大鼠杏仁皮质核内γ-氨基丁酸与一氧化氮共存神经元分布及对痛觉信息传递的调控

背景:大鼠杏仁复合体分布有较多的还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶阳性神经元,γ-氨基丁酸也是广泛地存在于哺乳动物中枢神经系统的一种重要的抑制性神经递质,γ-氨基丁酸与一氧化氮合酶是否在大鼠杏仁复合体内共存目前尚不清楚.目的:采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学和免疫组化双重染色相结合的方法,观察杏仁皮质核内是否存在γ-氨基丁酸与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶共存的神经元.设计:以实验动物为研究对象,验证性对照研究.单位:两所大学的解剖教研室.材料:实验于2004-05/06在浙江大学医学院解剖教研室完成.选择SD大鼠6只,雌雄不拘,体质量250～300 g.干预:制备大鼠脑组织冠状连续冰冻切片,取4套切片分别用作尼氏染色、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学和γ-氨基丁酸免疫组化双重染色以及检查抗体特异性的对照实验.计数杏仁皮质核核团内γ-氨基丁酸标记神经元数目、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶阳性神经元数目以及还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶/y-氨基丁酸双标神经元的数目,计算出双标阳性神经元数占单标阳性神经元数的百分比.内氏染色用作核团定位.主要观察指标:还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶和γ-氨基丁酸双标和单标神经元分布情况.结果:显示γ-氨基丁酸阳性神经元多散在分布于杏仁皮质后内侧核、杏仁皮质后外侧核,以小型为主,中型较少,还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶阳性神经元多散在分布于杏仁皮质后内侧核、杏仁皮质后外侧核,杏仁皮质前核以中、小型神经元为主,双标神经元(γ-氨基丁酸/还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶均阳性)多散在分布于杏仁皮质后外侧核,以中、小型神经元为主.还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶和γ-氨基丁酸双标神经元与单标神经元的比例分别24.5%(γ-氨基丁酸),46.7%(还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶).结论:大鼠杏仁皮质核内有γ-氨基丁酸与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶共存的神经元,提示一氧化氮对杏仁皮质核内的γ-氨基丁酸能神经元可能有调控作用.     

伏核注射γ-氨基丁酸对大鼠伏核痛反应神经元放电的影响

目的：观察伏核（NAc）注射γ-氨基丁酸（GABA）后，NAc中痛反应神经元的放电变化以及荷包牡丹碱（Bic）对GABA的阻断效应，研究GABA与NAc在痛觉信息通路中的作用。方法：在60只成年Wistar大鼠上采用NAc内注药，以串脉冲刺激坐骨神经作为伤害性刺激，玻璃微电极细胞外记录痛反应神经元的放电变化。结果：（1）NAc内分别注射GABA 25、50、75μg／μl能够使正常大鼠NAc中痛兴奋神经元（Pain excitation neurons，PEN）的痛诱发放电频率减少，潜伏期延长；痛抑制神经元（Pain inhibition neurons，PIN）的痛诱发放电频率增加，诱发放电完全抑制时程缩短。PEN与PIN的反应与GABA剂量间呈量效关系；（2）侧脑室注入GABA。受体拮抗剂Bic能够阻断其上述效应。结论：GABA可通过同时影响NAc中PEN和PIN的放电活动而产生镇痛效应。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠皮质和海马区谷氨酸、γ-氨基丁酸含量的调节

目的:观察使用灵芝孢子粉后,癫痫点燃大鼠模型皮质和海马区谷氨酸和γ-氨基丁酸的含量及神经元形态学改变。方法:实验于2005-08在佳木斯大学基础医学院完成。选择健康雄性wistar大鼠30只(鼠龄12周),随机分为3组,空白对照组、癫痫模型组、灵芝孢子粉组,每组10只。采用戊四氮腹腔注射制作大鼠慢性点燃模型,癫痫模型组采用戊四氮腹腔注射+生理盐水灌胃;灵芝孢子粉组采用戊四氮腹腔注射+灵芝孢子粉灌胃;空白对照组采用生理盐水腹腔注射+生理盐水灌胃。腹腔注射剂量为35mg/kg,灌胃剂量为150mg/kg,1次/d,持续28d。每次注射后观察大鼠60min,记录癫痫发作情况。惊厥发作评分标准:0级,没有行为上的发作;Ⅰ级,节律性点头或头部颤搐;Ⅱ级,阵挛性咀嚼;Ⅲ级,头部颤搐加前肢阵挛性抽搐;Ⅳ级,袋鼠姿势(上身直立);Ⅴ级,跌倒;Ⅵ级,强直性惊厥。凡显示连续5次Ⅱ级以上惊厥的大鼠为达到点燃标准。点燃后断头取脑,行免疫组化染色观察各指标含量变化及神经元形态学改变。显微镜观察显示棕黄色颗粒者为阳性。结果:实验过程中,无动物死亡,全部进入结果分析。①灵芝孢子粉组和癫痫模型组所有大鼠均有连续多次的Ⅲ～Ⅴ级癫痫发作,均达到癫痫模型点燃标准。②免疫组织化学染色后,空白对照组大脑皮质谷氨酸免疫反应阳性细胞密集分布于各层,海马谷氨酸免疫反应阳性细胞主要分布在海马回的锥体细胞层和齿状回的颗粒层。谷氨酸阳性神经元胞体呈圆形、椭圆形或不规则形,谷氨酸阳性反应产物为棕黄色,呈细颗粒状。癫痫模型组大脑皮质及海马谷氨酸免疫反应阳性细胞数比空白对照组明显增多,差异具有显著性[(206±41),(96±12)个/张,P<0.05];[(164±41),(69±14)个/张,P<0.05]。灵芝孢子粉组大脑皮质及海马谷氨酸免疫反应阳性细胞比癫痫模型组数减少,差异具有显著性[(108±23),(206±41)个/张,P<0.05];[(100±12),(164±41)个/张,P<0.05]。③免疫组织化学染色后空白对照组大脑皮质γ-氨基丁酸有较多分布,浅层尤为明显。大鼠海马回和齿状回均可见γ-氨基丁酸阳性细胞散在分布。γ-氨基丁酸阳性神经元胞体呈圆形,胞浆均匀深染。癫痫模型组大脑皮质及海马γ-氨基丁酸免疫反应阳性细胞数比空白对照组明显减少,差异具有显著性[(69±16),(149±21)个/张,P<0.05];[(47±9),(108±10)个/张,P<0.05];灵芝孢子粉组大脑皮质及海马γ-氨基丁酸免疫反应阳性细胞比癫痫模型组数增多,差异具有显著性[(113±17)(69±16)个/张,P<0.05];[(80±11)(47±9),个/张,P<0.05]。结论:灵芝孢子粉能够有效降低皮质和海马区兴奋性氨基酸谷氨酸的含量,降低病变神经元兴奋性以达到抗癫痫作用。同时还能增强抑制性氨基酸氨基丁酸的表达,使神经元兴奋性减弱,抑制癫痫的发作,从而减轻癫痫发作给神经系统带来的损伤,所以灵芝孢子粉可能具有减轻痫性发作、保护神经元的作用。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠皮质和海马区谷氨酸、γ-氨基丁酸含量的调节

目的：观察使用灵芝孢子粉后，癫痫点燃大鼠模型皮质和海马区谷氨酸和1一氨基丁酸的含量及神经元形态学改变。 方法：实验于2005-08在佳木斯大学基础医学院完成。选择健康雄性wistar大鼠30只（鼠龄12周），随机分为3组，空白对照组、癫痫模型组、灵芝孢子粉组，每组10只。采用戊四氮腹腔注射制作大鼠慢性点燃模型，癫痫模型组采用戊四氮腹腔注射＋生理盐水灌胃；灵芝孢子粉组采用戊四氮腹腔注射＋灵芝孢子粉灌胃；空白对照组采用生理盐水腹腔注射＋生理盐水灌胃。腹腔注射剂量为35mg／kg，灌胃剂量为150mg／kg，1次／d，持续28d。每次注射后观察大鼠60min，记录癫痫发作情况。惊厥发作评分标准：0级，没有行为上的发作；Ⅰ级，节律性点头或头部颤搐；Ⅱ级，阵挛性咀嚼；Ⅲ级，头部颤搐加前肢阵挛性抽搐；Ⅳ级，袋鼠姿势（上身直立）；Ⅴ级，跌倒；Ⅵ级，强直性惊厥。凡显示连续5次Ⅱ级以上惊厥的大鼠为达到点燃标准。点燃后断头取脑，行免疫组化染色观察各指标含量变化及神经元形态学改变。显微镜观察显示棕黄色颗粒者为阳性。结果：实验过程中，无动物死亡，全部进入结果分析。①灵芝孢子粉组和癫痫模型组所有大鼠均有连续多次的Ⅲ～Ⅴ级癫痫发作，均达到癫痫模型点燃标准。②免疫组织化学染色后，空白对照组大脑皮质谷氨酸免疫反应阳性细胞密集分布于各层，海马谷氨酸免疫反应阳性细胞主要分布在海马回的锥体细胞层和齿状回的颗粒层。谷氨酸阳性神经元胞体呈圆形、椭圆形或不规则形，谷氨酸阳性反应产物为棕黄色，呈细颗粒状。癫痫模型组大脑皮质及海马谷氨酸免疫反应阳性细胞数比空白对照组明显增多，差异具有显著性[（206&#177;41），（96&#177;12）个／张，P〈0．05]；[（164&#177;41），（69&#177;14）个／张，P〈0．05]。灵芝孢子粉组大脑皮质及海马谷氨酸免疫反应阳性细胞比癫痫模型组数减少，差异具有显著性[（108&#177;23），（206&#177;41）个／张，P〈0．05]；[（100&#177;12），（164&#177;41）个／张，P〈0．05]。③免疫组织化学染色后空白对照组大脑皮质γ-氨基丁酸有较多分布，浅层尤为明显。大鼠海马回和齿状回均可见γ-氨基丁酸阳性细胞散在分布γ-氨基丁酸阳性神经元胞体呈圆形，胞浆均匀深染。癫痫模型组大脑皮质及海马γ-氨基丁酸免疫反应阳性细胞数比空白对照组明显减少，差异具有显著性[（69&#177;16），（149&#177;21）个／张，P〈0．05]；[（47&#177;9），（108&#177;10）个／张，P〈0．05]；灵芝孢子粉组大脑皮质及海马γ-氨基丁酸免疫反应阳性细胞比癫痫模型组数增多，差异具有显著性[（113&#177;17）（69&#177;16）个／张，P〈0．05]；[（80&#177;11）（47&#177;9），个／张，P〈0．05]。 结论：灵芝孢子粉能够有效降低皮质和海马区兴奋性氨基酸谷氨酸的含量，降低病变神经元兴奋性以达到抗癫痫作用。同时还能增强抑制性氨基酸氨基丁酸的表达，使神经元兴奋性减弱，抑制癫痫的发作，从而减轻癫痫发作给神经系统带来的损伤，所以灵芝孢子粉可能具有减轻痫性发作、保护神经元的作用。     

大鼠中脑黑质γ-氨基丁酸能神经元形态学增龄变化的定量研究

目的:探讨大鼠黑质γ-氨基丁酸神经元的增龄变化规律,为进一步揭示黑质病变的病因提供客观依据。方法:实验于2002-01／2003-07在贵阳医学院解剖学教研室完成。选择健康SD大鼠32只,分为一两个月龄、四五个月龄、十一二个月龄、≥24 个月龄4组,常规石蜡切片,中脑黑质连续冠状切片,进行苏木精-伊红染色、γ-氨基丁酸免疫组织化学染色,图像分析仪测量γ-氨基丁酸免疫阳性产物的吸光度和γ-氨基丁酸免疫反应阳性神经元的胞面积、体密度、数密度、圆球度,并对苏木精-伊红染色细胞进行计数。结果:32只大鼠均进入结果分析。4个月龄组大鼠随年龄增长,中脑黑质神经元数量减少,γ-氨基丁酸免疫反应阳性神经元平均吸光度减少 (P<0,001),γ-氨基丁酸免疫反应阳性神经元数密度、体密度、圆球度、平均体积均减少,平均截面积增加(P<0．01),呈增龄性变化。结论:黑质γ-氨基丁酸神经元随年龄增长而出现的衰老性变化,可能是黑质病变的原因之一。     

氯胺酮对强迫游泳大鼠前额皮层谷氨酸及γ-氨基丁酸的影响

目的:观察氯胺酮对强迫游泳大鼠前额皮层谷氨酸及γ-氨基丁酸的影响。方法:32只Wistar雄性大鼠随机均分为4组(n=8):生理盐水0.5h组(S0.5组)、生理盐水2h组(S2组)、氯胺酮0.5h组(K0.5组)、氯胺酮2h组(K2组)。药物干预前1d大鼠行强迫游泳15min制备急性应激抑郁模型。药物干预当天,给大鼠分别腹腔注射1mL容积的生理盐水或氯胺酮10mg/kg,给药后0.5h及2h分别再次行强迫游泳6min,记录后5min内不动时间。行为学测试结束后,取大鼠前额皮层,检测谷氨酸及γ-氨基丁酸的含量。结果:与S0.5组相比,K0.5组大鼠强迫游泳不动时间显著减少,谷氨酸含量上升,γ-氨基丁酸含量下降(P<0.05)。与S2组相比,K2组大鼠强迫游泳不动时间显著降低(P<0.05),谷氨酸及γ-氨基丁酸含量则无明显变化(P>0.05)。结论:氯胺酮在大鼠强迫游泳模型中能够发挥快速抗抑郁作用,同时伴随大鼠前额皮层谷氨酸上调及γ-氨基丁酸下调。     

丙泊酚麻醉对老龄大鼠认知功能和海马神经元γ-氨基丁酸A受体表达的影响

目的 观察丙泊酚麻醉对老龄大鼠认知功能及海马神经元γ-氨基丁酸A(GABA)受体表达的影响.方法 50只SD老年大鼠随机分为丙泊酚组和对照组,每组25只.丙泊酚组大鼠腹腔注射1％丙泊酚中/长链脂肪乳注射液6 mL/kg,对照组腹腔注射等体积的生理盐水.麻醉后1d进行Morris水迷宫实验,分别采用HE染色和尼氏体染色观...     

γ-氨基丁酸对急性毒鼠强中毒小鼠的实验治疗研究

目的观察不同剂量γ-氨基丁酸(GABA)对急性毒鼠强(TET)中毒小鼠的治疗作用,为其用于临床治疗提供实验基础.方法通过小鼠急性毒性实验观察染毒即刻以及染毒10 min后分别给予低剂量和大剂量GABA行解毒治疗,并观察各组小鼠脑组织细胞的病理学改变.结果GABA能有效缓解急性毒鼠强中毒小鼠症状,减轻惊厥发作,延缓抽搐出现,降低中毒小鼠的病死率.中毒后即刻用药治疗比10 min后用药治疗效果较好.在小鼠对GABA治疗最大耐受量范围内,即刻大剂量GABA治疗比小剂量GABA治疗急性毒鼠强中毒疗效好.结论GABA对急性毒鼠强中毒小鼠有明显治疗作用,提示GABA有望成为临床上救治急性毒鼠强中毒的优良解毒剂,但在GABA对毒鼠强解毒的具体的量效关系方面尚需进一步探讨.     

自发性高血压大鼠尾壳核神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的变化

目的:观察自发性高血压大鼠脑尾壳核内神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的变化。方法:实验于2003-05在暨南大学人体解剖教研室完成,取自发性高血压大鼠(实验组)和京都种威斯特大鼠(对照组)各30只,分别于3月龄,6月龄和12月龄测血压并处死,ABC免疫细胞化学方法观察大鼠脑内神经元型一氧化氮合酶阳性神经元,实验组使用兔抗神经元型一氧化氮合酶多克隆抗体。阴性对照用0.01mol/L磷酸盐缓冲液替代一抗体。每只大鼠计数20～30片,取其均数计数尾壳核的神经元型一氧化氮合酶免疫阳性神经元的数目,代表其密度。结果:各组大鼠在实验过程中无死亡,全部进入结果分析。①对照组3,6,12月龄大鼠血压分别为(97.5±12.0)、(107.3±9.8)、(113.3±12.8)mmHg(1mmHg=0.133kPa),差异无显著性意义;实验组3,6,12月龄自发性高血压大鼠血压逐渐升高,分别为(116.3±13.5)、(151.5±8.3)、(177.0±9.0)mmHg,差异有显著性意义(P<0.05);实验组大鼠血压均高于同鼠龄对照组大鼠,差异均有显著性意义(P<0.05)。②大鼠尾壳核的神经元型一氧化氮合酶阳性神经元中等大小,突起较多较长,还可见阳性神经纤维呈网状分布。大鼠尾壳核内的神经元型一氧化氮合酶免疫阳性神经元的密度改变:对照组和实验组3月龄无明显变化,实验组6月龄和12月龄明显减少。③对照组3,6和12月龄京都种威斯特大鼠尾壳核神经元型一氧化氮合酶阳性神经元无明显变化(9.41±0.77),(8.64±1.28),(8.51±0.77)个/mm2;实验组自发性高血压6,12月龄大鼠神经元型一氧化氮合酶阳性神经元呈逐渐减少的趋势,与3月龄比较,差异有显著性意义6个月(6.59±0.70),12个月(7.30±0.96),3个月(8.90±1.09)个/mm2,P<0.05,实验组6,12月龄大鼠神经元型一氧化氮合酶阳性神经元均低于同鼠龄对照组大鼠,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:自发性高血压大鼠为模拟人类原发性高血压的良好动物模型,自发性高血压大鼠的血压随月龄而有不同。自发性高血压大鼠尾壳核内神经元型一氧化氮合酶免疫阳性神经元的改变有可能是通过影响血压调节中枢的交感活性而间接调控高血压的发生。     

康复训练结合电针对脑卒中肢体痉挛大鼠γ-氨基丁酸能中间神经元表达的影响

目的:观察康复训练、电针、康复训练结合电针治疗方案对脑卒中肢体痉挛大鼠神经功能、肌张力及脑干、脊髓颈、腰膨大部位γ-氨基丁酸(GABA)能中间神经元钙结合蛋白-D28K(CB)、微白蛋白(PV)表达的影响.方法:75只SD大鼠随机分为5组,其中模型组、康复组、电针组和综合组采用线栓法建立局灶性脑缺血动物模型,空白组不做任何处理.康复组、电针组、综合组每天治疗1次,每次30min,连续治疗6d后,检测各组肌张力、神经功能缺损,以及PV、CB的表达情况.结果:6d治疗后,与模型组比较,康复组、电针组和综合组神经功能缺损评分值均显著降低(P＜0.05),以综合组最为明显,组间比较有显著性意义(P＜0.05);肌张力均有所降低(P＜0.05),以综合组最为明显,组间比较有显著性意义(P＜0.05);大鼠脑干、脊髓颈膨大、腰膨大中CB和PV积分光密度值均上升,差异有显著性意义(P＜0.05),以综合组增多最为明显,组间比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论:康复训练、电针、康复训练结合电针三种不同的治疗方案,均可改善脑卒中肢体痉挛大鼠的神经功能、肌张力,并可上调脑干、脊髓颈膨大、腰膨大中CB、PV的表达,而尤以康复训练结合电针治疗方案效果更好.     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元的保护作用

背景纳洛酮对脑缺血再灌注损伤细胞的保护作用机制尚不明确.选择体外培养皮质神经元研究纳洛酮疗效可排除多重因素干扰.目的观察缺氧对体外培养大鼠皮质神经元的影响及纳洛酮的保护机制.设计重复测量设计.地点和对象实验地点军事医学科学院神经生物学研究室.研究对象体外培养12 d的Wistar大鼠皮质神经元.干预取体外培养12 d的Wistar大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组(缺氧前24 h加纳洛酮预处理);缺氧6 h后在常氧下继续培养24 h.主要观察指标观察各种条件下神经元的存活率和形态学的改变,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.结果缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡,LDH渗出量增多[6 h正常对照组为(78.68±7.34)%,缺氧组为(194.38 ±22.32)%;12 h正常对照组为(77.98±8.85)%,缺氧组为(331.66±36.12)%],细胞存活率减少[6 h正常对照组为(91.82±2.89)%,缺氧组为(66.96±4.98)%;12 h正常对照组为(90.84±2.61)%,缺氧组为(32.02±6.34)%],差异有显著性意义(P＜0.01).经纳洛酮预处理的神经元,缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组,LDH渗出[6 h(159.86±34.03)%;12 h(256.28±28.29)%]显著低于缺氧组(P＜0.01),而存活率[6 h(78.08±4.15)%;12 h(53.68±4.32)%]明显高于缺氧组,差异有显著性意义(P＜0.01).结论对缺氧诱导的皮质神经元的损伤,纳洛酮具有明显的保护作用.     

海洛因依赖对大鼠杏仁核神经元自发放电的影响

目的：观察海洛因依赖SD大鼠杏仁核神经元自发放电及伤害性刺激对神经元自发放电的影响。 方法：实验于2004-12／2005-02在贵阳医学院生理教研室完成。选择健康SD大鼠45只，随机分为海洛因依赖组（n=25）和对照组（n=20）。海洛因依赖组按剂量（13mg/kk曲逐日递增原则，2次／d，连续9d皮下注射海洛因，首日剂量3mg／kg。对照组以同样方法注射等量生理盐水。第10天用5mg／kg纳洛酮腹腔注射催促戒断，确定海洛因依赖模型的建立成瘾后的大鼠从第10天起，给予海洛因维持剂量27mg／kg，1次／d。对照组同样方法注射等量生理盐水。给药12d后用玻璃微电极细胞外记录两组大鼠杏仁核神经元自发放电及鼠尾伤害性刺激对自发放电的影响。 结果：纳入大鼠45只，实验组在建立模型过程中有2只死亡，另外随机选取大鼠补充，最终进入结果分析大鼠保持为45只。①海洛因依赖组记录到114个单位神经元放电，对照组记录到80个。②两组大鼠杏仁核神经元可观察到单个不匀、束簇状和混合型3种放电形式，海洛因依赖组和对照组杏仁核神经元自发放电均以单个不匀为主，对照组中束簇状（7．5％）和混合型（13．8％）放电所占比例高于海洛因依赖组（1．8％和7．0％），组间差异有显著性意义（P〈0．05）。③海洛因依赖组大鼠杏仁核自发放电以低频为主（57．9％），而对照组则以低频（46.3％）和中频（47．5％）为主（P〈0．05）。④给予伤害性刺激后，大鼠杏仁核神经元自发放电表现为激活、抑制和无影响3种效应。实验组大鼠杏仁核神经元中频放电以抑制（45％）和无影响（40％）为主，而对照组以无影响为主（70％）。组间差异有显著性意义（P〈0．05）。⑤伤害性刺激后两组大鼠杏仁核神经元低频放电无变化。 结论：海洛因对大鼠杏仁核神经元自发放电的形式和频率产生影响，海洛因对伤害性刺激后大鼠杏仁核神经元中频放电产生影响。     

海洛因依赖对大鼠杏仁核神经元自发放电的影响

目的:观察海洛因依赖SD大鼠杏仁核神经元自发放电及伤害性刺激对神经元自发放电的影响。方法:实验于2004-12/2005-02在贵阳医学院生理教研室完成。选择健康SD大鼠45只,随机分为海洛因依赖组穴n=25雪和对照组穴n=20雪。海洛因依赖组按剂量穴13mg/kg雪逐日递增原则,2次/d,连续9d皮下注射海洛因,首日剂量3mg/kg。对照组以同样方法注射等量生理盐水。第10天用5mg/kg纳洛酮腹腔注射催促戒断,确定海洛因依赖模型的建立成瘾后的大鼠从第10天起,给予海洛因维持剂量27mg/kg,1次/d。对照组同样方法注射等量生理盐水。给药12d后用玻璃微电极细胞外记录两组大鼠杏仁核神经元自发放电及鼠尾伤害性刺激对自发放电的影响。结果:纳入大鼠45只,实验组在建立模型过程中有2只死亡,另外随机选取大鼠补充,最终进入结果分析大鼠保持为45只。①海洛因依赖组记录到114个单位神经元放电,对照组记录到80个。②两组大鼠杏仁核神经元可观察到单个不匀、束簇状和混合型3种放电形式熏海洛因依赖组和对照组杏仁核神经元自发放电均以单个不匀为主,对照组中束簇状穴7.5%雪和混合型穴13.8%雪放电所占比例高于海洛因依赖组穴1.8%和7.0%雪,组间差异有显著性意义(P<0.05)。③海洛因依赖组大鼠杏仁核自发放电以低频为主(57.9%),而对照组则以低频(46.3%)和中频(47.5%)为主(P<0.05)。④给予伤害性刺激后,大鼠杏仁核神经元自发放电表现为激活、抑制和无影响3种效应。实验组大鼠杏仁核神经元中频放电以抑制(45%)和无影响(40%)为主,而对照组以无影响为主(70%)。组间差异有显著性意义穴P<0.05雪。⑤伤害性刺激后两组大鼠杏仁核神经元低频放电无变化。结论押海洛因对大鼠杏仁核神经元自发放电的形式和频率产生影响,海洛因对伤害性刺激后大鼠杏仁核神经元中频放电产生影响。     

Noradrenergic modulation of cortical acetylcholine release is both direct and gamma-aminobutyric acid-mediated

The effect of norepinephrine (NE) on the outflow of gamma-aminobutyric acid (GABA) as well as the influence of endogenous GABA on NE-induced inhibition of acetylcholine (ACh) release have been investigated in guinea-pig cortical slices, in order to clarify the role of this amino acid in the noradrenergic control of the cholinergic signal. NE in the range of 9 to 30 microM increased GABA outflow from unstimulated slices, doubling it at 30 microM. This effect was antagonized by prazosin (0.1 microM) and by tetrodotoxin (0.5 microM), suggesting an involvement of alpha-1 receptors and of sodium-dependent mechanisms. 2,4-diaminobutyric acid (DABA), an inhibitor of neuronal GABA uptake, at 60 microM steadily doubled the amino acid outflow without affecting ACh release However, DABA increased the GABA-induced inhibition of electrically evoked ACh release by a factor of about 10 and the NE-induced inhibition by a factor of 2.8. Prazosin (1 microM) reduced the effects of NE (60 microM) on the spontaneous and evoked ACh release in normal slices and the effects of NE (30 microM) in DABA-treated slices. Thus, an alpha-1 GABA-mediated component of NE influence on ACh can be demonstrated even in vitro (beside the well-known alpha-2 direct inhibition), provided high NE concentrations are used or the GABA availability is enhanced. On the other hand, bicuculline and picrotoxin antagonized not only GABA but also NE, whereas yohimbine counteracted not only NE but also GABA inhibition of ACh release, suggesting a close assembly of alpha-2 and GABAA receptors on the cholinergic axons.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

大鼠脑干孤束核中神经激肽B受体神经元在内脏痛信息传递与整合中的作用

背景 脑干孤束核是内脏痛信息向高位脑中枢传递的一个关键的中继站.形态学证据表明,大鼠孤束核中分布有大量的神经激肽 B受体( neurokinin B receptors, NKR).然而,孤束核中表达 NKR的神经元是否参与内脏痛信息的传入与整合目前仍不清楚. 目的 阐明孤束核中表达 NKR的神经元在脑肠通路中传递内脏痛信息中的作用. 设计 随机的对照实验性研究. 地点和对象 12只 SD大鼠购自第四军医大学实验动物中心.大鼠均为雄性,体质量 220～ 250 g,用随机数字表法分为实验组和对照组,每组各 6只. 干预 6只雄性大鼠吸入麻醉后,将 2 mL 50 g/L的乙酸经导管注入大鼠升结肠内, 20 s后再注入 5 mL生理盐水冲洗结肠.对照组大鼠则注射等体积的磷酸缓冲液( 0.01 mol/L). 24 h后大鼠开胸经心脏灌流 40 g/L的甲醛.灌注毕后取出鼠脑修块,然后将含有孤束核的脑块在 300 g/L的蔗糖溶液中浸泡过夜,冰冻切片机切片.用抗 FOS抗体和抗 NKR抗体行免疫组化双重标记染色.免疫组化由第一作者完成,动物模型构建由第二作者完成,第三及第四作者负责免疫组化结果评估. 主要观察指标 孤束核中 NKR和 FOS蛋白的共表达. 结果 孤束核各个亚核中均有大量的 NKR免疫阳性的神经元,但在内侧亚核和联合亚核中尤其浓密.阳性产物分布在细胞膜和树突上;胃肠道给予甲醛刺激后,表达 FOS蛋白的神经元主要分布在孤束核的内侧亚核和联合亚核. NKR和 FOS蛋白双重标记神经元的胞核为黑色,而胞膜为棕黄色.在本研究中,双重标记神经元分别占所有 NKR或 FOS免疫阳性神经元的 37%和 42%. 结论在乙酸诱导的炎症性肠病大鼠孤束核中大约有 1/3的 NKR免疫阳性神经元表达 FOS蛋白,提示这些神经元可能参与了内脏痛信息的传递与整合.     

Nanomolar concentrations of tri-n-butyltin facilitate gamma-aminobutyric acidergic synaptic transmission in rat hypothalamic neurons

Tri-n-butyltin (TBT), an environmental pollutant, is accumulated in edible mollusks and fishes. It has also become a health concern in today's society. In the present study, to elucidate the possible neurotoxic action of TBT, the effect on spontaneous gamma-aminobutyric acid (GABA) release from GABAergic nerve terminals projecting to rat ventromedial hypothalamic neurons was examined using "synaptic bouton" preparation with a nystatin perforated patch recording mode under voltage-clamp conditions. The threshold concentration of TBT to affect the synaptic transmission was 10 to 30 nM. TBT at 30 nM or higher concentrations increased the frequency of GABAergic miniature inhibitory postsynaptic currents in a dose-dependent manner, whereas the current amplitude and current kinetics were not affected. The removal of either external Ca2+ or application of Cd2+ attenuated the TBT-induced facilitation of neurotransmission. TBT at 1 microM induced an inward current in more than one-half of the cells. This current persisted even after TBT was washed out. The present results indicate that TBT at environmentally relevant concentrations (30-100 nM) facilitates the GABAergic neurotransmission in the mammalian brain and the external Ca2+ is needed in this facilitation. Because the concentration of TBT accumulated in some mollusks and fishes has been reported to reach levels of 100 nM or more, such accumulation of TBT in some mollusks and fishes is thus suggested to be hazardous to the health of humans.     

伏核内勿动蛋白A和降钙素基因相关肽1受体在炎性痛大鼠痛觉调制过程中的角色

目的:探讨大鼠伏核内勿动蛋白A(Nogo-A)和降钙素基因相关肽1(CGRP1)受体在痛觉调制过程中的作用。方法:健康雄性SD大鼠随机分为4组:空白对照组,伏核内注射生理盐水1μl;炎性痛模型对照组、吗啡组和纳洛酮组。福尔马林致炎成功后,分别向其伏核内注射生理盐水、吗啡、纳洛酮各1μl。采用Western blot法,观察各组大鼠伏核内Nogo-A和CGRP1受体蛋白表达的变化,分析炎性痛、吗啡、纳洛酮对大鼠伏核内Nogo-A和CGRP1受体蛋白表达的影响。结果:正常大鼠伏核内有Nogo-A和CGRP1受体蛋白表达;福尔马林致炎后Nogo-A的蛋白表达量降低(P<0.05),而CGRP1表达升高(P<0.05);与炎性痛模型对照组比较,吗啡组大鼠伏核内Nogo-A的蛋白表达量增高(P<0.05),CGRP1降低(P<0.05),而纳洛酮组Nogo-A降低(P<0.05),CGRP1增高(P<0.05)。结论:Nogo-A和CGRP参与了炎症致痛敏大鼠伏核内的痛觉调制过程,且二者之间存在反向调节关系,内源性阿片系统可能参与并影响了该过程。     

Effects of halothane and propofol on excitatory and inhibitory synaptic transmission in rat cortical neurons

General anesthetics are thought to act on both excitatory and inhibitory neuronal pathways at both post- and presynaptic sites. However, the literature in these regards is somewhat controversial. The aim of the present study was to reassess the relative importance of the various anesthetic actions using a common preparation. Rat cortical neurons in primary culture were used to record spontaneous miniature postsynaptic currents by the whole-cell patch-clamp technique. Halothane at clinically relevant concentrations prolonged the decay phase of spontaneous miniature inhibitory postsynaptic currents (mIPSCs) recorded in the presence of tetrodotoxin and at higher concentrations decreased the frequency of mIPSCs. The mIPSC amplitudes underwent little change. Spontaneous action potential-dependent IPSCs recorded in the absence of tetrodotoxin were similarly affected by halothane. Halothane also decreased the frequency of spontaneous miniature non-N-methyl-D-aspartate (NMDA) excitatory postsynaptic currents (mEPSCs) as well as spontaneous action potential-dependent NMDA EPSCs and non-NMDA EPSCs without affecting their decay phase. The halothane effect on mIPSC and mEPSC frequency was dependent on the external calcium concentration. In contrast to halothane, the only effect of propofol was the prolongation of the decay phase of mIPSCs and IPSCs. The prolongation of mIPSCs and IPSCs by halothane and propofol coupled with the ineffectiveness on mEPSCs and EPSCs suggests a selective postsynaptic modulation of GABA(A) receptors. The additional calcium-dependent inhibition of mIPSC and mEPSC frequency by halothane (but not propofol) suggests a more general mechanism by this anesthetic on presynaptic transmitter release.     

Fipronil modulation of gamma-aminobutyric acid(A) receptors in rat dorsal root ganglion neurons

The gamma-aminobutyric acid (GABA) receptor is an important site of action of a variety of chemicals, including barbiturates, benzodiazepines, picrotoxin, bicuculline, general anesthetics, alcohols, and certain insecticides. Fipronil is the first phenylpyrazole insecticide introduced for pest control. It is effective against some insects that have become resistant to the existing insecticides. To elucidate the mechanism of fipronil interaction with the mammalian GABA system, whole-cell patch-clamp experiments were performed using rat dorsal root ganglion neurons in primary culture. Fipronil suppressed the GABA-induced whole-cell currents reversibly in both closed and activated states. The IC(50) values and Hill coefficients for fipronil block of the GABA(A) receptor were estimated to be 1.66 +/- 0.18 microM and 1.23 +/- 0.14 for the closed receptor, respectively, and 1.61 +/- 0.14 microM and 0.96 +/- 0.06 for the activated receptor, respectively. The association rate and dissociation rate constants of fipronil effect were estimated to be 673 +/- 220 M(-1) s(-1) and 0.018 +/- 0.0035 s(-1) for the closed GABA(A) receptor, respectively, and 6600 +/- 380 M(-1) s(-1) and 0.11 +/- 0.0054 s(-1) for the activated GABA(A) receptor, respectively. Thus, both the association and dissociation rate constants of fipronil for the activated GABA(A) receptor are approximately 10 times as large as those for the closed receptor. Experiments with coapplication of fipronil and picrotoxinin indicated that they did not compete for the same binding site to block the receptor. It is concluded that although fipronil binds to the GABA(A) receptor without activation, channel opening facilitates fipronil binding to and unbinding from the receptor.