鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP 1的表达

目的：探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况。方法：用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况。结果：免疫组化及Western bolt法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达。结论：人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关。     

鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP1的表达

目的:探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况.方法:用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况.结果:免疫组化及Western bolt 法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达.结论:人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关.     

SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1在不同放射敏感度鼻咽癌细胞中的表达

目的 建立鼻咽癌放射抗拒亚系CNE-2S,研究SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路在鼻咽癌细胞系CNE-2和CNE-2S中表达的差异,探讨鼻咽癌放射敏感度变化的分子机制.方法 通过X线大剂量低分割照射技术建立鼻咽癌放射抗拒亚系(子代,CNE-2S1),观察亲代(CNE-2)和子代细胞的形态学和生长动力学差异,检测亲代及子代细胞系放射敏感度相关参数,分析亲代及子代细胞系各自细胞周期分布,同时检测亲代与子代细胞系SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路中各因子的蛋白质表达水平.结果 通过X线大剂量低分割照射技术成功建立鼻咽癌放射抗拒亚系CNE-2S1,且CNE 2及CNE-2S1放射敏感度相关参数具有延续性.同时CNE-2S1细胞S期比例较CNE-2细胞明显增高,G1期细胞明显减少,G2-M期细胞比例变化不明显.此外SHP-1、CDK6以及CylinD1在CNE-2S1细胞中的蛋白表达水平明显上调,p21表达水平则明显下调,其与CNE-2细胞之间的差异具有统计学意义.结论 SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路可能在调控鼻咽癌放射敏感度和细胞周期分布方面发挥一定作用.     

绿色荧光蛋白标记的鼻咽癌放射抗拒性裸鼠移植瘤模型的建立及其活体成像观察

目的建立绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein,GFP）标记的鼻咽癌放射抗拒性裸鼠移植瘤模型,为后续研究奠定基础。方法将以慢病毒转染的方法建立稳定表达GFP标记的人鼻咽低分化鳞癌细胞株GFP．CNE-2和放射抗拒性细胞株GFP—CNE-2R接种至裸鼠体内,建立皮下移植的肿瘤模型。待肿瘤直径约为1em时给予相同剂量10Gv的X射线一次性照射,通过小动物活体成像仪观察移植瘤的生长和转移情况。结果成功建立了稳定表达GFP标记的放射抗拒性及放射敏感的人鼻咽低分化鳞癌细胞株GFP—CNE-2R和GFP—CNE．2。克隆形成实验显示GFP—CNE．2R细胞株具有放射抗拒性。GFP—CNE-2R和GFP—CNE-2细胞的皮下成瘤率均为100％,证实建模成功。相对于GFP—CNE．2裸鼠移植瘤,GFP—CNE-2R移植瘤的生长受照射抑制不明显。结论相对于GFP—CNE-2裸鼠移植瘤,GFP-CNE-2R裸鼠移植瘤具有更强的放射抗拒性。     

耳、鼻、咽、喉（060036～060071）

27例外耳道癌临床分析；定量和定位检测EB病毒在鼻咽癌组织中的感染状态；PAI-1在鼻咽癌细胞系（CNE-2Z）及其克隆珠（CNE-2Z-H5、CNE-2Z-H5-9）中的表达和意义;GSTY1-GSTM1基因缺失多态性与鼻咽癌发病的关系;干扰素α-2a对人鼻咽癌细胞株CNE-Ⅰ放射敏感性的影响；不同p53功能状态鼻咽癌细胞株的放射生物学特性；鼻咽癌后程三维适形放疗加时间调节化疗的临床前瞻性随机研究；[编者按]     

环氧化酶-2与鼻咽癌细胞分化的关系

目的检测人鼻咽癌细胞株中环氧化酶-2（COX-2）的表达情况,探讨鼻咽癌细胞中COX-2的表达与细胞分化程度的关系。方法应用流式细胞仪和免疫细胞化学法对细胞中COX-2的表达进行定位定量检测。结果2种细胞株（CNE1和CNE-2Z）均有COX-2的表达,表达强度和分布与分化程度有关,分化越低,表达越高;流式细胞仪检测COX-2在细胞株中表达强弱顺序为CNE-2Z〉CNE1,阳性表达细胞数CNE-2Z〉CNE1,差异有统计学意义,P〈0.01;免疫细胞化学法检测COX-2主要表达在细胞质,分布与分化程度有关,细胞质表达强度CNE-2Z〉CNE1,差异有统计学意义,P〈0.01。结论COX-2在鼻咽癌细胞株中表达和分布与细胞株的分化程度有关。     

鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性异质性与凋亡的关系

目的评估人鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性异质性与凋亡敏感性的相关性。方法用流式细胞仪、荧光显微镜、电镜、Western-blot检测H5和S1凋亡能力的不同及凋亡相关蛋白表达的差异。结果H5、S1两种细胞的凋亡率均随着照射后时间的延长而增加,但H5比S1高且差异有显著性(P<0.05)。结论人鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性的异质性,与细胞受射线照射后凋亡呈正相关,对射线敏感的亚细胞系凋亡率高。     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的放射增敏作用及其作用机制

目的:研究姜黄素(curcumin)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测姜黄素药物毒性,用克隆形成实验观察其对放射敏感性的影响,用流式细胞仪(FCM)技术分析对CNE-2Z细胞周期分布和姜黄素联合辐射引起的细胞周期阻滞的影响。结果:不同浓度的姜黄素作用于CNE-2Z细胞后,其细胞毒性呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时,即可降低放射后CNE-2Z细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.52±0.25。姜黄素以及姜黄素联合辐射作用CNE-2Z细胞24h后,细胞周期主要阻滞在辐射敏感时相G2/M期。结论:姜黄素对CNE-2Z细胞有放射增敏作用,其机制可能与其引起的细胞周期阻滞等因素有关。     

不同放射敏感性的鼻咽癌细胞中ATM/PI3 K区基因突变的研究

目的：探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞（CNE1、CNE2）中ATM／PI3K区基因突变的情况。方法：采用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术和荧光标记的双脱氧核糖核苷三磷酸（ddNTP)循环测序方法，对不同放射敏感性的鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2中ATM／PI3K关键区域进行突变检测。结果：所测CNE1、CNE2中的ATM／PI3K区序列中没有发生突变。结论：鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2内在放射敏感性的差异可能由ATM／PI3K区基因突变以外的因素所决定。     

PAI-1对鼻咽癌侵袭和转移的影响

目的探讨尿激酶激活剂抑制剂-1(PAI-1)对鼻咽癌侵袭和转移的影响。方法以高低不同淋巴道转移能力的鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)及其克隆株(CNE-2Z—H5，CNE-2Z—H5—9)作为研究材料；应用逆转录聚合酶反应(RT—PCR)方法检测PAI-1表达水平；应用酶联吸附法(ELISA)测定PAI-1在3种细胞中的蛋白表达量；通过侵袭抑制实验观察PAI-1在鼻咽癌的侵袭和转移过程中的作用。结果PAI-1在CNE-2Z、CNE-2Z—H5中均有表达，但无显著性差异；PAI-1在(2NE-2Z—H5—9中无表达。抗PAI-1抗体对CNE-2Z—H5—9侵袭无影响。结论PAI-1可能抑制鼻咽癌的侵袭和转移。     

敲低Bmi-1对鼻咽癌细胞CNE2放射敏感性的影响

目的探讨敲低Bmi-1的表达水平对鼻咽癌细胞CNE2放射敏感性的影响。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测4种鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、HNE1和HONE1中Bmi-1的表达,筛选出高表达Bmi-1的细胞株。设计3条针对Bmi-1 mRNA的干扰序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3),用于构建慢病毒重组载体Bmi-1-shRNA1、Bmi-1-shRNA2、Bmi-1-shRNA3,然后转染至高表达Bmi-1的细胞株中,筛选出敲低Bmi-1效果最佳的慢病毒重组载体。将筛选出的慢病毒重组载体转染至高表达Bmi-1的鼻咽癌细胞株中,使用2 Gy放射线(IR)进行照射,通过平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况。结果在4种鼻咽癌细胞株中,CNE2细胞的Bmi-1 mRNA表达水平最高(P<0.05),CNE1、CNE2细胞中Bmi-1蛋白表达相对较高(P<0.05)。构建的3条慢病毒重组载体Bmi-1-shRNA1、Bmi-1-shRNA2、Bmi-1-shRNA3均可降低CNE2细胞中...     

DNA-PKcs 表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

 目的 探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1（鼻咽高分化鳞癌细胞株）和CNE-2（鼻咽低分化鳞癌细胞株）中DNA依赖蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法 通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数，并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β,SF2、MID值，以及四氮唑蓝比色分析法（MTT法）检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率，以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术（RTrFQPCR）检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKCS基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高，MID值分别为2．78、1．61，SF2值分别为0．627、0．341；4Gy照射后12h的存活率分别为88．2％、72．3％；RT-FQPCR显示两株细胞中均有DNA-PKCS基因的表达，其相对表达量之比为7．54±2．71（t=4．17，P=0．014），表达差异有统计学意义，DNA-PKCS基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNB2比CNE-1对射线更敏感，DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。     

不同敏感性鼻咽癌细胞株中Ku蛋白表达情况比较

目的　比较作为DNA双链断裂修复蛋白DNA依赖性蛋白激酶 (DNA PK)的调节亚基70 Ku、80 Ku在不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中的表达情况。方法　成克隆实验测定鼻咽癌高分化鳞癌细胞CNE1和低分化鳞癌细胞CNE2不同剂量照射后的存活分数 ,用线性二次模型拟合剂量存活曲线并求出放射生物学参数α、β、SF2、MID以评价两株细胞的放射敏感性。Westernblot检测照射前和后不同时间及不同剂量CNE1、CNE2细胞中Ku的表达 ,检测蛋白条带的吸光度值做半定量分析。结果　CNE1在各个剂量点的存活分数均比CNE2高 ,MID也大于CNE2 (2 .35∶1.11) ,SF2也大于CNE1(0 .5 4∶0 .37)。Westernblot显示两株细胞中70 Ku、80 Ku均有表达 ,蛋白条带的吸光度值测定显示70 Ku在CNE1、CNE2细胞中分别为 2 0 .0 3± 7.5 6和 19.36± 6 .0 4 ,80 Ku分别为 2 5 .98± 12 .87和 2 3.74±9.2 4 (P值均 >0 .0 5 )。蛋白表达的定量和定性分析同样显示 4Gy照射后不同时间点及 0～ 16Gy照射后 12hKu的表达无统计学差异。结论　实验验证了CNE2比CNE1对放射更敏感 ;照射前后两个细胞均有70 Ku、80 Ku蛋白表达且无差异 ;CNE1、CNE2放射敏感性的差异与Ku蛋白表达量无明显关系。     

E1A基因对鼻咽癌细胞放射敏感性影响的初步实验研究

目的 探讨E1A基因对鼻咽癌细胞放射增敏作用及相关机制.从而为提高鼻咽癌放射治疗疗效提供实验依据.方法 经腺病毒介导,将E1A基因导入人鼻咽癌细胞系CNE2细胞.经RT-PCR鉴定,获得含E1A的阳性克隆.将未转染的CNE2细胞、转染对照空载体Ad-B-gal的CNE2细胞和转染Ad-E1A的CNE2细胞用6 MV X线分别照射0、2、4、6、 8 Gy后进行成克隆分析并绘制细胞存活曲线,计算放射增敏比.流式细胞术和RT-PCR检测转染前后的细胞周期分布以及wtp53表达情况.结果 转染后阳性克隆细胞RT-PCR结果说明E1A已整合到细胞基因组中并且稳定表达.细胞存活曲线结果显示转染E1A的CNE2细胞放射增敏比分别为1.37(D_0值比)、1.95(D_q值比)、1.46(SF_2值比).未转染及空载体转染后的CNE2细胞照射后细胞存活曲线分析结果显示无差异,D0D_qSF2值分别为1.57 Gy及1.53 Gy、1.82 Gy及1.78 Gy、0.89及0.82.流式细胞术显示细胞周期出现G_2+M期阻滞,RT-PCR结果显示E1A基因能提高wtp53的表达.结论 E1A基因能显著提高人鼻咽癌细胞的放射敏感性,其作用机制可能与E1A基因提高叭p53基因的表达和引起G2+M期阻滞有关.     

蟾蜍灵对人鼻咽癌细胞CNE-1的放射增敏作用

目的:观察蟾蜍灵对鼻咽癌细胞的放射增敏作用。方法:通过MTT法获得单纯蟾蜍灵作用于鼻咽癌细胞CNE-1的细胞存活曲线及抑制细胞增殖50%的药物浓度(IC50),然后采用蟾蜍灵及放射线单独或联合作用于CNE-1细胞,用克隆形成法经SPSS 9.0软件绘制细胞存活曲线,获得不同处理条件下的放射增敏比。结果:单纯用药组,CNE-1细胞的存活率随蟾蜍灵浓度的增加而降低,其IC50约为2.5×10-7mol/L。2.5×10-9和2.5×10-7mol/L的蟾蜍灵作用CNE-1细胞24 h后均见到放射增敏作用,增敏比分别为1.21和1.42。结论:蟾蜍灵对鼻咽癌细胞CNE-1有放射增敏作用,且增敏作用随浓度的增加而增强。     

人鼻咽癌细胞株自发性凋亡与放射敏感性的研究

  目的   探讨鼻咽癌细胞自发性凋亡对放射敏感性的预测意义及自发性凋亡水平差异的分子学基础。   方法   克隆形成实验测定人鼻咽高分化鳞癌细胞株(CNE-1)、人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)接受Varian加速器单野照射(6 MV X线)的存活分数, 单击多靶和线性二次模型拟合辐射剂量存活曲线并求出放射生物学参数; 流式细胞术检测自然生长2、4、6、8d细胞凋亡情况; RT-PCR、Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、Bax、Bad、Bid、Bak转录及蛋白表达水平。   结果   函数模型参数显示CNE-2较CNE-1具有更高的辐射敏感性; 相同培养天数下CNE-2早期及晚期凋亡率显著高于CNE-1(P < 0.05);CNE-2中Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、Bax、Bad、Bid、Bak基因转录及蛋白表达水平均高于CNE-1(P < 0.05)。   结论   自发性凋亡可能成为放射敏感性的预测指标, 自发性凋亡水平差异可能与凋亡相关基因差异性表达有关。      

形态学定量测定对预测鼻咽癌细胞放射敏感性的价值

目的　研究人鼻咽癌细胞形态、DNA含量及倍体与放射敏感性的异质性之间的关系 ,探讨预测肿瘤放射敏感性的可行方法。方法　应用 2种放射敏感性不同的鼻咽癌细胞系CNE 2Z亚克隆株F1、S1,通过细胞培养及裸鼠体内实验 ,用HE染色法、Feulgen染色法和图像分析仪 ,观察这 2株细胞及其裸鼠移植瘤的形态学参数、DNA含量及倍体分布。 结果　形态参数测定表明 ,F1细胞面积、细胞体积等参数小于S1(P <0 .0 1) ,核周长、核直径大于S1(P <0 .0 1) ,核质比大于S1(P <0 .0 1)。F1细胞及裸鼠移植瘤DNA含量、DI值、5C及 >5C比例均高于S1组 (P <0 .0 1)。结论　F1、S1放射敏感性的异质性与细胞分化程度、DNA含量及 >5C比例有关 ,采用计算机图像分析法定量分析 ,可以预测鼻咽癌细胞间的放射敏感性差异     

鼻咽癌放射敏感性异质性的形态学差异观察

目的探讨鼻咽癌放射敏感性异质性与形态学变化的相关性。方法应用电镜观察并用体视学技术测算,比较鼻咽癌细胞系CNE-2Z亚克隆株H5和S1,于体内体外照射后形态学改变的差异;用流式细胞仪、荧光显微镜检测H5和S1放射后凋亡率的不同,用Western-blot检测H5和S1放射后凋亡蛋白Bcl-2表达的差异,以期探讨其形态学异质性机制。结果H5和S1照射后形态学改变差异有显著性;照射后的H5比S1凋亡率高,对射线敏感;S1细胞的各个照射剂量组Bcl-2蛋白表达无明显差异;而H5细胞的各个照射剂量组Bcl-2蛋白表达随照射剂量的增加而递减。结论H5、S1照射后形态学的差异变化可用于预测其放射敏感性的异质性。     

人鼻咽癌细胞系CNE-2Z两种明胶酶表达及分泌的差异

目的:探讨人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z两种明胶酶表达及分泌的差异.方法:免疫细胞化学法检测CNE-2Z细胞明胶酶A及明胶酶B的表达;明胶酶谱法检测两种明胶酶的分泌情况.结果:CNE-2Z细胞明胶酶B强阳性表达率明显高于明胶酶A,明胶酶B的分泌量或活性比明胶酶A高.结论:明胶酶B在鼻咽癌恶性进展中作用可能强于明胶酶A,有可能成为鼻咽癌的潜在治疗靶点.     

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及其作用机制的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人鼻咽癌CNE2Z细胞的生物学效应及其作用机制。方法:台盼蓝计数法计算As2O3的IC50;CNE-2Z细胞经As2O3处理后,通过流式细胞仪、荧光染色及DNA电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪测定bcl2和bax阳性细胞百分率;罗丹明123染色后进行线粒体膜电位分析。结果:As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制CNE2Z细胞生长,其IC50为(1.35±0.30)μmol/L;0.5～2.0μmol/LAs2O3处理CNE2Z细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,荧光显微镜下可见明显的细胞凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带;As2O3对bcl2的表达没有影响(P>0.05),但能显著增加bax的表达(P<0.01)及降低线粒体膜电位(P<0.01)。结论:As2O3在体外可诱导鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡,其机制可能与上调bax表达和降低线粒体膜电位有关。