胱硫醚β-合酶/胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢体系小干扰RNA对大鼠正常肝细胞系BRL凋亡的影响

目的 探讨内源性胱硫醚 β-合酶（CBS）/胱硫醚 γ-裂解酶（CSE）-硫化氢（H2S）体系在生理状态肝细胞凋亡中的影响。方法 培养大鼠正常肝细胞株BRL。小干扰RNA（siRNA）序列筛选：随机分组为阴性siRNA序列转染组、CBS siRNA序列转染组和CSE siRNA序列转染组,转染时间为48h或24h;siRNA转染后细胞凋亡检测：随机分组为siRNA阴性对照组、溶剂对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、（CBS+ CSE）siRNA组,作用时间为转染后0、4、8、12、24 h;凋亡机制探讨：随机分组为siRNA阴性对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、（CBS+ CSE）siRNA组,作用时间为转染后4、8、12、24 h;每组均为4个平行样。RT-PCR、Western blot检测BRL细胞中CBS、CSE的表达,siRNA基因静默CBS、CSE,去蛋白法检测H2S生成,Hoechst荧光染色、流式细胞术检测BRL细胞凋亡,荧光染色检测线粒体膜电位（MMP）变化,Western blot检测胞浆内细胞色素C（Cyt C）和激活型caspase 3蛋白表达变化。结果 BRL细胞株存在CBS、CSE表达。CBS/CSE siRNA转染后,细胞内源性H2S生成降低,细胞凋亡且凋亡率随时间延长而逐渐增加。结论 抑制内源性H2S体系可引起生理状态肝细胞凋亡,机制可能部分涉及凋亡线粒体途径。     

硫化氢在抗动脉粥样硬化的研究进展

内源性硫化氢是一种公认的继一氧化氮和一氧化碳后的第三种信号气体分子,哺乳动物内源性硫化氢主要以两种5′-磷酸吡哆醛依赖酶催化产生,分别为胱硫醚-β合酶(CBS)和胱硫醚-γ裂解酶(CSE)。硫化氢对心血管具有保护作用,如降低血压,修复心肌损伤,改善心脏肥大和心力衰竭症状,延缓动脉粥样硬化病程等,CSE/H2S途径的影响在动脉粥样硬化病程尤为显著。近年来,外源性硫化氢(如Na2S,NaHS,GYY4137,SG1002)也影响着动脉粥样硬化的发生发展,并且H2S的合成抑制剂(如D,L-炔丙基甘氨酸)会加剧动脉粥样硬化斑块的形成。硫化氢对动脉粥样硬化的影响不可忽视,但其影响途径复杂,本文旨在内外源性硫化氢在脂代谢,炎性反应,氧化应激,高同型半胱氨酸损伤以及细胞凋亡对动脉粥样硬化的相关性研究做一综述,以期为后面探究硫化氢对动脉粥样硬化影响提供依据。     

硫化氢对离体大鼠急性缺血心肌心功能的影响

目的观察离体大鼠急性缺血心肌内源性硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2S/CSE)体系的动态变化,研究H2S对急性心肌缺血损伤大鼠心脏功能,心肌组织H2S/CSE及心肌梗死体积的影响。方法应用Langendorff心脏灌注系统建立急性心肌缺血损伤模型。分别于相应时间点取材,取材前应用Powerlab/8s多导生理仪记录各组大鼠左室发展压(LVDP)、左室压力变化速率(±dp/dtmax);测定冠脉流量(CF);检测心肌组织中H2S含量及CSE活性;以Evan's蓝和TTC双染法检测心肌梗死体积。结果①与相应假手术组比较,缺血30 min、1、2、3、4 h组LVDP、±dp/dtmax、CF明显降低(P<0.01)。缺血30 min组H2S含量和CSE活性无明显变化,心肌组织无明显梗死灶,缺血1、2、3、4 h组H2S含量和CSE活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。缺血1h组可见明显梗死灶(P<0.01),缺血2、3、4 h组梗死体积明显增大(P<0.01);②与缺血4 h组比较,NaHS低、中、高剂量组LVDP、±dp/dtmax、CF明显升高(P<0.05或P<0.01),H2S含量和CSE活性均升高(P<0.05或P<0.01),NaHS中、高剂量组心肌梗死体积明显减小(P<0.01)。结论H2S与CSE参与了离体大鼠急性心肌缺血损伤。NaHS可增强急性缺血损伤心肌CSE活性,增加H2S含量,使心肌梗死体积缩小,提示H2S可改善急性心肌缺血损伤。     

硫化氢对离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤的影响及机制初探

目的观察内源性CSE/H2S通路的改变以及给予H2S供体对缺血/再灌注心脏的影响,探讨该通路与心脏缺血/再灌注损伤的关系及作用机制。方法采用Langendorff离体灌流装置、通过停灌30min/复灌30min方式造成Wistar大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型;采用外源性NaHS(40μmol.L-1)分别在停灌30min前(SIR)与停灌30min后处理(IRS)对缺血/再灌注心脏的影响。记录心脏收缩期左心室内压上升的最大变化速率(+dp/dtmax)、舒张期左心室内压下降的最大变化速率(-dp/dtmax)及左室内压差(LVP=左室收缩压-左室舒张压)。采用比色法检测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌MDA及SOD;采用比色法检测心肌胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性;采用RT-PCR方法测定心肌组织CSEmRNA表达。结果与缺血/再灌注组(I/R)30min相比,SIR组及IRS组±dp/dtmax、LVP均增高,LDH降低;I/R组MDA水平高于对照组(CON)、SIR组及IRS组(P<0.05,P<0.01);IR组SOD活性低于SIR组及IRS组(P<0.05),但与CON组差别无显著性;I/R组大鼠心肌CSE活性低于CON组(P<0.05);而大鼠心肌CSEmRNA的表达与CON组差异无显著性。结论在缺血前后给予外源性NaHS均可改善因再灌注损伤引起的心肌收缩及舒张功能障碍;其作用机制可能是通过提高心肌SOD活性,增加氧自由基清除而拮抗缺血/再灌注引起的心功能及细胞膜损伤;心肌缺血/再灌注时内源性CSE活性抑制可能与心功能障碍及细胞损伤有关。     

硫化氢对大鼠急性心肌缺血损伤后心功能的影响

目的探讨硫化氢(H2S)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)体系在大鼠急性心肌缺血中的变化及对心功能的影响。方法♂SD大鼠48只随机分为假手术组、缺血组、缺血+硫氢化钠(NaHS)低、中、高剂量组和缺血+炔丙基甘氨酸(PPG)组,每组8只。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型。缺血组、缺血+NaHS低、中、高剂量组和缺血+PPG组大鼠分别于缺血3h时腹腔注射生理盐水,低、中、高剂量NaHS及PPG,假手术组只在大鼠左冠状动脉前降支下穿线但不结扎,各组大鼠均于术后6h时处死并取材。取材前Powerlab/8s多导生理仪记录各组大鼠心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室压力变化速率(±dp/dtmax)等心功能指标;检测血浆中H2S含量、心肌组织CSE活性。结果与假手术组比较,缺血组大鼠心功能指标HR、LVDP、±dp/dtmax明显降低,LVEDP明显升高,血浆中H2S含量和心肌组织CSE活性降低(P<0.01)。与缺血组比较,缺血+NaHS中、高剂量组大鼠心功能指标HR、LVDP、±dp/dtmax明显升高,LVEDP明显降低,心功能改善随NaHS剂量升高有增高趋势;缺血+NaHS低、中、高剂量组大鼠血浆中H2S含量和心肌组织CSE活性升高,且随NaHS剂量升高而增高;缺血+PPG组大鼠心功能指标HR、LVDP、±dp/dtmax明显降低,LVEDP明显升高,血浆中H2S含量和心肌组织CSE活性降低(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠急性心肌缺血时H2S/CSE体系可能参与急性心肌缺血的病理生理过程,给予外源性H2S可明显减轻急性缺血所致的心肌损伤,改善心功能,起到心肌保护作用。     

内源性硫化氢与心血管疾病的研究进展

硫化氢（hydrogensulfide,H2S）是一种具有臭鸡蛋气味的有毒气体,自从1713年第一次对H2S的毒性进行描述后,人们对于其研究就仅限于它的毒性作用,20世纪90年代以来的研究发现,由半胱氨酸代谢生成的内源性H2S存在于哺乳动物的多种组织、器官中,其通过多种调节方式和信号转导形式…参与机体多种生理病理过程,被认为是继NO和CO之后的第三种气体信号分子。其生理学特征、作用及与心血管疾病的关系综述如下。     

内源性硫化氢参与缺血后处理减轻离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤

目的探讨内源性硫化氢是否参与缺血后处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤。方法Sprague Dawley(SD)大鼠离体心脏Langendorff灌流,平衡20min,全心缺血30min,复氧灌注60min,在复灌即刻给与短暂停灌15s/复灌15 s循环4次造成心肌缺血后处理模型。预先给予胱硫醚-γ-裂解酶(cystanthionine-γ-lysase,CSE)抑制剂炔丙基甘氨酸(L-propargylglycine,PAG),以及给予PAG后加用外源性硫化氢供体NaHS后处理,观察它们对缺血后处理的影响。记录心率(HR)、左室发展压(LVDP)、冠脉流出量(CF);检测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌组织CSE活性、硫化氢的含量以及心肌梗死面积。结果缺血/再灌注组LVDP下降、冠脉灌流液中LDH活性明显增加、心肌梗死面积增加(vsControl组,P<0.05)。缺血后处理组LVDP升高、冠脉灌流液中LDH活性下降、心肌梗死面积缩小(vsIR组,P<0.05)。PAG加缺血后处理组心肌CSE活性及H2S生成下降、并且逆转了缺血后处理的作用,而外源性硫化氢供体NaHS后处理组H2S生成回升、LVDP升高、心肌梗死面积缩小(vsIR组,P<0.05)。结论内源性硫化氢参与大鼠心肌缺血后处理减轻缺血/再灌注损伤。     

内源性硫化氢在慢性肾脏病中的研究进展

长期以来,环境中的H2S曾因其对人体的毒性被认为是一种有毒气体,直到20世纪80年代末期,相继在大鼠和人类的脑组织中发现了含量相当高的内源性H2S后,才认为它具有生理功能。越来越多的研究证明,H2S是继NO、CO之后发现的第三种气体信号分子,同NO、CO一样在人体内发挥着重要的生理和病理作用。目前H2S与CKD的关系也逐渐引起人们的重视,现对H2S在CKD中的相关研究进展进行综述。     

硫化氢的治疗性应用研究进展

硫化氢是继一氧化氮和一氧化碳后的第3个气体信号分子,具有广泛的生物学效应,在多种疾病状态中显示了极大的治疗性应用前景。该文结合H2S研究的最新进展围绕其治疗性应用作一综述。     

胱硫醚-β-合酶/硫化氢系统在鱼藤酮诱导PC12细胞损伤中的变化

目的动态研究胱硫醚-β-合酶/硫化氢(CBS/H2S)系统在鱼藤酮诱导PC12细胞损伤中的变化。方法鱼藤酮诱导具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞损伤作为帕金森病(Parkinson's disease,PD)细胞模型,免疫印迹法(Western blot)检测CBS的表达;亚甲基蓝分光光度计法检测细胞内CBS酶活性及硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的生成;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;GSH检测试剂盒检测细胞内GSH含量。结果鱼藤酮损伤6和12 h组,PC12细胞内CBS的表达和活性升高,H2S生成量增加;而在24和48 h组,CBS表达和活性则明显降低,H2S的生成量明显减少;鱼藤酮可以时间依赖性的降低细胞存活率及减少细胞内GSH的含量。结论鱼藤酮刺激引起内源性CBS的表达和活性先升高后降低,H2S的生成先增加后减少,这可能与PC12细胞对抗鱼藤酮诱导的氧化应激损伤有关。     

胱硫醚β-合酶研究新进展

近几年的研究证实[1],高同型半胱氨酸是栓塞和心血管疾病的一个独立危险因素,血浆中同型半胱氨酸水平与经血管造影而证实的冠心病死亡率之间有很强的相关性.同型半胱氨酸是蛋氨酸脱甲基形成的含硫氢基的氨基酸;在正常情况下胱硫醚β-合酶可催化使之缩合为胱硫醚[2].若胱硫醚β-合酶发生变异,就会引起同型半胱氨酸血浆浓度升高.本文就胱硫醚β-合酶结构、功能和活性调节与动脉粥样硬化及其他疾病关系综述如下.……     

哮喘大鼠血管内皮生长因子表达与γ-干扰素、白介素-4变化的相关性及地塞米松的干预

目的:观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)在大鼠哮喘急性模型中的表达情况,探讨Th细胞亚群的失衡与其表达的相关性.方法:36只清洁级雄性sD大鼠随机分为生理盐水对照组(C组)、哮喘组(A组)和地塞米松干预组(D组),以卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发法制备大鼠哮喘急性模型.末次激发24 h后腹腔注射麻醉,心脏取血,右肺行支气管肺泡灌洗留取灌洗液(BALD.应用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清和BALF中IL-4、IFN-γ和VEGF的浓度.结果:A组血清和BALF中IL-4、VEGF的水平均分别显著高于C组,D组血清和BALF中IL-4、VEGF的水平均分别显著低于A组(P<0.01),C组和D组相比差异均无统计学意义(P>0.05).A组血清和BALF中IFN.,的水平均显著低于C组(P<0.01),D组血清、BALF中的IFN-γ水平均显著高于A组(P<0.01)而低于C组(P<0.01).大鼠BALF中IL-4浓度与VEGF浓度呈显著正相关(r=0.797,P<0.01),IFN-γ浓度与VEGF浓度呈显著负相关(r=-0.568,P相似文献   

胱硫醚-γ-裂解酶产生的H2S在小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用及与RhoA-ROCK2信号通路的关系

目的 探讨胱硫醚-γ-裂解酶产生的H₂S在脑缺血/再灌注(cerebral ischemia/reperfusion, I/R)损伤中的作用及与RhoA-ROCK₂信号通路的关系。方法 采用双侧颈总动脉结扎制备小鼠脑缺血/再灌注损伤模型,激光散斑法检测脑血流量,HE染色法观察脑海马组织病理学变化,检测LDH、NSE、RhoA和ROCK₂活性及H₂S含量和ROCK₂蛋白表达。结果 H₂S合酶CSE底物L-Cys(300 mg·kg^-1)可明显促进脑I/R小鼠脑血流量的恢复,改善海马组织的病理损伤,抑制血清中LDH活性和脑组织中NSE、RhoA及ROCK₂活性的升高,并抑制血清H₂S含量的降低和脑组织中ROCK₂蛋白表达的增多。但L-Cys上述作用可被CSE合酶抑制剂PPG(50 mg·kg^-1)明显地减弱;H₂S供体NaHS(4...     

增龄对大鼠阴茎海绵体内CSE及H2S含量变化的影响

目的:探讨不同月龄大鼠阴茎海绵体内CSE、H2S含量的变化规律,进一步明确增龄中ED发生的机理.方法:选择2月龄、8月龄、16月龄及24月龄雄性Wistar大鼠各10只,按月龄不同分成四组(A、B、C、D组).于相同环境下给予相同饲料喂养四周后第1日给予阿朴吗啡100μg/kg于每只大鼠的颈项背部皮下注射,然后持续观察60min并记录勃起次数.第2日在给予电刺激3V和5V、2ms、25Hz下分别测定每只大鼠的ICP/MAP.切取各组大鼠阴茎海绵体组织,分别测定H2S和CSE含量.结果:随月龄增加,大鼠海绵体内H2S和CSE含量均下降,大鼠阴茎勃起次数减少.结论:增龄对于海绵体组织内CSE、H2S水平有显著影响,内源性H2S在大鼠阴茎勃起过程中起促进阴茎勃起的作用,阴茎海绵体组织内CSE表达减弱导致H2S含量减少是老年性ED的发病原因之一.     

ZnPP对高热惊厥大鼠硫化氢/胱硫醚-β-合成酶体系变化的影响

目的:研究高热惊厥大鼠(febrile convulsion,FC)硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)/胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-b-synthase,CBS)体系表达的变化及锌原卟啉(ZnPP)对其的影响。方法:21日龄Wistar大鼠54只,随机分为对照组(n=12)及10次热处理组(n=42),10次热处理组依其是否出现惊厥分出FC组(n=14),FC+ZnPP组(n=14),高热未惊厥组(n=14),用分光光度计间接测定大鼠血浆CO,H2S含量,用原位杂交法观察大鼠海马CBS基因表达情况。结果:FC组大鼠血浆CO和H2S的含量明显高于对照组、高热未惊厥组,FC+ZnPP组大鼠血浆HS的含量明显高于FC组,CO的含量明显低于FC组。FC组大鼠CBSmRNA表达高于对照组和高热未惊厥组,FC+ZnPP组CBSmRNA表达高于FC组。结论:1FC大鼠血浆H2S/CBS体系表达上调。2ZnPP可能通过降低内源性CO水平,上调H2S/CBS体系而发挥脑保护作用。     

酵母胱硫醚β-合成酶的表达及酶活鉴定

将重组质粒pET45b-yCBS转入E.coli BL21中,构建高效表达酵母胱硫醚β-合成酶(yeast cystathionine β-synthase,1)的重组菌.研究诱导时菌体浓度、诱导剂IPTG浓度、诱导时间和温度,以及在培养基中添加不同浓度的山梨醇、葡萄糖、甘油对1表达量的影响.使用Ni2+亲和色谱柱纯化重组蛋白,再经His-Trap脱盐柱脱盐,以茚三酮法检测蛋白活性.结果表明,培养基中添加0.05％的山梨醇,重组菌在37℃培养3h后,添加终浓度为0.1 mmo/L的IPTG于20℃诱导培养15h,可溶性1表达量达到110 mg/L;纯化后比活为1 320 u/mg.     

γ-氨基丁酸与哮喘的关系

γ-氨基丁酸(GABA)是哺乳动物中枢神经系统重要的抑制性神经递质之一,也存在于气道平滑肌细胞及气道上皮细胞等周围组织。研究表明,GABA系统与哮喘有密切关系。GABA受体主要分为A型和B型两类。GABAA受体激动剂蝇蕈醇能松弛由速激肽、组胺引起的气道平滑肌的收缩,并能减轻乙酰胆碱引起的气道通气压力增大;而GABAA受体抑制剂能抑制小鼠过敏性哮喘时杯状细胞增生及黏液过度分泌;GABAB受体激动剂可抑制神经诱导的胆碱能和速激肽介导的气道平滑肌收缩,微血管渗漏及过敏反应。由此可见,GABA系统可影响哮喘疾病发病过程中一些病理生理过程,因此GABA系统对治疗哮喘疾病具有重要价值。     

胱硫醚β-合酶在酒精性肝病中的作用

肝脏是蛋氨酸代谢的主要场所,蛋氨酸代谢障碍所致的肝损伤是酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)的重要发病机制[1].同型半胱氨酸(homocysteinemia,Hcy)是一种含硫的非必需氨基酸,是蛋氨酸循环的重要中间产物.蛋氨酸代谢障碍可使Hcy水平升高.Hcy可通过诱发氧化应激、内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)及激活致炎因子等损伤肝组织.     

胱硫醚-β-合酶(CBS)基因与冠心病发病机制的研究

目的：研究冠心病患者血浆同型半胱氨酸（HCY）水平及HCY代谢相关酶胱硫醚－β－合酶（CBS）基因T833C位点、G919A位点碱基突变与冠心病的关系。方法：用酶联免疫试剂盒测定血浆HCY水平，采用扩增阻滞突变体系法检测CBS基因中T833C和G919A基因型。结果：冠心病组HCY水平显著高于对照组（P＜0．01）。CBS基因T833C冠心病组CC、CT、TT型频率分布及C、T等位基因频率分布，G919A冠心病组AA、AG、GG型频率分布及A、G等位基因频率分布，均与对照组有非常显著性差异（P＜0．05或P＜0．01）。T833C、G919A冠心病组中3种基因型的HCY水平有显著性差异（P＜0．05）。冠心病组的CC、CT基因型HCY水平显著高于TT型，AA、AG基因型HCY水平显著高于GG型。结论：（1）高HCY血症是冠心病发病的危险因素，CBS基因T833C的CC、CT突变和G919A的AA、AG突变是高HCY血症的原因。（2）CBS基因T833C、G919A多态性与冠心病的发生有关。     

阳和汤对哮喘大鼠IL-4、IFN-γ及NGF表达的影响

目的:探讨阳和汤改善哮喘大鼠肺部炎症反应的进一步机制。方法:用卵蛋白攻击复制哮喘大鼠模型,用ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4、干扰素(IFN)-γ;用RT-PCR方法检测肺组织神经生长因子(NGF)mRNA表达水平。结果:阳和汤能下调哮喘大鼠IL-4,上调IFN-γ水平,下调两者比例;能抑制NGF-mRNA的表达。结论:阳和汤对哮喘有效的机理可能与下调IL-4,上调IFN-γ水平,抑制Th1/Th2漂移,其分子机制可能与肺部组织NGF-mRNA的抑制表达有关。