菌感染及免疫抑制鼠小量菌感染均可引起致死性感染,而IL-12在小鼠系统性尖端赛多孢子菌感染中可能具有保护作用。     

白介素2激活人外周血单一核细胞抗白念珠菌活性的研究

目的 研究在体外人介素１（ＩＬ－１）,重组人白介素２（ＩＬ－２）,重组人γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）,重组人肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）能否激活人外周单一核细胞（ＰＢＭＣ）,使之具有抗白念珠菌活性。     

白念珠菌诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞焦亡的初步研究

【摘要】 目的 探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）焦亡的影响。方法 通过活细胞工作站实时观察白念珠菌［感染复数（MOI） = 50,下同］体外诱导BMDM后是否发生焦亡;将BMDM分为对照组、白念珠菌组,分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h,实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 （NLRP3）、白细胞介素1β （IL-1β）、IL-18 mRNA表达水平,Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后,酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型（WT）BMDM及 GSDMD 敲除（KO）BMDM 15 min,采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率;诱导6 h后,采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶（LDH）释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β + 白念珠菌组,用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对t检验、Kruskal-Wallis 检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。结果 白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象,证实焦亡发生;与对照组相比,白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高（t = 13.02、17.51,P = 或＜0.001）,而IL-18 mRNA表达水平无明显变化（P = 0.486）,且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高（H = 12.90,P = 0.012）,而IL-18的分泌水平无明显变化（F = 0.48,P = 0.753）,且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组（F = 24.22,P = 0.008）。白念珠菌体外诱导15 min后,GSDMD KO BMDM［（50.3 ± 1.10）%］对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM［（58.53 ± 1.19）%,t = 5.09,P = 0.007］;白念珠菌体外诱导6 h后,流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率（38.40% ± 0.50%）高于WT组BMDM（34.37% ± 0.52%）,t = 4.72,P = 0.009;LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率（22.52% ± 0.18%）高于WT BMDM（12.48% ± 0.15%）,t = 42.36,P＜0.001;IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM 的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低（均P＜0.001）。结论 白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡,焦亡的发生可促进IL-1β释放,并通过提高巨噬细胞的免疫活性,降低巨噬细胞死亡率。     

白念珠菌胞壁溴化十六烷基三甲铵甘露聚糖下调白介素6和8的研究

目的 探讨白念珠菌胞壁溴化十六烷基三甲铵(CTAB)甘露聚糖影响脂多糖诱导人外周血单一核细胞(PBMC)产生的IL-6、IL-8的效应。方法 3种浓度的CTAB甘露聚糖(1.00mg/mL、0.10mg/mL、0.01mg/mL)体外与人PBMC共孵育预刺激24h,然后加入脂多糖(50μg/mL)再孵育24h,收集上清液;在24h、48h时收集3种浓度CTAB甘露聚糖刺激组的上清液;阳性对照为脂多糖(50μg/mL),并设不加刺激剂的空白对照,酶联免疫法检测各组上清液中白介素-6、IL-8(IL-6、8)的含量。结果 在24h、48h3种浓度CTAB甘露聚糖刺激组均未检出IL-6、IL-8;阳性对照脂多糖组IL-6含量为(478.507±24.876)ng/mL,IL-8含量为(529.655±53.279)ng/mL;阴性对照未检出IL-6、IL-8;1.00mg/mLCTAB甘露聚糖+脂多糖组IL-6含量为(85.620±16.058)ng/mL,IL-8为(123.940±20.319)ng/mL;0.10mg/mLCTAB甘露聚糖+脂多糖组IL-6含量为(210.086±27.874)ng/mL,IL-8为(206.798±31.878)ng/mL;0.01mg/mLCTAB甘露聚糖+脂多糖组IL-6含量为(201.387±32.396)ng/mL,IL-8为(203.133±36.012)ng/mL.结论 白念珠菌胞壁CTAB甘露聚糖对脂多糖诱导人PBMC产生IL-6、IL-8具有下调作用。     

系统性红斑狼疮患者血清白介素 10水平与外周血单一核细胞分泌白介素 12水平的关系

在 Th细胞向 Th1/Th2细胞分化过程中,白介素 12(IL－ 12)是决定免疫反应的性质和功效的关键性细胞因子 [1,2],它甚至可以使1已建立的 Th2型为主的反应向 Th1型转变 [3]。我们的实验表明系统性红斑狼疮 (SLE)患者 IL－ 12水平降低主要由单一核细胞分泌能力下降引起,而 IL－ 10对单一核细胞功能有很强的抑制作用。有报道 SLE患者单一核细胞和活化的 B细胞分泌 IL－ 10的能力都是增强的,且 IL－ 10在 SLE的发病中起一定作用 [4]。我们检测了 SLE患者血清 IL－ 10水平,并分析其与体外 IL－ 12分泌水平的关系。同时,在体外予…     

白念珠菌系统性感染中白念珠菌相关抗原检测的意义

甘露聚糖和甘露糖蛋白、葡聚糖、烯醇化酶、磷脂酶和蛋白酶等是白念珠菌胞壁或细胞内的成分。文中就其生物学特性及其作为在感染宿主过程中的特征性标志物在诊断系统性白念珠菌感染中的方法、价值和意义等方面加以综述。     

白念珠菌系统性感染中白念珠菌相关抗原检测的意义

甘露聚糖和甘露糖蛋白、葡聚糖、烯醇化酶、磷脂酶和蛋白酶等是白念珠菌胞壁或细胞内的成分。文中就其生物学特性及其作为在感染宿主过程中的特征性标志物在诊断系统性白念珠菌感染中的方法、价值和意义等方面加以综述。     

白介素-27在小鼠白念珠菌性阴道炎局部的表达及其意义

目的：了解小鼠白念珠菌性阴道炎阴道局部白介素-27（IL-27）的水平变化特点和在感染中的作用以及与小鼠机体免疫状况的关系。方法：建立免疫系统正常（A组）与免疫抑制雌激素化（B组）感染小鼠模型，另设未雌激素化免疫系统正常感染对照组（c组），用逆转录聚合酶链检测鼠模型阴道组织中IL-27p28mRNA水平的变化。结果：A组在感染后第4、第7和第14dIL-27p28mRNA的表达高于C组，差异有显著性（P〈0．01）；B组在感染后第7dIL-27p28mRNA的表达高于C组，差异有显著性（P〈0．01）。A组在第4和第14dIL-27p28mRNA的表达水平较B组高（P〈0．01）。A组和B组在感染的第2和第4dCFU与局部IL-27p28mRNA水平成负相关（P〈0．01或P〈0．05）。结论：阴道局部IL-27可能参与实验性小鼠白念珠菌阴道感染的发病，并起到一定的保护作用。免疫抑制状态下白念珠菌易感性的增加可能与IL-27局部组织含量减少有一定关系。     

Toll样受体与抗白念珠菌感染

Toll样受体蛋白家族属于动物模式识别受体家族,对天然免疫和获得性免疫都有调控作用.与抗白念珠菌感染免疫有关的主要是Toll样受体2和4.Toll样受体2和4可以分别识别病原体,也可以与其他的Toll样受体以二聚体的形式参与识别,或者与其他模式识别受体,如Dectin-1、甘露糖受体等共同识别.免疫细胞表面Toll样受体识别白念珠菌后主要通过MyD88依赖的信号传递途径.激活白细胞的趋化作用,增强吞噬细胞的吞噬、杀伤功能,促进相关细胞因子的释放,从而起到抗白念珠菌的作用.     

白介素12在抗系统性真菌感染中的应用

白介素12及其受体都是由两条不同的多肽链构成的异二聚体分子,它具有多功能。白介素12在多个动物模型中均显示出抗系统性真菌感染的作用。其作用可能是通过诱生γ干扰素,调节Th1/Th2平衡及诱导α肿瘤坏死因子、O2^-的产生而实现的。     

白念珠菌抗体疫苗研究进展

白念珠菌是免疫力低下患者黏膜和系统的真菌致病源,侵袭性念珠菌感染有很强的致死性.即使是健康的个体,也容易感染阴道念珠菌病和其他皮肤黏膜念珠菌病.传统抗真菌药的疗效有一定的局限性和毒副作用,并且容易产生耐药.近年来,一些新型抗体疫苗已经研发并应用于动物模型和临床,表现出很好的对抗白念珠菌和协同传统抗真菌药物的作用.尽管其疗效和安全性还需要进一步验证,念珠菌抗体疫苗仍具有较好的临床应用前景,有望成为念珠菌病的辅助治疗手段.     

白念珠菌对小鼠致病性试验研究

白念珠菌是最常见条件致病真菌感染的病原菌之一,其致病力强、危害性大,尤以免疫低下者为甚。我们对正常和免疫功能低下小鼠进行了致病性试验,现报道如下。一、材料和方法1菌株:白念珠菌,日本千叶大学真核微生物研究中心保存菌株,编号:ＩＦＭ4009。2实验动物:健康4周龄ｄｄＹ雄性小白鼠75只(日本ＳＬＣ公司提供),体重(20±2)ｇ。小鼠随机分为3组,Ａ组37只为健康组;Ｂ组30只为免疫低下组,给环磷酰胺(日本盐野义制药株式会社)150ｍｇ/ｋｇ腹腔注射,3ｄ后小鼠尾静脉取血白细胞计数1000/ｍｍ3以下,中性粒细胞100/ｍｍ3以下,小鼠呈免疫功能低下状…